Name: 쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하기 위한 중간 대뇌 동맥 폐색 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: 배우세요 쥐의 중간 대뇌 동맥 폐색 기술을 이용한 사후 뇌졸중 우울증 유도 방법입니다. 이 기법은 뇌부종과 경색 부피 변이성을 줄이고 행동학적 평가를 통해 우울 상태를 확인할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

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생리, 생태 및 의학의 학부 Olena 세이 베 스 카 교수님에 게 감사의 말을 드리며, 오 레 스 Honchar 드니프로 대학, 드니프로, 우크라이나의 지원 및 토론에 도움이 되는 공헌에 감사 드립니다. 얻어진 데이터는 R.K. 박사 학위 논문의 일부입니다.

이스라엘 네 게 브의 벤 구리 온 대학의 동물 관리 위원회는이 의정서에 사용 된 모든 치료 및 시험 절차를 승인 했습니다.
1. 실험 절차를 위한 쥐의 제조
참고: 300-350 g의 무게를 가진 성인 남성을 선택 합니다.
<ol><li>1 개의 케이지 당 4 마리의 쥐를, 22 ° c의 비 바리 움과 40%의 습도에서 반전 된 12 시간 빛/어둠의 순환 (8:00 오전에 소등)과 음식과 물을 무제한으로 이용할 수 있습니다.</li>
	<li>래 트를 2 개의 그룹, 즉 MCAO 그룹 (n=24) 및 샴 그룹 (n=19) 에 임의로 할당 한다.</li>
</ol>2. 수술을 위한 쥐의 준비
<ol><li>수정 된 MCAO 절차를 위해 쥐를 준비 하기 위해, 각 쥐를 소이 소 루 란 (유도를 위한 4%, 수술을 위한 2% 및 유지 보수를 위한 1.3%)의 혼합물로 30 분 동안 마 취 시킵니다. 인덕 션 챔버 내에서 24% 산소 (2L/min)가 자발적으로 호흡 할 수 있습니다.29 ,30. 참고: 무딘 집게를 사용 하 여 발가락 및/또는 발가락 패드 사이의 피부를 꼬 집기 하 여 페달 철수 반사를 자극 합니다. 반사가 사라질 때 마 취의 깊이를 적절 하 게 고려 하십시오.</li>
	<li>가 열판을 사용 하 여 37 ° c에서 코어 체온을 유지 합니다.</li>
	<li>외과 수술을 시작 하기 전에 쥐의 직장에 배치 된 프로브를 통해 모든 쥐의 체온을 측정 하십시오.</li>
	<li>모든 쥐에 대해 체온 상수 (37 ° c)를 유지 하 여 신경학 적 결과 및 모든 신경학 적 부상에 대 한 hypothermic 효과를 최소화 합니다.</li>
	<li>그들은 준비 테이블에 거짓말을 하는 동안 각 동물의 눈 모두에 인공 눈물 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>각 쥐의 목을 면도 하 고 70% 알코올 클 로르 헥 딘 (70% 알코올 및 0.5%의 클 로르 헥 딘 글 루 콘)으로 피부를 소독 하십시오. 소독 단계를 두 번 더 반복 합니다.</li>
	<li>소독 된 수술 용 커튼과 함께 쥐를 덮으 십시오.</li>
</ol>3. 수술 (MCAO 기술)
참고: 보이 코 외28 에 의해 설명 된 대로 수술을 수행 하 고, 맥 게리 외29 와 울 루 소 외30에 의해 제공 되는 악기를 사용 한다.
<ol><li>복 부 중간 선 절 개를 수행 하 고 피상적 근 막을 분해 합니다.</li>
	<li>경 동맥 (ECA, ICA 및 일반적인 경 동맥 [CCA])을 식별 하기 위해 세 개의 삼각형 모양의 근육 (sternohyoid,가 수 및 유 양 돌기 근육) 내의 날카로운 무딘 해 부를 조심 스럽게 수행 하십시오.</li>
	<li>조심 스럽게 분해 하 고 올바른 CCA와 ICA를 노출 합니다.</li>
	<li>미주 신경에서 오른쪽 CCA와 ICA를 분리 합니다. 참고: 3.2 단계에서 규정 된 경 동맥을 확인 하면, ICA는 ECA와 함께 CCA 지점의 1/2로 인식 될 것입니다.</li>
	<li>카 테 터 (열 또는 실리콘 코팅 4-0 나일론) 모노 필 라 멘 트를 ICA를 통해 직접 삽입 하 고, 오른쪽 CCA의 분기에서 약 19 mm 사이에서 온화한 저항에 도달 할 때까지 윌리스의 원으로 들어갑니다. 참고: 상기 열 중 합 된 필 라 멘 트와 실리콘 코팅 된 4-0 나일론은 동일한 역할을 하 고, 이들은 일반 나일론 실 (28) 보다 더 우수한 폐색을 제공 하는 것을 감안 하 여 최근 보다 바람직한 모노 필 라 멘 트 이다.</li>
	<li>4-0 실크 봉합 사를 오른쪽 CCA 바로 위의 ICA 주변에 연결 (익 상 곱 동맥) 하 여 필 라 멘 트 삽입 지점에 대 한 ICA 근 위부를 일시적으로 그리고 원 위부로 차단 합니다.</li>
