Name: 지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 49 s
Description: 학습하세요 지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수를 이용한 무릎 골관절염 환자의 연골 재생 임상 프로토콜입니다. 최소 침습적 방법으로 연골 유사 조직 재생 및 무릎 기능 개선 효과를 확인할 수 있습니다.

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작가 인정 Mipro 진료소 및 Jaepil/데이비드 리 그림 디자인의 직원에서 지원 합니다. 이 작품에서 바이오 및 의료 기술 개발 프로그램 MSIT (NRF-2017M3A9E4078014 번호)에 의해 투자 하는 NRF의 연구 보조금에 의해 지원 되었다 그리고는 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 과학 교육부와 정보 통신 (숫자 NRF 2017R1A2B4002315 NRF-2016R1C1B2010308).

승인 및 동의 사건 보고서를 다음 보고서를 명 지 대학 기관 검토 위원회 위원회 (MJUIRB)에 의해 기권 했다. 또한,이 임상 프로토콜 식약청의 헬싱키의 선언 및 규제 지침을 준수 했다. 절차에 대 한 통지 해준 동의 환자 로부터 얻은 했다.
1입니다. 지방 흡입
참고: 무 균 기법으로 수행 합니다.
<ol><li>다음 포함 조건 사용: 3 단계의 (1) MRI 증거 OA; (2) 남성 또는 여성; (3) 18 세 이상; (4) 충분 한 (100-110 g) 지방이 많은 직물 지방 흡입;에 대 한 (5) 외 과적 수술;과 진행 방식 (6) 보수 관리;의 실패 그리고 (7) 지속적인 비활성화 통증입니다.</li>
	<li>다음 제외 기준을 사용 하 여: (1) 활성 염증 또는 결합 조직 질병 통증 상태 (즉,루 푸 스, 류 마티스 관절염, fibromyalgia); 영향을 생각 (2) 활성 내 분 비 장애 통증 상태 (즉, 저하 증, 당뇨병);에 영향을 줄 수 있는 (3) 활성 신경 장애 통증 상태 (즉, 주변 신경 병, 다 발성 경화 증);에 영향을 줄 수 있는 (4) 활성 폐 질환 필요한 약물 사용; (5) 호르몬 관절 주사 지난 3 개월의 역사.</li>
	<li>생물 학적 클래스 A 후드와 함께 수술 실에 환자를 가져오고 그 (또는 그녀) 부정사 위치에 배치.</li>
	<li>5 %betadine (povidone-요오드)와 환자의 복 부 영역을 청소 하 고 복 부 지방 흡입에 대 한 청소 영역을 노출 무 균 기술을 사용 하 여 환자를 드러 워 진.</li>
	<li>Infero-옆으로 배꼽에서 약 5 cm 절 개 투-수-만든 (25 게이지, 1½ 인치) 바늘 5 mL 주사기에 피 네 프 린 없이 2 %lidocaine 2 개 mL를 사용 하 여 두 사이트 (왼쪽에는 배꼽의 오른쪽에 다른 하나) anesthetize 표 피 수준에서 각 사이트 주입 하 여</li>
	<li>투-수-사용 하 여 만든 tumescent 솔루션 (2 %lidocaine, 0.5 %bupivacaine, 1:1000 피 네 프 린의 0.5 mL의 20 mL의 정상적인 염 분, 40 mL 500 mL)의 5 mL 10 mL 주사기에서 바늘 (25 게이지, 1½ 인치) 절 개의 사이트 anesthetize</li>
	<li>피하 레벨의 깊이를 피부를 곤란 하 게 하 여 옆으로 배꼽 아래 0.5 cm 대략 5 cm의 2 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>11 호 블레이드를 사용 하 여 제기 피부 피하 수준까지 침투를 하지만 복 벽을 통해 관통 구멍.</li>
	<li>20 cm 16 게이지 cannula를 사용 하 여 anesthetize tumescent 솔루션의 700 ~ 800 mL 투 수 liposuctioned는 전체 더 낮은 복 부 지역 피하 수준.</li>
	<li>후에 연결 하는 3.0 m m 정을 연결 하 여 지방 흡입 기구를 준비 tumescent 솔루션 전체 더 낮은 복 부의 침투를 마무리 60 mL (30 mL) 수동 지방 흡입 또는 특별히 고안 된 3.0 m m 정에 연결에 대 한 주사기를 원심 분리기 키트, 불 임, 유지 하기 위해 폐쇄 시스템 주사기에 진공 기계 진공 기반 지방 흡입에 대 한 연결.</li>
