Name: Oncogene 의존에 c Fos의 역할 및 Dusp1를 평가 하기 위한 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 배우세요 백혈병에서 c-Fos와 Dusp1을 유전적 및 화학적 방법으로 검증하는 프로토콜입니다. 이 기술은 다양한 종양 유형에 적용되어 종양 유전자 의존성에 대한 통찰을 제공합니다.

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저자 BaF3 및 WEHI 세포를 제공 하기 위한 G. Q. 데일리 감사 이며 T. Reya MSCV-BCR-ABL-Ires-YFP에 대 한 구성. 저자는 M. 캐롤 감사 CML 폭발 위기에서 환자 샘플을 제공 합니다. 이 연구 NCI (1RO1CA155091), 백혈병 연구 재단 및 V 재단, 그리고 NHLBI (R21HL114074-01)에서 석사를 교부 금에 의해 지원 되었다.

<ol><li>Daley, G. Q., Van Etten, R. A., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+myelogenous+leukemia+in+mice+by+the+P210bcr%2Fabl+gene+of+the+Philadelphia+chromosome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome.</a> Science. 247, 824-830 (1990).</li>
<li>Druker, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+selective+inhibitor+of+the+Abl+tyrosine+kinase+on+the+growth+of+Bcr-Abl+positive+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effects of a selective inhibitor of the Abl tyrosine kinase on the growth of Bcr-Abl positive cells.</a> Nature Medicine. 2, 561-566 (1996).</li>
<li>Mahon, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discontinuation+of+imatinib+in+patients+with+chronic+myeloid+leukaemia+who+have+maintained+complete+molecular+remission+for+at+least+2+years%3A+the+prospective%2C+multicentre+Stop+Imatinib+%28STIM%29+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Discontinuation of imatinib in patients with chronic myeloid leukaemia who have maintained complete molecular remission for at least 2 years: the prospective, multicentre Stop Imatinib (STIM) trial.</a> Lancet Oncology. 11, 1029-1035 (2010).</li>
<li>O'Hare, T., Zabriskie, M. S., Eiring, A. M., Deininger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pushing+the+limits+of+targeted+therapy+in+chronic+myeloid+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pushing the limits of targeted therapy in chronic myeloid leukaemia.</a> Nature Reviews Cancer. 12, 513-526 (2012).</li>
<li>Rousselot, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imatinib+mesylate+discontinuation+in+patients+with+chronic+myelogenous+leukemia+in+complete+molecular+remission+for+more+than+2+years%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Imatinib mesylate discontinuation in patients with chronic myelogenous leukemia in complete molecular remission for more than 2 years.</a> Blood. 109, 58-60 (2007).</li>
<li>Krause, D. S., Van Etten, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+kinases+as+targets+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tyrosine kinases as targets for cancer therapy.</a> The New England Journal of Medicine. 353, 172-187 (2005).</li>
<li>Sharma, S. V., Settleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+balance+between+life+and+death%3A+targeted+cancer+therapy+and+%22oncogenic+shock%22%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Exploiting the balance between life and death: targeted cancer therapy and "oncogenic shock".</a> Biochemical Pharmacology. 80, 666-673 (2010).</li>
<li>Sharma, S. V., Settleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogene+addiction%3A+setting+the+stage+for+molecularly+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Oncogene addiction: setting the stage for molecularly targeted cancer therapy.</a> Genes & Development. 21, 3214-3231 (2007).</li>
<li>Weinstein, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+Addiction+to+oncogenes--the+Achilles+heal+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer. Addiction to oncogenes--the Achilles heal of cancer.</a> Science. 297, 63-64 (2002).</li>
<li>Corbin, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+chronic+myeloid+leukemia+stem+cells+are+insensitive+to+imatinib+despite+inhibition+of+BCR-ABL+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Human chronic myeloid leukemia stem cells are insensitive to imatinib despite inhibition of BCR-ABL activity.</a> The Journal of Clinical Investigation. 121, 396-409 (2011).</li>
<li>Straussman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+micro-environment+elicits+innate+resistance+to+RAF+inhibitors+through+HGF+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tumour micro-environment elicits innate resistance to RAF inhibitors through HGF secretion.</a> Nature. 487, 500-504 (2012).</li>
<li>Wilson, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+potential+for+growth-factor-driven+resistance+to+anticancer+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Widespread potential for growth-factor-driven resistance to anticancer kinase inhibitors.</a> Nature. 487, 505-509 (2012).</li>
<li>Kesarwani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+c-FOS+and+DUSP1+abrogates+intrinsic+resistance+to+tyrosine-kinase+inhibitor+therapy+in+BCR-ABL-induced+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Targeting c-FOS and DUSP1 abrogates intrinsic resistance to tyrosine-kinase inhibitor therapy in BCR-ABL-induced leukemia.</a> Nature Medicine. 23, 472-482 (2017).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-fos+regulates+neuronal+excitability+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">c-fos regulates neuronal excitability and survival.</a> Nature Genetics. 30, 416-420 (2002).</li>
<li>Dorfman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+erp%2Fmkp-1+gene+does+not+affect+mouse+development%3A+normal+MAP+kinase+activity+in+ERP%2FMKP-1-deficient+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Disruption of the erp/mkp-1 gene does not affect mouse development: normal MAP kinase activity in ERP/MKP-1-deficient fibroblasts.</a> Oncogene. 13, 925-931 (1996).</li>
<li>Padhye, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorocurcumins+as+cyclooxygenase-2+inhibitor%3A+molecular+docking%2C+pharmacokinetics+and+tissue+distribution+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Fluorocurcumins as cyclooxygenase-2 inhibitor: molecular docking, pharmacokinetics and tissue distribution in mice.</a> Pharmaceutical Research. 26, 2438-2445 (2009).</li>
<li>Molina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+chemical+screening+reveals+an+inhibitor+of+Dusp6+that+expands+cardiac+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish chemical screening reveals an inhibitor of Dusp6 that expands cardiac cell lineages.</a> Nature Chemical Biology. 5, 680-687 (2009).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeting+of+quiescent+chronic+myelogenous+leukemia+stem+cells+by+histone+deacetylase+inhibitors+in+combination+with+imatinib+mesylate%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Effective targeting of quiescent chronic myelogenous leukemia stem cells by histone deacetylase inhibitors in combination with imatinib mesylate.</a> Cancer Cell. 17, 427-442 (2010).</li>
<li>Koschmieder, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+chronic+phase+of+myeloid+leukemia+with+expansion+of+hematopoietic+stem+cells+in+a+transgenic+model+of+BCR-ABL+leukemogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Inducible chronic phase of myeloid leukemia with expansion of hematopoietic stem cells in a transgenic model of BCR-ABL leukemogenesis.</a> Blood. 105, 324-334 (2005).</li>
<li>Abraham, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+of+p53+and+c-MYC+selectively+eliminates+leukaemic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dual targeting of p53 and c-MYC selectively eliminates leukaemic stem cells.</a> Nature. 534, 341-346 (2016).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+p53+by+SIRT1+inhibition+enhances+elimination+of+CML+leukemia+stem+cells+in+combination+with+imatinib%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Activation of p53 by SIRT1 inhibition enhances elimination of CML leukemia stem cells in combination with imatinib.</a> Cancer Cell. 21, 266-281 (2012).</li>
<li>Qiagen-miRNAeasy kit. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.qiagen.com/us/shop/sample-technologies/rna/mirna/mirneasy-mini-kit/#resources">https://www.qiagen.com/us/shop/sample-technologies/rna/mirna/mirneasy-mini-kit/#resources</a> (2018).</li>
<li>DNA-free DNA removal kit. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/AM1906?gclid=EAIaIQobChMIg4D-_ZvC2wIVx5-zCh00Cg8fEAAYASAAEgIv6vD_BwE&s_kwcid=AL!3652!3!264318446624!b!!g!!&ef_id=V7SO5AAAAck3ba89:20180607185004:s">https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/AM1906?gclid=EAIaIQobChMIg4D-_ZvC2wIVx5-zCh00Cg8fEAAYASAAEgIv6vD_BwE&s_kwcid=AL!3652!3!264318446624!b!!g!!&ef_id=V7SO5AAAAck3ba89:20180607185004:s</a> (2018).</li>
<li>SuperScript™ III First-Strand Synthesis System. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/18080051">https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/18080051</a> (2018).</li>
<li>Human Long Term Culture Initiating Cell Itc-ic Assay. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.stemcell.com/human-long-term-culture-initiating-cell-ltc-ic-assay.html">https://www.stemcell.com/human-long-term-culture-initiating-cell-ltc-ic-assay.html</a> (2018).</li>
<li>Abarrategi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+human+bone+marrow+niche+in+mice%3A+From+host+bone+marrow+engraftment+to+bioengineering+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Modeling the human bone marrow niche in mice: From host bone marrow engraftment to bioengineering approaches.</a> Journal of Experimental Medicine. 215, 729-743 (2018).</li>
<li>Kesarwani, M., Huber, E., Kincaid, Z., Azam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+screening+and+validation+of+resistant+mutations+against+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A method for screening and validation of resistant mutations against kinase inhibitors.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

