Name: 68가 표시 된 아르기닌 글리신 Aspartate (RGD) 준비-신생에 대 한 펩 티 드 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 학습하세요 Gallium-68로 표기된 RGD 펩티드 제조법과 생물학적 평가 방법을. 이 단순한 방사성 금속 표기 프로토콜은 종양 영상 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 작품은 핵 연구 및 개발 프로그램 (No. 2017M2A2A6A02019904) 한국 정부에 의해 투자 하는 한국 국립 연구 재단 (NRF) 부여의 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 프로토콜 한국 방사능 연구소 및 의료 과학 동물 연구 위원회에 의해 승인에서 관심과 연구 동물의 사용에 대 한 지침에 따라 실시 했다. 모든 시 약 및 용 매 구입 되었고 더 정화 없이 사용. NOTA RGD 펩타이드 문학 방법15에 따라 준비 되었다.
주의: 68가 양전자와 감마선을 방출 한다. 방사성 물질과 직접 또는 간접 접촉을 포함 하 여 모든 실험 훈련 하 고 인사만을 허용에 의해 이루어져야 합니다. 방사성 물질을 처리 하는 경우 적절 한 보호 장비, 차폐, 방사선 dosimeter 배지 및 반지, 그리고 조사 미터를 사용 해야 합니다.
1. radiolabeling RGD 펩타이드 68GaCl3
참고: 68가 (t1/2 = 68 분, β+ = 89%, EC = 11%) 68조지아에서에서 얻은 /68Ge 발전기.
<ol><li>68GaCl3 4 mL와 발전기에서 0.05 M HCl의 elute</li>
	<li>5 mL 반응 유리병에 68GaCl3 (333 kBq, 1 mL)을 건조 30 분 동안 80 ° C에 질소 가스 제거.</li>
	<li>RGD-펩타이드의 솔루션 추가 (100 µ g)에서 68GaCl3 단계 1.2에서에서 포함 된 반응 유리병에 1 M 나트륨 아세테이트 (100 µ L, pH 5-6).</li>
	<li>5 분 동안 80 ° C에서 반응 혼합물이 열. 다음, 실내 온도 아래로 냉각 하십시오.</li>
	<li>고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)와 원유 제품을 정화. 다음과 같은 시스템을 사용 하 여: C-18 열, 0.5 mL/min의 유량, 1.17%/min (5%-40%에서 30 분)의 차입 이기의 그라데이션 기울기: A = 0.1 %trifluoroacetic 산 (TFA) 이기, B = 0.1 %TFA 물에. 참고:는 HPLC는 갖추고 포토 다이오드 배열 검출기와 방사능 검출기. 68가-RGD-펩타이드는 12.5 분 (그림 2)의 보존 기간에 수집 되었다.</li>
	<li>조지아-RGD-펩타이드 고체 상 추출 시스템을 사용 하 여 결과 68정화.<ol>
<li>C18 역 상 카트리지를 통해 해결책을 통과 하 고 염 분의 2 mL로 씻어.</li>
		<li>68가-RGD-펩타이드 95% 에탄올의 0.7 mL와 함께 elute 20 분에 대 한 질소 가스에서 80 ° C에서 용 매를 제거 하 고 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 사용 하기 전에 함께 다시 구성.</li>
		<li>방사선된 제품 0.22 μ m 살 균 필터를 통해 필터링 하 고 메 마른 염 분 해결책의 1 mL에 공식화.</li>
	</ol>
</li>
	<li>라디오 얇은 층 크로마토그래피 (TLC)에 의해 방사선 화학 수확량을 확인 합니다.<ol>
<li>인스턴트 얇은 층 크로마토그래피 판 (ITLC, 길이 10 ㎝)에 1 µ L를 자리. 자리에서 9 cm까지 eluent (수성 0.1 M 구 연산 산 성, pH 5.0)을 포함 하는 상공에서 접시를 개발 합니다. 참고: 68가 RGD 펩타이드에 대 한 보존 요소 0 이며 unreacted 68Ga3 + 에 대 한 고정 요소는 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>MBq/nmol로 비 방사능에 해당 하는 방사능의 비율에서 마지막 특정 활동을 계산 합니다. 참고:는 공식화 68가-RGD-펩타이드 HPLC를 100 µ L의 주입 후 양의 비 방사성 구성 요소 nonradioactive가 RGD 펩타이드를 사용 하 여 표준 보정 곡선에서 계산 했다.</li>
</ol>2. 체 외에서 세포 통풍 관
참고: 웁살라 87 악성 Glioma (U87MG) 인간의 세포종 세포 Dulbecco의 수정된 독수리의 미디어 (DMEM), 10% 태아 둔감 한 혈 청 및 1% 페니실린-스 보충에서 성장 했다. 셀 5% CO2의 습도 분위기에서 37 ° C에서 150 m m 요리에서 성장 했다. 셀 수확 또는 trypsinization 분할: 0.25% (w/v) trypsin 및 3-5 분 동안 37 ° C에서 PBS에 0.02% (w/v) ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA).
