Name: 뎅기열 바이러스 유발 급성 바이러스 뇌염 같은 질병의 뮤린 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: 학습하세요 뎅기 바이러스 유발 급성 바이러스 뇌염 연구를 위한 면역유능 ICR 생쥐 모델 구축 방법을. 저바이러스 농도 감염으로 중추신경계 병원성 메커니즘을 탐구하고 항바이러스 치료제 개발에 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 과학기술부(MOST107-2321-B-038-001)의 보조금과 대만 타이베이의 교내 기금 106TMU-CIT-01-2의 보조금으로 지원되었습니다.

동물 연구의 실험 프로토콜은 대만 과학기술부에 의해 수립 된 지침에 따라 국방 의료 센터의 기관 동물 관리 및 사용자위원회 (IACUC 번호 : 16-261)에 의해 승인되었습니다.
1. 감염 절차
<ol><li>적응되지 않은 DENV2 (변형 PL046) 주식9 (원래 대만 질병 통제 센터에서 얻은, 2.5 x 107 에서 1 x 109 PFU / mL).</li>
	<li>로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트(RPMI) 1640 배지를 사용하여 바이러스 스톡을 1 x 106 PFU로 총 부피 40 μL로 희석합니다.</li>
	<li>희석 된 바이러스의 10 μL (2.5 x 105 PFU)와 30G 바늘이 장착 된 0.3 mL 주사기 하나를 채우고 희석 된 바이러스의 30 μL (7.5 x 105 PFU)로 30G 바늘이 장착 된 다른 0.3 mL 주사기를 채웁니다.</li>
	<li>
7일된 ICR 을 잡고 다음 단계를 수행합니다.
	<ol>
<li>내뇌 주사의 경우, 집게 손가락과 엄지 손가락 사이의 주경을 눌러 경향이 있는 위치에 마우스를 잡고, 회골과 람도이드 봉합사의 교차점에 있는 람다 부위에 희석된 바이러스 10 μL을 무혐의로 주입합니다. 16.</li>
		<li>내뇌 주사 후, 검지 손가락과 엄지손가락을 사용하여 마우스를 척추 위치에 잡고 복강 내 30 μL의 희석 바이러스를 무린 abdomenl에 부드럽게 주입합니다. 참고 : 식인 풍습을 피하기 위해 75 %의 알코올은 어머니의 후각 감각을 일시적으로 상실하는 데 사용됩니다. 또한, 그들의 어머니의 발판 및 소변으로 쓰레기를 덮는 것이 건의됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>새장에 다시 빨기 마우스를 놓고 5 분 동안 기다린 후 걷기와 모유 빨기를 포함하여 쥐의 열렬함으로 안전 포스트 자극을 확인합니다. 참고: 대부분의 경우, 마우스는 정상적인 활동 게시물을 보여자극하고 기술적 인 도전 다음 유해한 효과가없는 것 같다. 이 실험 동안, 동물은 대만 국방 의료 센터의 기관 동물 관리 및 사용자 위원회에 의해 유지되었다.</li>
	<li>체중(마이크로그램 밸런스를 사용하여), 급성 바이러스성 뇌염 유사 질환(섹션 2에 설명된 대로 질병 점수 매기기), 생존율9,10,11의 관점에서 마우스의 일일 진행 상황을 평가합니다. ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. 질병 점수 매기기
<ol><li>급성 바이러스 성 뇌염과 같은 질병의 등급을 모니터링합니다. 건강한 마우스에 0의 점수를 할당; 1 경미한 질병 증상을 가진 마우스, 체중 감소를 포함 하 여, 감소 이동성, 그리고 hunchback 신체 방향; 2는 변연계 발작을 나타내는 마우스; 3 마우스에 난이도 및 전방 사지 또는 후방 사지 약점을 가진 이동을 포함하는 변연계 약점을 나타낸다; 마비에 대 한 4; 5 죽음. 참고: 점수가 3에 도달하면 질병 증상은 빠르게 진화하는 것으로 간주됩니다.</li>
	<li>2.1단계에 따라, 각 군의 일일 시험 점수의 평균 ±SD를 이용하여 곡선 기반 도면으로서 매일 질병의 스코어링을 플로팅한다.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

