Name: 마우스에서 뇌간 에서 데이터 수집 및 분석 음성 응답 청력 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: 학습하세요 마우스에서 청각뇌간반응(ABR) 측정법을 통해 청각 처리 및 신경학적 상태를 분석하는 방법을. 이 기술은 유전적 및 약리학적 모델에서 청각 결손을 연구하는 데 필수적입니다.

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저자는 크리스티나 콜브 박사 (신경 퇴행성 질환에 대한 독일 센터 [DZNE]) 박사 로버트 스타크 (DZNE) 동물 사육 및 동물 건강 관리에 도움을 감사드립니다. 이 작품은 재정적으로 마약 및 의료 장치에 대한 연방 연구소에 의해 지원되었다 (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, 본, 독일).

저자는 공개 할 것이 없다.

이 프로토콜은 마우스에서 청각 유발 뇌간 반응을 기록하는 방법에 대한 상세하고 통합적인 설명을 제공합니다. 그것은 동물 전처리에 특정 초점을 두고, 마 취, 그리고 잠재적인 방법론 혼란 요인. 후자는 포함, 다른 사람의 사이에서, 성별, 마우스 라인, 나이, 및 주거 조건. 이러한 모든 요인은 감각신경성 난청및 청각 정보 처리의 근본적인 측면에 영향을 미칠 수 있다는 점에 유의해야 합니다. 따라서, 청각 프로파일링 연구의 적절한 계층화는 필수적입니다.
AEP 레코딩의 계측은 지난 50-60년 동안 엄청나게 발전해 왔으며, 요즘에는 이 기술의 적용을 향상시키고 단순화한 상용 ABR 레코딩 시스템을 사용할 수 있지만 새로운 함정이 도입되었습니다. 이러한 측면 중 일부는 여기에 설명되어 있습니다. 첫째, 사용자는 ABR 시스템, 즉 데스크탑 또는 랩톱 컴퓨터, 프리앰프, 앰프, 전극 입력 상자 및 잠재적 트랜스듀서(예: 라우드스피커, 인서트 이어폰, 수프라-청각)로 구성된 계측에 익숙...