<ol><li>6 잘 플레이트 1 x 106 의 밀도 시드 U87MG 세포 세포/음.</li>
	<li>68가 RGD 펩타이드와 셀을 품 어 (111 kBq) 30, 60, 90, 120 분 준비 샘플 3 중에서 37 ° C에서.</li>
	<li>셀 2 워시 x 2 mL PBS의 trypsinization 여 수확. 사용 하 여 0.25% (w/v) trypsin 및 0.02% (w/v) ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA) PBS에서 37 ° C에서 3-5 분.</li>
	<li>세포 현 탁 액 (500 µ L)와 γ-카운터에서 측정값을 수집 합니다.</li>
	<li>% (셀/총 개수에 개수)는 세포에 의해 화합물의 백분율 이해를 계산 합니다.</li>
</ol>3. 혈 청 안정성 생체 외에서
<ol><li>갓된 마우스 혈 청의 500 µ L, 500 µ L의 인간 혈 청, 그리고 PBS의 500 µ L를 추가 합니다. 2 시간 동안 37 ° C에 혼합물을 품 어.</li>
	<li>지정 된 시간 간격에 의해 ITLC 평가 (30, 60, 90, 및 120 분). 1-2 µ L 약 수 ITLC 접시에 혼합물의 자리 (모바일 단계: 0.1 M 구 연산 산). 개발 단계 1.7에서 접시. 참고: 68가3 + 예정 이다 용 매 전면 이동 반면 레이블이 화합물 근원에 남아 있을 것 이다.</li>
</ol>4입니다. Lipophilicity 결정
<ol><li>68가-RGD-펩타이드 (3.7 MBq, 3.7 µ L) octanol-PBS 시스템 추가 (1:1, v/v, 총 1 mL).</li>
	<li>실 온에서 5 분을 실 온에서 5 분 동안 10000 x g 에서 원심 분리기 적극적으로 튜브를 혼합.</li>
	<li>각 계층에서 100 µ L 샘플을가지고 고 γ-카운터와 방사능 측정. 보고 된 log P 값은 3 샘플의 평균을 기반으로 합니다.</li>
</ol>5. 종양 모델
참고: BALB/c 누드 마우스 (6-8 주 오래 된, 여성, n = 23)이이 연구를 위해 사용 되었다. 쥐 이후 애완 동물 연구를 위해 사용 되었다 (n = 3) 그리고 biodistribution (n = 20) 종양 볼륨에 200-300 m m3 (이식 후 1-2 주)를 도달 하는 때.
<ol><li>28 G, 1/2 인치 인슐린 주사기로 종양 세포를 로드 합니다.</li>
	<li>왼쪽된 팔 지역으로 PBS의 100 µ L에서 U87MG 세포 (5 x 106)를 주사.</li>
	<li>세포 주입 중 2 %isoflurane 산소 가스에서와 마우스를 anesthetize.<ol>
<li>마우스는 페달 철수 반사 다음 곤란 오른쪽 뒷 다리의 발가락 사이의 집게와의 손실에 의해 anesthetized 되었습니다 확인 하십시오. 두지 마십시오 동물 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. αvβ3 Integrin 사용 하 여 애완 동물의 비보에 정량화
<ol><li>산소의 2 %isoflurane 마우스 anesthetize<ol>
<li>마우스는 페달 철수 반사 다음 곤란 오른쪽 뒷 다리의 발가락 사이의 집게와의 손실에 의해 anesthetized 되었습니다 확인 하십시오. 두지 마십시오 동물 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지.</li>
	</ol>
</li>
	<li>애완 동물 갠트리의 중앙에 머리를 놓습니다.</li>
	<li>정 맥은 종이 식 마우스 모델을 통해 1 분 동안 꼬리 정 맥에 68가-RGD-펩타이드 솔루션 (7.4 MBq, 200 µ L)를 관리 합니다.</li>
	<li>동시에 150 분 목록 모드 (동적 검사) 애완 동물 검사를 수행 합니다. 참고: 원시 애완 동물 데이터는 사용자 정의 기간 (즉, 매 30 분)에 의해 재건 되었다. 애완 동물 검사, 마이크로 계산 된 단층 촬영 (CT) 스캔 후 (x 선, 0.16의 50 kVp mA) 감쇠 보정에 대 한 실시 했다.</li>
</ol>7. 전 비보 Biodistribution
<ol><li>68가-RGD-펩타이드 (0.37 MBq, 200 µ L)이 종이 식 마우스 모델의 꼬리 정 맥에 주사. 주사 기간 동안 2 %isoflurane 산소 가스에서와 마우스를 anesthetize. 참고: BALB/c 누드 마우스 섹션 5에에서 설명 된 대로 4 개의 그룹으로 나누어 되었고 다른 시간 지점에서 희생 (n = 그룹 당 5).</li>
	<li>68가-RGD-펩타이드의 직후 쥐 그리고 30, 60, 90, 및 이산화탄소 안락사와 120 분 postinjection에 그들을 희생. 참고: 관심의 조직 추출 되었다. 선택된 대상 했다 혈액, 근육, 심장, 폐, 간, 비장, 위장, 소장, 신장, 뼈, 및 종양.</li>
	<li>조직 무게 고 γ-카운터와 방사능을 측정 한다. 참고: 결과 조직 (%ID / g)의 그램 당 주입된 비율 복용량으로 표현 되었다.</li>
</ol>

