Name: 선 동적인 장 질병 마우스 모델에서 창 자 염증 단백질 폐지를 신호 하는 맛의 효과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-09T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: 배우세요 DSS 유도 염증성 장질환 마우스 모델에서 미각 관련 유전자 결손이 면역 반응에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 이 기술은 장 염증에서 유전자 효과와 신호 단백질의 항염증 및 전염증 작용을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (81671016, 31471008, 및 31661143030) 및 건강의 국가 학회 (DC010012, DC015819)에서 교부 금에 의해 및 Siyuan 재단에 의해 지원 됩니다.

쥐를 포함 하는 모든 실험 검토 하 고 기관 동물 관리와 Zhejiang 대학 사용 위원회에 의해 승인 했다. 이 프로토콜을 수행 하기 전에 적절 한 개인 보호 장비를 착용 하는 것이 좋습니다.
1입니다. 마우스 및 DSS의 준비
<ol><li>유지는 녹아웃 (α-gustducin-/-) 마우스 및 나이, 성별 및 몸 무게 일치 야생-타입 컨트롤 (α-gustducin+ +) 개별적으로 깨끗 한 장에 C57BL/6 쥐. 참고: 녹아웃 쥐 20 세대 이상 C57BL/6 마우스 backcrossed 되어 있고 거의 100 %C57BL / 6 유전 배경.</li>
	<li>Dextran 압력가 물 1 L에 황산 나트륨 (DSS) 가루 30 g을 분해. 혼합 때까지 솔루션 최종 작업 농도 3% (w/v) 되도록 명확 하 게 된다. 참고: DSS 솔루션 저장할 수 있습니다 1 주까지 동안 실내 온도에 또는 4 ° C에서 사용까지.</li>
</ol>2. 유도 및 쥐에 DSS Colitis의 평가
<ol><li>무게 고 각 마우스의 초기 몸 무게를 기록 합니다. 표준 플라스틱 감 금 소에는 쥐를 개별적으로 배치 및 레이블 새 장을.</li>
	<li>일반 3%는 두 그룹의 쥐가 7 일의 총에 대 한 DSS 솔루션 물 마시는 바꾸기 광고 libitum액세스할.</li>
	<li>마우스의 몸 무게를 측정, DSS 솔루션 소비를 기록 하 고 수집 하 고 DSS 관리 동안 매일 각 마우스의 대변 검사. 설사, 직장 출혈의 심각도 관찰 하 고이 DSS 유도 질병 색인12로 변환.</li>
	<li>실험 기간 동안 초기 체중 및 질병 색인에 비해 체중 감소의 비율 대 장 염의 증상을 평가 하 계산 됩니다. 참고: 질병 색인 설사, 직장 출혈의 관찰을 결합 하 여 득점 하 고 다음과 같이 정의 됩니다: 0 (정상의 자, 혈액), 1 (부드러운의 자, 혈액), 2 (부드러운의 자, 작은 혈액), 3 (매우 부드러운의 자, 겸손 한 출혈), 4 (물 대변, 중요 한 출혈)12. 질병 색인 매일 각 마우스에 대 한 분석 이다.</li>
	<li>7 일 DSS 치료의 끝으로 쥐 자 궁 경부 전위에 의해 희생 하 고 나머지 실험으로 진행.</li>
</ol>3입니다. 조직 샘플의 준비
<ol><li>부정사 위치에 마우스를 놓고 70% 에탄올과 복 부의 피부를 청소 합니다. 복 부 구멍을 노출 하는 작은 위 가진 복 부에 3 cm 긴 중간 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>집게의 쌍을 사용 하 여 신중 하 게 다른 조직에서 비장을 분리 다음 비장을 제거 하 고, 그것의 크기를 측정.</li>
	<li>식별 및 콜론 집게와 들어올린 주변 mesentery에서 분리. 맹 및 직장 표시 될 때까지 전체 결 장 밖으로 당겨.</li>
	<li>Colonocecal 여백에와 각각 인접 하 고 원심 콜론을 골반에 깊은 transecting에 의해 콜론을 격리 합니다. 다음, 측정 하 고 절연된 콜론의 길이 기록 합니다. 수 해 동안 저 승 조직을 손상 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>10 mL 주사기는 eluate 완전히 취소 될 때까지 대변과 혈액을 제거 하는 gavage 바늘 갖춘 차가운 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)의 10 mL와 콜론을 플러시.</li>
	<li>조직학 식별을 위해 분할 조직 샘플 동등 하 게 세 부분으로: 근 위, 중간, 그리고 원심. 다음, 수정 조직 4 %paraformaldehyde (PFA)와 하룻밤에 4 ° c.</li>
	<li>사이토카인 발현의 분석에 대 한 액체 질소로 급속 하 게 전체 콜론을 고정 하 고 사용까지-80 ° C에서 그것을 저장 합니다.</li>
</ol>4. 조직학 DSS 유도 Colitis의 심각도 평가
<ol><li>되며 고 오신 (H & E) 얼룩<ol>
<li>고정, 후 잠수함 1 x PBS 15 mL 튜브에서 하룻밤에 30% 자당 해결책에서 조직 cryoprotect을 샘플.</li>
		<li>최적의 절삭 온도 (10 월) 화합물에 조직을 포함 하 고 OCT 견고까지-20 ° C에서 그것을 배치.</li>
		<li>cryostat는 조직을 포함 하는 10 월 블록 전송 12 µ m 및 슬라이스 cryostat에 두께 다이얼을 설정 하 고 12 µ m 두께 냉동된 섹션을 수집.</li>
		<li>뜨거운 접시에 20 분 동안 65 ° C에서 cryostat에서 수집 된 조직 단면도 열.</li>
