지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜

골관절염은 노인 인구 중 가장 흔한 쇠약 장애 중 하나입니다. 현재, 골관절염의 근본 원인에 대한 명확한 치료법은 없습니다. 이 임상 프로토콜은 조직과 같은 연골을 재생하여 인간 무릎 골관절염의 유망한, 최소 침습 및 대체 치료를위한 혁신적인 절차를 설명합니다.

골관절염은 노인 인구 중 가장 흔한 쇠약 장애 중 하나입니다. 현재, 골관절염의 밑줄 원인에 대한 명확한 치료법은 없습니다. 이 임상 프로토콜은 연골과 같은 조직을 재생하여 인간 무릎 관절염의 유망한, 최소 침습 및 대체 치료를위한 혁신적인 절차입니다.

환자를 생물학적 위험 클래스 A 후드가 있는 수술실로 가져와 서척추 자세를 취하십시오. 환자의 복부 부위를 5% 베타딘-포비딘으로 청소하고 멸균 기술을 사용하여 환자를 드레이프하여 지방 흡입을 위한 복부의 깨끗한 부위를 노출시합니다. 약 5센티미터의 후천성에서 후불로, 두 개의 부위를 마취하고, 하나는 왼쪽에, 다른 하나는 절개 배꼽의 오른쪽에 있습니다.

표피 수준에서 각 부위를 주입하여 5 밀리리터 주사기에 25 게이지 1.5 인치 바늘을 가진 에피네프린없이 2 %의 리도카인을 사용하십시오. 절개 부위를 마취하여 5밀리리터의 tumescent 용액과 10 밀리리터 주사기 및 바늘 25 게이지 1.5 인치를 사용하여 만들 수 있습니다. 피하 레벨의 깊이를 높이기 위해 피부를 꼬집어 하여 배꼽 아래 약 5센티미터의 2개의 절개를 합니다.

숫자 11 블레이드를 사용하여, 제기 된 피부가 피하 수준으로 침투하지만 복벽을 관통하지 않도록 도와줍니다. 20센티미터 60게이지 캐뉼라를 사용하여, tumescent 용액의 700~800밀리리터로 지방 흡입될 전체 하복부 영역의 피하 수준을 마취한다. tumescent 용액으로 전체 하복부의 침투를 완료 한 후, 수동 지방 흡입을위한 60 밀리리터 또는 30 밀리리터 주사기에 연결된 3.0 밀리미터 캐뉼라 또는 원심 분리 키트에 연결된 3.0 밀리미터 캐뉼라를 연결하여 지방 흡입 장치를 준비합니다.

진공 보조 지방 흡입을 위해 진공 기계에 연결된 멸균을 유지하기 위해 FDA CDRH에서 자체 개발한 폐쇄 시스템 주사기. 투석용액을 제외한 100~110그램의 지방 조직을 얻기 위해 지방 흡입을 수행한다. 지방 흡입을 수행 할 때, 지방 조직은 tumescent 용액과 함께 얻을 수 있지만 분리하고 제거해야합니다.

투석용액을 중력에 의해 먼저 분리하기 위해 원심분리기 키트의 지방 조직을 60밀리리터 주사기로 이송하여 주사기를 내려 놓을 수 있다. 예를 들어 주사기의 개구부가 맨 아래에 있습니다. 5~6분을 기다려서, 지방 조직과 tumescent 용액이 분리됩니다.

주사기 플런저 의 상단에 눌러 주사기의 바닥에있는 액체를 제거합니다. 상기 단계9~11을 무릎당 100그램에서 110그램의 지방 조직 지질 흡인이 축적될 때까지 수행한다. tumescent 용액을 중력에 의해 분리하고 각 60 밀리리터 원심분리기 키트 멸균 폐쇄 시스템당 50그램에서 55그램의 지질 흡인을 축적한 후, 2개의 원심분리기 키트를 원심분리 용기 버킷에 넣고 1600G에서 5분간 회전하여 지질 흡인을 응축시키고 유체를 지방 조직으로부터 분리한다.

이 과정은 지질 흡인을 더 응축시키고 특정 경우에 지방 기름을 생성할 수 있습니다. 흔들리지 않도록 주의하여 원심분리기 키트 하단의 안전 캡과 플러그를 제거합니다. 원심분리기 키트의 플런저 위에 천천히 아래로 밀어 내하여 바닥 유체를 제거합니다.