<ol><li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li>
<li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li>
<li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+%CE%B1v%CE%B23+integrin+directed+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as αvβ3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li>
<li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting%2C+imaging%2C+and+therapy+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li>
<li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-%2C+di-+and+tetrameric+RGD+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of αvβ3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers%3A+Promising+agents+for+tumor+integrin+%CE%B1v%CE%B23+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin αvβ3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li>
<li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+%CE%B1v%CE%B23expression%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin αvβ3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylated+RGD-containing+peptides%3A+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li>
<li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Euroean+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Imaging of αvβ3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-%2C+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+the+Fe%28III%29%2C+Ga%28III%29+and+In%28III%29+chelates+of+N%2CN%E2%80%B2%2CN%E2%80%B3-triazacyclononanetriacetic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N′,N″-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li>
<li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li>
<li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c%28RGDyK%29+for+the+Quantification+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B23%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Korean+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin αvβ3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li>
<li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, suppl2 113-128 (2008).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

현재에 연구, 우리 radiopeptide integrin αvβ3 및 그것의 생물 학적 평가 대상으로 준비 하는 프로토콜을 도입. 전통적인 신약 개발 복잡 한 절차를 포함 한다. 참고 자료 및 비교적 긴 평가 시간에 많은 양의 필요합니다. 제안 된 방법론은 섬세 한 평가 과정을 대체할 수 없습니다, 하지만이 시스템 심사 목적으로 사용할 수 있습니다. 이 시스템 시간 및 비용을 상당히 줄일 것 이라고 제안 했다.
지난 10 년간 많은 방사선된 RGD-펩타이드는 종양16이미징을 위한 radiotracers로 광범위 하 게 연구 되었습니다. 임상 시험 유망 방사성 의약품을 얻기 위해 약물 개발에 대 한 체계적 접근을 제공 한다. 방사선 화학 타당성, 높은 선택도 선호도 대상, 신진 대사, 안정과 적절 한 약물 동력 학 4 개의 주요 우려가 있습니다. 일상적인 애완 동물 연구에 대 한 합리적인 방사선 화...