DENV 감염은 중증 뎅기열 환자3,17의CNS에서 검출되었으며, 뎅기열 병인 동안 급성 바이러스 성 뇌염의 발현 가능성을 시사한다. 여기에서, 우리는 가혹한 뎅기열에 있는 CNS 역기능의 관련을 공부를 위한 DENV 감염의 생체 내 murine 모형을 보고합니다, 특히 DENV 유도한 심각한 바이러스성 뇌염 같이 질병에 초점으로. 이전 모델과 비교하여, 특히 단일 경로 감염(정맥 내만, 복강 내만, 또는 내외만),DENV의 매우 높은 역가(1 x 108 PFU)는 면역적격 마우스에서 활용된다. 그러나, 면역손상 마우스에서, DENV의 비교적 낮지만 변이체 역가(1 x 105 1 x 108 PFU)는18,19,2...

FLAviviridae 가족의 절지 동물 매개 바이러스 인 DENV는 3 개의 바이러스 구조 단백질 (캡시드, 전막 및 봉투)과 7 개의 바이러스 성 비 구조적 단백질 (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B)을 암호화하는 양성 감각 RNA 게놈을 포함합니다. 및 NS5)를 참조하십시오. 매년 약 3억 9천만 명을 감염시키는 DENV(DENV1-4)의 4가지 혈청형은 정부가 모기 벡터 및질병 대조군 1을 향한 상당한 노력을 기울였음에도 불구하고 전 세계적인 부담을 야기한다. 현재, 보호 백신 및 치료 항 바이러스 약물은 개발중이며 추가적인 장기 검증이 필요합니다 2. 임상 사례에서, CNS 감염을 가진 뎅기열 환자는 드물더라도, 뎅기열 질병 발달의 다양성을 이해하기 위하여 더 탐구될 필요가있다3. 추가 조사 및 유효성 검사가 필요합니다. 특히, 세계보건기구(WHO)는 중증 뎅기열 3,4의분류에 인지 장애, 경련, 뇌병증 및 뇌염과 같은 CNS 장애의 참여를 포함하였다. DENV 감염의 동물 모델을 구축하는 것은 DENV 감염의 신경 병증을 탐구하는 데 필수적입니다.
DENV에 의한 CNS 감염을 생성하기 위해, 여러 연구는 (1) 적응되지 않은 DENV3 5의 4 x 103 플라크 형성 단위 (PFU)를 받은 C57BL/6 마우스의 내역 성 접종을 포함하여 DENV 감염의 다른 경로를 실행했습니다. 6,(2) 생체외 신경적응 DENV47,(3) 생체 내 신경 적응 DENV1 8의 1 x 105 PFU를 받은 스위스 마우스의 자궁 내 내 접종을 받은 BALB/c마우스의 복강 내 접종 적응되지 않은 DENV29의1 x 106 PFU를 받은 ICR 빨기 마우스의 인내뇌및 복강 내 공동 접종. 이러한 연구의 결과에 따르면5,6,7,8,9,DENV 감염은 뇌에서 바이러스 복제를 초래하여 급성 바이러스성으로 이어진다. 뇌염과 같은 증후군, 사지 마비와 자세 불안정을 동반 행동 변화, CNS 신경 독성 및 염증, 혈액 - 뇌 장벽을 통해 일반 및 국소 혈장 누출 (BBB), 및 치사. 이러한 연구의 모든결과 5,6,7,8, 9는 DENV가 CNS를 감염시키고 급성 바이러스성 뇌염과 같은 유도를 하는 능력을 보여주었다. 감염 다음 질병.
우리의 현재 사실인정에 근거하여 9,10,11,12,13,14,15,우리는 생체 내로 DENV 감염의 뮤린 모형을 만들었습니다 바이러스 복제에 대한 표적 제제 / 요인의 치료 효능뿐만 아니라 신경 독성을 검사하는 플랫폼. 여기에서, 우리는 CNS 감염을 공부하고 DENV에 기인한 다른 경벌을 가진 신경병의 발달을 감시하기 위하여 면역적격 outbred ICR 마우스를 만들기 위하여 이용된 프로토콜을 보고합니다. 결과는 DENV 감염마우스에서 뇌염과 같은 질병의 유의한 진행을 시간 의존적인 방식으로 보여준다.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 매체 (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>희석 바이러스</td></tr><tr><td>0.3 mL 인슐린 주사기&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>뇌내 및 복강내 주사</td></tr><tr><td>Microbalance</td><td>METTLER TOLEDO의 LabX</td><td>AL104</td><td>Weight mouse</td></tr><tr><td>Non-adapted DENV2 (strain PL046)</td><td>대만 질병통제센터</td><td>-</td><td>감염 마우스</td></tr><tr><td>ICR(Institute of Cancer Research) 젖먹이 마우스</td><td>BioLASCO Taiwan Co., Ltd</td><td>-</td><td>당사의 쥐 모델</td></tr></tbody></table>