	<li>지방 흡입 지방 조직의 tumescent 솔루션을 제외 하 고 100-110 g를 수행 합니다. 지방 흡입을 수행할 때 지방 조직 분리 하 고 제거 해야 tumescent 솔루션과 함께 가져옵니다.</li>
	<li>Tumescent 솔루션, 별도로 먼저 중력, 60 mL 주사기를 원심 분리기 키트에 지방 조직 전송 및 장소 (즉, 주사기의 부분은 하단에) 아래로 주사기. 5-6 분을 대기, 지방 조직 및 tumescent 액체 구분 됩니다. 주사기 플런저의 상단 부분에 눌러 주사기의 바닥에서 액체를 제거 합니다.</li>
	<li>100-110 g 무릎 당 지방 조직 (lipoaspirates)의 총 축적 되었습니다 때까지 1.9-1.11 위의 단계를 수행 합니다.</li>
</ol>2. 살 균 닫힌 시스템 ASC/ECM 혼합물의 준비
<ol><li>분리 후 중력 및 각 60 mL 원심 분리기 키트, 살 균 닫힌된 시스템 당 lipoaspirates의 50-55 g 축적 tumescent 솔루션 배치 원심 분리기 컨테이너 양동이와 1600 x g 5 분, 응축에서 스핀 2 원심 분리기 키트는 lipoaspirates 고 지방 조직에서 액체를 분리입니다. 이 추가의 과정 응축, lipoaspirates는 특정 경우에 지방 기름 생성 될 수 있습니다.</li>
	<li>동요, 안전 모자와 원심 분리기 키트의 하단에 플러그를 제거 주의 되 고.</li>
	<li>눌러서 천천히 아래로 원심 분리기 키트의 플런저 상단 하단 액체를 제거 합니다.</li>
	<li>별도 60 mL 주사기에 정상적인 염 분의 50 mL와 콜라 (콜라 결합 조직24 에 대 한 특정의 5 밀리 그램) 및 지방 조직25에 대 한 특정 콜라의 5 mg의 10 mg을 디졸브.</li>
	<li>원심 분리기 키트를 사용 하 여 60 mL 주사기를 연결 하 여 압축 된 lipoaspirate의 약 25-30 mL 녹은 콜라 (콜라 결합 조직에 대 한 특정의 5 밀리 그램) 및 지방 조직에 대 한 특정 콜라의 5 mg의 1:1 (v: v)의 비율로 혼합 특수 커넥터입니다.</li>
	<li>60 mL 주사기와 원심 분리기 키트 막대 또는 미는 사람을 사용 하 여 콘텐츠를 추진 하 여 압축 된 lipoaspirate와는 콜라로 믹스 철저 하 게.</li>
	<li>60 mL 주사기를 다시는 lipoaspirate와는 콜라의 혼합물을 전송 합니다.</li>
	<li>블레이드를 포함 하는 조직 균질 화기와 혼합물을 포함 하는 각 60 mL 주사기를 연결 합니다.</li>
	<li>빈 60 mL 주사기는 균질 화기의 다른 쪽 끝을 연결 합니다.</li>
	<li>4-6 시간에는 균질 화기를 통해 다른 60 mL 주사기 혼합물 밀어 절단 하 고는 lipoaspirate의 닦지.</li>
	<li>무 균된 lipoaspirate과 콜라 혼합 60 mL 원심 분리기 키트 전문된 커넥터를 통해 다시 전송</li>
	<li>원심 분리기 키트 미리 37 ° c.에가 열 된 인큐베이터에 배치 하는 컨테이너에 배치</li>
	<li>45 rpm에 회전 하는 동안 40 분 동안 37 ° C에서 무 균 혼합 두 개의 원심 분리기 키트를 품 어.</li>
	<li>외피의 40 분 후 살 균 방식에서 인큐베이터에서 컨테이너를 제거 합니다. 그런 다음, 원심 분리기 키트를 제거 하 고 원심 분리기 기계에 넣어.</li>
	<li>지방 조직 유래 SVF 분리 5 분 800 x g 에서 혼합물 원심</li>
	<li>원심 분리기, 후 (이 콜라를 포함 하 고 지방 조직 소화) 상쾌한에서에서 제거 각 원심 분리기 키트 플런저 위에 주사기 모자를 제거 하 고 주사기 잠금을 통해 여 플런저에 30 mL 주사기를 배치 하 여 연결입니다.</li>
	<li>천천히 30 mL 주사기로 채우기 위해 상쾌한에 대 한 30 mL 주사기의 배럴 부분을 누르십시오.</li>
	<li>지방 조직 유래 SVF의 마지막 3-4 mL를 떠나 원심 분리기 키트의 아래쪽의 마지막 3-4 mL까지 30 mL 주사기 배럴 아래로 누릅니다. 상쾌한 삭제 됩니다.</li>
	<li>플런저의 위에서 30 mL 주사기를 제거 하 고 lactated 벨의 솔루션 (D5LR)에 5% 포도 당 주사기를 채우십시오.</li>
	<li>채우기 원심 분리기 키트, D5LR와 함께 지방 조직에서 파생 된 SVF의 3-4 mL를 포함 하 여 플런저 상단 D5LR 가득 30 mL 주사기를 연결 하 여 최대 55 mL.</li>
	<li>30 mL 주사기를 제거 하 고 플런저, 모자 원심 분리기 키트 4 분의 300 x g 에서 다시.</li>