신생은 새로운 혈관의 개발에 의해 특징 이다 생물학 과정. 많은 angiogenetic 요인 들 중 αvβ3 integrin 연관 된 침입는 integrin은 높은 신생 종양 혈관에 표현 되지만 결 석 때문에 정상 조직의1.
아르기닌 글리신 aspartate (RGD) 도메인, αvβ3 integrin 수용 체에 대 한 높은 선호도가지고, 이미징 에이전트2,3 유망 신생 여겨진다 방사선된 수용 체 바인딩 펩 티 드 , 4 , 5 , 6 , 7. 애완 동물을 위해 만들어진 여러 방사성 의약품 및 그것의 생물 학적 속성이 다양 한 동물 모델8,9,,1011에 검증 된. 방사성 핵 종에서 68가 다른 radioisotopes 비해 몇 가지 장점이 있다. 첫째, 그것은 사용자에 대 한 높은 접근성을가지고 하 고는 싸이 클 로트 론 필요 하기 때문에 경제적으로 유리 하다. 둘째, 68가 기반 방사성 의약품 생산 높은 공간 해상도 계산 하는 단일 광자 방출 단층 촬영 (SPECT), 더 정확한 정량화를 허용과 비교. 마지막으로, 68가 67.71 분 반감기는 작은 펩 티 드 또는 단백질의 준비에 대 한 충분 한 수 있습니다.
안정적인 단지 68가와 생산, 많은 chelators 개발 되었습니다. 대표 chelators는 diethylenetriaminepentaacetic, 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacetic 산 (NOTA), 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic 산 (DOTA), 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic 산 (TETA) 산 (DTPA), 및 N, N'-di(2-hydroxybenzyl) ethylenediamine-N, N'-diacetic 산 (HBED). NOTA 68가 (로그 안정성 일정 30.98)12,,1314와 매우 안정적인 복잡 한 형태로 보고 되었습니다.
현재 연구의 목적은 새로운 radiopeptide (그림 1)의 개발에 대 한 간단한 프로토콜을 제공 하는 것입니다. 예를 들어, 우리가 68RGD-펩타이드가 표시 된 및이 종이 식 모델에서 이러한 아날로그의 생물 학적 평가 대 한 현재 메서드를 준비합니다.

<table><tbody><tr><td>68Ga/68Ge 발전기</td><td>ITG</td> <td>Company-10</td> <td>mCi&nbsp;</td></tr><tr><td>염화수소 용액</td><td>: Sigma-aldrich</td><td>84429</td><td></td></tr>, <tr><td>아세트산 나트륨</td>, <td>Sigma-aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>C18 역상 카트리지</td><td>, Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>0.22-&mu; m 멸균 필터</td><td>Milllipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>Radio-TLC 스캐너</td><td>Bioscan</td><td>AR2000</td><td></td></tr><tr><td>ITLC 종이</td><td>Agilent</td><td>SGI001</td><td></td></tr><tr><td>구연산</td><td>Sigma-aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Waters-Waters</td><td></td> <td>1525 시스템 바이너리 펌프, 포토 다이오드 어레이 (Waters 2998), 방사능 검출기 (Raytest, Gabi)</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>J.T. Baker</td><td>14-650-359</td><td></td></tr><tr><td>Trifluoroacetic acid</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 변형된 Eagle media&nbsp;</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>T175 플라스크&nbsp;</td><td>코닝</td><td>CLS431080</td><td></td></tr><tr><td>트립신 EDTA (0.25%)</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토 마이신</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>15240112</td><td></td></tr><tr><td>&gamma; - 카운터</td><td>퍼킨 엘머</td> <td>-</td> <td>1480 마법사 3</td></tr><tr><td>인선린 주사기</td><td>Becton 디킨슨</td><td>326105</td><td></td></tr><tr><td>Synringe 펌프</td><td>하버드 장치</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>micro-PET/CT</td><td>Siemens Inveon</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

68가 표시 된 아르기닌 글리신 aspartate (rgd) 준비-신생에 대 한 펩 티 드

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

Αvβ3 integrin heterodimeric 접착 분자 종양 세포 마이그레이션 및 신생에 관여 이다. integrin 신생 종양 내 피 세포, 일반적으로 낮은 농도 그것이에 overexpressed입니다. 이 특정 표현의 αvβ3 항 혈관 신생 및 이미징 약에 대 한 유효한 biomarker 하기가. 기능 이미징 적임, 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 생화학 및 생리에 대 한 정보에서 변경 vivo에서, nanomolar 규모에 독특한 높은 감도 때문에 제공 합니다. 따라서, radiometal 기반 PET 방사성 의약품 종양 신생의 비-침략 적 정량화에 대 한 큰 관심을 받았습니다. 이 종이 신생의 평가 대 한 새로운 radiometal 표시 된 펩 티 드를 준비 하는 조직 프로토콜을 제공 합니다. 이 프로토콜은 방사선 화학 안정성, lipophilicity, 셀 통풍 관, 혈 청, 안정과 pharmacokinetic 속성에 대 한 정보가 있습니다. 68가-RGD-펩타이드 αvβ3 integrin 향해 대표 애완 동물 ligands 중 하나입니다. 여기, 우리는 68가 RGD 펩타이드와 생물 학적 효능 평가 준비 하는 프로토콜을 소개 합니다.