암 세포의 대량에 대 한 치료 응답 TKI은 티로신 키 니 아 제 oncoprotein 신호는 종양은 중독의 봉쇄에 의해 중재 됩니다. 그러나, 상대적으로 작은 MRD에 기여 하는 암 세포의 소수 oncogene 의존과 치료4를 탈출 하는 방법에 대 한 알려져 있다. 최근 연구는 백혈병에 단단한 기관 종양 약물 저항을 중재 성장 인자 신호 밝혀. 이 다양 한 분자 메커니즘 본질적인 저항10,,1112기초 수 있습니다 제안 합니다. 하는 메커니즘을 이해 하 고 유전자 치료 개발을 위한 목표를 식별, 우리는 포괄적인 전체-게놈 식 프로필 마우스 (BaF3)과 인간 (K562) 셀을 사용 하 여 수행 합니다. 우리, 기본 골 수 샘플은 상당히 이질적인, 그들은 것입니다 마스크 관련 유전자/대상의 신원을 의심 때문에 leukem...

BCR-ABL1 퓨전 oncogene의 제정 티로신 키 니 아 제 활동 하면 CML, 작은 분자 억제제 여 키 니 아 제 활동에 근거를 제공 한다. CML 환자 치료에 TKIs의 성공 타겟된 치료1,2의 개념을 혁명. 그 후, 안티 니 정밀 의학으로 치료는 단단한 종양을 포함 한 다른 여러 악성 종양에 대 한 개발 되었다. 지금까지, 30 개 이상의 kinase 억제제는 다양 한 악성 종양 치료를 위한 미국 국가 FDA에 의해 승인 되었습니다. TKI 치료 질병 억제에 매우 효과적 이다, 그러나 그것은 치료입니다. 게다가, 암 세포의 작은 인구는 치료 기간 동안 지속: MRD3,,45. 완전 한 사 함을 보여도 환자가 결국 결과에 재발 하지 않을 경우 지속적으로 억제 MRD 남아 있습니다. 그러므로, MRD 세포의 박멸 내구성 또는 치료 응답을 달성 하기 위해 필요 합니다. CML은 발암, 합리적인 대상 감독 치료제, 질병의 진행, 그리고 약물 저항 메커니즘, 정밀 의학의 개념을 정의 하기 위한 귀중 한 패러다임을 나타냅니다. 그러나, 오늘날에 암 세포에 TKI 유도 된 세포 죽음을 운전 하는 메커니즘은 완전히 이해 되지 않습니다,도 왜 MRD 세포 (leukemic 줄기 세포 [LSCs]의 구성)은 본질적으로 TKIs4,6. 그럼에도 불구 하 고, 돌연변이 니 oncoprotein 하 "oncogene 의존"의 현상 TKIs에 의해 타겟된 oncogene의 심각한 저해 대규모 proapoptotic 응답 또는 셀에 정지에 이르게 하는 종양 충격을 발생 하는 TKI 효능에 연루는 맞는 방식으로6,7,,89. 그러나, oncogene 의존의 기계적 underpinning 부족 이다. 최근 연구는 주석은 oncogene 의존 성장 인자 신호 및 따라서 TKI 치료10,,1112에 저항을 수 여 연루 있다. 따라서, oncogene 의존의 메커니즘에 대 한 통찰력을 얻기 위해 우리가 수행 전체-게놈 식 중독 BCR-ABL1 및 nonaddicted 세포 성장 인자 (성장), c-Fos와 Dusp1의 중요 한 중개자는 밝혔다에서 프로 파일링 oncogene 중독13. C-Fos와 Dusp1의 유전 삭제 합성 BCR ABL1 표현 하는 치명적인 셀 이며 실험에 사용 하는 생쥐 백혈병을 개발 하지 않았다. 또한, 작은 분자 억제제에 의해 c-Fos와 DUSP1의 억제 생쥐에서 BCR ABL1 유도 CML 치료. 결과 높은 수준의 치료13저항을 야기 하는 동안 낮은 수준의 마약 감도 부여 c Fos와 Dusp1의 식 수준 암 세포, apoptotic 임계값 정의 보여 줍니다.
Oncogene 의존을 운전 하는 유전자를 식별 하기 위해 우리는 마우스-그리고 CML 환자 파생 셀 (K562)를 사용 하 여 성장 인자와 TKI (imatinib)의 실험을 프로 파일링 하는 여러 전체 게놈 식 수행. 이러한 데이터는 CD34에서 얻은 CML 환자 데이터 세트와 병렬로 분석 되었다+ 조 혈 줄기 세포 imatinib 치료 전후. 이 분석 공개 3 개의 유전자 (전사 요소 [c-Fos], 이중 특이성 인산 가수분해 효소 1 [Dusp1], 그리고 RNA 의무적인 단백질 [Zfp36])는 일반적으로 upregulated TKI 내성 세포에서. 약물 저항을 부여에 있는이 유전자의 중요성을 확인 하기 위해 우리는 단계별 생체 외에서 그리고 vivo에서 분석 실시. 이 유전자의 표현 수준 실시간 정량 (RT-정량)와 서 부 럽 약물 내성 세포에 의해 확인 되었다. 또한, cDNA overexpression 및 c-Fos, Dusp1의 shRNA 헤어핀으로 최저 그리고 Zfp36 높은 c-Fos와 Dusp1 식은 충분 하 고 TKI 저항을 부여 하는 데 필요한. 따라서, 우리는 c-Fos와 Dusp1 모델 마우스를 사용 하 여 생체 조건 유효성 검사를 수행. C-Fos와 Dusp1의 유전 유효성 검사에 대 한 우리 ROSACreERT를 유도할 수 있는 c-Fosfl/플로리다 쥐 (조건부 녹아웃)14 만들어지고 Dusp1-/- (똑 바른 녹아웃)15 ROSACreERT2-c-Fosfl/플로리다 수 있도록 그들을 넘어 Dusp1/- 이중 유전자 변형 쥐. 골 수 파생 된 c-키트+ 세포 (c Fos에서fl/플로리다-, Dusp1-/--, c-Fosfl/플로리다Dusp1-/-) BCR ABL1 표현 했다 분석 생체 외에서 에 콜로 니 형성 단위 (CFU) 분석 결과, vivo 백혈병 개발에 혼자 또는 함께 c-Fos와 Dusp1의 요구를 테스트 하려면 치명적 방사능된 쥐에서 골 수 이식에 의해. 마찬가지로, DFC (difluorinated curcumin)16 c-Fos와 BCI에 의해 Dusp1의 화학 임무 (benzylidene-3-(cyclohexylamino)-2,3-dihydro-1H-inden-1-one)17 시험 되었다 생체 외에서 그리고 vivo BCR-ABL1-표현, 뼈를 사용 하 여에서 야생-타입 (WT) 마우스에서 골 수 유래 c-키트+ 세포. 우리 어디 BCR ABL1 특히 유도 되었다 그것의 줄기 세포에 doxycycline (Tet transactivator 표현 murine 줄기 세포 백혈병 (SCL) 유전자 3' 증강에 의해 CML 마우스 모델을 활용 하는 leukemic 줄기 세포에서 c-Fos와 Dusp1의 요구를 확인 하려면 레 귤 레이 션)18,19. 우리 골 린-사용 Sca+c-키트+ (LSK) 세포 vivo에서 이식 분석 결과에서 이러한 쥐에서. 또한, 우리는 설립 phopsho-p38 수준 및 Dusp1 및 c-Fos 저해 수립이 동적 생체로 일리노이-6의 식 각각, vivo에서. 마지막으로, 인간의 관련성, CD34 환자 파생에 대 한 연구를 확장+ 세포 (마우스에서 c-키트+ 세포에 해당) 복종된 장기 생체 외에서 문화 시작 셀 분석 실험 (LTCIC)를 했다 vivo에서 인간 답게 마우스 모델의 CML20,21. Immunodeficient 마우스 CML CD34 + 세포, 약물 치료 및 인간 leukemic 세포 생존의 분석으로 이식 했다.
이 프로젝트에서 우리는 다른 전 임상 모델을 사용 하 여 대상 식별 및 유전과 화학 도구를 사용 하 여 유효성 검사에 대 한 방법을 개발 한다. 이러한 메서드는 치료 개발에 대 한 화학 modalities를 개발 하는 다른 대상 유효성을 성공적으로 적용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Biological Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Cellgro (corning)</td><td>15-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Cellgro (corning)</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Cellgro (corning)</td><td>15-016-CVR</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin 재조합 인간 피브로넥틴 단편</td><td>Takara</td><td>T100B</td><td></td></tr><tr><td>MethoCult GF M3434 (마우스 CFU용 메틸셀룰로오스)</td><td>줄기세포</td><td>3434</td><td></td></tr><tr><td>MethoCult H4434 Classic (인간 CFU용 메틸셀룰로오스)</td><td>줄기세포</td><td>4434</td><td></td></tr><tr><td>4-하이드록시타목시펜</td><td>시그마</td><td>H6278</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 SCF</td><td>Prospec</td><td>CYT-275</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 Flt3-Ligand</td><td>Prospec</td><td>CYT-340</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 IL-6</td><td>Prospec</td><td>CYT-350</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 IL-7</td><td>Peprotech</td><td>217-17</td><td></td></tr><tr><td>DFC</td><td>LKT Laboratories Inc.