	<li>4 빨 래의 총 단계 2.17-2.21를 반복 합니다. 사용된 콜라 xenogenic입니다. 따라서, 대부분 콜라 4 빨 래에 의해 제거 됩니다. 그러나, FDA 승인에 대 한 프로토콜의 미세 조정 해야 할 수 있습니다 완전히 최종 볼륨에 콜라 잔류물을 제거 콜라 잔류물의 현재 금액이 없는 어떤 임상 환자에 대 한 충분히 무시할 수 있지만 부작용입니다.</li>
	<li>4번째 원심 분리 후 주입에 대 한 최종 SVF를 얻으려면 제거 안전 모자와 원심 분리기 키트의 하단 오프닝에 플러그 없이 떨고 하거나 원심 분리기 키트.</li>
	<li>특별히 디자인 된 커넥터를 사용 하 여 열고 원심 분리기 키트 하단에 20 mL 주사기를 연결 합니다.</li>
	<li>원심 분리기 키트의 하단에 정착 하는 셀을 흔들어 앞뒤로 여러 번 주사기의 플런저를 당겨.</li>
	<li>다른 세포 및 조직 ASCs와 ECM을 포함 된 SVF의 원하는 총 볼륨 제거 (보통 각 원심 분리기 킷 무릎 관절 주사에서에서 약 3-4 mL).</li>
</ol>3. PRP 준비 살 균 기술
<ol><li>ASCs 및 ECM을 준비 하는 동안 항 응 혈 약 시트르산 포도 당 솔루션의 2.5 mL와 헌 혈액의 30 mL를 그립니다.</li>
	<li>60 mL 원심 분리기 키트에 그려진된 혈액을 전송 합니다.</li>
	<li>730 x g 5 분에 그려진된 혈액을 원심 하 고 새로운 60 mL 원심 분리기 키트에는 상쾌한을 제거 합니다. 4 분, PRP의 3-4 mL의 결과 1300 x g 에서 상쾌한 원심</li>
	<li>10: 2의 비율로 3% (w/v) 염화 칼슘을 추가 주사, 앞 (PRP: 염화 칼슘, v: v) 그것을 활성화 하기 위해 PRP를.</li>
	<li>염화 칼슘 활성화 하는 PRP를 0.5% (w/v)를 발판으로 하를 추가 합니다. ECM, PRP, 함께 함께 이러한 ASCs 칼슘 염화 물에 의해 활성화 하 고 하 서 ASC/ECM 혼합물에 대 한.</li>
</ol>4. ASC/ECM 혼합물에 기초를 둔 치료
<ol><li>5 %betadine 환자의 무릎을 청소 하 고 살 균 방식으로 드러 워 진.</li>
	<li>만져 tibial와 대 퇴 뼈 사이 공동 공간에 대 한 무릎의 앞쪽.</li>
	<li>공동 캡슐 외부 그냥 피부에서 피상적으로 희석된 lidocaine (정상적인 염 분의 4 mL에 희석 1 %lidocaine 1 mL)으로 사출 사이트 anesthetize.</li>
	<li>희석된 ropivacaine (1 mL 0.75 %ropivacaine 정상적인 염 분 3 mL로 희석)와 공동 캡슐의 내부 anesthetize</li>
	<li>HA의 믹스 2 mL 주사기 주사기 커넥터를 통해 20 mL 주사기에 포함 된 SVF의 6-8 ml</li>
	<li>주사기 주사기 커넥터를 사용 하 여 헌 이미 준비 된 PRP와 5 mL 주사기에 준비 되 고 3-4 mL를 염화 칼슘 0.4 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>3.5-4.5 mL 5 mL 주사기에 PRP/칼슘 염화 물의 8-10 mL 주사기 주사기 커넥터를 통해 20 mL 주사기에 HA/SVF 혼합물의 결합.</li>
	<li>즉시 혼합물 (약 12-15 mL)를 천천히 주사 또는 초음파 지도 없이 38 m m 18 게이지 바늘을 사용 하 여 무릎의 앞쪽 tibio-대 퇴 관절에.</li>
	<li>주입 후 접는 거 즈 4 x 4 면 4 번 고 접힌된 4 x 4 거 즈 위에 테이프를 배치 하 여 압력 사출 사이트 붕대.</li>
	<li>60 분 셀 첨부 파일에 대 한 허용 여전히 남아 환자를 지시 합니다.</li>
	<li>지시 하는 활동을 제한 하는 환자는 병원에서 퇴원 후 1 주 최소.</li>
	<li>3 주 이상 칼슘 염화 물에 의해 활성화 하는 PRP의 3 개의 추가 주사 클리닉에 반환 합니다.</li>
</ol>5. 치료 후 후속
<ol><li>시각 아날로그 척도 (VAS) 측면 통증 개선 및 물리 치료 매개 변수에서 기능 향상에 대 한 2, 4, 16 18 (22)의 주에 환자를 평가 합니다. 앞에서 설명한26,27기능 평가 지 수 (금), VAS, 및 모션 (ROM)의 범위를 결정 합니다.</li>
	<li>치료 후 MRI 3 개월 치료 후 환자를 따라 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