	<li>이 카를 내 알루 실 주위에 묶어 실크 봉합을 조여 출혈을 방지 하십시오.</li>
	<li>MCAO 쥐와 같은 외과 수술에 가짜 작동 쥐를 대상으로 하지만 대신에 나일론 스레드를 삽입28. 참고: 실리콘 코팅 나일론 처럼 나일론 실은 ICA를 폐색 하지만 후자 만큼 효과적이 지는 않습니다.</li>
	<li>MCA를 폐색 한 후 쥐의 목에 상처를 감고 마 취를 끄고 관찰 중인 인큐베이터에 쥐를 올려 놓으십시오. 참고: 근 위부 결 찰의 필요성은 ICA를 폐색 하는 것이 고, 추가 말단 결 찰은 필 라 멘 트 주위의 출혈을 감소 시키고 제자리에 고정 시키는 것입니다. 또한, 쥐는 상처가 닫힌 후 몇 분 후에 일어나 야 합니다.</li>
</ol>4. 수술 후 회복
<ol><li>복 강 내 각 쥐에 게 5 mL의 0.9% 염 수 용액을 투여 하 고, 수술 직후에 탈수를 방지 합니다.</li>
	<li>사후 작업의 첫날에 무조건 진통 관리; 멜 록 시 캄 1 밀리 그램/kg SQ q24를 사용 하 여 희석 된 di 0.5 (식 수의 400 mL에 녹 인)을 첫 3 일 동안 통증의 증상을 보여주는 쥐에 게 주십시오.</li>
	<li>발작으로 모든 쥐를 희생 하십시오 (발작이 대뇌 부 종이나 뇌 출혈로 인 한 증가 된두개 내 압력에 의해 유발 됨).</li>
</ol>5. 신경학 적 심각도 점수31
참고: 이 절차는 수술 절차에 참여 하지 않는 두 명의 관찰자에 의해 수행 됩니다. 그들은 0-432의 누적 점수에 신경 적자와 학년 모터 적자를 테스트 합니다. 이 점수에 대 한 평가는 상이한 시간 간격으로 수행 될 수 있다; 이 조사에서, 50 분, 24 시간, 7, 15 및 30 일 후 수술을 수행 하였다. NSS를 평가 하는 단계를 아래에서 찾습니다. 이 상황에서 필수품은 아니지만,이 점수는 치료를 관리 하기 위해 설치류에 뇌졸중을 확인 하는 데 필요한.
<ol><li>쥐를 세라믹 바닥에 놓고 1 분 동안 자유롭게 움직일 수 있습니다.</li>
	<li>
다음과 같이 꼬리와 경사면에 의해 쥐를 부드럽게 당깁니다.
	<ol>
<li>신경 적자 없이 점수 0으로 쥐를 채 점 하십시오.</li>
		<li>Forelimb 굴곡을 위한 점수 1로 쥐를 채 점 하십시오.</li>
		<li>반대편 약한 forelimb 그립에 대 한 점수 2와 쥐를 학년.</li>
		<li>꼬리를 당길 때 파 레 틱 쪽으로 선회 하는 점수 3으로 쥐를 채 점 합니다.</li>
		<li>자연 선회32에 대 한 점수 4와 쥐를 학년. 참고: 둘 이상의 반응이 관찰 되 면 선호도가 높은 점수를 가진 작업에 부여 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 경색 체적 결정 (H조직학 시험)
<ol><li>
경색 부피 측정 참고: 이전33,34에 설명 된 대로이 절차를 수행 합니다. 재 관류 후 24 시간 동안 2, 3, 5 triphenyltetrazolium 염화 물 (TTC) 염색을 사용 하 여 뇌 경색 부피를 측정 한다.<ol>
<li>각 그룹에서 다섯 마리의 쥐를 안락사 시키고, 마지막 NSS 후 24 시간 후, 유도 챔버에 있는 아이 소 포컬 과다 복용에 그들을 노출 시 킴으로써.</li>
		<li>쥐를 욕 하 고 신속 하 게 작은가 위와 집게를 사용 하 여 뇌를 분리 합니다.</li>
		<li>0.9% 염 분으로 분리 된 두뇌를 씻으십시오.</li>
		<li>뇌의 출혈 점을 검사 하 여 윌리스 서클에서 지주 막의 출혈을 겪은 생쥐를 배제 합니다.</li>
		<li>각 뇌를-20°c 얼음 팩에 깨끗 한 유리 슬라이드에 놓고 5 분간-20°c의 냉장고에 놓고 뇌를 쉽게 슬라이스 할 수 있도록 합니다.</li>
		<li>-20°c 냉장고 밖으로 뇌와 유리 슬라이드를 받아-20°c 얼음 팩에 다시 넣어, 그리고 블레이드와 집게로 정면 극과 소 뇌를 분해.</li>
		<li>6 슬라이스를 생산 하는 블레이드와 2mm 두께로 수평으로 뇌 부분을 슬라이스.</li>
		<li>1.25 g의 TTC 분말을 일반 생리 식 염 수의 500 mL에 추가 하 여 0.05% TTC 솔루션을 준비 하십시오. 희생 하기 전에 용액을 포 일에 덮여 있는 24 웰 플레이트 (우물 당 1Ml)로 이송 하 고 4°c에서 보관 하십시오. 참고: Ttc와 ttc의 스테인드 티슈는 빛에 민감합니다.</li>
		<li>집게를 사용 하 여 뇌 슬라이스를 TTC 솔루션 (웰 당 한 슬라이스)을 포함 하는 24 웰 플레이트에 전달 하 고 용액의 슬라이스를 늘립니다.</li>
		<li>30 분간 얕은 수조에 37 ° c에서 플레이트 함량을 배양 합니다.</li>
		<li>플레이트에서 TTC 용액을 피 펫으로 흡입 하 고, 세 뇌 세척 액체로 세척 하 고, 실 온에서 30 분간 배양 합니다.</li>