</td><td>D3420</td><td></td></tr><tr><td>BCI</td><td>Chemzon Scientific</td><td>NZ-06-195</td><td></td></tr><tr><td>Imatinib</td><td>LC Laboratory</td><td>I-5508</td><td></td></tr><tr><td>커큐민</td><td>시그마</td><td>458-37-7</td><td></td></tr><tr><td>NDGA</td><td>시그마</td><td>500-38-9</td><td></td></tr><tr><td>Penn/Strep</td><td>Cellgro (corning)</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>애틀랜타 생물학적</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>트립신 EDTA 1x</td><td>Cellgro (corning)</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Cellgro (corning)</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>Cellgro (corning)</td><td>25-005-CL</td><td>5 mg/mL 물</td></tr><tr><td>스톡 Puromycin</td><td>Gibco (life technologies)</td><td>A11138-03</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4.7H2O</td><td>시그마</td><td>S9390</td><td></td></tr><tr><td>프로타민 설페이트</td><td>시그마</td><td>P3369</td><td>5 mg/mL 물</td></tr><tr><td>스톡 Trypan Blue 용액(0.4%)</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Cellgro(corning)</td><td>25-950-CQC</td><td></td></tr><tr><td>WST-1</td><td>Roche</td><td>11644807001</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &뮤; M 아크로 디스크 필터</td><td>PALL</td><td>2016-10</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m nylon cell stariner</td><td>Becton Dickinson</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>FICOL (Histopaque 1083) (polysucrose)</td><td>Simga</td><td>1083</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21040CV</td><td></td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>프로테아제 억제제 칵테일</td><td>Roche</td><td>CO-RO</td><td></td></tr><tr><td>포스파타제 억제제 칵테일 2</td><td>Sigma</td><td>P5762</td><td></td></tr><tr><td>니트로쿨룰로오스 멤브레인</td><td>Bio-Rad</td><td>1620115</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate ( chemiluminiscence substrate)</td><td>Thermo Scientific</td><td>34075</td><td></td></tr><tr><td>CD5</td><td>eBioscience</td><td>13-0051-82</td><td></td></tr><tr><td>CD11b</td><td>eBioscience</td><td>13-0112-75</td><td></td></tr><tr><td>CD45R (B220)</td><td>BD biosciences</td><td>553092</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0453-85</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-PE</td><td>eBioscience</td><td>12-0454-83</td><td></td></tr><tr><td>hCD45-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>555482</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Biotin-FITC</td><td>Miltenyi</td><td>130-090-857&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Anti-7-4</td><td>eBioscience</td><td>MA5-16539</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Gr-1 (Ly-6G/c)</td><td>eBioscience</td><td>13-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ter-119</td><td>eBioscience</td><td>13-5921-75</td><td></td></tr><tr><td>Ly-6 A/E (Sca1) PE Cy7</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>558612</tr><tr><td>CD117 APC&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>553356</tr><tr><td>BD Pharm Lyse</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>555899</tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm (고정 및 투과화 솔루션)</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>554714</tr><tr><td>BD 펌/워시&nbsp; (Phospho Flow를 위한 투과화 및 세척 용액)</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>554723</tr><tr><td>phospho p38</td><td>세포 신호 기술</td><td>4511S</td><td></td></tr><tr><td>총 p38</td><td>세포 신호 기술</td><td>9212</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IgG 제어</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>554121</tr><tr><td>Alexa Flour 488 활용&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A-11034</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Invitrogen</td><td>K278001</td><td></td></tr><tr><td>2x HBS</td><td>Invitrogen</td><td>K278002</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Ambion</td><td>AM9261</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>혈액 모세관</td><td>Fisher</td><td>22-260-950</td><td></td></tr><tr><td>혈액 채취 튜브</td><td>Giene Bio-One</td><td>450480</td><td></td></tr><tr><td>신생아 송아지 혈청</td><td>애틀랜타 생물학적</td><td>S11295</td><td></td></tr><tr><td>Erythropoiein</td><td>Amgen</td><td>5513-267-10</td><td></td></tr><tr><td>인간 