뇌 생리학의 핵심 측면은 학습, 기억, 정서적 반응 또는 운동 반응과 같은 다양한 본질 또는 외적 출력을 초래하는 환경 정보를 처리하는 기능입니다. 다양한 실험 및 진단 접근법은 자극 관련 뉴런 회로 내에서 개별 신경 세포 유형 또는 클러스터/뉴런의 반응성의 전기생리학적 반응을 특성화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 전기 생리학적 기술은 마이크로, 메소 및 대용량 1에 대한상이한 시공간적 치수를 다룹니다. 마이크로 스케일 레벨은 예를 들어 배양 또는 급성 해리 뉴런 1을 사용하는 다른 패치 클램프모드에서 전압 및 전류 클램프 접근법을 포함합니다. 이러한 시험관내 기술은 개별적인 현재 엔티티 및 그들의약리학적 변조2,3의특성화를 허용한다. 그러나 중요한 단점은 마이크로 및 매크로 회로 정보 통합 및 처리와 관련하여 체계적인 정보가 부족하다는 것입니다. 이 손상은 배양 된 뉴런뿐만 아니라 급성 뇌 슬라이스에서도 동시에 세포 외 다전극 기록을 허용하는 다전극 배열과 같은 메조 스케일의 생체 외 기술에 의해 부분적으로 극복됩니다4. 5.마이크로 회로는 특정 범위 (예를 들어, 해마에서)로 뇌 슬라이스에 보존 될 수 있지만, 장거리 상호 연결은 전형적으로손실6. 궁극적으로, 뉴런 회로내의 기능적 상호연결을 연구하기 위해, 거시적 척도에 대한 생체내 전기생리학적 기술이 선택된7의방법이다. 이러한 접근법은 무엇보다도, 인간 및 동물 모델 둘 다에서 수행되는 표면(경막외) 및 깊은(intracerebral) EEG 기록을 포함한다. EEG 신호는 주로 흥분제 입력8의 일반적인 우세에도 불구하고 주체에서 억제 또는 흥분될 수 있는 상이한 피질 층에서 피라미드 형 뉴런에동기화 된 시냅스 입력을 기반으로합니다. 동기화시, 세포외 전기장에서의 흥분성 세포내전위 전위-기반 이동은 표면 전극을 사용하여 두피에 기록될 수 있는 충분한 강도의 신호를 형성하기 위해 합산된다. 특히, 개별 전극에서 검출 가능한 두피 기록은 증폭기, 필터링 프로세스(로우 패스 필터, 하이 패스 필터, 노치 필터 및 특정 도체 특성을 가진 전극.
대부분의 실험 동물 종(즉, 마우스 및 래트)에서, 인간 기반 두피 EEG 접근법은 근본적인 피질에 의해 생성된 신호가 제한된 수의 동기화된피라미드 뉴런(9)으로 인해 너무 약하기 때문에 기술적으로 적용되지않는다. 10,11. 설치류에서, 표면 (두피) 전극 또는 피하 전극은 따라서 심전도에 의해 심각하게 오염되고 고품질 의 EEG 기록을불가능하게 하는 주로 전기 신경학상 유물 9,11, 12. 무마취 자유롭게 움직이는 마우스와 쥐를 사용하는 경우, 따라서 직접 감지 팁의 직접 물리적 연결을 보장하기 위해 경막 외 전극을 통해 피질또는 깊은, 내추적 구조에서 중 하나를 기록하는 것이 필수적이다 신호 생성 신경 세포 클러스터에 납 /이식 된 전극의. 이러한 EEG 접근법은 구속된 테더링 시스템 설정에서 또는 비억제 이식형 EEG 무선 원격측정 접근법 9,10,11을사용하여 수행될 수 있다. 두 기술은 자신의 장점과 단점을 가지고 있으며 발작 감수성 / 발작 활동, circadian 리듬, 수면 아키텍처, 진동 활동 및 동기화의 질적 및 정량적 특성화에 귀중한 접근 이 될 수 있습니다. 시간 주파수 분석, 소스 분석등을 포함하여 9,10,13,14,15,16,17.
테더링 된 시스템 및 무선 원격 측정은 각각 억제 / 반억제 또는 비 억제 조건하에서 EEG 기록을 허용하는 반면, 관련 실험 조건은 ABR 기록에 대한 요구 사항과 일치하지 않습니다. 라우드 스피커와 실험 동물의 정의된 위치와 제어된 음압 레벨(SPL)으로 시간이 지남에 따라 반복적으로 제시되는 정의된 음향 자극에 대한 후자의 요구. 이것은 제지 조건 하에서 머리 고정또는 마취18,19에의해 달성될 수 있습니다. 실험 적 스트레스를 줄이기 위해, 동물은 일반적으로 ABR 실험 동안 마취되지만 마취가 ABR19,20을방해 할 수 있다고 고려해야합니다.
일반적인 특성으로서, EEG는 50-100 μV. 배경 주파수 및 진폭의 전압 범위에서 상이한 주파수로 구축되어 실험 동물의 생리적 상태에 크게 의존한다. 깨어 있는 상태에서, 베타(β) 및 감마(γ) 주파수가 더 낮은 진폭을 가진 우세. 동물이 졸리거나 잠들 때, 알파(α), 세타(θ), 및 델타(δ) 주파수가 발생하여, 증가된 EEG진폭(21)을 나타낸다. 일단 감각 채널 (예를 들어, 음향 통로)가 자극되면, 정보 전파는 말초 및 중추 신경계를 통해 신경 활동을 통해 중재됩니다. 이러한 감각(예: 음향) 자극은 소위 EP 또는 유발 된 응답을 유발합니다. 특히, 이벤트 관련 전위(ERP)는 EEG(즉, 몇 마이크로볼트만)보다 진폭이 훨씬 낮다. 따라서, 단일 자극에 기초한 임의의 개별 ERP는 더 높은 진폭 의 EEG 배경에 대하여 손실될 것이다. 따라서 ERP를 기록하려면 동일한 자극(예: ABR 기록의 클릭)과 후속 평균화의 반복적인 적용이 필요하며, 이는 임의의 EEG 배경 활동 및 아티팩트를 제거한다. ABR 기록이 마취 된 동물에서 수행되는 경우, 여기에서 피하 전극을 사용하기 쉽습니다.