		<li>실험실 유리에서 절단 된 순서 대로 슬라이스를 배치 하 고 스캐너로 세그먼트를 검사 합니다.</li>
		<li>시각적 식별을 기반으로 ImageJ 분석 소프트웨어를 사용 하 여 전체 뇌 조각의 백분율로 경색 크기를 분석 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
경색 볼륨 분석35
	<ol>
<li>표준 이미지 분석 소프트웨어 (ImageJ)를 사용 하 여 경색 볼륨을 정량화 하 고 전체 뇌 크기33의 백분율로 경색 뇌 볼륨을 분석 합니다.</li>
		<li>뇌 슬라이스를 유리 현미경 슬라이드에 놓고 광학 스캐너를 사용 하 여 고해상도 (1600 x 1600 dpi)로 스캔 하 여 적절 한 해석을 실시 합니다.</li>
		<li>스캔 한 이미지에 포함 된 메트릭 눈금자를 사용 하 여 이미지를 자르고 모든 이미지의 배율을 표준화 합니다.</li>
		<li>Imagej 1.37 v 소프트웨어36에 지팡이 (추적) 도구와 프리 핸드 선택을 사용 하 여 6 연속 2mm 코 날 섹션의 표시 된 창백 영역을 측정 합니다.</li>
		<li>다음 공식37을 사용 하 여 간접 경색 체적을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 뇌 부 종의 측정38
참고: 뇌 부 종은 마지막 MCAO 후 24 시간을 측정 하였다.  적어도 3 일 동안 식사 및/또는 음주를 방해 하는 심각한 신경학 적 결핍으로 동물을 안락사 시키고, 20% 이상의 체중 감량, 편 마비 또는 발작을 유발 한다.
<ol><li>검 시 슬라이스 영역의 합을 사용 하 여 오른쪽 반구의 부 종의 크기를 평가 하 여 임의의 단위 (픽셀)에서 오른쪽 및 왼쪽 반구로의 체적을 계산 합니다. 참고: 광학 스캐닝 (해상도: 1600 x 1600 dpi) 후이 계산을 위해 ImageJ 1.37 v 소프트웨어를 사용 하십시오. 관심 영역을 선택 하 고 분석 메뉴에서 측정 기능을 사용 합니다. 우리의 조사에 매크로가 사용 되었습니다.</li>
	<li>영향을 받지 않은 반대편 반구에서 표준 영역의 백분율로 뇌 부 종 영역을 표현.</li>
	<li>이전에 개발 된 방정식을 사용 하 여 팽 윤 정도를 계산39.</li>
</ol>8. 행동 패러다임
<ol><li>폐쇄, 조용 하 고 빛이 제어 되는 방에서 수술 후 일 30 및 33 사이에 행동 테스트를 수행 합니다.</li>
	<li>모든 실험 절차에 눈이 멀게 된 조사자에 게 상업적으로 사용 가능한 프로그램으로 모든 행동 테스트를 비디오 테이프로 지정 합니다.</li>
	<li>
자당 선호도 테스트40,41
	<ol>
<li>그들은 어두운 주기 동안 보관 되는 곳과 같은 방에 있는 개별 케이지에 쥐를 배치 합니다.</li>
		<li>다음 24 시간 동안, 테스트 할 쥐와 함께 각 케이지에 100 mL의 1% (w/v) 자당 용액 한 병을 놓고 쥐의 적응을 허용 하십시오.</li>
		<li>24 시간 후, 병을 제거 하 여 12 시간 동안 음식과 물의 쥐를 박탈.</li>
		<li>그런 다음 12 시간 후에 각 케이지에 4 시간 동안 2 개의 병을 넣고 수돗물 100 mL를 포함 하 고 다른 하나는 100 mL의 자당 용액을 함유 합니다.</li>
		<li>자당 용액과 물이 밀리 리터의 쥐에 의해 소비 되는 양을 기록 한다. 다음과 같이 자당 선호도에 대 한 친화도를 계산 한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Porsolt 강제 수영 테스트42 참고: Porsolt 강제 수영 시험은 Zeldetz et al.40 및 보이 코 외42에 의해 출판 된 이전 프로토콜에서 설명한 바와 같이 수행 되었다. 이 시험의 원리는 쥐가 whence 제한 된 지역에서 수영을 강요 할 때, 그들은 탈출 할 수 없습니다, 그들은 결국 물43,44을 탈출 하려는 시도를 중단, 비 이동이 될 것을 상태. 이 시험은 어두운 주기 동안 다른 방에서 수행 되었다.<ol>
<li>수직 플 렉 시 유리 실린더에 각각의 쥐를 배치 (높이: 100 40 센티미터), 25 ° c의 물 80 cm을 포함 하 여 한 번에 15 분 동안.</li>
		<li>쥐를 꺼내가 열 된 인클로저 (32 ° c)에서 15 분 동안 건조 시키십시오.</li>
		<li>쥐를 집 (원본) 케이지에 반환 합니다.</li>
		<li>24 시간 후에 8.4.1 단계를 반복 하 여 이번 조사를 위해 5 분간 진행 한다.</li>
		<li>5 분 테스트를 비디오 테이프로 만들고 해당 기간 동안 부동의 총 기간을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