2001 년에, Zuk 외. 콜라6콜라겐 매트릭스를 파괴 함으로써 지방 조직에서 분리 된 줄기 세포. 나중에, 그룹이 보여주었다 지방 조직에서 분리 된 줄기 세포 연골 및 mesoderm 원점에서의 다른 조직으로 변환 수 증명 하는이 줄기 세포에에서 엽 했다.
마찬가지로,이 문서에 제공 된 절차 인간 환자에 게 비슷한 메서드를 적용 하는 수정 된 프로토콜입니다. 프로토콜의 주요 수정 및 절차 수행의 용이성을 유지 하면서 공기 접촉을 최소화 하기 위하여는 lipoaspirates 처리에 닫힌된 시스템 주사기의 설립 이다. 이러한 닫힌된 시스템 주사기를 사용 하 여, 지방이 많은 직물 지방 흡입을 통해 얻은. 다음, 닫힌된 시스템 주사기 내 콜라는 lipoaspirates 혼합 했다. 나중에, 콜라는 닫힌된 시스템 주사기 내 콜라 농도 diluting 하 여 혼합물에서 제거 되었습니다. 최종 결과 과정의 쉽게...

중간 엽 줄기 세포 (MSCs) 연골1,2,,34,,56을 다시 생성 하는 기능으로 알려져 있습니다. 그들은 쉽게 다양 한 소스에서 얻어질 수 있다: 골 수, 제대혈, 및 많은 다른 사람의 사이에서 지방 조직. 이러한 소스 중 지방 조직 임상 설정7,8에 연골을 다시 생성 하려면 어떤 문화 확장 없이 MSCs의 충분 한 수를 구할 수 있는 유일한 소스 이다. 자가 골 수 기질 혈관 분수 (SVF) 얻어질 수 있다 쉽게 뿐만 아니라. 그러나, 줄기 세포 문화 비 확장 된 골 수에 포함 된 수는 매우 낮은7,8. 코드 혈액은 MSCs의 충분 한 번호를 포함할 수 있습니다. 그러나, 탯 줄 혈액 헌 SVF의 쉽게 사용할 수 있는 소스 되지 않습니다.
SVF를 처리 지방 조직의 수많은 방법 임상 응용 프로그램에 대 한 사용할 수 있습니다. 이러한 가운데, 콜라를 사용 하 여 지방 조직에서 MSCs를 얻기의 방법 개발 및 Zuk 외 에 의해 확인 5 , 6, 잘 허용 됩니다. 콜라를 사용 하는이 방법은 정형 외과에 임상 응용 프로그램에 대 한 수정 되었습니다. 임상 설정으로 적용 하기 위해서는 시스템 편의 유지 하면서는 불 임을 유지 하기 위해 폐쇄 시스템 이어야 합니다. 이 문서에서 제공 하는 하나의 특정 수정은 lipoaspirates의 균질 화를 포함 한다. 작은 크기의 lipoaspirates는 분해의 결과에 고르지 못한 지방이 많은 직물의 큰 것 들 보다는 상대적으로 빨리 소화 된다. 또한, 이러한 큰 크기 lipoaspirates 관절 주사9,10를 수행 하는 동안 주사기와 바늘을 방해할 수 있는 섬유 조직을 생성할 수 있습니다. 이러한 문제를 방지 하기 위하여는 lipoaspirates 자르고 콜라와 부 화 하기 전에 lipoaspirates를 닦지 무 균 수 있습니다. 결과 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF 더 균일 한 세포 외 기질 (ECM) 무 균된11하지 않은 lipoaspirates에 비해 포함할 수 있습니다. Broken-down ECM에 있는 SVF 포함 된 비 계12으로 작동 수 있습니다.
2009 년, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 한국 식품 의약품 안전 청 (식약청) 의사13에서 최소한의 처리와 의료 시설 내에서 처리 될 때에 의해 허용 되었습니다. 나중에, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF은 잠재적으로 재생성 연골 같은 조직의10,,1415 에 의해 관절염 (OA) 환자의 무릎 기능을 개선 하기 위해 잠재적인 대리인으로 이용 되어 , 16 , 17 , 18 . 
2011 년 박 보였다 처음으로 지방 조직 유래 줄기 세포 (ASCs) 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF에 포함 된 잠재적으로 인간의 OA 환자 혈소판이 풍부한 주사 때에 연골 같은 조직의 재생성 무릎 기능을 향상 시킬 수 있습니다. 플라즈마 (PRP) 14. 또한, 박 외. 2013 관련 91 환자에서 안전 데이터를 보고 있다. 말은 효능이 안전 데이터에 보고 이었다 6715. 그 후, 박 외. 추가 연구는 초승달 모양의 눈물과 chondromalacia patellae10,16,17 가진 환자에서 연골 같은 조직 재생 때문에 잠재적으로 향상 된 무릎 기능 보였다 ,18. 기사 보고에 따라, 그것은이 문서에서 제공 하는 프로토콜에 의해 처리 하는 지방 조직의 100 g에 포함 된 줄기 세포의 수에 따라 환자의 특성8, 1000000 40,000,000에서 범위 수 있습니다 알려져 있다 19 , 20 , 21 , 22 , 23.
여기, 우리는 하와 염화 칼슘을 활성화 하는 PRP 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF를 사용 하 여 인간 무릎 OA의 임상 프로토콜을 제시. 이 임상 프로토콜, 불 임, 유지 하기 위해 폐쇄, 수동 시스템을 포함의 첫 번째 버전 201114에 보고 되었다. 동일한 프로토콜 최적화 되었다, 불 임, 유지 하 고 2013 201610,15에서 보고 했다. 여기, 최적화 된 프로토콜 제공 됩니다. 프로토콜의 개요 개요는 그림 1에 표시 됩니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58363/58363fig1.jpg"> 그림 1: 프로토콜의 도식 개요. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58363/58363fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