주로 AEP에는 일반적으로 A벌또는 BERA와 관련된 짧은 대기 시간 EP가 포함되며, 또한 중간 지연 EP(중간 지연 응답 [MLR]) 및 긴 대기 시간 EPs22와같은 이후 발병 전위가 포함됩니다. 중요한 것은, 청각 정보의 정보 처리에 있는 교란은 수시로 신경 정신병병 (demyelinating 질병, 정신 분열증 등)의 중앙 특징 및 AEP 변경과 관련되었던23,24 ,25. 행동 조사는 기능적 장애를 드러낼 수 있는 반면, AEP 연구는 특정 신경 해부학 적 구조와 관련된 청각 기능 장애의 정확한 시공간 분석을 허용합니다26.
ABR은 보통 에서 높은 강렬한 클릭 응용 프로그램에서 일반적으로 감지되며, 최대 7개의 ABR 피크(W I-WVII)가발생할 수 있습니다. 가장 중요한 파도(W I-W V)는 다음과 같은 신경 해부학 구조와 관련이 있습니다 : WI은 청각 신경 (말단 부분, 내이 내); W II를 달팽이관 핵(청각 신경의 근위 부분, 뇌간 종단); W III상수체(SOC)에 우수한 올리바리 복합체; W IV를 측면 렘니스커스(LL);; W V는 반대측에서 열등한 콜리큘러스(IC) 내의 측면 렘니스커스(LL)의 종결(27)(보충도 1)이다. WII-W V는 그(것)들에 기여하는 오름차순 청각 통로의 하나 이상의 해부학 적 구조를 가질 가능성이 있다는 것을 유의해야 한다. 특히, 피크와 청각 지역의 기본 구조의 정확한 상관 관계는 여전히 완전히 명확히되지 않습니다.
청각학에서 ABE는 스크리닝 및 진단 도구로 사용할 수 있으며 외과 모니터링28,29. 이형성증, 히pacusis 및 아나쿠스시스(예: 노화 관련 난청, 소음 유발 난청, 대사 및 선천성 난청, 기형 또는 기형으로 인한 비대칭 청력 상실 및 청력 결핍) 식별에 가장 중요합니다. 기형, 부상 및 신 생물)28. AAB는 또한 활동적이고 지적 장애가 있는 어린이 또는 기존의 청력 측정에 반응할 수 없는 다른 어린이(예: ADHD, MS, 자폐증 등)에 대한 선별 검사와 관련이 있습니다29 , 30)인공와우의 개발 및 외과적 피팅에28. 마지막으로, A브라스는 항간질제31,32와같은 신경정신병치료제의 잠재적이독성 부작용에 대한 귀중한 통찰력을 제공할 수 있다.
약리학 또는 형질전환 마우스 모델에서 인간으로 의한 신경 생리학적 지식의 번역의 가치는 쥐와 쥐33의 청각 패러다임에서 ERPs의 수준에서, 특히 수많은 설정에서 입증되었습니다. 34,35. 변경된 초기 AEP에 대한 새로운 통찰력 및 마우스와 쥐의 청각 정보 처리의 관련 변화에 대한 새로운 통찰력은 따라서 인간에게 번역될 수 있으며 청각, 신경학상 및 신경 정신 질환이 미래에. 여기에서 우리는 ABE가 기본적인 과학, 독성 학 및 약리학적 인 목적을 위해 마우스에서 성공적으로 기록되고 분석 될 수있는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>RZ6 용 AEP / OAE 소프트웨어 (BioSigRZ 소프트웨어)</td><td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td><td>BioSigRZ</td><td></td></tr><tr><td>쌍안 외과 확대 현미경</td><td>Zeiss Stemi 2000</td><td>0000001003877, 435540000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000</td><td></td></tr><tr><td>케이지 (Macrolon)</td><td>Techniplast</td><td>1264C, 1290D</td><td></td></tr><tr><td>Carprox vet, 50mg / ml</td><td>Virbac Tierarzneimittel GmbH</td><td>PZN 11149509</td><td></td></tr><tr><td>냉광원</td><td>Schott KL2500 LCD</td><td>9.705 202</td><td></td></tr><tr><td>코튼 팁 애플리케이터(멸균)</td><td>Carl Roth</td><td>EH12.1</td><td></td></tr><tr><td>맞춤형 메쉬 금속 패러데이 케이지(스테인리스 스틸, 2mm 두께, 1cm 메쉬 크기)</td><td>맞춤형</td><td></td><td></td></tr><tr><td>맞춤형 5% 덱스판테놀(Bepanthen 눈과 코 크림)</td><td>바이엘 Vital GmbH</td><td>PZN: 01578681</td><td></td></tr><tr><td>일회용 피하 스테인리스강 바늘 전극, 27GA, 12mm</td><td>Rochester Electro-Medical, Inc.</td><td>S03366-18</td><td></td></tr><tr><td>수술용 드레이프 시트(멸균)</td><td>Hartmann</td><td>PZN 0366787</td><td></td></tr><tr><td>에탄올, 70%</td><td>Carl Roth</td><td>9065.5</td><td></td></tr><tr><td>1/4'' 자유 필드 측정 교정 마이크 키트</td><td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td><td>PCB-378C0</td><td></td></tr><tr><td>장갑(멸균)</td><td>Unigloves</td><td>1570</td><td></td></tr><tr><td>Graefe 집게 곡선, 톱니 모양의</td><td>FST</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 6 소프트웨어, V6.07</td><td>GraphPad Prism Software, Inc.