여기에 제시 된 MCAO 기술이 원래의 MCAO 모델 보다 안전 하다 고 간주 될 수 있는 방법 중 하나는 ECA 및 후 두 동맥, 터미널 언어, 및 상 악 동맥을 포함 한 그 가지가 손상 되지 않는다는 사실에 의해 예시 된다 ICA를 통해 MCA를 폐색 할 때. MCAO (및 해당 분기)의 원래 모델의 오프셋 (및 그 지점), 거리 해 부 및 응고 하 여46, 손상 된 저작 원인, 혈관 공급에 타협으로 인해 근육을 저작 하는47. 근육의 파괴는 결국 추가 전산 유체 역학의 방출을 일으킬 수 있습니다. MCA에 대 한 액세스가 ECA를 통해 발생 하는 원래의 MCAO 기법과는 달리, 여기에 설명 된 기술은 ECA 및 그 지류의 혈 류 중단 발생 없이 뇌졸중에 대해 수정 됩니다.
새로운 MCAO 모델을 선호에 대 한 가장 중요 한 인수는 뇌 부 종의 가변성을 줄일 수 있는 능력에 원래 MCAO 나...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/58875">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats</a>. The Authors section was updated.
One of the author names was updated from:
Dmitri Frank
to
Dmitry Frank