SCF</td><td>Prospec</td><td>CYT-255</td><td></td></tr><tr><td>인간 IL-3</td><td></td><td>Prospec CYT-210</td><td></td></tr><tr><td>G-SCF</td><td>Prospec</td><td>CYT-220</td><td></td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>Prospec</td><td>CYT-221</td><td></td></tr><tr><td>MyeloCult (LTCIC 분석을 위한 미디어)</td> <td>줄기세포 기술</td><td>5100</td><td></td></tr><tr><td>하이드로코르티손 나트륨 헤미숙시네이</td>트 <td>줄기세포 기술</td><td>7904</td><td></td></tr><tr><td>MEM 알파</td><td>Gibco</td><td>12561-056</td><td></td></tr><tr><td>1/2 cc Lo-Dose u-100 인슐린 주사기 28 G1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Mortor pestle</td><td>Coor tek&nbsp;</td><td>60316 및 60317</td><td></td></tr><tr><td>Isoflorane (Isothesia TM)</td><td>Butler Schien</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>SOC</td><td>New England Biolabs</td><td>B90920s</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma</td><td>A0166</td><td>100 mg/mL stock in water</td></tr><tr><td>Bacto 한천(한천)</td><td>Difco</td><td>214050</td><td></td></tr><tr><td>Terrific</td><td>broth Becton Dickinson</td><td>243820</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Genemate</td><td>E-3119-500</td><td></td></tr><tr><td>독시사이클린 차우</td><td>TestDiet.com</td><td>52662</td><td>수정된 RMH1500, 오토클레이브 가능한 5LK8&nbsp; 0.0625% 독시사이클린&nbsp;</td></tr><tr><td>타목시펜</td><td>시그마</td><td>T5648</td><td></td></tr><tr><td>요오도니트로테트라졸륨 클로라이드&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>I10406</td><td></td></tr><tr><td>Kits</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dneasy 혈액 및 조직 키트</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td></td></tr><tr><td>GoTaq Green (녹색 로딩 염료가 함유된 taq 중합효소)</td><td>Promega</td><td>M1722</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy 미니 키트&nbsp; (RNA 분리 키트)</td><td>Qiagen</td><td>217084</td><td></td></tr><tr><td>DNA Free Dnase Kit(RT PCR을 위한 DNAse 처리)</td><td>Ambion, Life Technologies</td><td>AM1906</td><td></td></tr><tr><td>Superscript III First Strand Synthesis(cDNA 합성을 위한 역전사 효소)</td><td>Invitrogen</td><td>18080051</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green(qPCR을 위한 녹색 interchalating dye와 taq 중합효소 혼합물)</td><td>Bio-Rad</td><td>1725270</td><td></td></tr><tr><td>CD117 MicroBead Kit</td><td>Miltenyi</td><td>130-091-224</td><td></td></tr><tr><td>인간 장기 배양 시작 세포 분석</td><td>Stemp Cell Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NAPCO 시리즈 8000 WJ CO2 인큐베이터</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>스윙 버킷 로터 cetrifuge 5810R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TC-10 자동 세포 계수기</td>, <td>Bio-RAD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C-1000 Thermal cycler</td>, <td>Bio-RAD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mastercycler, Real Plex 2</td>, <td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ChemiDoc Imaging System(겔 및 웨스턴 블롯용 이미징 시스템)</td><td>Bio-RAD</td><td>17001401</td><td></td></tr><tr><td>Hemavet(볼드 카운터)</td><td>Drew-Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSR II(FACS 분석기)</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fortessa I (FACS 분석기)</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACSAriaII (FACS 분류기)</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자석 스탠드</td><td>Miltenyi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Irradiator</td><td>&nbsp;J.L. Shepherd and Associates, San Fernando CA</td><td>Mark I Model 68A</td><td>source Cs 137</td></tr><tr><td>Mice</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ROSACreERT2</td><td>Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scl-tTA&nbsp;</td><td>클라우디아 휘트너 박사 s 랩</td><td></td><td></td></tr><tr><td>보이J&nbsp;</td><td>CCHMC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6&nbsp</td>의 마우스 코어 시설;<td>CCHMC의 Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NSGS</td><td>마우스 코어 시설</td> ROSACreERT2/c-Fosfl/fl Dusp1-/-&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>사내에서</td><td></td><td></td>제작</tr><tr><td>ROSACreERT2/c-Fosfl/fl</td> 사<td>내에서</td><td></td><td></td> 제작</tr><tr><td>Cells</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BaF3</td><td>George Daley, Harvard Medical School, Boston</td><td></td><td></td></tr><tr><td>WEHI</td><td>Gift from George Daley, Harvard Medical School, Boston</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CML-CD34+ 및 Normal CD34+ cells</td><td>신시내티</td><td></td><td></td> 대학교 대학 병원</tr></tbody></table>