<table><tbody><tr><td><강력한>소재</강력></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% 베타딘 (포비돈-요오드)&nbsp;</td><td>공급자:Firson Co., Ltd.</td><td></td><td></td>657400260</tr><tr><td>2% 리도카인&nbsp;</td><td>대한제약(주)</td><td></td><td></td>670603480</tr><tr><td>Tumescent 솔루션&nbsp;</td><td>(주)명문제약</td><td>N01BB01</td><td>용액은 500mL 생리식염수, 40mL 2% 리도카인, 20mL 0.5% 마르카인, 0.5mL 에피네프린 1:1000으로 구성하였다.</td></tr><tr><td>리바아제 TL 및 TM 연구 등급&nbsp;</td><td>Roche 응용 과학</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>D5LR</td><td>Dahan Pharm. 주식회사</td><td>645101072</td><td>젖산 Ringer의 용액에 포도당 5 %&nbsp;</td></tr><tr><td>항응고제 구연산염 포도당 용액&nbsp;</td><td>펜왈, Inc.</td><td>NDC : 0942-0641</td><td>용액은 0.8 % 구연산, 0.22 % 구연산 나트륨 및 0.223 % 포도당으로 구성되었다.</td></tr><tr><td>3%(w/v) 염화칼슘&nbsp;</td><td>충웨이제약(주</td>)<td></td><td></td>644902101</tr><tr><td>0.5% (w/v) HA (히알루론산)</td> <td>Dongkwang pharm. Co., Ltd.</td><td></td><td></td>645902030</tr><tr><td>0.25% Ropivacaine</td><td>Huons Co., Ltd. (주)</td><td>670600150</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.0 mm 캐뉼라&nbsp;</td><td>(주)우주의료기기</td><td></td><td></td>ML30200</tr><tr><td>60mL Luer-Lock 주사기</td><td>BD (Becton Dickinson)&nbsp;</td><td></td><td></td>309653</tr><tr><td>원심분리기 배럴 키트&nbsp;</td><td>공급자:CPL Co., Ltd.</td><td>30-0827044</td><td></td></tr><tr><td>블레이드를 함유한 조직 균질화기</td><td>(주)씨피엘</td><td>30-0827045</td><td></td></tr><tr><td>회전배양기 믹서</td><td>(주)메디칸</td><td>MS02060092</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>한일과학(주)</td><td>CE1133</td><td></td></tr><tr><td>자기 공명 영상</td><td>필립스 의료 시스템 Inc.</td><td>18068</td><td></td></tr><tr><td>초음파 검사</td><td>삼성 메디슨 (주</td><td>) CT-LK-V10-ICM-09.05.2007</td><td></td></tr></tbody></table>

지방 조직 유래 stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

관절염 (OA) 가장 일반적인 쇠 약 질환 중 하나입니다. 최근, 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)의 다른 형태를 사용 하 여 무릎의 기능을 개선 하기 위해 수많은 시도 되었습니다. 한국, 골 집중, 코드 혈액에서 파생 된 줄기 세포 연골 재생을 위한 한국 식품 의약품 안전 청 (식약청)에 의해 승인 되었습니다. 또한, 한 지방 조직 유래 stromal 혈관 분수 (SVF) 인간 환자에서 관절 주사에 대 한 식약청에 의해 허용 되었습니다. 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 중간 엽 줄기 세포 외 기질 (ECM)를 포함합니다. ECM 배설 히 알루 론 산 (HA) 및 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP) 염화 칼슘에 의해 활성화 MSCs 재생성 연골 및 무릎 기능을 개선에 도움이 될 수 있는 다양 한 cytokines. 이 문서에서는, 우리는 OA 인간 환자에서 연골 같은 조직의 재생성 하 여 무릎 기능을 개선 하는 프로토콜을 제시. 프로토콜의 결과 뒤에 몇 가지 추가적인 간행물 2011 년에 처음 보고 되었다. 프로토콜 콜라 섞인 헌 lipoaspirates를 지방 흡입을 포함 한다. 이 lipoaspirates 콜라 혼합물 다음 잘라내어 동안 주사 바늘을 방해할 수 있습니다 큰 섬유 조직을 제거 하는 무 균. 나중에, 혼합물 지방 조직에서 파생 된 SVF를 incubated. 포함 하는 지방 조직에서 파생 된 MSCs와 ECM의 나머지 결과 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF HA와 함께 환자의 무릎에 주입 하 고 염화 칼슘 PRP를 활성화. 무릎 통증, 붓기, 그리고 유리 모양의 연골 같은 조직의 MRI 증거 함께 모션의 범위에 따른 우리의 프로토콜으로 치료 했다 환자의 세 가지 경우는 있습니다.

3 환자 (87 세 여성을 무대 3 OA, 한 68 세 남성 하나 3 OA, 무대와 함께 한 60 세 여성 무대 3 OA) 가능성에 대 한 어떤 중요 한 과거 의료 기록을 영구 무릎 통증으로 병원에 제시 하 고 원하는 없이 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 치료. 모든 3 명의 환자 정형 외과 의사에 의해 검사를 그들의 무릎을 했다 총 무릎 보충 (TKR)을 제공 했다 하 고는 수술을 꺼 려 했다. 절차, 이전 모든 세 환자 장기 개선 없이 스테로이드와 HA의 여러 주사를 받았습니다 했다.
87 세 한국 여성 환자, 심한 통증의 불평, 시험의 때에 (8;의 VAS 점수 그림 2A) 나머지에 있는 동안. 그녀는 고통을 증가 설명 ([금: 37; 그림 2A) ...

여기, 선물이 지방 조직 유래 stromal 혈관 분수와 인간의 골 관절염 환자에서 연골 같은 조직의 재생성 하 여 무릎 기능을 개선 하는 응용 프로그램을 생성 하는 프로토콜.