NOTA RGD 펩타이드와 68GaCl3 의 chelation 간단 했다 그리고 radiolabeling 수율 99% 이었다. 그림 2와 같이 반응 불순물 제거 성공적으로 되었습니다. 68가-RGD-펩타이드의 방사선 화학 순수성 보다 큰 99% 이었고, 종합의 끝에 특정 활동은 90-130 MBq/nmol (그림 3).
셀 통풍 관 68가 RGD 펩타이드에 대 한 값 되었고 1.49%, 0.85%, 0.36%, 0.39 0, 60, 90, 120 분, 각각. 혈 청 안정성 그 68가-RGD-펩타이드 외피와 PBS (&gt; 92% 안정성에서 2 h) 뿐만 아니라...

Αvβ3 integrin 높은 신생 겪고 활성화 된 내 피 세포에 표현 되는 접착 단백질의 일종 이다. 따라서,는 integrin의 무결성을 평가 종양학에 큰 관심입니다. 여기, 68가 표시 된 radiopeptides를 준비 하는 방법 및 그것의 생물 학적 효과 평가 하는 방법을 소개 합니다.

68가 표시 된 아르기닌 글리신 Aspartate (RGD) 준비-신생에 대 한 펩 티 드

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

이 방법은 갈륨 68 라벨 RGD-펩타이드의 제조와 그 유사체의 생물학적 평가를 위한 방법에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있다. 이 기술의 주요 장점은 새로운 방사성 금속 표지 펩타이드의 개발을위한 간단한 전신 프로토콜이라는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 우리 연구소의 사후 의사 인 정기혜가 될 것입니다.먼저 0.5 개의 어금니 염산을 사용하여 방사성 라벨이 부착된 갈륨 게르마늄 발생기에서 방사성 라벨이 부착된 갈륨 트리클로라이드를 엘루트합니다. 80°C에서 질소 가스로 5밀리리터 반응 바이알로 화합물을 제거합니다. 건조 된 화합물에 하나의 어금니 나트륨 아세테이트에 아르기닌 글리신 아세테이트 또는 RGD 펩티드의 100 마이크로 그램의 첨가에 의해 다음.혼합물을 실온으로 식히기 전에 5분간 반응 혼합물을 섭씨 80도에서 가열합니다. 고성능 액체 크로마토그래피로 원유 제품을 정화하려면 C18 컬럼에 용액을 추가하고 C18 역단계 카트리지를 통해 솔루션을 전달합니다. 식염수 2밀리리터로 카트리지를 세척하고 방사성 표지 펩타이드를 95%에탄올의 0.7 밀리리터로, 질소 가스 하에서 섭씨 80도에서 20분 동안 용매를 제거합니다.PBS에서 정제 된 펩티드를 재구성하고 멸균 0.22 미크론 멸균 여과기를 통해 방사성 표지 된 제품을 필터링합니다. 펩티드를 멸균 식염수 용액 1밀리리터로 제조하고 펩타이드 용액 1마이크로리터를 즉시 얇은 층 크로마토그래피 플레이트에 뿌린다. 이어서, 수성 0.1 의 어금반 구연산을 함유하는 챔버내의 플레이트를 개발하여 그 자리에서 9센티미터 떨어진 곳에서 전파 화학수량을 결정한다.펩티드의 생체 내 세포 섭취를 평가하기 위해, 삼중에서 30, 60, 90 또는 120 분 동안 잘 37 섭씨당 111 킬로베크렐의 방사성 라벨 RGD-펩타이드와 함께 6 개의 우물 판당 6 번째 인간 교모 세포 세포를 잘 치료하십시오. 인큐베이션이 끝나면 세척당 PBS 2밀리리터로 우물을 2회 세척하고 PBS에서 0.25%의 트립신과 0.02%EDTA로 3~5분간 37°C.로 수확한다. 그런 다음 각 웰에서 15 밀리리터 원내 튜브로 세포를 이송하여 감마 카운터에서 방사성 표지 펩타이드 섭취량을 측정합니다.방사성 라벨이 부착된 RGD-펩타이드의 혈청 안정성을 평가하기 위해 새로 준비된 마우스 혈청 500마이크로리터, 인간 혈청 500마이크로리터, PBS 500마이크로리터를 각 시료의 50마이크로

preparing-68ga-labeled-arginine-glycine-aspartate-rgd-peptide-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

쥐 전립선 암 모델에서 종양 침윤에 응고 된 혈장 단백질에 특정한 MRI 조영제를 대상으로 작은 펩티드와 암 MR 분자 이미징을 입증.