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/58875">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats</a>. The Authors section was updated.

Erratum: A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

뇌졸중은 미국1,2,3에 있는 죽음-가해자 질병의 목록에 넷째, 그것은 선진국에서 성인에서 장애의 대부분을 야기 하는 동안4; 이것은 뇌졸중 세계에서 가장 중요 한 건강 문제 중 선도적 인 경쟁자를 만든다. 뇌졸중 생존 환자에서 정상은 드문, 영구 장애를 겪고 생존 피해자의 약 15%-40%, 뇌졸중 발병5후 3 개월 기관 치료를 필요로 하는 20%, 그리고 6 개월 생존의 1/3은 그들이 사는 데 도움이 필요 매일6. 뇌졸중은 또한 상승 국가 건강 지출에 대 한 계정7. 미국 심장 협회의 추정치는 20108에서 $500억 이상에서 미국에서 뇌졸중 관련 비용을가지고 있다.
뇌졸중은 개인의 장기적인 손상을 유발할 뿐만 아니라 치 매, 피로, 불안, 우울증, 정신 착 란 및 침략과 같은 정서적 및 행동 장애를 겪는 경향이 있습니다. ,13,14. 뇌졸중 후 가장 재발 심리적 속 편은 사후 뇌졸중 우울증 (PSD), 생존15의 50%에서 진단,17. 뇌졸중 유발 우울증은 발병 률과 사망률이 증가하 고,19,20,21을 초래 한다. PSD의 병 태 생리학은 완전히 알려지지 않았지만, 여러 가지 요인에 의해 발생 하 고 장애, 인지 장애 및 변 부 부위23에 연결 되어 있습니다.
MCAO에 의해 생성 된 초점 뇌 허 혈의 쥐 모델은 뇌졸중24,25,26,27의 가장 광범위 한 동물 모델입니다. ICA를 통해 MCA를 폐색 하 여 쥐의 PSD를 유도 하는 것을 시연 하면서 MCAO 모델의 사망률과 가변성을 최소화 하는 기술은28을 사용 합니다.
이 프로토콜의 주요 목적은 사망률과 변동성28의 결과를 감소 시키는 MCAO의 수정 된 모델인 ICA를 통해 MCA를 폐색 하 여 쥐에서 PSD를 유도 하는 단계를 간략하게 설명 하는 것입니다. 특정 목표는 신경학 적 및 조직학 검사를 수행 하는 것을 포함 합니다 (신경학 적 심각도 점수 [NSS], 경색 영역의 부피 및 뇌 부 종을 결정) MCAO의 효능을 확인 하 고 행동 테스트를 사용 하 여 검사 정서적 장애, 주로 PSD의 개발에이 MCAO 절차의 영향.

