Name: 흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류 크기를 결정 하는 쥐에서의 초음파 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: 학습하세요 쥐에서 흉부 및 복부 대동맥 동맥류 크기를 결정하는 초음파 이미징 방법을. 비침습적 고해상도 측정으로 재현 가능한 결과를 얻어 심혈관 연구에 활용하세요.

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국가 심 혼, 폐, 저자의 연구 작업 지원 했다 고 수상에서 국립 보건원의 혈액 연구소 혈관 질환 (18SFRN33960001)에 R01HL133723 및 R01HL139748와 미국 심장 협회 SFRN 번호. 호 성 아 박사 친목 (18POST33990468)에 의해 지원 됩니다. 제는 NCATS UL1TR001998에 의해 지원 됩니다. 이 원고 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다.

마우스에서 초음파 이미징 대학 켄터키 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인 하 여 수행 됩니다 (IACUC 프로토콜 번호: 2018-2967). 이미징, 동안 isoflurane 1%-3 %vol / vol 사용 하 고 절차 상의 스트레스를 줄이기 위해 하 고 저체온증을 방지 난방 플랫폼에 쥐 취는. 눈 윤 활 유는 마 취 동안 깜박임 반사의 손실 때문에 각 막 손상을 방지에 적용 됩니다.
1. 장비 설치
<ol><li>플랫폼, 난방 초음파 기계를 켜고 젤 따뜻한 (그림 1).</li>
	<li>초음파 프로그램을 엽니다. 연구 정보 등 연구 이름 및 마우스 정보를 입력 합니다.</li>
	<li>Isoflurane 기화 기 및 O2 탱크를 확인 합니다. 콘텐츠 낮은 경우 채우기 isoflurane 기화 및/또는 새로운 O2 탱크에 대 한 교환.</li>
	<li>마 취 유도 챔버와 원뿔 필터 청소를 연결 합니다.</li>
	<li>유도 챔버에 대 한 분기를 엽니다.</li>
	<li>O2 탱크를 켭니다.</li>
	<li>설정 O2 와 isoflurane 손잡이 1 L/min을 0 %vol / vol, 마 취 기화 각각, O2와 챔버를 채우기 위해.</li>
</ol>2입니다. 마우스의 준비
<ol><li>O2에 마우스를 놓고-마 취로 인해 원치 않는 심장 혈관 변화를 최소화 하기 위해 유도 챔버를 가득.</li>
	<li>Isoflurane 기화 (1.5%-2.5 %vol / vol)을 켭니다.</li>
	<li>뒷 다리 철수 반사의 부재를 확인 합니다.</li>
	<li>상공에서 마우스를 제거 하 고 각 눈에서 한 방울 살 균 안과 윤활제의 장소.</li>
	<li>코 콘 진단트리로 이동 마 취 고 유도 약 실에 흐름을 닫습니다.</li>
	<li>하다는 마우스 dorsally 난방 플랫폼에 마 취 코 콘에 코.</li>
	<li>가슴 또는 복 부, 면봉을 사용 하 여 depilatory 크림을 적용 합니다. 자극을 피하기 위해 depilatory 크림의 양을 최소화 합니다.</li>
	<li>1 분 동안 기다려와 다음, 부드럽게 닦아 모든 크림과 머리.</li>
	<li>따뜻한 물으로 영역을 관개 하 고 완전히 제거 하는 크림 건조 닦아냅니다.</li>
	<li>각 4 개의 구리 점 젤 플랫폼에 지도 한다.</li>
	<li>(아래 손바닥) 아래로 심전도 (ECG) 신호에 대 한 리드 각 발 패드 테이프. 이 심전도 및 호흡 생리학 취 하는 동안 마우스의 제공할 것입니다.</li>
	<li>심장 박동 450-550 박동/min 사이 인지 확인 합니다. 때문에 마 취에 영향을 미치는 대동맥 직경을 변경할 수 있습니다, 심장 기능, 심장 박동은 적절 한 범위에서 되도록 마 취의 배달 속도 조정 합니다.</li>
	<li>Prewarmed 초음파 젤 준비 사이트에 적용 됩니다.</li>
	<li>소유자에 프로브를 연결 합니다.</li>
	<li>최적의 검색을 위해 플랫폼을 회전 및 프로브 초음파 젤 접촉 될 때까지.</li>
</ol>3. 흉부 대동맥의 이미징
<ol><li>플랫폼에서 마우스의 왼쪽을 아래로 기울기.</li>
	<li>마우스의 흉 골 (그림 2A)의 오른쪽 가장자리에 프로브를 넣어. Caudally 동양 프로브에 참조 마커. 참고: 프로브에 참조 마커 조사 방향을 나타내고 초음파 시스템 (그림 2A D)의 모니터에 메이커와 일치. 마커의 모양 각 초음파 시스템에 따라 다릅니다.</li>
	<li>흉부 대동맥에 컬러 도플러를 사용 하 여 혈액 흐름을 확인.</li>
	<li>대동맥을 명확 하 게 표시를 단계 및 조사 각도 조정 (그림 3A, B). 참고: Innominate 및 폐 동맥 및 대동맥 밸브 오른쪽 parasternal 긴 축 보기에 대 한 해부학 적 랜드마크에 대 한 사용할 수 있습니다. 따라서이 보기에서 대동맥 이미지 한 프레임 (그림 3A) innominate 및 폐 동맥 및 대동맥 밸브를 포함할 수 있습니다. 한 검사, 대동맥 팽창 등 tortuosity, 대동맥 병 리 때문에 전체 오름차순 대동맥을 포착 하기 어려운 경우 이미지 별도로 캡처할 수 해야 합니다. 분리 된 이미지 때문에 대동맥 측정의 과소를 일으킬 가능성이, 무대 및 검색의 좋은 위치 하는 것이 필요 합니다. 오른쪽 parasternal 긴 축 보기 전체 오름차순 대동맥 (그림 3C) 이미징 최적입니다. 그러나, 그것은 종종이 보기 aneurysmal aortas에서 특히 대동맥 공동 캡처 어렵다입니다. 이 뷰는 한 프레임 (그림 3C) 대동맥 아치를 캡처할 수 없습니다 비록 왼쪽된 parasternal 긴 축 보기는 대체 접근 방식으로 인접 오름차순 대동맥을 대동맥 루트에서 캡처 수 있습니다. 왼쪽된 parasternal 긴 축 보기에 대 한 조사 (그림 2B) 흉 골의 왼쪽된 가장자리 위에 놓습니다. 무대는 플랫 또는 마우스의 오른쪽을 약간 기울이면. 오른쪽 parasternal 긴 축 보기와 같은 방식으로 절차의 다른 단계를 수행 하십시오. 이러한 프로브 위치의 장단점은 표 2에 설명 되어 있습니다. 대동맥 이미지 중 오른쪽 또는 왼쪽 parasternal 긴 축 보기에서 지속적으로 캡처할 수 해야 합니다.</li>