oncogene 의존에 c fos의 역할 및 dusp1를 평가 하기 위한 방법

Methods for Evaluating the Role of c-Fos and Dusp1 in Oncogene Dependence

만성 골수성 백혈병 (CML) 치료에 tyrosine kinase 억제제 (TKIs)의 데모는 암 치료에 새로운 시대를 예 고 했다. 그러나, 세포의 작은 인구에 반응 하지 않는 TKI 치료 결과 최소 잔여 질병 (MRD); 이 세포를 근절 하기 위해 심지어는 가장 강력한 TKIs 실패. 이러한 MRD 세포 치료에 저항을 개발 하는 저수지 역할을 합니다. 왜 TKI 치료 MRD 셀에 대 한 효과 알 수 없습니다. TKI 치료 동안 MRD 세포의 생존을 지 원하는에 연루는 성장 인자 신호 하지만 기계적 이해 부족. 최근 연구는 높은 c-Fos와 Dusp1 집중 결과로 종양 표현과 MRD 셀에 신호 하는 성장 인자 중재 TKI 저항을 설명 했다. C-Fos와 Dusp1의 유전과 화학 억제 CML를 TKIs에 절 묘하게 과민 한 렌더링 하 고 두 유전자 및 인간 답게 된 마우스 모델에 CML을 치료. 우리는 TKI-민감하고-내성 세포에서 여러 microarrays를 사용 하 여이 대상 유전자 발견. 여기, 우리는 생체 외에서 그리고 vivo에서 마우스 모델을 사용 하 여 대상 유효성 검사 메서드를 제공 합니다. 이러한 메서드는 쉽게 유전자 유효성 검사 및 치료 개발에 대 한 모든 대상에 적용할 수 있습니다.

Oncogene 중독 TKIs의 치료 효능에 연루 되었습니다. 그러나, oncogene 의존 운전 메커니즘 이해 되지 않는다. 우리는 중독을 계획에 관련 된 유전자 구성 요소를 식별 하기 위해 여러 편견된 유전자 식 분석을 수행. 이러한 분석 3 유전자, c Fos, Dusp1, 및 Zfp36, 암 세포는 생존을 위한 종양 신호에 의존 하 고, 따라서, TKI 치료를 구분 하지 않습니다의 upregulation를 공개 했다. ShRNA 중재 최저에 의해 c-Fos와 Dusp1의 downregulation는 달리 TKI 방지에서 약물 감도 복원 하는 충분 한 세포.
백혈병의 치료 대상으로 c Fos와 Dusp1의 역할의 유효성을 검사 하려면 그들의 overexpression BCR ABL1 oncogene를 표현 하는 BaF3 세포를 사용 하 여 처음 확인 됐다. ...

여기, 우리는 생체 외에서 그리고 vivo에서 유전자 및 인간 답게 된 마우스 모델을 사용 하 여 백혈병에서 마약 대상으로 c Fos와 Dusp1의 유전과 화학 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이 메서드는 유전 유효성 검사 및 치료 개발에 대 한 모든 대상에 적용할 수 있습니다.

Oncogene 의존에 c Fos의 역할 및 Dusp1를 평가 하기 위한 방법

The demonstration of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in treating chronic myeloid leukemia (CML) has heralded a new era in cancer therapeutics. However, ...