<table><tbody><tr><td>흡수 패드</td> <td>-</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>검은 색 무광택 방풍 상자</td> <td>-</td><td></td> <td>(120cm &times; 60cm &times; 60cm), 25 % 중앙 영역과 주변 경계 영역으로 나뉘어</td></tr><tr><td>병</td><td>Techniplast</td><td>ACBT0262SU</td><td>100mL의 물과 100mL 1% (w/v) 자당 용액으로 채워진 150mL 병</td></tr><tr><td>전기 충격</td><td>열 시스템 Ultasonic Inc.</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Horizon-XL</td><td>Mennen Medical Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이미징 시스템</td><td>Kodak</td><td>-</td><td>이미징 및 정량화용</td></tr><tr><td>모노필라멘트</td><td>-</td><td></td><td></td></tr><tr><td>-종이 타월</td><td>약국</td><td>-</td><td>쥐를 물에 담근 후 건조하게 유지하는 데 사용되는 건조 타월</td></tr><tr><td>Pexiglass 실린더</td><td>-</td><td>-</td><td>쥐</td></tr><tr>, 생쥐 및 햄스터에게 주어진 강제 수영 테스트<td>Purina Chow</td><td>Purina</td><td>5001</td> 설치류 실험실 차우를 수행하는 데 사용되는 높이 100cm, 직경 40cm의 실린더<td>는 5 년 이상 생물 의학 연구에서 사용되어온 수명주기 영양입니다. 이 실험에서 쥐에게 자유로이 제공됨</td></tr><tr><td>Rat Cages</td><td>Techniplast</td><td>2000P</td><td>설치류를 위한 기존 주택. 실험 내내 쥐를 수용하는 데 사용되었습니다.</td></tr> 스캐너<tr><td>&nbsp;</td><td>Canon CanoScan</td><td>4200F</td><td>-</td></tr><tr><td>비디오 카메라</td><td>ETHO-VISION (Noldus)</td><td>-</td><td>오픈 필드 테스트에서 쥐 행동의 고화질 녹화를 위한 디지털 비디오 카메라</td></tr></tbody></table>

쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하기 위한 중간 대뇌 동맥 폐색 기술

A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

사후 뇌졸중 우울증 (PSD)은 허 혈 성 뇌졸중으로 인해 발생 하는 모든 정신병 합병증의 가장 재발입니다. 더 큰 (약 60%) 모든 허 혈 성 뇌졸중 환자는 PSD로 고생 하 고, 장애는 건강의 증가 된 죽음과 악화를 위한 허 혈 성 뇌졸중 관련 전 구체로 여겨진다. PSD의 이상 징후는 여전히 모호 합니다. PSD의 개발과 발생의 메커니즘을 연구 하 고 치료법을 발견 하기 위해 우리는 쥐의 내부 경 동맥 (ICA)을 통해 중간 대뇌 동맥 (MCA)을 폐색 해야 하는 새로운 프로토콜을 개발 하려고 시도 했습니다. 이 프로토콜은 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)을 통해 쥐에 유도 된 PSD의 모델을 기술 한다. 또한 실험에서 사용 되는 Porsolt 강제 수영 시험과 자당 선호도 검사는 조사 중인 쥐의 우울한 기분을 확인 하 고 평가 하는 것입니다. 원래 절차에 규정 된 것 처럼 외부 경 동맥 (ECA)을 통해 카 테 터를 삽입 하는 대신,이 MCAO 기술은 ICA를 통해 직접 전달 되는 모노 필 라 멘 트를가지고 있습니다. 이 MCAO 기술은 몇 년 전에 개발 되었으며 사망률과 가변성의 감소로 이어집니다. 일반적으로 사용 되는 기준은 생물학적 모델의 선택에서 선호 되는 것으로 받아들여진다. 이 프로토콜로 얻어진 데이터는 MCAO의이 모형은 쥐에 있는 PSD를 유도 하는 방법이 고 잠재적으로 병 리 생리학 및 새로운 약 및 그밖 신경 보호 에이전트의 미래 발달의 이해로 이끌어 낼 수 있다는 것을 보여줍니다.