		<li>씻고 증류수에 간단히 섹션. 5 분에 대 한 솔루션을 얼룩이 지는 hematoxylin와 얼룩 고 이후 5 분 동안 수돗물 실행 린스.</li>
		<li>0.5% 염 산-에탄올 30 s와 린스 그들 실행에 1 분 동안 수돗물에 대 한 섹션을 구분 합니다. 다음, 1 분에 대 한 1 x PBS에 세척을 수행 하 고 이후 5 분 동안 수돗물 실행 린스.</li>
		<li>10 s. Counterstain 오신 2 분에 대 한 솔루션을 얼룩이 지기를 위해 각각 70%, 75%, 80%, 및 95% 알코올에 조직 단면도의 세척을 수행 합니다.</li>
		<li>각 시간 5 분 동안 95% 알코올을 2 변경 절대 알코올의 탈수를 수행 합니다. 5 분 동안 크 실 렌의 변화 2에 분명.</li>
		<li>각 마우스의 근 위, 중간, 그리고 원심 콜론의 조직 손상 유전자 녹아웃 및 야생-타입 그룹은 위의 H & E 염색의 결과에 따라 점수. 참고: 질병 인덱스는 상피의 손상과 다음과 같이 정의 되는 점 막, submucosa, muscularis, 그리고 serosa 지역, 염증의 결합 된 점수: 0 (조직 손상 및 염증), 1 (초점 조직 손상과 염증), 2 (누 덕 누 덕 조직 손상과 염증), 고 3 (확산 조직 손상과 염증)12,13. 결 장의 근 위, 중간, 그리고 원심 부분에 대 한 마우스 당 3 개의 점수는 다음 각 동물에 대 한 총 점수 표현 됩니다. 각 그룹에 대 한 평균 점수 다음 계산 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Immunohistochemistry14<ol>
<li>뜨거운 접시에 20 분 동안 65 ° C에서 cryostat에서 수집 된 조직 단면도 열. 1 x PBS 3 시간, 10 분에에서 섹션을 씻어. 내 인 성 과산화 효소를 제거 하기 위해 10 분 동안 3%의 과산화 수소의 조직 단면도 품 어. 섹션 3 번 더 세척. 조직 1 시간 실 온에서 버퍼 (BSA는 3%, 0.3% 비 이온 세제, 2% 염소 혈 청, 1 x PBS에 0.1% 나트륨 아 지 드) 또는 더 차단으로 차단 합니다.</li>
		<li>다음과 같은 면역 세포 유형 특정 기본 항 체를 포함 하는 솔루션으로 블로킹 버퍼를 대체: CD45 백혈구에 대 한, CD3 T 세포에 대 한, B 셀 B220, 대 식 세포에 대 한 CD11b 및 호 중구에 대 한 Ly6G. 4 ° C에서 밤새 품 어.</li>
		<li>포부에 의해 조직 섹션에서 기본 항 체를 제거 합니다. 1 x PBS 3 시간, 10 분에 대 한 섹션을 씻어. Biotinylated 이차 항 체와 streptavidin HRP 복잡 한 실 온에서 부 화 뒤와 섹션을 품 어.</li>
		<li>빛 또는 어두운 갈색 색상을 개발 하 고 시각화 immunoreactive 셀에 3, 3'-diaminobenziding (DAB) 솔루션 섹션을 품 어.</li>
		<li>되며와 0.3% (v/v) 희석 암모니아 섹션 counterstain 10 배 확대 현미경 아래에서 밝은 필드 이미지를 가져가 라.</li>
		<li>식별 하 고 계량 상피와 lamina propria (상피) 아래에 표시 된 면역 세포의 인구는 이미지 처리 프로그램을 사용 하 여 여 2 마스크 설정: 색상 큐브 기반 기능에 첫 번째 마스크를 사용 하 여 색상 검출 설정 임계값 측정 색된 소량 반응 영역; 두 번째 마스크를 사용 하 여 상피 및 검사 섹션에서 층 류 오는의 총 영역을 결정 하. Immunoreactive 셀 인구의 비율로 시험된 직물의 총 면적을 침투 셀의 착 색 영역을 표현 한다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. DSS 유도 Colitis의 진 식 평가
<ol><li>DSS 처리 유전자 녹아웃-80 ° C 냉동 고에서 야생-타입 마우스에서 콜론 조직 검색 그리고 25 mg의 조직, 세포의 용 해 버퍼의 0.6 mL을 추가 균질 화기에 균질.</li>
	<li>총 RNA, 및 어떤 오염 게놈 DNA를 제거 하는 DNase를 추출 하는 RNA 추출 키트의 프로토콜을 따릅니다.</li>
	<li>추출 된 RNA의 품질을 확인 하는 agarose 젤을 실행 합니다. 자사의 28S RNA 밴드 18 밴드 보다 밝은 경우에, 그것은 사용 가능한입니다. microspectrophotometer에 RNA 농도 결정 하는 RNA 샘플의 1 µ L를 가져가 라.</li>
	<li>20 mM 올리고 (dT)12,13,14,15,16,,1718 뇌관의 2.5 µ L와 Moloney murine 백혈병의 1 µ L 총 RNA의 믹스 1 µ g 바이러스 (MMLV) 역전사 준비는 cDNA를 60 분 동안 42 ° C에서 품 어.</li>
	<li>TNF, IFN-γ, 일리노이 대 한 정방향 및 역방향 정량 Pcr 뇌관의 0.5 µ L 1µL는 cDNA의 혼합 하 여 실시간 PCR 반응 설정-13-5, 일리노이, 일리노이-10, TGF-β1, 및 β-말라 형광 녹색 염료 x 2 뿐만 아니라 제어로.</li>
	<li>다음 매개 변수는 정량 실행: 10 95 ° C의 45 주기 다음 10 분 동안 95 ° C s, 25 ° C 50 s 및 20 72 ° C s.</li>
	<li>2-ΔΔCt 방법15를 사용 하 여 유전자 발현의 상대적 부 량을 계산 합니다. 비교적에 녹아웃 vs진 식 수준 분석. 야생-타입 마우스입니다.</li>
</ol>