뎅기열 바이러스 유발 급성 바이러스 뇌염 같은 질병의 뮤린 모델

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

뎅기열 바이러스 (DENV), 모기에 의해 전달 되는 절지 동물 매개 바이러스, 뎅기열 출혈열로 알려진 심각한 질병을 일으킬 수 있습니다., 플라즈마 누출으로 인해 치명적인 합병증을 특징으로 하는, 복수, 흉막 삼출액, 호흡 곤란, 심한 출혈, 장기 장애. DENV 감염의 몇 가지 경우는 신경 학적 증상을 제시; 그러나, 연구는 DENV 유도된 신경 병증을 더 탐구하지 않았습니다. 본 연구에서, 우리는 DENV를 가진 중추 신경계 (CNS) 감염의 유도를 조사하기 위한 면역 적격 outbred ICR (암 연구 연구소) 마우스를 사용하는 프로토콜을 제시하고, 급성 바이러스성 뇌염의 진행에 선행됩니다 질병.

가혹한 뎅기열 관련 신경학상 합병증은 뎅기열 병인을 위한 환자에서 보고되었습니다4. 이러한 경우는 클리닉에서 드물지만 DENV 감염의 면역 적격 뮤린 모델을 만드는 것은 면역 요법 생성을 연구하는 데 뿐만 아니라 CNS 감염, 신경 염증, 신경 독성 및 급성 바이러스를 탐구하는 데에도 사용될 수 있습니다. 뇌염과 같은 질병. 본 연구에서, 우리의 현재모델 9에 따르면,10,11,12,13,14,15,7 일 된 ICR 빨기 마우스를 접종하였다.</s...

여기에서, 우리는 신경병의 발달을 표시하기 위하여 중추 신경계 감염의 면역적격 ICR (암 연구 연구소) 뮤린 모형을 만들기위한 프로토콜을 제시합니다. 동일한 질병 점수에 의한 급성 바이러스 성 뇌질환 모니터링은 생체 내에서 뎅기열 바이러스 유발 신경병증을 나타내는 데 수행될 수 있었다.