	<li>이미지 깊이 폭을 위해 손잡이 사용 하 여 프레임 속도를 초음파 이미지 자르기.</li>
	<li>초점 깊이 대 한 노브를 사용 하 여 오름차순 대동맥의 등 쪽 측에 초점 깊이 변경 합니다.</li>
	<li>초음파 매개 변수를 확인 합니다. 이 프로토콜에 대 한 초음파 설정은 표 1에 설명 되어 있습니다.</li>
	<li>이동 프로브 부드럽게, 가장 큰 가능한 직경을 가진 경도 대동맥 이미지는 X 축 및 Y 축 스테이지 손잡이 사용 하 여.</li>
	<li>한 씨 네 루프를 저장 합니다.</li>
</ol>4. 복 부 대동맥의 이미징
<ol><li>흉 골 및 칼 과정 (그림 2C) 바로 아래 transversely, 프로브를 배치 합니다. 프로브에 참조 마커 마우스의 오른쪽 얼굴을 한다. 복 부 대동맥 열 등 한 베 나 정 맥 또는 문맥 (그림 3D) 옆 위치 한다.</li>
	<li>컬러 도플러 타악기 흐름을 확인 하기 위해 복 부 대동맥을 시각화. 참고: 도플러 각도 혈액의 흐름에 수직, 색 도플러 신호는 대동맥에 표시 되지 않습니다. 색 도플러 영상, 뿐만 아니라 복 부 대동맥 프로브를 약간 눌러 베 나 정 맥 및 문맥에서 구별 수 있습니다. 베 나 정 맥 및 문맥은 대동맥의 patency 유지 하면서 압축할 수 있는.</li>
	<li>프레임 속도를 초음파 이미지 자르기.</li>
	<li>복 부 대동맥의 후부 벽에 초점 깊이 변경 합니다.</li>
	<li>프로브 caudally 시각화 복 강 및 우수한 mesenteric 동맥의 분기 포인트를 이동 합니다.</li>
	<li>오른쪽 신장 동맥을 찾아서 랜드마크로 그것을 사용 하 여. 참고: 복 부 대동맥 동맥 류는 대동맥 tortuosity로 이어질 수 있습니다, 이후 복 부 대동맥을 이루면서 이미지를 조사 각도 조정 합니다. 내부 통제에 대 한 오른쪽 신장 브랜치 포인트에의 한 이미지를 캡처할 수 해야 합니다.</li>
	<li>복 부 대동맥 (그림 3D, E)에서 최대 팽창 보여주는 관심 영역의 씨 네 루프를 캡처하십시오. 참고: 대동맥 동맥 류의 지역화 각 동물 모델에 따라 다릅니다. Angiotensin II 유발 쥐에 대동맥 팽창 CaCl2 또는 elastase infrarenal 쥐에서 대동맥에서 대동맥 동맥 류를 유도 하는 동안 suprarenal 대동맥에서 주로 발생 합니다.</li>
</ol>5. postscanning 마우스 관리 및 정리
<ol><li>초음파 젤을 닦아, 가슴 또는 복 부에 따뜻한 물으로 관개 하 고 부드럽게 마우스 닦아 건조.</li>
	<li>생리대에는 케이지를 마우스를 반환 합니다.</li>
	<li>O2 탱크 및 isoflurane 기화를 해제 합니다. 리필은 기화 isoflurane 수준이 낮은 경우.</li>
	<li>초음파 기계, 프로브, 부드러운 천으로와 이소프로필 알코올 플랫폼 청소 또는 글 지워 버리고.</li>
	<li>스캔 하는 동안 수집 된 모든 파일을 다운로드 합니다.</li>
	<li>초음파 기계를 해제.</li>
	<li>그들은 마 취에서 회복 후에 동물 주택 룸에 쥐를 반환 합니다.</li>
</ol>6입니다. 분석
<ol><li>
흉부 대동맥 이미지의 분석
	<ol>
<li>분석 소프트웨어를 출시 하 고 초음파 데이터를 엽니다. 분석 소프트웨어 (Vevo 실험실 3.0.0)의 예제 이미지 추가 그림 1에 표시 됩니다.</li>
		<li>(그림 4A, C, E, G 및 보충 그림 1) 씨 네 루프에서 측정 한 대동맥 초음파 이미지를 선택 합니다. 참고: 이 프로토콜은 일반적으로 한 씨 네 루프 6 ~ 7 하트 비트를 감지. 대동맥 직경 systole와 심장 (그림 4A-G) 사이의 서로 다른 이기 때문에, 측정 심장 주기의 일정 단계에서 시험 될 필요가 있다. Systole는 T 파의 끝에 R 파에서 정의 됩니다. 일반적으로, T 파는 마우스 심전도에서 식별 하기가 어렵습니다. 따라서, systole에서 대동맥 직경 (그림 4나) 육안 검사에 의해 정의 된 생리 systole에서 측정 되어야 한다. 대동맥은 극대로 확장 때 심장 단계 midsystole 이어야 한다. 끝-심장 심전도 (그림 4나)의 R 파에 쉽게 정의 됩니다. 끝-심장에서 대동맥 측정은 심장 주기를 구별 하는 것의 관점에서 midsystole에 비해 간단 합니다.</li>
		<li>대동맥 루멘의 중앙에 선을 그립니다. 이 센터 라인 측정 라인 대동맥 (그림 4B, D 및 보충 그림 1)에 수직이 되도록 사용 됩니다.</li>
		<li>대동맥 공동 최대한 오름차순 대동맥 수준 (그림 4B, D 및 보충 그림 1)에서 내부 가장자리 luminal 내부 가장자리에서 센터 라인을 통해 수직 라인을 그립니다.</li>
		<li>적어도 3 개의 별도 하트 비트에 대동맥 직경을 측정 하 고 측정의 평균을 계산. 참고: Vevo2100 시스템 Vevo 실험실 분석 소프트웨어를 사용 하 여 대동맥 치수의 측정. 각 버튼에 대 한 간략 한 설명이 아래와 같습니다. 측정 모드 (보충 그림 1A): 대동맥 측정을 위해이 모드를 선택 해야 합니다. 씨 네 루프 (보충 그림 1B)의 슬라이더:이 슬라이더를 사용 하 여 초음파 프레임을 선택. 추적 거리 (보충 그림 1C): 센터 라인이이 기능으로 그려집니다. 선형 거리 (보충 그림 1D): 대동맥 차원이이 함수를 사용 하 여 측정 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
복 부 대동맥 이미지의 분석
	<ol>
<li>분석 소프트웨어를 출시 하 고 초음파 데이터를 엽니다.</li>
		<li>(그림 4E, G)에 네 루프에서 분석용 대동맥 이미지를 선택 합니다. 참고: 흉부 대동맥 측정 마찬가지로 심장 주기 수에 영향을 복 부 대동맥 직경 및 지역. 측정 심장 주기의 일정 단계에서 결정 되어야 합니다.</li>
		<li>배 루멘 (그림 4F, H)의 안쪽 가장자리를 안쪽 가장자리에서 가장 큰 luminal 직경에서 선을 그립니다.</li>
		<li>(그림 4F, H) luminal 영역에 대 한 대동맥 루멘의 안쪽 가장자리를 추적 합니다.</li>
		<li>취득 세 별도 하트 비트 최소한 대동맥 측정 하 고 데이터의 평균을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자 없다 공개.