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<li>Feng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cells+of+the+human+peripheral+taste+system%3A+Dominant+dendritic+cells+and+CD4+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Immune cells of the human peripheral taste system: Dominant dendritic cells and CD4 T cells.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 23 (6), 760-766 (2009).</li>
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<li>Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+Intestinal+Inflammation+in+DSS-induced+Model+of+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD.</a> Journal of Visualized Experiments. (60), 3678(2012).</li>
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<li>Howitt, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuft+cells%2C+taste-chemosensory+cells%2C+orchestrate+parasite+type+2+immunity+in+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tuft cells, taste-chemosensory cells, orchestrate parasite type 2 immunity in the gut.</a> Science. 351 (6279), New York, N.Y. 1329-1333 (2016).</li>
</ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

이 메서드는 quantitively에 채택 될 수 있다 염증 DSS 유도 IBD 마우스 모델에서 특정 미각 유전자의 돌연변이의 효과 결정. 활용, IBD의 최적의 유도 중요 한 단계입니다. Colitis의 개발은 마우스 스트레인, 주택 환경, 장내 microflora, 뿐만 아니라 관심의 유전자를 포함 한 여러 요인에 의해 영향을 받습니다. 다른 복용량을 테스트 하는 쥐의 작은 숫자와 DSS 관리의 기간 파일럿 실험을 수행 하는 것이 좋습니다. 파일럿 실험, 체중 감소, 설사, 장 출혈, 그리고 조직 손상 등 미세한 변화가 심한 증상, 면역 세포 침투와 관련 된 염증 및 cytokines의 식 수준 변화 되어야 합니다. 분석 하 고 컨트롤 그룹을 DSS16,17,,1819없이 식 수에 비해. DSS-치...