별도의 60 밀리리터 주사기에, 콜라게나아제 10 밀리그램, 결합 조직에 대 한 특정 5 밀리 그램 콜라게나아제, 그리고 5 밀리 그램의 콜라게나아제의 5 밀리 그램 일반 식염수와 지방 조직에 대 한 특정. 약 25~30밀리리터의 응축지질 흡용을 용존 콜라게나아제와 혼합하고, 결합 조직에 특정한 콜라게나아제 5밀리그램, 지방 조직에 특정한 콜라게나아제 5밀리그램을 1대 1의 비율로, 부피량에, 60밀리리터 주사기를 원심분리키에 연결하여 교전된 결합기를 사용하여 양립키트에 연결한다. 60 밀리리터 주사기와 원심분리기 키트 사이의 컨텐츠를 낚싯대 나 푸셔를 사용하여 준비 흡기와 콜라게나아제를 응축시키기 위해 철저히 섞는다.

지질 흡인과 콜라게나아제의 혼합물을 60 밀리리터 주사기로 다시 옮는다. 혼합물을 함유한 각 60밀리리터 주사기를 블레이드를 함유한 조직 균질화제와 연결합니다. 빈 60 밀리리터 주사기를 균질화의 다른 쪽 끝에 연결합니다.

다른 60 밀리리터 주사기에 다른 60 밀리리터 주사기를 4~6회 동안 밀어지질 흡인의 절단 및 절단을 초래한다. 균질화된 지질 흡인및 콜라주누혼합물을 60밀리리터 원심분리기 키트로 다시 전속하여 특수 커넥터를 통해 전달합니다. 원심분리기 키트를 용기에 넣고 섭씨 37도에서 예열된 인큐베이터에 넣습니다.

45 rpm에서 회전하는 동안 40 분 동안 37섭씨37도에서 균질화 혼합물로 두 개의 원심분리기 키트를 배양합니다. 40분 동안 인큐베이션을 한 후, 인큐베이터에서 용기를 멸균 방식으로 제거합니다. 그런 다음 원심 분리기 키트를 제거하고 원심 분리기 기계에 넣습니다.

지방 조직 유래 SVF를 분리하기 위해 5분 동안 800 G에서 혼합물을 원심분리합니다. 원심분리기 후, 콜라게나아제와 소화된 지방 조직을 포함하는 상체는 플런저 위에 주사기 캡을 제거하고 주사기 잠금 연결을 통해 플런저 개구부에 30 밀리리터 주사기를 배치하여 각 원심분리기 키트에서 제거됩니다. 30 밀리리터 주사기의 배럴 부분을 천천히 눌러 30 밀리리터 주사기를 채우도록 슈퍼나탄을 넣습니다.

30 밀리리터 주사기 배럴을 원심분리기 키트 바닥의 마지막 3~4밀리리터까지 누르고, 마지막 3~4밀리리터만 방치하여 조직 유래 SVF를 누릅니다. 상체가 폐기됩니다. 플런저 상단에서 30 밀리리터 주사기를 제거하고 D5LR이라고도 하는 5%dextrose 수유 링거 용액으로 주사기를 채웁니다.

플런저 개구부의 상단에 D5LR로 채워진 30 밀리리터 주사기를 부착하여, 최대 55 밀리리터로 D5LR을 함유한 지방 조직 유래 SVF의 3~4밀리리터를 포함하는 원심분리기 키트를 채웁니다. 그런 다음 30 밀리리터 주사기를 제거하고 플런저 개구부를 캡하고 원심분리기 키트를 300 G에서 약 4분 동안 다시 원심분리기로 제거합니다. 총 4개의 세척에 대해 17번에서 21번으로 단계를 반복합니다.

네 번째 원심분리기 후, 주입을 위한 최종 SVF를 얻기 위해 원심분리기 키트의 하단 개구부의 안전 캡과 플러그를 흔들어보거나 돌리지 않고 제거한다. 특별히 설계된 커넥터를 사용하여 원심분리기 키트 바닥 개구부에 20밀리리터 주사기를 부착합니다. 20 밀리리터 주사기의 플런저를 여러 번 앞뒤로 당겨 원심분리기 키트의 바닥에 정착한 세포를 흔들어 줍니다.