작은 분자 CLT1 펩타이드 표적 조영제와 전립선 암의 MR 분자 영상

EOB-DTPA의 분리 및 후속 착화 천연의 Ga (III) 및 (68)의 Ga 명세서 제시뿐만 아니라 표지 효율 모든 화합물 및 조사의 철저한 분석 시험 관내 안정성 및 N- 옥탄 올 / 물하는 수순 방사성 표지 복합체의 분배비.

EOB-DTPA와의 조지아 (III) 단지에 대한 조사 그것<sup&gt; (68)</sup&gt; 조지아 방사성 표지 된 아날로그

세포 및 약물 전달을 위한 장치로서 RGD 기능성 하이드로겔을 합성하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차에는 알킨 변성 폴리아크릴산(PAA)과 RGD-아지드 유도체 사이의 구리 촉매 알카인-아지드 고리첨가(CuAAC)가 포함됩니다. 하이드로겔은 마이크로파 보조 중축합을 사용하여 형성되며 물리화학적 특성이 조사됩니다.

치료 응용 프로그램을위한 도구로 RGD-작용 히드로 겔의 합성

대응하는 전구체의 사용에 기초하여 알킬화 구아니딘의 합성을위한 프로토콜이 제시된다.

맞춤형 선구자로 수정하고, 구아니딘 그룹의 기능화

1, 2-dithiolane의 합성에 대 한 프로토콜 펩 티 드와 펩 티 드에서 자기 조립 결과 supramolecular 구조의 특성 수정.

합성 및 특성 1, 2-Dithiolane의 수정 자가 조립 펩 티 드

MRGPRX2 수용체를 통해 비만 세포를 활성화할 수 있는 짧은 펩티드 라이브러리를 생성하기 위한 기술이 기재되어 있다. 관련 기술은 쉽고 저렴하며 다른 세포 수용체로 확장 될 수 있습니다.

엔지니어링 된 HEK 세포를 사용하여 MRGPRX2를 활성화하는 펩티드 스크리닝

TGT 표면은 성장 인자 - 인테그린 누화를 연구하는 혁신적인 플랫폼입니다. 유연한 프로브 설계, 부착 리간드의 특이성, 자극 조건의 정밀한 조절은 EGFR-인테그린 인터플레이의 강력한 정량적 평가를 가능하게 한다. 결과는 EGFR을 '메카노-조직자' 튜닝 인테그린 역학으로 강조하여 초점 접착 어셈블리 및 세포 확산에 영향을 미칩니다.

성장 인자 매개 인테그린 역학 및 접착력을 정량화하기 위한 장력 게이지 테더 프로브

이 연구는 [68Ga] D-도데카펩티드 길항제의 양전자 방출 단층 촬영 이미징을 기반으로 전신에서 프로그래밍된 죽음 리간드 1의 분포를 평가하는 비침습적 실시간 방법을 개발했습니다. 이 기술은 기존의 면역조직화학에 비해 장점이 있으며 면역관문 차단 요법의 혜택을 받을 적절한 환자를 식별하는 효율성을 향상시킵니다.

프로그래밍된 죽음 리간드 1 발현 이미징을 위한 68갈륨 표지 D-펩타이드 PET 추적자 개발

이 연구는 섬유아세포 활성화 단백질의 PET 이미징을 위해 GAIA V2 신디사이저를 사용한 [68Ga]Ga-3BP-3940 생산을 위한 자동화 프로세스를 설명합니다. 3개의 테스트 배치에 대해 수행된 품질 관리 테스트의 결과도 제공됩니다.

종양 미세환경의 PET 이미징을 위한 합성 모듈에서 [68Ga]Ga-3BP-3940의 자동 제조

학습하세요 Gallium-68로 표기된 RGD 펩티드 제조법과 생물학적 평가 방법을. 이 단순한 방사성 금속 표기 프로토콜은 종양 영상 연구에 활용됩니다.

⁶⁸가 표시 된 아르기닌 글리신 Aspartate (RGD) 준비-신생에 대 한 펩 티 드

더 많은 동영상 탐색