선 동적인 장 질병 (IBD), (CD), 크 론 병 및 궤 양성 대 장 염 (UC)의 두 가지 주요 형태는 multifactorial 병 인1,2 장의 만성 remittent 또는 진보적인 선 동적인 조건 특징 . IBD의 개발 다이어트, 항생제 사용, 같은 유전자로 특정 환경 요인에 따라 달라 집니다 중요 한 병원 성 감염. 그러나, 병 인 및 IBD 기본 규정 분자 메커니즘 여전히 명확 하지 않다. 따라서, 많은 화학적으로 유도 된 IBD 동물 모델이 건설 고 pathogenesis 및 규제 메커니즘 윤곽을 그리 다 고 인간 치료제3의 효과 평가에 적용 되었습니다.
맛 수용 체 G 단백질 결합 된 수용 체 (GPCRs) 이며 두 가지 주요 유형으로 분류 됩니다: 난 (T1Rs)을 입력 하 고 유형 II (T2Rs) 달콤한, umami, 그리고 쓴 화합물을 검출 하는. 맛 신호 폭포 tastant 바인딩 T1Rs 또는 T2Rs, 활성화는 heterotrimeric G 단백질의 α-gustducin와 Gβγ 이합체로 구성 된와 Gβγ subunits의 출시를 선도 시작 됩니다. Gβγ moiety 차례로 다운스트림 이펙터 효소 phospholipase C-β2 (PLC-β2) 자극. 활성화 된 PLC-β2 phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate 두 세포내 이차 메신저 [이노 시 톨-1,4,5-trisphosphate (IP3) 및 diacylglycerol], 그리고 IP3 바인딩 하로 hydrolyzes 그리고의 채널 수용 체 IP3 열 R3, 바인딩과 그물에서 칼슘 이온을 방출. 결국 일시적인 수용 체 잠재력 이온 채널 Trpm5의 열고 릴리스는 미각 신경4,,56,7에 신경 전달 물질 ATP의 리드. 그러나, 짠 맛과 신 맛의 신호 경로, umami, 다 정하고 쓴 맛8에서 다르고 독립적인 있습니다. 또한, 맛 GPCRs의 구성 요소 및 다운스트림 단백질 다양 한 여분 구강 조직에 존재합니다. 최근 연구는 α-gustducin 표시, 맛 신호의 주성분 장내 점 막에서 표현 될 발견 된다. 더 연구는 이러한 맛 신호 구성 요소 추가-구강 조직을9,10의 기능을 이해 필요 합니다.
여기에 설명 된 메서드 외 구강 조직에 표현 하는 미각 신호 단백질의 기능을 특성화 하는 데 사용 됩니다. 우리는 화학적으로 유도 된 대 장 염 모델 입맛에 신호 폭포를 묘사에 대 한 개발 된 유전자 변형 마우스 선 결합. 절차적 결함과 인간의 궤 양성 대 장 염을 병 적인 유사성 때문에 크게는 dextran 황산 나트륨 (DSS)-유도 IBD 모델은 다양 한 화학적으로 유도 된 대 장 염 모델11중 가장 널리 이용 되는. 이 연구에서 우리가 사용 α gustducin 불충분 한 쥐 대표 마우스 선으로 1) 조직의 형태학 적 변화를 분석 하 고 2)의 표현에 차이 시 금 창 자 점 막 면역과 염증에 α-gustducin의 소설 기능을 크린 시 토 킨 결에 염증에 관련 된 양적 및 질적으로 미각 신호 (단백질과 다른 단백질에에서 표현)의 기여 장 염증, 조직 손상 하 때 결정 유전자 변형된 마우스의 유전자에 대 한 라인이 메서드를 사용할 수 있습니다. 관심은 사용할 수 있습니다. 이 방법의 이점은 모두 화학 DSS의 행동 및 관심사의 유전자의 결핍에서 발생 하는 통합된 데이터를 얻기 위해 사용자가 활성화 됩니다. 이 방법은 그것의 감도 증가 하 고 세포 및 분자 수준에서 미묘한 장 변화를 공개를 더 개선할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>항체</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>550539</td><td></td></tr><tr><td>CD3</td><td>BD Biosciences</td><td>555273</td><td></td></tr><tr><td>B220</td><td>BD Biosciences</td><td>550286</td><td></td></tr><tr><td>CD11b</td><td>BD Biosciences</td><td>550282</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>BD Biosciences</td><td>551459</td><td></td></tr><tr><td>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dextran Sulfate Sodium Salt (DSS)</td><td>MP Biomedicals</td><td>2160110</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-HRP complex</td><td>BD Pharmingen 551011</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H& E 염색 키트</td><td>BBI Life Sciences</td><td>E607318</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Sangon Biotech</td><td>B548117</td><td></td></tr><tr><td>FastStart Universal SYBR Green Master(ROX)</td><td>Roche</td><td>4913850001</td><td></td></tr><tr><td>MMLV Reverse Transcriptase, GPR</td><td>Clontech,TaKaRa</td><td>639574</td><td></td></tr><tr><td>TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit&nbsp;</td><td>TaKaRa</td><td>9767</td><td></td></tr><tr><td>BD 10 mL 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>기기 및 장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>균형</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>펜치</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>qPCR 기계</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>염색 항아리</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imag-Pro Plus&nbsp;</td><td>미디어 사이버네틱스, Inc.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