이 프로토콜에서는 높은 주파수 초음파 시스템을 사용 하 여 마우스에서 흉부 및 복 부 대동맥의 이미지 수집에 대 한 기술 가이드. 초음파 대동맥 이미징 근 흉부 대동맥에 특히 프로브 위치 및 심장 주기, 대동맥 측정의 정확도 손상 시킬 수 있습니다, 같은 잠재적인 confounders, 있다. 이 프로토콜 대동맥 크기를 정확 하 게 측정 하기 위해 자세한 지침 및 이미지 수집, 측정 및 데이터 분석을 위한 전략을 설명 합니다.
근 흉부 대동맥, 이미징에 대 한 배치를 여러 접근이 있다. 그림 2A 에 표시 된 오른쪽 parasternal 긴 축 볼 초음파 이미징이 프로토콜에 사용 되었다. 이 보기는 대동맥 아치 부분을 대동맥 공동에서 높은-품질의 이미지의 수집을 촉진 한다. 그것은 하강 대동맥에 대 한 최적의 초음파의 간섭 때문 에입니다. 그들은 전시에 오름차순 대동맥 대동맥 루트에서 주로 luminal 팽창 하기 때문에이 프로토콜의 흉부 대동맥 동맥 류 대부분 마우스 모델에 적용 됩니다. 만성 angiotensin II 주입을 쥐18,19,20,21,,2223의 오름차순 대동맥에서 동맥 류 형성 되도록 포함 됩니다. Marfan 증후군의 모델 마우스 (fibrillin 1C1041G / + , fibrillin 1mgR/mgR 마우스) 대동맥 루트와 오름차순 대동맥 팽창23,,2425. 또한 대동맥 루트에 오름차순 대동맥18,,2627,28 동맥을 개발 하는 Loeys Dietz 증후군 마우스 모델 (1 또는 2 평활 근 세포에서 TGF-β 수용 체의 출생 후 삭제) . 따라서, 바로 parasternal 긴 축 보기는 이러한 마우스 모델 흉부 대동맥 동맥 류의 대동맥 영상에 적합 합니다. 다른 한편으로, 바로 parasternal 짧은 축 보기 잡으려고 대동맥 이미지 대각선 동맥 류는 대동맥 tortuosity, 직경의 과대평가 발생할 수 있습니다 종종 복잡 하기 때문에 가능성이 있다. 흉부 대동맥과 달리 짧은 축 보기가이 프로토콜에서 복 부 대동맥의 이미징에 사용 되었다. 대동맥 곡률 및 tortuosity 흉부 대동맥에 비해 복 부 대동맥에서 겸손 한 이후, 짧은 축 보기에서 이미지의 수집 대동맥 직경의 underestimations을 살펴볼. 그것은 중요 한 메모는 다른 조사 위치 다른 보기 각도 제공 하 고 대동맥 직경 각 보기 각도에 다를 수 있습니다. 따라서, 신뢰할 수 있는 대동맥 직경 측정 연구 내의 모든 이미지에 대 한 동일한 프로브 위치를 적용 하 여 향상 되었습니다. 흥미롭게도, 3 차원 (3D) 초음파 심장 및 대동맥의 이미지 되었습니다 보고 최근29,30,,3132. 또한, 현재 초음파 시스템 4 차원 이미지33시간이 지남에 3 차원 이미지를 얻을 수 있습니다. 따라서, 이러한 3D 이미징 기술을 프로브 포지셔닝의 문제를 해결할 수 있는 대동맥 구조를 보다 정확 하 게 보여 주기 위해 가능성이 있다.
2D 밝기 모드 (B-모드) 또는 1 차원 모션 모드 (M 모드)에서 초음파 이미지를 캡처할 수 있습니다. 일부 기사는 대동맥 직경의 측정에 대 한 M 모드를 사용 하 고, B 모드는 바람직15,,3435,36. M 모드는 시간적, 공간적 해상도 높이기 위해 2 차원에서 이미지 용량이 있다. 그러나,이 모드는 대동맥 동심 실린더 수직 초음파 파도에 몇 군데 되는 가정에 의존 합니다. 이 가정 수 있습니다 하지 aneurysmal 상태에 진정한 보유 하 고 오름차순 대동맥의 곡률 어려운이, nonaneurysmal 상태에도. 또한, 대동맥 심장 주기37전체 고정된 위치에 남아 있지 않는다. 따라서, M-모드 측정 오류, 오버-및 underestimations를 포함 하 여 발생할 수 있습니다.
그것은 또한 중요 심장 사이클에 영향을 주는 대동맥에서 luminal 직경입니다. 예상 했던 대로, systole에 대동맥 직경 보다 큽니다 (그림 4A H), 심장에 관련 된 대동맥 벽의 탄력과 긴장. Systole와 심장 대동맥 직경의 차이에서 대동맥 벽의 탄력과 긴장을 계산할 수 있습니다. 탄력과 긴장 정상 aortas31,34,35,38,,3940에 비해 aneurysmal aortas에서 감소 됩니다. 대동맥 경직 초음파에 의해 직접 측정 될 수 없습니다. 펄스 파 속도 측정 (PWV) aneurysmal aortas31,35,,4142에 증가 되기 위하여 보고 되는 프록시는 강성을 평가할 수 있다. PWV 펄스 파 도플러 이미지와 그들의 해당 거리를 사용 하 여 두 동맥 사이트 간의 운송 시간으로 계산 됩니다. 비교 임상 시험, 달리 대동맥 직경에 대 한 쥐의 대동맥 측정을 위해 심장 위상 측면에서 더 엄격한 표준화가입니다. 따라서, 그것은 하지 아직 불분명 어떤 심장 단계 대동맥 측정에 적합입니다. 그러나, 안정적이 고 재현 가능한 비교를 보장 하기 위해, 대동맥 직경 심장 주기의 정의 단계에서 측정 되어야 한다.
이 프로토콜 대동맥 크기를 정확 하 게 측정 하기 위해 대동맥 이미징 및 데이터 분석에 대 한 자세한 지침을 제공 합니다. 이 프로토콜을 사용 하 여 대동맥 측정 ex vivo 대동맥 직경 (그림 5A) 실제와 일치 했다. 우리는 또한 간의 대해 확인-및 intraobserver 재현성 (그림 5B, C). 특히 조사 위치 및 심장 주기,이 프로토콜의 모든 단계는 정확한 측정을 위해 필요. 그러나, 적절 한 절차를 사용 하는 경우에 초음파 이미징 동안 유물 불가피 하지 않습니다. 갈비뼈와 폐, 호흡 및 심장 맥 박의 위치 흉부 대동맥의 이미지 품질에 영향을 수 있습니다. 장내 가스는 복 부 영상에서 아티팩트를 발생할 수 있습니다. 따라서, 가난한 대동맥 이미지의 경우이 프로토콜을 따르는 때 제외 기준을 정의 하는 것이 좋습니다.
고해상도 초음파 시스템의 도래와 함께 쥐의 대동맥 구조 수 검사 절묘 한 세부 사항에, 연속적으로 그리고 전통적으로, 매우 대동맥 동맥 류의 이해에 기여. 위에서 설명한 대로 프로토콜 초음파 이미징 쥐의 대동맥 동맥 류 측정에 대 한 안정적이 고 재현 가능한 비 침 투 적인 접근 이다.