다른 세포 및 조직과 함께 AST와 ECM을 모두 포함하는 SVF의 원하는 총 부피를 제거합니다. 일반적으로 무릎 관절 주사에 대 한 각 원심 분리 기 키트에서 약 3 ~ 4 밀리 리터. 우리는 항응고제 구연산 덱스트로스 용액의 2.5 밀리리터와 함께 자가 혈액 30 밀리리터를 했습니다.

그런 다음 그려진 혈액은 60 밀리리터 원심분리기 배럴 키트로 옮겨졌습니다. 그런 다음 5 분 동안 730 중력에서 원심 분리되었습니다. 그리고 상체는 제거하고 새로운 60 밀리리터 원심 분리기 배럴 키트에 넣어.

상술은 4분 동안 1350중력으로 원심분리되어 4.4밀리리터를 얻었다. 환자의 무릎을 5%의 베타딘으로 청소하고 멸균 방식으로 드레이프합니다. 경골과 대퇴 뼈 사이의 관절 공간에 대한 무릎의 전방을 palpate.

분사 부위를 희석 된 리도카인으로 표면적으로 마취하고, 1 밀리리터의 1 밀리리터는 피부에서 관절 캡슐 바깥쪽에 일반 식염수 4 밀리리터로 희석됩니다. 그런 다음 희석 된 로피바카인, 일반 식염수 의 3 밀리리터로 희석 된 1 밀리리터 0.75 %의 ropivacaine로 조인트 캡슐의 내부를 마취시합니다. 주사기 커넥터에 주사기를 통해 20 밀리리터 주사기에 포함 된 SVF의 6 ~ 8 밀리리터에 HA의 2 밀리리터를 혼합합니다.

주사기를 주사기 커넥터에 사용하여 이미 준비되고 5 밀리리터 주사기로 준비된 자가 PRP의 3~4밀리리터에 0.4 밀리리터의 염화물 을 첨가하십시오. 3.5 ~4.5 밀리리터 PRP 염화칼슘을 5밀리리터 주사기에 8-10 밀리리터의 HA-SVF 혼합물을 주사기를 통해 주사기 커넥터에 20 밀리리터 주사기에 결합합니다. 즉시 혼합물을 주입, 약 12 받는 것 15 밀리 리터, 천천히 무릎의 전방 tibial-대퇴 관절에, 사용 하 여 38 밀리 미터 18 게이지 바늘 또는 초음파 지침 없이.

주입 후, 4x4 면 거즈를 4번 접고 접힌 4x4 거즈 위에 테이프를 배치하여 압력으로 사출 부위를 붕대를 감았다. 환자에게 세포 부착을 허용하기 위해 60 분 동안 가만히 있다고 지시하십시오. 환자에게 퇴원 후 1주일 동안 최소한의 활동을 제한하도록 지시합니다.

3 주 동안 염화 칼슘에 의해 활성화 된 PRP의 3 개의 추가 주사에 대 한 클리닉에 반환. 3단계 OA를 가진 환자는 프로토콜 섹션에 기재된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM개선.

16주까지 환자의 통증과 ROM은 16주 후 복용한 치료 MRI가 70% 이상 크게 개선되었으며, 무릎 내측의 연골과 같은 조직의 두께가 증가하는 것으로 나타났다. 3단계 OA를 가진 또 다른 환자는 프로토콜 섹션에 기술된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM개선.

18주까지 통증과 ROM은 18주 이후에 복용한 MRI가 80%로 크게 향상되었으며, 무릎의 전방 내측에 연골과 같은 조직의 신장이 증가하는 것으로 나타났다. 3단계 OA를 가진 세 번째 환자는 프로토콜 섹션에 기술된 바와 같이 치료를 받았다. ASV-ECM 혼합물 주사의 두 번째 주 후, 환자의 통증과 ROM은 22 주까지 약 50 %까지 개선되었으며, 통증과 ROM은 22 주 후에 취한 80 % 반복 MRI가 크게 개선되어 무릎의 내측에 연골과 같은 조직의 높이가 증가하는 것으로 나타났습니다.

현재 치료법은 OA의 치료에 사용할 수 없습니다. 그러나, ASC와 균질화 된 ECM을 가진 줄기 세포 치료의 경피 주사및 HA와 유사 PRP와 함께 염화 칼슘으로 활성화 무릎 OA 치료의 현재 치료 치료에 대 한 대안을 제공할 수 있습니다.