선 동적인 장 질병 마우스 모델에서 창 자 염증 단백질 폐지를 신호 하는 맛의 효과

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

선 동적인 장 질병 (IBD)는 면역-관련 위장 장애, 궤 양성 대 장 염 및 Crohn의 질병, 전세계 사람들의 수백만의 삶의 질에 영향을 주는 등 중 하나입니다. IBD 증상 복 통, 설사, 직장 출혈, 본질적인 microbiota, 음식 구성 요소, 장 상피 세포, 면역 세포 간의 상호 작용에서 발생할 수 있습니다. 그것은 장 상피와 면역 세포에 표현 된 각 주요 유전자는 콜론에 염증에 미치는 영향을 평가 하기 위해 특별 한 중요성 의입니다. G 단백질 결합 맛 수용 체, G 단백질 소 단위 α-gustducin와 다른 신호 단백질을 포함 하 여 창 자에서 발견 되었습니다. 여기, 우리가 사용 하 여 α-gustducin 대표 dextran 황산 나트륨 (DSS) 설명-창 자 점 막 면역과 염증에 미각 유전자 돌연변이의 효과 평가 하 IBD 모델을 유도. 이 메서드는 화학적으로 유도 된 IBD 모델 유전자 녹아웃 기술을 결합 하 고 따라서 다른 유전자를 exuberate 수 있습니다 또는 콜론에 DSS 유도 된 면역 반응을 저해할 뿐 아니라 미각 유전자 무효의 결과 평가에 적용할 수 있습니다. 돌연변이 쥐를 일정 기간 동안 자신의 몸 무게의 자, 직장 출혈 모니터링 및 기록에 대 한 DSS와 함께 관리 됩니다. 관리 하는 동안 다른 timepoints에서 일부 마우스 안락사는, 크기 및 그들의 spleens와 콜론의 무게 측정 그리고 창 자 조직 수집 및 처리 조직학 및 유전자 표정 분석. 데이터는 과도 한 체중 감소, 설사, 장 출혈, 조직 손상 및 염증 대 야생-타입 마우스에 α-gustducin 녹아웃 결과 표시. 마우스 긴장, 주택 환경, 그리고 다이어트에 의해 유발된 염증의 심각도 영향을 DSS 농도 및 관리 기간 파일럿 실험의 최적화가 특히 중요 합니다. 이러한 요소를 조정 하 여 두 안티-과 프로-염증 성 효과 평가 하기 위해이 메서드를 적용할 수 있습니다.