지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

골관절염은 노인 인구 중 가장 흔한 쇠약 장애 중 하나입니다. 현재, 골관절염의 근본 원인에 대한 명확한 치료법은 없습니다. 이 임상 프로토콜은 조직과 같은 연골을 재생하여 인간 무릎 골관절염의 유망한, 최소 침습 및 대체 치료를위한 혁신적인 절차를 설명합니다.골관절염은 노인 인구 중 가장 흔한 쇠약 장애 중 하나입니다. 현재, 골관절염의 밑줄 원인에 대한 명확한 치료법은 없습니다. 이 임상 프로토콜은 연골과 같은 조직을 재생하여 인간 무릎 관절염의 유망한, 최소 침습 및 대체 치료를위한 혁신적인 절차입니다.환자를 생물학적 위험 클래스 A 후드가 있는 수술실로 가져와 서척추 자세를 취하십시오. 환자의 복부 부위를 5% 베타딘-포비딘으로 청소하고 멸균 기술을 사용하여 환자를 드레이프하여 지방 흡입을 위한 복부의 깨끗한 부위를 노출시합니다. 약 5센티미터의 후천성에서 후불로, 두 개의 부위를 마취하고, 하나는 왼쪽에, 다른 하나는 절개 배꼽의 오른쪽에 있습니다.표피 수준에서 각 부위를 주입하여 5 밀리리터 주사기에 25 게이지 1.5 인치 바늘을 가진 에피네프린없이 2 %의 리도카인을 사용하십시오. 절개 부위를 마취하여 5밀리리터의 tumescent 용액과 10 밀리리터 주사기 및 바늘 25 게이지 1.5 인치를 사용하여 만들 수 있습니다. 피하 레벨의 깊이를 높이기 위해 피부를 꼬집어 하여 배꼽 아래 약 5센티미터의 2개의 절개를 합니다.숫자 11 블레이드를 사용하여, 제기 된 피부가 피하 수준으로 침투하지만 복벽을 관통하지 않도록 도와줍니다. 20센티미터 60게이지 캐뉼라를 사용하여, tumescent 용액의 700~800밀리리터로 지방 흡입될 전체 하복부 영역의 피하 수준을 마취한다. tumescent 용액으로 전체 하복부의 침투를 완료 한 후, 수동 지방 흡입을위한 60 밀리리터 또는 30 밀리리터 주사기에 연결된 3.0 밀리미터 캐뉼라 또는 원심 분리 키트에 연결된 3.0 밀리미터 캐뉼라를 연결하여 지방 흡입 장치를 준비합니다.진공 보조 지방 흡입을 위해 진공 기계에 연결된 멸균을 유지하기 위해 FDA CDRH에서 자체 개발한 폐쇄 시스템 주사기. 투석용액을 제외한 100~110그램의 지방 조직을 얻기 위해 지방 흡입을 수행한다. 지방 흡입을 수행 할 때, 지방 조직은 tumescent 용액과 함께 얻을 수 있지만 분리하고 제거해야합니다.투석용액을 중력에 의해 먼저 분리하기 위해 원심분리기 키트의 지방 조직을 60밀리리터 주사기로 이송하여 주사기를 내려 놓을 수 있다. 예를 들어 주사기의 개구부가 맨 아래에 있습니다. 5~6분을 기다려서, 지방 조직과 tumescent 용액이 분리됩니다.주사기 플런저 의 상단에 눌러 주사기의 바닥에있는 액체를 제거합니다. 상기 단계9~11을 무릎당 100그램에서 110그램의 지방 조직 지질 흡인이 축적될 때까지 수행한다. tumescent 용액을 중력에 의해 분리하고 각 60 밀리리터 원심분리기 키트 멸균 폐쇄 시스템당 50그램에서 55그램의 지질 흡인을 축적한 후, 2개의 원심분리기 키트를 원심분리 용기 버킷에 넣고 1600G에서 5분간 회전하여 지질 흡인을 응축시키고 유체를 지방 조직으로부터 분리한다.이 과정은 지질 흡인을 더 응축시키고 특정 경우에 지방 기름을 생성할 수 있습니다. 흔들리지 않도록 주의하여 원심분리기 키트 하단의 안전 캡과 플러그를 제거합니다. 원심분리기 키트의 플런저 위에 천천히 아래로 밀어 내하여 바닥 유체를 제거합니다.별도의 60 밀리리터 주사기에, 콜라게나아제 10 밀리그램, 결합 조직에 대 한 특정 5 밀리 그램 콜라게나아제, 그리고 5 밀리 그램의 콜라게나아제의 5 밀리 그램 일반 식염수와 지방 조직에 대 한 특정. 약 25~30밀리리터의 응축지질 흡용을 용존 콜라게나아제와 혼합하고, 결합 조직에 특정한 콜라게나아제 5밀리그램, 지방 조직에 특정한 콜라게나아제 5밀리그램을 1대 1의 비율로, 부피량에, 60밀리리터 주사기를 원심분리키에 연결하여 교전된 결합기를 사용하여 양립키트에 연결한다. 60 밀리리터 주사기와 원심분리기 키트 사이의 컨텐츠를 낚싯대 나 푸셔를 사용하여 준비 흡기와 콜라게나아제를 응축시키기 위해 철저히 섞는다.지질 흡인과 콜라게나아제의 혼합물을 60 밀리리터 주사기로 다시 옮는다. 혼합물을 함유한 각 60밀리리터 주사기를 블레이드를 함유한 조직 균질화제와 연결합니다. 빈 60 밀리리터 주사기를 균질화의 다른 쪽 끝에 연결합니다.다른 60 밀리리터 주사기에 다른 60 밀리리터 주사기를 4~6회 동안 밀어지질 흡인의 절단 및 절단을 초래한다. 균질화된 지질 흡인및 콜라주누혼합물을 60밀리리터 원심분리기 키트로 다시 전속하여 특수 커넥터를 통해 전달합니다. 원심분리기 키트를 용기에 넣고 섭씨 37도에서 예열된 인큐베이터에 넣습니다.45 rpm에서 회전하는 동안 40 분 동안 37섭씨37도에서 균질화 혼합물로 두 개의 원심분리기 키트를 배양합니다. 40분 동안 인큐베이션을 한 후, 인큐베이터에서 용기를 멸균 방식으로 제거합니다. 그런 다음 원심 분리기 키트를 제거하고 원심 분리기 기계에 넣습니다.지방 조직 유래 SVF를 분리하기 위해 5분 동안 800 G에서 혼합물을 원심분리합니다. 