대동맥 동맥 류는 일반적인 혈관 질환 흉부 및 복 부 대동맥1,2,,34의 영구 luminal 팽창에 의해 특징. 아니 약리 치료 팽창과 병원 성 메커니즘에 대 한 필요성을 강조 하는 대동맥 동맥 류의 파열을 방지 하기 위해 설립 되었습니다. 대동맥 동맥 류의 메커니즘, 명료 하 마우스 모델 유전적 또는 화학적 조작에 의해 생산 되어 널리 사용된4,,56,7,8, 9 , 10 , 11 , 12. 쥐에서 대동맥 직경의 정확한 정량화는 대동맥 동맥 류 연구의 기초 이다.
높은 주파수 초음파의 개발 대동맥 크기13,,1415에 작은 차이 검출 하기 위하여 이미지의 공간 및 시간 해상도 증가 했다. 이 마우스에 대동맥 직경의 연속 측정 사용은 그리고 이렇게, 그것 murine 연구 대동맥 동맥 류의 대동맥 직경을 측정 하기 위한 선호 하는 방법 되고있다. 초음파 이미징 간단한 기법 이지만, 정확한 측정, 데이터 분석 및 해석에 대 한 적절 한 이미지 대동맥 해부학과 생리학의 지식이 필요 합니다. 대동맥 근 흉부 지역16에 가변 곡률을 pulsating 원통형 기관 이다. 이 일반적으로 인수 2 차원 (2D) 이미지에서 대동맥 크기의 부정확 한 결정에 대 한 잠재력에 기여 한다. 대동맥 측정의 정확도 손상 될 수 있는 aneurysmal 상태17대동맥 tortuosity에 의해 추가. 대동맥 dilations의 안정적이 고 재현 가능한 측정을 얻기 위해이 프로토콜 쥐에서 근 흉부 및 복 부 대동맥 직경을 측정 하는 고해상도 초음파 시스템의 사용에 대 한 실용적인 가이드를 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>시약의 이름</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)</td><td>Henry Schin</td><td>NDC11695-6776-2</td><td>마취제</td></tr><tr><td>Omnicon F/Air Anesthesia 가스 필터 캐니스터</td><td>A.M. Bickford Inc.</td><td>80120</td><td>마취</td></tr><tr><td>퓨랄루베 수의사 연고</td><td>Dechra</td><td>청소 시스템 NDC17033-211-38</td><td>윤활 안약</td></tr><tr><td>Aquasonic&nbsp;</td><td>Parker Laboratories</td><td>01-08</td><td>초음파 젤</td></tr><tr><td>Nair</td><td>Nair</td><td></td><td>Depilliating Cream</td></tr><tr><td>Transeptic Transducer 세척 용액</td><td>Parker Laboratories</td><td>341-09-25</td><td>프로브 용 세척 스프레이</td></tr> <tr><td>장비 이름 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td>초음파 기계</td></tr><tr><td>Vevo LAB 3.0.0</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo LAB 3.0.0</td><td>초음파 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>MS-550D</td><td>VisualSonics</td><td>MS-550D</td><td>초음파 프로브</td></tr><tr><td>EX3 기화기</td><td>Patterson Veterinary</td><td>EX 3</td><td>아날로그 마취 기화기</td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>Sunbeam</td><td>E12107</td><td>가열 패드</td></tr></tbody></table>

흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류 크기를 결정 하는 쥐에서의 초음파 이미징

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

현대 고해상도 초음파 기기 마우스 aortas의 측정을 촉진 하기 위하여 충분 한 해상도. 이 악기 마우스 모델 대동맥 동맥 류의 대동맥 크기를 측정 하기 위해 널리 사용 되었습니다. 대동맥 동맥 류는 대동맥의 상승, 복 부 지역에서 가장 자주 발생 하는 영구 dilations 정의 됩니다. 초음파에 의해 대동맥 크기의 순차적 측정은 개발 및 대동맥 동맥 류 vivo에서의 진행을 평가 하기 위한 주요 접근 합니다. 많은 보고 된 연구 초음파 이미징 기본 끝점으로 대동맥 직경을 측정 하기 위해 사용, 혼동 요인, 프로브 위치 등 심장 주기, 데이터 수집, 분석 및 해석의 정확도 영향을 줄 수 있다. 이 프로토콜의 목적은 안정적이 고 재현 가능한 방식으로 대동맥 직경을 측정 하는 초음파의 사용에 대 한 실용적인 가이드를 제공 하는 것입니다. 이 프로토콜 마우스와 악기의 준비, 적절 한 초음파 이미지 및 데이터 분석의 수집을 소개합니다.

Nonaneurysmal 근 흉부 및 복 부 대동맥의 대표적인 초음파 이미지는 각각 그림 3A 와C, 그림 3나와 있습니다. 오름차순 대동맥 폐 동맥 옆에 위치 하 고 아치 지역에 3 개의 지사와 함께 구부러진된 튜브 형태: innominate 동맥, 좌 일반 경 동맥 및 왼쪽된 하 동맥 (그림 3A). 복 부 대동맥 (그림 3D) 열 등 한 베 나 정 맥에 dorsally 감지 됩니다. 그림 3A 와 그림 3D, 정상적인 직경에 비해 깊은 dilations와 흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류의 대표 이미지 그림 3B 와 그림 3에 나와 있습니다. H, 각각. 모든 초음파 이미지 끝-심장에 점령 되었다.
대표 흉부 및 복 부 대동맥 초음파 이미지 midsystole 및 끝-심장 (그림 4A, C, E, G)에 점령 되었다. 그림 4B, D, F, H대표 이미지 측정을 보여주는 표시 됩니다. 오름차순 대동맥의 중앙에 녹색 선 대동맥 공동 표준화 하 고 오름차순 대동맥 직경 (그림 4B, D) 사용 되었다. 라인 대동맥 공동 (노란색 선)에서 루멘의 두 내부 모서리와 최대한 오름차순 대동맥 직경 (레드 라인) 사이 녹색 라인에 수직으로 당겨 졌다. 흉부 및 복 부 aortas의 luminal 직경 systole와 심장 (그림 4A H) 사이 달랐다. 복 부 대동맥, 최대한 대동맥 직경 (빨간색)에 대 한 luminal 영역 (녹색) 했다 (그림 4F, H)를 측정. 모니터 심전도의 대표 이미지는 그림 4나에 표시 됩니다. 심장 주기는 정확한 측정을 위해 고려 될 필요가 있다. 끝-심장 및 systole 각각 흰색 점선 및 분홍색 선으로 표시 됩니다.
정확성과 재현성이이 프로토콜의 유효성을 검사 하려면 우리 파일럿 연구 수행. 대표 흉부 대동맥 초음파 및 전 비보 이미지는 그림 5에 표시 됩니다. 오름차순 대동맥 직경에 대 한 이러한 이미지 사이 측정 하는 직경에서 큰 차이가 없었다 (초음파: 비보 전 대 1.67 m m: 1.65 m m). 때문에 대동맥 공동 전에 볼 어려웠다 비보 전 비보 이미지, 대동맥 구멍 직경 측정 하지 했다. 이 프로토콜의 간-및 intraobserver 재현성 그림 5B, C에나와 있습니다. 잠재적인 variabilities를 확인 하려면 초음파 이미징 수행한 하지 두 관찰자에 의해 독립적으로, 즉 경험 있는 심장 및 배우는이 기술, 두 개의 다른 일에 동일한 마우스 (nonexperienced 학부 학생 n = 5). 모든 점 들에서 그림 5B, C, 주요 간 나타내는 평균 ± 1.96 SD 사이 했다-또는이 프로토콜에 대 한 intraobserver variabilities.
<img alt="설치류 유도를 위한 마취 시스템 설정; 기화기, 유도 챔버 및 젤 워머가 포함되어 있습니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59013/59013fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1 : 워크스테이션 설치. 워크스테이션에는 마 취, 마 취 청소 필터, 온수 플랫폼, 초음파 젤, 그리고 따뜻한 젤의 유도 챔버를 포함 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="마우스 대동맥 이미징을 위한 초음파 설정; 흉부 및 복부 위치 다이어그램이 포함되어 있습니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59013/59013fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2 : 근 흉부 및 복 부 대동맥 이미징 프로브 배치의 예. 프로브 (A) 오른쪽에 대 한 배치 및 (B) 는 대동맥 루트, 상승 및 아치 지역, 및 (C) 복 부 대동맥의 짧은 축 보기의 왼쪽된 parasternal 긴 축 보기. 초음파 시스템의 (D) A 대표 모니터 이미지. 