DSS 유도 IBD 절차 관리 3%에 의해 설립 되었다 DSS α-gustducin-녹아웃 (KO) 및 야생-타입 (WT) 쥐에 식용 수에서. WT 쥐에 비해, 녹아웃 쥐와 과도 한 체중 감소, 설사, 장 출혈 (그림 1) 더 가혹한 colitis 전시. 7 일 DSS 관리 후 조직의 무결성에 차이 H &amp; E 조직학 방법으로 얼룩을 사용 하 여 분석 되었다 그리고 더 악화 조직 손상이 WT 쥐 ( 보다 녹아웃 쥐의 근 위, 중간, 그리고 원심 콜론에서 발견 되었습니다. 그림 2). 또한, 과도 한 면역 활성화 대 식 세포, 호 중구 등 다양 한 염증 세포의 침투와 대 장 염에 지도 했다. Immunohistochemical 분석 면역 세포에 대 한 다양 한 마커를 사용 하 여 면역 세포 침투 α-gustducin 결핍에 영향을 받는지 확인 하기 위해 실행 되...

여기에 우리가 dextran 황산 나트륨 (DSS)에 면역 반응에 맛보기 관련 유전자의 무효의 효과 조사 하기 위해 프로토콜을 제시-선 동적인 장 질병 (IBD) 마우스 모델을 유도.

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

이 방법은 궤양성 대장염과 크론병에 대한 염증성 생물 질환 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 신호 단백질의 첫 번째 항 및 proinfammatory 효과를 평가하는 데 사용할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 의미는 새로운 진보와 염증에 있는 가스의 조사를 확장합니다.이 방법은 창 자 염증에 유전 효과에 대 한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 그것은 또한 규정식과 microbiome와 같은 그밖 요인에 적용될 수 있습니다. 일반적으로, 이 학기에 새로 들어본 개인은 질병 흉터 조직을 처리하는 것이 까다롭기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.이 방법의 시각적 데모는 해부와 조직 준비 단계는 mystalia 및 세포 조직 구조가 변경될 수 있기 때문에 배우기 어렵기 때문에 중요합니다. dextran 황산 나트륨, 또는 DDS 대장염을 유도하기 위해 일반 식수를 3 %DSS 용액으로 대체하고 7 일 동안 libidium을 추가하십시오. 각 마우스의 체중, DSS 용액 소비 및 대변 생산을 매일 측정합니다.7일 치료 가끝나면 마우스를 척추 위치에 놓고 작은 가위를 사용하여 복부에 3센티미터 길이의 중간선 절개를 합니다. 비장을 수확하고 크기를 측정합니다. 그런 다음 집안을 들어 올려 주변 간질에서 분리할 수 있도록 집게를 사용합니다.그리고 cecum과 직장이 보일 때까지 전체 결장추출. 대장 내시경 마진에서 조직을 분리합니다. 그리고 골반 깊숙이 각각 근위와 결장이 해제됩니다.격리된 결장의 길이를 측정하고 기록합니다. 그리고 10 밀리리터 주사기를 사용하여 10 밀리리터의 얼음 차가운 PBS로 결장세척제로 결장세척기를 사용하여 유언장과 혈액을 제거합니다. 조직학적 식별을 위해 조직 샘플을 동등하게 크기의 근위, 중간 및 단면으로 나눕니다.그리고 4섭씨에서 하룻밤 사이에 4%의 파라포름알데히드로 조직을 수정합니다. 고립 된 결장 조직의 헤마톡클린과 에오신 염색의 경우, 다음 아침, 샘플의 극저온 보호를 위해 개별 15 밀리리터 튜브에 30 %의 자당과 PBS에 조직 조각을 잠급. 다음 날, 최적의 절삭 온도 또는 OCT 화합물에 조직을 포함.그리고 10 월 경화 될 때까지 영하 20도에서 조직을 냉각. 100000블록을 저온에 놓고 두께 다이얼을 12마이크로미터로 설정합니다. 그런 다음 슬라이스하고 유리 현미경 슬라이드에 12 마이크로 미터 두께의 냉동 섹션을 수집합니다.모든 조

effects-taste-signaling-protein-abolishment-on-gut-inflammation-an

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

염증성 장 질환의 실험적 모델은 우리가 pathogenesis와 관련된 복잡한 본래과 적응 면역 반응을 조사 수 있습니다. histological 채점, 프로 - 염증 크린 시토킨 및 myeloperoxidase 활동 부량 사용하여, 하나는 염증성 장 질환에서 볼 이러한 반응을 평가하기 시작할 수 있습니다.