원심분리기 후, 콜라게나아제와 소화된 지방 조직을 포함하는 상체는 플런저 위에 주사기 캡을 제거하고 주사기 잠금 연결을 통해 플런저 개구부에 30 밀리리터 주사기를 배치하여 각 원심분리기 키트에서 제거됩니다. 30 밀리리터 주사기의 배럴 부분을 천천히 눌러 30 밀리리터 주사기를 채우도록 슈퍼나탄을 넣습니다.30 밀리리터 주사기 배럴을 원심분리기 키트 바닥의 마지막 3~4밀리리터까지 누르고, 마지막 3~4밀리리터만 방치하여 조직 유래 SVF를 누릅니다. 상체가 폐기됩니다. 플런저 상단에서 30 밀리리터 주사기를 제거하고 D5LR이라고도 하는 5%dextrose 수유 링거 용액으로 주사기를 채웁니다.플런저 개구부의 상단에 D5LR로 채워진 30 밀리리터 주사기를 부착하여, 최대 55 밀리리터로 D5LR을 함유한 지방 조직 유래 SVF의 3~4밀리리터를 포함하는 원심분리기 키트를 채웁니다. 그런 다음 30 밀리리터 주사기를 제거하고 플런저 개구부를 캡하고 원심분리기 키트를 300 G에서 약 4분 동안 다시 원심분리기로 제거합니다. 총 4개의 세척에 대해 17번에서 21번으로 단계를 반복합니다.네 번째 원심분리기 후, 주입을 위한 최종 SVF를 얻기 위해 원심분리기 키트의 하단 개구부의 안전 캡과 플러그를 흔들어보거나 돌리지 않고 제거한다. 특별히 설계된 커넥터를 사용하여 원심분리기 키트 바닥 개구부에 20밀리리터 주사기를 부착합니다. 20 밀리리터 주사기의 플런저를 여러 번 앞뒤로 당겨 원심분리기 키트의 바닥에 정착한 세포를 흔들어 줍니다.다른 세포 및 조직과 함께 AST와 ECM을 모두 포함하는 SVF의 원하는 총 부피를 제거합니다. 일반적으로 무릎 관절 주사에 대 한 각 원심 분리 기 키트에서 약 3 ~ 4 밀리 리터. 우리는 항응고제 구연산 덱스트로스 용액의 2.5 밀리리터와 함께 자가 혈액 30 밀리리터를 했습니다.그런 다음 그려진 혈액은 60 밀리리터 원심분리기 배럴 키트로 옮겨졌습니다. 그런 다음 5 분 동안 730 중력에서 원심 분리되었습니다. 그리고 상체는 제거하고 새로운 60 밀리리터 원심 분리기 배럴 키트에 넣어.상술은 4분 동안 1350중력으로 원심분리되어 4.4밀리리터를 얻었다. 환자의 무릎을 5%의 베타딘으로 청소하고 멸균 방식으로 드레이프합니다. 경골과 대퇴 뼈 사이의 관절 공간에 대한 무릎의 전방을 palpate.분사 부위를 희석 된 리도카인으로 표면적으로 마취하고, 1 밀리리터의 1 밀리리터는 피부에서 관절 캡슐 바깥쪽에 일반 식염수 4 밀리리터로 희석됩니다. 그런 다음 희석 된 로피바카인, 일반 식염수 의 3 밀리리터로 희석 된 1 밀리리터 0.75 %의 ropivacaine로 조인트 캡슐의 내부를 마취시합니다. 주사기 커넥터에 주사기를 통해 20 밀리리터 주사기에 포함 된 SVF의 6 ~ 8 밀리리터에 HA의 2 밀리리터를 혼합합니다.주사기를 주사기 커넥터에 사용하여 이미 준비되고 5 밀리리터 주사기로 준비된 자가 PRP의 3~4밀리리터에 0.4 밀리리터의 염화물 을 첨가하십시오. 3.5 ~4.5 밀리리터 PRP 염화칼슘을 5밀리리터 주사기에 8-10 밀리리터의 HA-SVF 혼합물을 주사기를 통해 주사기 커넥터에 20 밀리리터 주사기에 결합합니다. 즉시 혼합물을 주입, 약 12 받는 것 15 밀리 리터, 천천히 무릎의 전방 tibial-대퇴 관절에, 사용 하 여 38 밀리 미터 18 게이지 바늘 또는 초음파 지침 없이.주입 후, 4x4 면 거즈를 4번 접고 접힌 4x4 거즈 위에 테이프를 배치하여 압력으로 사출 부위를 붕대를 감았다. 환자에게 세포 부착을 허용하기 위해 60 분 동안 가만히 있다고 지시하십시오. 환자에게 퇴원 후 1주일 동안 최소한의 활동을 제한하도록 지시합니다.3 주 동안 염화 칼슘에 의해 활성화 된 PRP의 3 개의 추가 주사에 대 한 클리닉에 반환. 3단계 OA를 가진 환자는 프로토콜 섹션에 기재된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM개선.16주까지 환자의 통증과 ROM은 16주 후 복용한 치료 MRI가 70% 이상 크게 개선되었으며, 무릎 내측의 연골과 같은 조직의 두께가 증가하는 것으로 나타났다. 3단계 OA를 가진 또 다른 환자는 프로토콜 섹션에 기술된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM개선.18주까지 통증과 ROM은 18주 이후에 복용한 MRI가 80%로 크게 향상되었으며, 무릎의 전방 내측에 연골과 같은 조직의 신장이 증가하는 것으로 나타났다. 3단계 OA를 가진 세 번째 환자는 프로토콜 섹션에 기술된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM은 22 주까지 약 50 %까지 개선되었으며, 통증과 ROM은 22 주 후에 취한 80 % 반복 MRI가 크게 개선되어 무릎의 내측에 연골과 같은 조직의 높이가 증가하는 것으로 나타났습니다.현재 치료법은 OA의 치료에 사용할 수 없습니다. 그러나, ASC와 균질화 된 ECM을 가진 줄기 세포 치료의 경피 주사및 HA와 유사 PRP와 함께 염화 칼슘으로 활성화 무릎 OA 치료의 현재 치료 치료에 대 한 대안을 제공할 수 있습니다.