이 방법은 종양 유전자 의존에 관련시킨 중요한 유전자의 확인과 같은 암 치료 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 많은 키나아제 구동 암에 공통되는 온코진 의존성을 활용하므로 다중 종양 유형에 적용가능하다는 것입니다. 이 방법은 백혈병에 대한 통찰력을 제공할 수 있더라도 폐암, 뇌종양 및 췌장 종양과 같은 고형 종양과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.일반적으로, 이 방법에 새로운 개인 분자 생물학 및 세포 생리학에 경험의 부족으로 인해 투쟁 할 것 이다. 시작하려면 안락사 된 마우스에서 다리 뼈를 수확하십시오. 메스로 뼈에서 조직을 청소합니다.그런 다음 차가운 PBS에 뼈를 얼음위에 놓고 뼈를 봉금으로 부수습니다. 그 후, 70 마이크로미터 셀 스트레이너를 통해 셀 서스펜션을 10밀리리터 파이펫이 있는 50밀리리터 스크류 캡 튜브로 필터링합니다. 차가운 PBS로 박격포를 여러 번 씻고 셀 서스펜션을 50 밀리리터 튜브에 추가하십시오.다음 원심 분리골골은 골수를 제거하고 진공 및 유리 파이펫으로 상체를 제거합니다. PBS의 5 밀리리터에서 세포 펠릿을 다시 중단합니다. 파이펫을 사용하여 실온 폴리 자당의 상단에 매달린 골수를 천천히 추가합니다.그 후, 브레이크가 꺼져 20분 동안 400 Gs에서 폴리 자당을 회전시다. 원심분리 후 파이펫으로 흐린 총 모노 핵 세포 인터페이스를 수집하고 새로운 15 밀리리터 튜브로 옮긴다. PBS로 10 밀리리터에 볼륨을 가져와 계산할 수 있는 마이크로리터 20기를 제거합니다.원심 분리 후, 상체를 버리고 펠릿을 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, EDTA 및 BSA를 가진 PBS에 있는 세포 펠릿을 재중단합니다. CD117 마이크로비드를 세포 현탁액에 넣고 소용돌이를 혼합합니다.그 후, 섭씨 4도에서 10분 동안 서스펜션을 배양합니다. 그런 다음 EDTA및 BSA와 원심분리기가 1200G에서 5분 동안 섭씨 4도에 더 많은 PBS를 사용하여 최대 10 밀리리터의 볼륨을 가져옵니다. 진공을 사용하여 상체를 제거하고 EDTA 및 BSA로 PBS에서 세포 펠릿을 중단하십시오.그런 다음 EDTA 및 BSA를 사용하여 PBS 3 밀리리터를 자석 기둥이 있는 자석 스탠드에 추가하고 수집 튜브로 흐르도록 합니다. 버퍼가 컬럼을 통해 흐르면 셀 서스펜션을 추가하고 컬럼을 통해 수집 튜브로 흐르도록 합니다. 다음으로 EDTA와 BSA를 사용하여 PBS의 밀리리터 를 추가하여 플런저로 즉시 플러시합니다.플런저를 제거하고 셀을 계산하기 전에 플러시를 반복합니다. 세포를 원심분리한 후, 상체를 제거하고 배양을 위해 완전한 IMDM에서 세포 펠릿을 중단한다. 이산화탄소5%로 밤새 세포를 섭씨 37도에서 배양합니다.먼저, 레트로바이러스 플라스미드 DNA를 포장 플라스미드, 염화칼슘 및 물을 1.5 밀리리터 튜브에 결합합니다. 그런 다음 다른 1.5 밀리리터 튜브에 HBS 의 500 마이크로 리터를 추가합니다. 동시에 가장 낮은 설정으로 설정 된 소용돌이와 혼합하면서 HBS를 포함하는 튜브에 경피 혼합물 드롭 와이즈를 추가합니다.실온에서 20~30분 동안 배양혼합물을 배양한다. 잠복기 동안, HEK 세포에 클로로퀸을 추가하고 인큐베이터에 보관하십시오. 트랜스페션 믹스를 추가한 후, 신선한 DMEM10 미디어의 14밀리리터를 매우 느리게 추가하여 세포 매체를 변화시키는 섭씨 5%CO2 인큐베이터에서 8시간 동안 세포를 배양한다.접시의 벽에 천천히 파이펫팅HEK 세포의 스트리핑을 방지하는 데 도움이됩니다. 그런 다음 37섭씨 5%CO2 인큐베이터에서 하룻밤 동안 세포를 배양합니다. 10 밀리리터 주사기를 사용하여 바이러스 성 상체를 수집하십시오.그런 다음 주사기에 0.45 마이크로미터 주사기 필터를 부착합니다. 새로운 컬렉션 튜브에 바이러스 성 상체를 플런지. 약 16시간 후에 바이러스 성 상체를 수집하십시오.