조직 학적 소견 (표 1)은 MCAO 군에서 동물에 비하여 통계적으로 유의 한 경색 부피를 총 뇌 (p &lt; 0.0001)의 백분율로 밝혀 내었다. 또한 실험 군에서 평가 되 면 통계적으로 유의 한 뇌 부 종 (p &lt; 0.0003)이 그를 샴 대조 군의 것과 나란히 배치 하였다 고 보고 하였다.
표 2에 나타난 바와 같이, 얻어진 NSS 점수는,만-휘트니 테스트 다음에 MCAO 그룹에 대 한 더 높은 수치와 비교 하 여 실험 군에서 낮은 신경학 적 성능을 보여준다: p &lt; 0.001 50 분 후, p &lt; 24 시간 후 0.05, p &lt; 7 일 후 0.05.
<p class="jove_conte...

여기에서 우리는 내부 경 동맥을 통해 중간 대뇌 동맥을 폐색 하 여 쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하는 프로토콜을 제시. 우리는 Porsolt 강제 수영 시험과 자당 기본 설정 테스트를 사용 하 여 유도 우울한 기분을 확인 하 고 평가 합니다.

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of ...

우리의 프로토콜은 뇌졸중 후 우울증 개발의 메커니즘을 연구하고 보다 효율적인 치료를 찾을 수 있도록 쥐에 있는 새로운 내측 대뇌 동맥 폐색 기술을 제안합니다. 우리의 기술의 주요 장점은 체중 변화, 뇌 부종 및 경색 볼륨의 가변성을 줄이고 절차 관련 사망을 최소화하는 능력입니다. 남성 300 ~350그램 스프라그 Dawley 쥐의 꼬리 핀치에 대한 반응부족을 확인한 후, 동물을 섭씨 37도 에 놓고 핵심 체온을 모니터링하기 위해 직장 프로브를 사용합니다.동물의 눈에 연고를 바르고 목에서 머리카락을 면도합니다. 이어서, 노출된 피부를 70% 알코올 클로르헤시딘으로 소독하고, 표준 기술에 따라 폐색을 수행하기 전에 멸균 수술 드레이프로 쥐를 덮는다. 신경학적 심각도 점수를 얻으려면 폐색 된 쥐를 평평한 표면에 놓고 동물이 자유롭게 움직일 수 있도록하십시오.1분 후, 쥐를 꼬리뒤로 부드럽게 당기고 동물의 걸음걸이 반응을 채점합니다. 경피량을 측정하려면 준비된 스테인드 브레인 슬라이스를 인치 해상도당 1, 600 x 1, 600 점으로 스캔하고 모든 이미지의 크기를 자르고 크기를 조정합니다. 그런 다음 표준화된 이미지를 적절한 이미지 분석 소프트웨어 프로그램에 로드하고 추적 도구를 사용하여 6개의 연속 2mm 슬라이스로 표시된 페일어 영역을 측정하여 전체 뇌 슬라이스의 백분율로 극한크기를 결정합니다.수술 후 30~33일 동안 동물을 개별 케이지의 폐쇄적이고 조용하고 가벼운 통제실로 옮기고, 24시간 동안 각 케이지에 1%의 수당 용액 100밀리리터가 들어 있는 병을 넣습니다. 다음 날, 12 시간 동안 병뿐만 아니라 음식과 식수를 제거합니다. 박탈 기간이 끝나면 100 밀리리터100 밀리리터가 들어 있는 1병과 4시간 동안 각 케이지에 100밀리리터의 수돗물을 넣습니다.그런 다음 각 동물에 대한 선호도를 계산할 수 있도록 소비된 자당 용액과 물의 양을 기록한다. 포르솔트의 강제 수영 시험의 경우 수술 후 30~33일 동안 각 쥐를 15분 동안 섭씨 25도의 80cm를 포함하는 수직 플렉시글라스 실린더에 1위를 차지합니다. 습관 기간이 끝나면 동물을 홈 케이지로 되돌리기 전에 32도의 가열된 인클로저에서 15분 동안 쥐가 건조할 수 있습니다.다음 날, 마지막 5 분 동안 실린더에 쥐를 반환, 그 기간 동안 부동성의 총 기간을 계산 할 수 있도록 5 분 테스트를 기록. 조직학적 분석은 가짜 대조군의 동물과 비교할 때 MCAO 이후 총 뇌 부피의 백분율로서 통계적으로 유의한 경포량을 나타낸다. 통계적으로 유의한 뇌 부종은 또한 샴 대조군에 비해 실험동물에서 관찰된다.MCAO 동물은 수술 후 50분, 24시간, 7일 동안 가짜 수술동물에 비해 신경작용이 낮은 것으로 입증됩니다. MCAO 쥐는 또한 자당의 상당히 낮은 양을 소비하고 가짜 작동 동물에 비해 포르염의 강제 수영 테스트 동안 더 이상 부동성을 나타낸다. 이것은 행동 치기 연구 결과를 위한 중요한 모형이고 미래 치료를 평가하거나 치료 물질의 효험에 중요한 전임상 데이터를 제공하기 위한 공구역할을 할 수 있었습니다.