검은색 화살표는 프로브에 참조 마커를 나타냅니다. 노란색 화살표 참조 표시자의 측면을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="흉부 및 복부 대동맥 보기의 초음파 다이어그램; 비동맥류 상태와 동맥류 상태를 비교합니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59013/59013fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3 : 흉부 및 복 부 대동맥의 대표적인 초음파 이미지. Nonaneurysmal (A)와 (B) aneurysmal 오름차순 대동맥, 오른쪽 parasternal 긴 축 보기에서. (C) Nonaneurysmal 오름차순 대동맥, 왼쪽된 parasternal 긴 축 보기에서. (D) Nonaneurysmal 및 (전자) aneurysmal 복 부 대동맥. Asc Ao = 오름차순 대동맥, IA innominate 동맥, LCA = = 왼쪽된 일반적인 경 동맥, LSA 왼쪽된 하 동맥, PA = = 폐 동맥, 부 비 동 대동맥 공동, IVC = = 열 등 한 베 나 정 맥, 그리고 Abd Ao = 복 부 대동맥. 노란색 삼각형 표시 대동맥 동맥 류. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="흉부 및 복부 대동맥 초음파; 수축기, 이완기 지표; 심장 주기 그래프; 혈관 분석." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59013/59013fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 그림 4 : 대동맥 이미지의 측정. (A에서 캡처한 흉부 대동맥의 이미지) midsystole 및 (C) 끝-심장. 이미지 대동맥 직경의 측정에서에서 보여주는 근 흉부 대동맥 지역 (B) 동안 midsystole 및 (D) 심장. 녹색 선 오름차순 대동맥의 중심을 나타냅니다. 노란색, 빨간색 선은 각각 대동맥 공동 오름차순 대동맥의 직경을 나타냅니다. 노란색과 붉은 색 숫자 각각 대동맥 공동 오름차순 대동맥의 실제 직경을 나타냅니다. 복 부 대동맥의 이미지 캡처한 (E)에 midsystole (G) 끝-심장. Midsystole (F) 동안 suprarenal 대동맥의 측정을 보여주는 이미지 및 (H) 끝-심장. 빨간색과 녹색 라인 직경 및 복 부 대동맥의 luminal 영역 각각 나타냅니다. 빨간색과 녹색 색상 숫자 실제 직경을 표시 되며 복 부 대동맥의 각각. (나) 모니터 심전도 (ECG) 이미지 인수 동안 기록. 녹색과 노란색 라인 심전도 및 호흡 주기를 각각 나타냅니다. 흰색 점선 표시 끝-심장, 그리고 보라색 라인 systole을 나타냅니다. P = P 파와 R = R 파. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="관찰자 간 및 관찰자 내 가변성, 대동맥 직경 분석이 있는 초음파 및 생체 외 이미지." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59013/59013fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 그림 5 : 정확도 및 초음파 영상의 재현성. (A) 대표 이미지 흉부 대동맥 초음파의 그리고 vivo 이미지 C57BL/6J 남성 쥐 (10-12 주 이전)에 전. 영-알트 플롯 표시 (B) 인터-그리고이 프로토콜의 (C) intraobserver variabilities. Asc Ao = 오름차순 대동맥, IA innominate 동맥, LCA = = 왼쪽된 일반적인 경 동맥, LSA 왼쪽된 하 동맥, 펜 실바 니 아 = = 폐 동맥, 및 부 비 동 대동맥 공동 =. 녹색 선 오름차순 대동맥의 중심을 나타냅니다. 노란색, 빨간색 선은 각각 대동맥 공동 오름차순 대동맥의 직경을 나타냅니다. 붉은 색 숫자 오름차순 대동맥 초음파와 ex vivo 이미지 측정의 실제 직경을 나타냅니다. 검은 점선 표시 의미 하 고 평균 ± 1.96 sd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="초음파 데이터 분석; 심장 심초음파; 부비동, 대동맥, 중심선 측정." src="/files/ftp_upload/59013/59013supfig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Supplemental Figure 1"> 보충 그림 1: 초음파 분석 소프트웨어의 예제 이미지. 초음파 데이터 분석 (A) 측정 모드에서 수행 되어야 합니다. 1 대동맥 초음파 이미지 (B) 씨 네 루프의 슬라이더를 사용 하 여 씨 네 루프에서 분석을 위해 선택 됩니다. 센터 라인 (C) 추적된 거리 함수를 사용 하 여 그려집니다. 대동맥 차원 (D) 선형 거리 함수에 의해 측정 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59013/59013supfig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