그 후, PBS에 재조합 인간 섬유네틴 조각의 2밀리리터를 추가하여 6개의 잘 배양 플레이트에 첨가한다. 다음 날 파이펫을 사용하여 플레이트에서 섬유네틴을 제거합니다. PBS에서 2%BSA로 플레이트를 차단하고 실온에서 플레이트를 30분 동안 배양합니다.진공을 사용하여 BSA를 제거하고 진공으로 제거하기 전에 PBS로 플레이트를 세척하십시오. 그 후 즉시 여과된 바이러스 성 상신체를 추가하고 플레이트를 2시간 동안 원심분리기를 추가합니다. 진공을 사용하여 상체를 제거하고 플레이트를 다시 회전시십시오.다음으로 진공으로 상체를 제거하고 PBS로 바이러스 코팅 된 우물을 씻으신다. 진공상태에서 PBS를 제거하고 이전에 배양된 c-Kip 플러스 마우스 세포를 바이러스 코팅 된 우물에 추가하십시오. 원심분리 후 세포는 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 배양합니다.48 변환 후 시간, 원심 분리를 통해 세포를 펠릿과 FACS 버퍼 1에서 다시 중단. 먼저 실온에서 마우스를위한 사이토카인으로 메틸 셀룰로오스를 해동하십시오. 그런 다음 FACS 튜브에서 메틸 셀룰로오스의 3 밀리리터를 알리쿼트합니다.메틸 셀룰로오스의 3 밀리리터에 적절한 억제제와 함께 세포 현탁액의 100 마이크로 리터를 추가합니다. 그런 다음 서스펜션을 10~30초 동안 높게 소용돌이시다. 대부분의 기포가 탈출한 후 1 밀리리터 주사기를 사용하여 3개의 복제 플레이트에 1 밀리리터의 미디어 플레이트를 플레이트에 놓습니다.접시를 큰 페트리 접시에 놓고 멸균물이 들어있는 열린 접시 하나를 놓습니다. 그런 다음 큰 페트리 접시를 덮고 섭씨 37도에서 세포를 배양합니다. 10 밀리리터의 물에 10 밀리그램의 요오도니트로테라졸륨염화물을 용해하여 요오도니트로테라졸륨 염화염을 준비하십시오.필터는 0.2 마이크로미터 필터가 장착된 Luer 잠금 주사기를 장착하여 염색 용액을 살균합니다. 조직 배양 후드에서, CFU 플레이트 주위에 염색 용액의 100 마이크로 리터를 드롭 현명한 추가합니다. 그런 다음 세포 배양 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 하룻밤 동안 플레이트를 배양합니다.마지막으로, 식민지가 어두운 붉은 갈색으로 변한 후 멸균 조직 배양 후드에 흰색 배경을 사용하여 염색 된 CFU 플레이트의 사진을 찍습니다. 이 프로토콜에서, 다중 편견 유전자 발현 분석은 종양유전자 중독을 오케스트레이션하는 유전 성분을 확인하기 위하여 이용되었습니다. 백혈병에서 치료 대상으로 c-Fos 및 Dusp1의 역할을 검증하기 위해, 그들의 과발현은 BCR-ABL1 종양 유전자를 발현하는 세포로 확인되었다.RT-qPCR 및 서부 블로팅을 통한 분석은 둘 다 BCR-ABL1에 의해 유도되었고 그들의 발현이 성장 인자 IL-3에 의해 증강된다는 것을 확인했습니다. YFP 플러스 발현 세포는 추가 시험관 내 및 생체 내 에세이를 위해 FACS를 통해 분류되었습니다. 결과는 c-Fos와 Dusp1의 삭제가 CFU 숫자를 억제한다는 것을 보여주었습니다.c-Fos와 Dusp1이 모두 결여된 세포는 c-Fos와 Dusp1의 손실이 BCR-ABL1 발현에 합성적으로 치명적임을 나타내는 모든 CfU를 전멸시키는 식민지및 이마티닙 치료를 형성하는 능력에서 현저히 손상되었습니다. 이 발달 후에, 이 기술은 암의 필드에 있는 연구원이 종양유전자 의존을 몰고 유전 네트워크 및 유전자를 탐구하고 이 유전자가 마우스 모형 및 인간 적인 환자에 있는 그들의 특정 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 탐구하는 길을 포장했습니다. 레트로바이러스 및 환자 샘플로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 안전한 실험실 관행을 준수해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