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

뇌에서 뎅기열 바이러스 감염을 볼 질병 모델의이 프로토콜은 신경 병인과 관련된 바이러스 및 호스트 벡터를 선별하기위한 생체 내 플랫폼이된다. 이전 모델과는 달리, 우리의 모델은 낮은 바이러스 성 titer감염의 도구를 사용, 뇌와 같은 질병 출산 유도에 대한 마우스를 빨아 암 연구의 면역 무능 한 연구소를 감염. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 후보인 팅징 셴(Ting-Jing Shen)이 될 것입니다.감염 절차를 시작하기 전에, 비 적응 뎅기열 바이러스 2 주식을 희석, RPMI 1640 중간 농도의 40 마이크로 리터 당 다섯 번째 플라크 형성 단위에 1배 10으로 희석. 다음으로, 희석 바이러스 10 마이크로리터가 장착된 30 게이지 바늘을 장착한 0.3 밀리리터 주사기를 로드합니다. 그리고 동물 당 30 마이크로 리터의 바이러스가있는 30 게이지 바늘이 장착 된 0.3 밀리리터 주사기 1 개.바이러스의 대뇌 전달을 위해 엄지와 검지 손가락 사이의 오라클을 눌러 7일 된 암 연구소 마우스를 조심스럽게 억제하고, 적목과 람도이드 봉합사의 교차점에 있는 람다 지역에 희석된 바이러스의 10마이크로리터 부피를 주입한다. 간 주사 후 엄지 손가락과 검지 손가락을 사용하여 마우스를 supine 위치에 넣고 부드럽게 회음부로 희석 된 바이러스의 30 마이크로 리터 부피를 뮤린 복부에 주입하십시오. 질병 진행의 점수를 위해, 급성 바이러스 성 뇌염과 같은 질병의 등급에 따라 매일 각 접종 마우스에 0 - 5의 점수를 할당하고, 각 그룹에서 일일 시험 점수의 평균 플러스 및 마이너스 를 사용하여 곡선 기반 그림으로 매일 점수를 플롯.모의, 배지만 접종된 마우스, 뎅기열 바이러스 접종 동물에서 측정된 체중 변화와 비교하여 시험 기간 동안 매 시점에서 체중이 감소하는 것을 나타낸다. 또한, 뎅기열 바이러스 감염된 동물은 모의 접종 된 동물에 의해 표시되는 증상에 비해 직감 허리 자세, 변연 발작, 변연 약점, 마비 및 죽음에 상당한 증가를 보여줍니다. 실제로, 뎅기열 감염마우스는 모의 접종동물에서 관찰되지 않는 생존율의 시간 의존적 감소를 나타내며, 중추 신경계 내에서 뎅기열 바이러스의 전염성 모델의 확립을 확인하여 마우스에서 급성 바이러스 뇌염과 같은 질병의 진행을 입증한다.잘못된 부위의 펑크는 머리 외부의 바이러스 용액의 점수 및 오버플로에 의해 바늘 막힘으로 인해 주사가 실패하고 감염이 실패할 수 있다. 절차에 따라 뇌 샘플을 혈액학적 손상, 면역 세포 침투 및 헤마톡시린 및 에신 염색 흐름 세포측정및 플라크 형성 분석에 의한 바이러스 복제 분석을 위해 수확될 수 있다. 우리의 면역 무능한 murine 모형은 뎅기열 바이러스 감염의 병원성 기계장치를 탐구하기 위한 발판을 제공합니다, 뎅기열 바이러스 백신의 발달을 위한, 또는 반대로 뎅기열 바이러스 약.뎅기열 바이러스는 생물 안전 수준 2 병원체이며, 따라서, 이 바이러스를 가진 모든 실험은 자격을 갖춘 동물 생물 안전 수준 2 실험실에서 완료되어야 합니다.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

DA 쥐에서 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 encephalomyelitis :이 비디오는 여러 경화증의 동물 모델의 유도 및 임상 채점을 보여줍니다. 전체 쥐의 척수하고 완전한 프로 인드의 도움이되는가 포함된 유제와 immunizing 쥐가 유도된 질병은, 인간의 질병을 닮은 임상 징후를 보여줍니다.

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

소설로 루시 페라 제 및 생체 이미징 시스템 (IVIS)에서를 활용하면 임상 개발가 발생하기 전에 질병 끝점을 식별 할 수 의미합니다. IVIS은 우리가 미래 연구를위한보다 정확한 질병 모델을 제공 실시간으로 여러 일 동안 encephalitic 바이러스의 침입을 시각화 할 수 있습니다. 또한 우리는 신속하게 현재 활용 동물 모델보다 antivirals과 백신의 잠재적 인 보호 기능을 식별 할 수 있습니다. 여러 시간 지점을 통해 개인 동물을 활용하는 기능은 감소 동물의 요구 사항, 비용, 질병 연구의 더 인간적 더 과학적인 수단을 확보 활용 동물 전반적인 질병을 보장합니다.