초음파 이미징 생쥐에서 흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류의 luminal 크기를 결정 하는 일반적인 형식 되고있다. 이 프로토콜 생쥐에서 상승 하 고 복 부 대동맥의 안정적이 고 재현 가능한 2 차원 초음파 이미지 절차를 설명 합니다.

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

고해상도 초음파 측정은 마우스의 대동맥 치수를 측정하기 위해 널리 사용되었습니다. 이 프로토콜은 이 양식의 적용에 대한 실용적인 가이드를 제공합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 흉부 및 복부 대자의 직경의 재현 가능하고 정확한 2차원 측정의 수집을 용이하게합니다.절차를 시연하는 것은 박사 후 학자인 사와다 하사시 박사와 켄터키 대학의 연구 과학자 제시카 모레헨(Jessica Morrleghen)이 될 것입니다. 시술을 시작하기 전에 면봉을 사용하여 마취 된 마우스의 이미징 영역에 딜라토리 크림을 적용하십시오. 1분 후 크림과 모발을 모두 부드럽게 제거하고 노출된 피부를 따뜻한 물로 헹굽니다.크림을 완전히 제거하기 위해 건조한 피부를 닦은 후, 플랫폼에 4 개의 구리 리드 각각에 초음파 젤을 배치합니다. 각 발 패드를 각 리드에 테이프로 테이프로 테이프로 사용하여 심전도 판독값을 얻습니다. 그리고 심박수가 분당 450에서 450 박동 사이인지 확인하십시오.미리 데운 초음파 젤을 이미징 부위에 바르고 프로브를 홀더에 부착합니다. 그런 다음 최적의 스캐닝을 위해 플랫폼을 회전시키고 초음파 젤과 접촉할 때까지 프로브를 낮춥니다. 흉부 대레이터를 이미지하려면 플랫폼을 마우스의 왼쪽쪽으로 기울여 마우스 흉골의 오른쪽 가장자리에 프로브를 놓습니다.프로브의 참조 마커를 caudally 지향합니다. 흉부 대금반의 색 도플러로 전환하여 혈류를 확인합니다. 그리고 무대와 프로브 각도를 조정하여 대어타를 명확하게 시각화합니다.이미지 깊이 및 너비에 대한 손잡이를 사용하여 초음파 이미지를 자르면 프레임 속도를 높이고 오름차순 대어의 등쪽의 초점 깊이를 변경하여 초점 깊이에 대한 손잡이를 사용하십시오. 표에 표시된 바와 같이 초음파 파라미터를 확인하고 X 및 Y 축 단계 노브를 사용하여 프로브를 부드럽게 이동시키고, 가능한 가장 큰 직경의 세로 대동맥 이미지를 캡처합니다. 복부 대동맥을 이미지화하려면 프로브를 마우스의 오른쪽을 향한 프로브에 참조 마커를 사용하여 흉골 및 xyphoid 프로세스 바로 아래에 프로브를 배치합니다.복부 대자는 열등한 베나 카바 또는 포털 정맥 옆에 위치해야합니다. 복부 대어를 컬러 도퍼로 시각화하여 맥동 유동을 확인하고 초음파 영상을 자르면 프레임 속도를 증가시한다. 복부 대동맥의 후방 벽에 초점 깊이를 변경하고 프로브를 caudally 이동하여 체강과 우수한 장막 동맥의 가지 지점을 시각화합니다.그런 다음 오른쪽 신장 동맥을 랜드마크로 사용하고 관심 지역의 사인 루프를 캡처하여 복부 대동맥에서 최대 팽창을 나타낸다. 모든 이미지가 캡처된 후 초음파 젤을 제거하고 따뜻한 물로 이미징 영역을 헹구고 마우스를 건조하게 부드럽게 닦아냅니다. 가열 패드에 케이지에 마우스를 반환하고 부드러운 천과 소독물 물티슈로 초음파 기계, 프로브 및 플랫폼을 청소하십시오.그런 다음 스캔 중에 수집 된 모든 파일을 다운로드하고 초음파 기계를 끕니다. 비동맥류 근위 흉부 대동맥의 대표적인 초음파 이미지에서, 상승 대동맥은 폐 동맥 옆에 위치하여 관찰될 수 있으며, 아치 부위에 3개의 가지가 있는 곡선관을 형성한다. 지명 동맥, 왼쪽 일반적인 경동맥, 왼쪽 아비아동맥.비동맥류 복부 대동맥의 대표적인 초음파 이미지에서, 복부 대동맥은 열등한 베나 카바에 등쪽으로 검출된다. 여기서, 흉부 및 복부 대동맥류의 대표적인 이미지가 표시됩니다. 대동맥 부비동과 오름차순 대동맥 직경의 측정을 위해 그린 라인은 대동맥 부비동과 오름차순 대동맥 직경을 각각 표준화하는 데 사용됩니다.그런 다음 대동맥 부비동에서 루멘의 두 내부 가장자리와 최대 상승 대동맥 직경 사이의 녹색 선에 수직으로 선을 그릴 수 있습니다. 복부 대동맥의 측정을 위해, 배 루멘의 내부 가장자리에서 가장 큰 발광 직경을 가로 질러 선을 그리고 발광 영역에 대한 대동맥 루멘의 내부 가장자리를 추적합니다. 흉부와 복부 대자의 발광 직경은 시스톨과 디아스톨 사이에 다릅니다.심장 주기는 정확한 측정을 위해 고려되어야 합니다. 이 대표적인 파일럿 연구에서는 초음파와 전 생체 이미지 사이의 상승 대어타의 측정 된 직경에 큰 차이가 없었습니다. 이 초음파 기술은 두 개의 독립적 인 관찰자 및 측정 세션에 의해 만들어진 대동맥 측정 사이의 이 실험에서 관찰된 상호 또는 내 관찰자 가변성이 관찰되지 않기 때문에 재현 가능하고 정확한 결과를 획득할 수 있게 합니다.프로브 및 스테이지 설정을 조정하는 것은 신뢰할 수 있고 재현 가능한 대동맥 이미징을 위한 중요한 단계입니다. 데이터 분석 단계는 정확한 대동맥 측정에도 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