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레트로바이러스 매개 형질도입: 암세포에 표적 유전자를 도입하는 방법

초점 형성의 분석은 후보 종양 유전자의 변화 가능성을 평가하기위한 간단한 방법을 제공한다.

형성 초점 : 세포 기반 분석은 유전자의 발암 성 가능성을 파악하기 위해

이 프로토콜은 초파리의 눈 / 더듬이 가상적인 디스크 (EAD에게)에서 형광 표시, 유 전적으로 정의 클론 종양을 생성하는 방법을 보여줍니다. 그것은 세 번째 령 유충과 방법을 시각화하고 유전자 발현 변화와 종양 침입을 정량화를 처리하는 방법에서 EAD 뇌를 해부하는 방법에 대해 설명합니다.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

전임상 시험에서 인간 대상 시험으로 전환되는 새로운 약물 표적을 식별하는 것은 과학적인 우선 순위입니다. 이를 위해 여기에서는 유전자 고갈이 암 세포주 스페로이드에 미치는 영향을 조사하기 위한 기능적 유전체학 접근 방식을 설명하며, 이는 생체 내에서 인간 암을 보다 적절하게 모델링합니다.

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이 원고에서 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포 증식에 여러 후보 유전자의 역할의 간단 하 고 신속 하 게 조사에 대 한 클러스터 정기적으로 Interspaced 짧은 구조 반복 (CRISPR) CRISPR-Cas9-기반 방법을 설명 합니다. 병렬입니다. 이 기술은 확장성 이며 다른 암 세포 라인에 적용 될 수 있습니다.

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