clinical-protocol-producing-adipose-tissue-derived-stromal-vascular

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은의 고립을 설명 지방 - 파생 lipoaspirate과 골격 재생을 평가하는 4mm 중요한 크기 calvarial 결함의 생성의 stromal 세포를.

Lipoaspirate에서 수확 지방 - 파생 Stromal 셀을 사용하여 임계 크기 Calvarial 결함 모델의 수리

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

인간 지방 유래 기질 세포 내의 전사 이질성은 세포 표면 마커와 골 형성 유전자를 사용하여 단일 세포 수준에서 정의할 수 있습니다.  우리는 골형성 잠재력이 증가된 세포 하위 집단의 분리를 위해 유세포 분석을 활용하는 프로토콜에 대해 설명하며, 이는 두개안면 골격 재건을 향상시키는 데 사용될 수 있습니다.

분리 및 인간의 농축 향상된 골 연장술에 대한 기질 세포를 지방이 유래

이 연구의 목적은 microfractured 고 순화 된 지방 유래 줄기 세포를 사용 하 여 탈 러 스의 osteochondral 장애의 절경 치료에 대 한 프로토콜을 보고입니다.

헌 Microfractured 고 순화 된 지방 조직에서 탈 러 스의 Osteochondral 장애의 절경 관리에 대 한

여기, 우리는 일련의 유화 및 여러 centrifugations를 포함 하는 기계적인 프로세스를 통해 지방 조직에서 stromal 혈관 분수를 얻기 위해 프로토콜 제시.

재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization

본 프로토콜은 ADSC 단리를 위한 개선된 방법론을 기술하여 문헌에 비해 시간 이득과 함께 엄청난 세포 수율을 초래한다. 이 연구는 또한 장기 동결보존 후 비교적 많은 수의 생존 가능한 세포를 얻기 위한 간단한 방법을 제공합니다.

지방 조직에서 중간엽 줄기세포를 얻는 기술 및 장기 냉동 보존에서 기질 혈관 분획 특성 분석

피브린 하이드로겔과 함께 기계적으로 분리된 기질 혈관 분획(SVF)은 조직 공학 및/또는 상처 치유 목적을 포함한 다양한 적응증에 대해 생존 가능한 지방 유래 기질 세포를 위한 쉽고 효율적인 운반체를 제공합니다. 여기에서는 중개 연구 및 임상 응용을 위한 기계적 SVF(mSVF)-피브린 하이드로겔 구조체의 준비를 제시합니다.

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

여기에서는 자가 지방 조직을 서로 다른 물리화학적 특성과 기능을 가진 다양한 지방 구성 물질로 변환할 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

지방을 특수 성분으로 전환하기 위한 혁신적인 지방 조직 분획

암종 - 관련 섬유아 세포 (CAFs) 종양의 기질 내에 존재 myofibroblasts 풍부한은 종양의 진행을 운전에 중요한 역할을한다. 우리는 실험적으로 인간의 섬유아 세포에서 mammary CAFs 창출을위한 coimplantation 종양의 xengraft 모델을 개발했습니다. 프로토콜 tumourigenesis을 추진하는 능력을 습득 카페인 myofibroblasts을 수립하는 방법에 대해 설명합니다.

인간 Mammary 섬유아 세포에서 암종 - 관련 섬유아 세포의 실험 세대 (CAFs)

레이저 microdissection은 실질의 미세한에서 선택한 셀의 복구를 할 수있는 기술입니다. 여기 transcriptomic 연구에 사용되는 수술 표본에서 인간의 췌장 섬을 획득을위한 프로토콜을 설명합니다. 우리 프로토콜은 따라서 자신의 컬렉션을 촉진 인간의 베타 세포의 고유 autofluorescence을 향상시킵니다.

수술 표본에서 인간 췌장 섬의 레이저 Microdissection을위한 개선 된 프로토콜

학습하세요 지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수를 이용한 무릎 골관절염 환자의 연골 재생 임상 프로토콜입니다. 최소 침습적 방법으로 연골 유사 조직 재생 및 무릎 기능 개선 효과를 확인할 수 있습니다.

지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜

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