a-middle-cerebral-artery-occlusion-technique-for-inducing-post-stroke

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 노화된 쥐에서 총경동맥 또는 CCA 결찰술을 사용하여 영구 원위 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 수행하는 절차를 보여줍니다. 이는 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포의 사멸로 이어지며 뇌졸중 메커니즘과 잠재적 치료법을 연구하기 위한 모델을 생성합니다.

쥐 모델에서 중추 및 일반 경동맥 폐색을 통한 허혈 유도

출처: Larpthaveesarp, A., et. al입니다. P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 일시적인 중간 대뇌 동맥 폐색 모델. J. Vis. 특급. (2017)이 비디오는 새끼 쥐에서 Middle Cerebral Artery Occlusion 모델을 설정하는 방법을 보여줍니다. 내부 경동맥(ICA)이 노출되고 결찰자가 고정되어 혈액 범람을 제한합니다. 폐색은 ICA를 통해 삽입되어 중대뇌동맥에 도달합니다. 그런 다음 추가 분석 전에 강아지가 회복할 수 있습니다.

국소 뇌허혈을 유발하기 위해 새끼 쥐에서 중대뇌동맥 폐색을 생성하는 것

우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

여기에서 우리는 큰 대뇌 피질 경색과 지속적인 적자를 생성하는 경동맥의 동시 폐쇄와 함께 노인 여성 쥐 영구 원심 중간 대뇌 동맥 폐쇄를 생산하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 24 시간 뇌졸중 후 팔주에서 구조 MRI를 사용하여 병변 크기의 확인을 보여줍니다.

세 쥐의 경동맥 폐색으로 영구 말초 중간 대뇌을 수행하면 두피 허혈 지속적인 장애를 연구하는

신생아 뇌졸중은 조기 뇌 손상의 중요한 원인으로, 연구를 위해 일관된 국소 손상 패턴과 높은 재현성을 가진 번역 모델이 필요합니다. 이 연구는 만삭 등가 설치류에서 비출혈성, 편측성 국소 허혈-재관류 손상을 생성하기 위한 자세한 수술 절차를 설명합니다.

P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

이 프로토콜은 수정된 4개 혈관 폐색 방법을 사용하여 뇌 허혈성 혼수 모델을 유도하는 과정을 설명합니다.

수정된 4혈관 폐색에 의해 유도된 대뇌 허혈성 혼수 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥 폐색(MCAO)과 만성 경미한 스트레스, 행동 억제, 격리 주거를 결합하여 뇌졸중 후 우울증(PSD)의 쥐 모델을 구축하고, 행동 검사를 이용해 Yi-nao-jie-jie-yu 처방(YNJYP)의 치료 효과를 평가하는 방법을 설명합니다.

중뇌동맥 폐색과 행동 억제를 결합한 쥐에서 Yi-Nao-Jie-Yu 처방이 뇌졸중 후 우울증에 미치는 영향

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

배우세요 쥐의 중간 대뇌 동맥 폐색 기술을 이용한 사후 뇌졸중 우울증 유도 방법입니다. 이 기법은 뇌부종과 경색 부피 변이성을 줄이고 행동학적 평가를 통해 우울 상태를 확인할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하기 위한 중간 대뇌 동맥 폐색 기술

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