IBD의 DSS 유발 모델에서 창자 염증을 조사

이 비디오는 염증성 장 질환인 대장염의 화학적 유도 쥐 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 마우스는 적절한 기간 동안 덱스트란 황산나트륨(DSS) 용액을 섭취할 수 있습니다. DSS를 섭취하면 결장의 점액과 상피층 장벽이 손상되어 장내 미생물이 기저 조직으로 들어가 상주 면역 세포가 이를 감지하여 과장된 면역 반응을 매개하여 염증을 유발합니다.

덱스트란 황산염 나트륨 유발 대장염의 쥐 모델을 생성하는 기술

이 비디오는 마우스 결장 조직의 면역조직화학적 염색을 통한 화학적 유발 대장염의 평가를 보여줍니다. 염색된 조직 절편에서 손상된 조직에 많은 수의 면역 반응 세포가 존재한다는 것은 대장염 중 면역 세포의 침투를 나타냅니다.

결장 조직 절편의 면역조직화학적 분석을 통한 화학적 유발 대장염 평가

DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

여기에서는 syngeneic CD4+CD45RBhigh T cell을 T 및 B cell 결핍 수용자로 이식하여 마우스에서 결장 염증을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. 임상적 및 조직병리학적 특징은 인간의 염증성 장 질환을 모방합니다. 이 방법을 사용하면 결장 염증의 시작과 질병의 진행에 대한 연구를 할 수 있습니다.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

여기에서, 우리는 마우스에 있는 대장 내시경 유도핀치 생검을 유도하고 실시간으로 상처 폐쇄를 추적하는 절차에 대한 상세한 설명을 제공합니다. 또한, 상처 침대의 조직학적, 면역 조직 화학 및 분자 분석을 위한 조직의 제조를 위한 방법이 제공됩니다.

마우스에서 대장 내 시경 유도 핀치 생검을 수행하고 후속 조직 변화를 평가

무료 컴퓨터 보조 시스템을 사용하여 장 염증의 체계적인 점수는 궤양과 염증 변화의 존재를 특징으로 하는 대장염 모델의 조직 병리학적 변화를 정량적으로 비교할 수 있는 강력한 도구입니다. 조직학 대장염 점수 평가는 임상 관찰을 강화하고 데이터 해석을 용이하게합니다.

뮤린 Dextran 나트륨 황산염 유도 대장염 모형에 있는 장 염증을 위한 체계적인 채점 분석

본 프로토콜에서, 장내 미생물-항원 특이적 T 세포 입양 상반염 모델이 기재된다. CD4+ T 세포는 CBir1 TCR 형질전환 마우스로부터 분리된다. 이들은 면역 지배적인 창자 microbiota 항원 CBir1 flagellin를 위해 특정합니다, 수신자 Rag1/-- 마우스로 전송되는, 장 염증으로 이끌어 내는.

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

유전 적 감수성, 점막 면역 및 장내 미세 생태 학적 환경의 상호 작용은 염증성 장 질환 (IBD)의 발병 기전에 관여합니다. 이 연구에서는 IL-10 결핍 마우스에 분변 미생물 이식을 적용하고 결장 염증 및 심장 기능에 미치는 영향을 조사했습니다.

인터루킨 10-결핍 마우스 모델에서 분변 미생물 이식의 치료 평가

이 프로토콜은 낭염의 쥐 모델을 확립하는 방법을 설명합니다. 회장낭 모델은 미세수술 기법을 사용하여 회장낭-항문 문합(IPAA) 수술을 수행하여 만들어졌습니다. 수술 후, 쥐는 4 일 동안 4 % 덱스트란 설페이트 나트륨 (DSS)으로 치료되었습니다.

덱스트란 설페이트 나트륨을 사용한 직장결장절제술 및 회장낭-항문 문합술 후 낭염의 쥐 모델

배우세요 DSS 유도 염증성 장질환 마우스 모델에서 미각 관련 유전자 결손이 면역 반응에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 이 기술은 장 염증에서 유전자 효과와 신호 단백질의 항염증 및 전염증 작용을 연구하는 데 활용됩니다.

선 동적인 장 질병 마우스 모델에서 창 자 염증 단백질 폐지를 신호 하는 맛의 효과

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