삼투 펌프의 피하 주입 화합물의 연장하고 일관된 전달을위한 편리한 방법을 제공합니다. 이러한 접근은 마우스에서 복부 및 흉부 대동맥 동맥류 모두 광범위하게 연구하기 위해 사용되었다.

삼투압을 이용하여 피하 안지오텐신 II 주입 쥐에서 유도 대동맥 동맥류 펌프

이 프로토콜의 목적은 비 침습적 및 M B- 모드 초음파 심장 검진 및 컬러 / 맥파 도플러 촬상을 이용하여 횡 대동맥 수축에 의해 생성 된 심장 질환의 마우스 모델에서 심장 구조적 및 기능적 변화를 평가하는 것이다.

심 초음파 이미징에 의해 가로 대동맥 수축의 마우스 모델에서 심장 형태 학적 평가 및 기능 변경

다음 프로토콜은 마우스의 왼쪽 심방 볼륨 (LAV), 대동맥 (아오) 직경 및 폐 동맥 (PA) 직경을 얻기 위해 사용 심 초음파 이미지의 수집 및 분석을위한 방법을 설명합니다. 이 기술은 심폐 기능 평가를 할 수있는 비 침습적 비 단자 절차이다.

왼쪽 아트리움, 대동맥과 폐동맥의 쥐 심 초음파

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

이 원고는 복부 대동맥류의 마우스 모델에 발광 직경, 펄스 전파 속도, dtensibility 및 방사형 변형을 측정하기 위해 고주파 초음파 이미징을 사용하기위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

복부 대동맥류 마우스 모델에서 맥박 전파 속도, 감도 및 변형률 측정

본 프로토콜은 마우스에서 적외선 복부 대동맥의 출현에 엘라스타제의 직접 적용을 통해 엘라스타아제 유도 AAA 모델에 대한 표준화된 수술 방법을 기술한다.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 반복적인 약물 치료를 위해 경정맥 카테터를 갖는 혈관 접근 포트의 아포리포단백질 E(ApoE) 결핍 마우스에서 안지오텐신 II 방출에 의해 복부 대동맥류를 유도하기 위한 삼투압 펌프의 연속 이식을 기술한다. 3D 초음파에 의한 동맥류 발달 모니터링은 등쪽 임플란트에도 불구하고 효과적으로 수행됩니다.

안지오텐신 II의 마우스 모델에서 중앙 정맥 카테터에 의한 약물 치료 유도 복부 대동맥류 및 3D 초음파에 의한 모니터링

이 원고는 염화칼슘과 엘라스타제를 사용하여 생쥐 복부 대동맥류 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하고 이전 모델링 방법의 장점을 결합합니다. 이 모델은 복부 대동맥류의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 엘라스타제를 대동맥에 직접 적용하고 음용수를 통해 ß-아미노프로피오니트릴을 투여하는 조합을 통해 마우스의 진행성 복부 대동맥류를 모델링하는 체계적인 외과적 접근 방식을 설명합니다.

국소 엘라스타제와 구강 ß-아미노프로피오니트릴의 조합에 의한 마우스의 고급 복부 대동맥류 모델링

이 프로토콜은 면역 감작 성분을 포함한 AAA 모델로서, 엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제 적용을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 복부 대동맥류(AAA)를 반복 가능하고 신뢰할 수 있게 유도하는 방법을 제공합니다.

엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제를 이용한 쥐 복부 대동맥류 모델의 신뢰성 높은 생성

학습하세요 쥐에서 흉부 및 복부 대동맥 동맥류 크기를 결정하는 초음파 이미징 방법을. 비침습적 고해상도 측정으로 재현 가능한 결과를 얻어 심혈관 연구에 활용하세요.

흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류 크기를 결정 하는 쥐에서의 초음파 이미징

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