신경 침윤성 Encephalitic 바이러스의 생체 이미징 시스템 (IVIS) 검색에서

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오는 CNS에 감염된 마우스 모델의 생성을 보여줍니다. 젖먹이 새끼는 두개골 내 및 복강 내 바이러스를 주입합니다. 바이러스가 퍼져 중추신경계를 감염시켜 신경 세포 사멸과 염증을 일으킵니다. 새끼는 질병이 진행됨에 따라 감염 증상을 평가합니다.

중추신경계 감염이 있는 쥐 모델의 생성

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

이 비디오는 Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus(TMEV)에 감염된 쥐에서 취급 유발 발작의 유도를 보여줍니다. 과흥분성 뉴런을 가진 감염된 쥐는 외부의 물리적 자극에 노출됩니다. 이러한 노출은 스트레스를 유발하여 뉴런의 비정상적인 전기 활동을 유발하여 발작을 일으킵니다.

마우스 모델에서 취급 유도 발작

인플루엔자 A 바이러스 (IAVs)는 중요 한 인간의 호흡기 병원 균. IAVs pathogenicity 이해 하 고 새로운 백신 접근의 전 임상 시험 수행 인간의 생리를 흉내 낸 동물 모델은 필요. 여기, 우리가 IAV pathogenesis, 체액 성 반응과 감염 마우스 모델을 사용 하 여 백신 효능을 평가 하는 기법을 설명 합니다.

감염 마우스 모델에서 인플루엔자 A 바이러스 연구

여기는 마우스에서 바이러스 유도 microcephaly Zika의 모델을 설정 하는 방법에 설명 합니다. 이 프로토콜에는 Zika 바이러스의 미 발달, 신생아, 그리고 성인 무대 intracerebral 접종에 대 한 메서드가 포함 됩니다.

Zika 바이러스 유도 신경 장애 Intracerebral 주입 전략을 사용 하 여 마우스 모델을 수립: 배아, 신생아, 및 성인

여기에 제시 된 프로토콜은 성인 남성 다크 아구티 쥐에서 두 피질 반구의 광범위한 회색 물질 탈모의 재현을 허용합니다. 상기 방법은 카테터의 인트레이스레브레인 이식, 골엘린 올리고드로시테 당단백질에 대한 임상 접종, 이식된 카테터를 통한 프로염증성 사이토카인 혼합물의 인트레이스레브렐 주입을 포함한다.

프로 염증 성 사이토카인의 인트레이스렐 주입에 의해 유도된 광범위한 대뇌 피질 탈량의 쥐 모델

프로토콜의 목표는 감염 다음 마우스에 있는 다중 기관에서 Zika 바이러스를 격리하고 정량화하여 바이러스성 질병을 조사하기 위하여 이용된 기술을 설명하는 것입니다.

마우스의 여러 장기에서 Zika 바이러스의 격리 및 정량화

C57BL/6 마우스에서 Theiler's murine encephalomyelitis virus(TMEV)에 의한 뇌내 감염은 인간 환자에서 바이러스성 뇌염 및 후속 간질의 초기 및 만성 임상 증상의 많은 부분을 복제합니다. 이 논문은 TMEV 모델의 바이러스 감염, 증상 및 조직병리학에 대해 설명합니다.

Theiler's 쥐 뇌척수염 바이러스를 이용한 감염성 병인의 간질 모델

학습하세요 뎅기 바이러스 유발 급성 바이러스 뇌염 연구를 위한 면역유능 ICR 생쥐 모델 구축 방법을. 저바이러스 농도 감염으로 중추신경계 병원성 메커니즘을 탐구하고 항바이러스 치료제 개발에 활용할 수 있습니다.

뎅기열 바이러스 유발 급성 바이러스 뇌염 같은 질병의 뮤린 모델

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