</td><td>https://www.graphpad.com/</td><td></td></tr> <tr><td>열 기반 수술 기구 살균기</td><td>FST</td><td>18000-50</td><td></td></tr><tr><td>Homeothermic 가열 블랭크</td><td>ThermoLux</td><td>461265 / -67</td><td></td></tr><tr><td>Ketanest S (케타민), 25mg/ml</td><td>Pfizer</td><td>PZN 08707288</td><td></td></tr><tr><td>Ringer' s 솔루션(멸균)</td><td>B.Braun</td><td>PZN 01471434</td><td></td></tr><tr><td>Matlab 소프트웨어</td><td>MathWorks, Inc.</td><td></td><td></td>https://de.mathworks.com/products/matlab.html</tr><tr><td>메두사 4채널 저음. 헤드스테이지</td><td>Tucker-Davis Technologies(TDT)</td><td>RA4LI</td><td></td></tr><tr><td>Medusa 4채널 프리앰프/디지타이저</td><td>Tucker-Davis Technologies(TDT)</td><td>RA4PA</td><td></td></tr><tr><td>마이크</td><td>PCB Pieztronics</td><td>378C01</td><td></td></tr><tr><td>멀티 필드 스피커-스테레오</td><td>Tucker-Davis Technologies(TDT)</td><td>MF1-S</td><td></td></tr><tr><td>오실로스코프</td><td>Tektronix</td><td>DPO3012</td><td></td></tr><tr><td>Optibit 인터페이스용 광학 PC1 익스프레스 카드)</td><td>Tucker-Davis 시스템(TDT)</td><td>PO5e</td><td></td></tr><tr><td>Askina Braucel 패드(셀룰로오스 흡수 패드)</td><td>B.Braun</td><td>PZN 8473637</td><td></td></tr><tr><td>프리앰프</td><td>PCB Pieztronics</td><td>480C02</td><td></td></tr><tr><td>RZ6 다중 I/O 프로세서 시스템(BioSigRZ)</td><td>Tucker-Davis Technologies(TDT)</td><td>RZ6-A-PI</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 식염수(NaCl, 멸균)</td><td>B. Braun</td><td>PZN : 8609255</td><td></td></tr><tr><td>SigGenRZ 소프트웨어</td><td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td> <td>https://www.tdt.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Software R (버전 3.2.1) + Reshape 2 (버전 1.4.1) + ggplot 2 (버전 1.0.1) + Datatable (버전 1.9.4), + gdata (버전 2.13.3), + Pastecs (버전 1.3.18), + Waveslim (버전 1.7.5), + MassSpecWavelet (버전 1.30.0)</td><td>The R Foundation, R Core Team 2015</td><td>오픈 소스 소프트웨어 (무료 배포 가능)</td><td></td></tr><tr><td>소음 감쇠 큐비클</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-018V</td><td></td></tr><tr><td>표준 패턴 집게, 길이 12cm 및 14.5cm</td><td>FST</td><td>11000-12, 11000-14</td><td></td></tr><tr><td>Leukosilk 테이프</td><td>BSN medical GmbH & Co. KG</td><td>PZN 00397109</td><td></td></tr><tr><td>조직 집게- 1x2 치아 12cm</td><td>FST</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Uniprotect 환기 캐비닛</td><td>Bioscape</td><td>THF3378</td><td></td></tr><tr><td>환기 캐비닛</td><td>Tecniplast</td><td>9AV125P</td><td></td></tr><tr><td>자일라진(Rompun), 2%</td><td>바이엘 바이탈 GmbH</td><td>PZN 1320422</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에서 뇌간 에서 데이터 수집 및 분석 음성 응답 청력 측정

Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice

뇌간 유발 반응 청력 측정 (BERA)는 임상 신경 생리학에서 중앙 관련성입니다. 시각적으로 유발된 전위(EP) 전위(EP) 또는 체감각 유발 전위(SEP)와 같은 다른 자극전위(EP) 기술이 바와 같이, 청각 유발 전위(AEP)는 동일한 자극의 반복적인 프리젠테이션에 의해 촉발됩니다. 뇌전도 (EEG) 응답은 이후에 뚜렷한 양성 (p) 및 음의 (n) 편향의 결과로 평균화됩니다. 인간에서는, 개별 피크의 진폭 그리고 대기 시간 둘 다 근본적인 신경 회로에 있는 동기화 및 전도 속도의 변경을 특성화하기 위하여 이용될 수 있습니다. 중요한 것은, AE는 또한 약리학 및 유전 동물 모형에 있는 청각 기능을 확인하고 특성화하기 위하여 기초와 전임상 과학에서 적용됩니다. 더욱이, 약리학적 인 테스트와 함께 동물 모델은 감각 신경성 난청 (예 : 연령 또는 소음 유발 청력 적자)의 치료에 잠재적 인 이점을 조사하기 위해 활용됩니다. 여기에서우리는 클릭과 톤 버스트 응용 프로그램을 사용하여 마우스에 청각 뇌간 유발 응답 (AR)을 기록하는 방법에 대한 상세하고 통합적인 설명을 제공합니다. 이 프로토콜의 특정 초점은 실험 전 동물 하우징, 마취, ABR 기록, ABR 필터링 프로세스, 자동화된 웨이블릿 기반 진폭 성장 함수 분석 및 대기 시간 감지에 있습니다.

클릭 및 톤 버스트 유발 ABR 레코딩을 사용하여 청력 임계값 차이, 진폭 증가 함수 및 대기 시간 비교를 평가할 수 있습니다. SPL 증가 모드에서 클릭 유발 AV는 Cav3.2 T 형 전압 게이트 Ca2 + 채널 (즉, Cav3.2+/- 및 Ca)에 대한 부족한 컨트롤과 두 가지 예시돌연변이 마우스 라인에 대한 그림 1에 설명되어 있습니다. v3.2 null 돌연변이 [Cav3.2-/-]). 전술한 바와 같이, 성별별 조사는 일반적으로 인간54,55 및 마우스56,57에서...

뇌간 은 임상 신경 생리학에서 중요한 도구입니다 반응 청력 측정을 불러 일으켰다. 요즘, 뇌간 은 약리학 및 유전 동물 모델 모두를 포함하는 기초 과학 및 전임상 연구에서도 반응 청력 측정을 불러 일으켰다. 여기에서 우리는 청각 뇌간 반응이 마우스에서 성공적으로 기록되고 분석될 수 있는 방법에 대한 상세한 설명을 제공합니다.

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as ...

이 프로토콜은 마우스에서 클릭 및 톤 버스트 불러 온 청각 뇌간 응답을 계획, 수행 및 분석하는 방법에 대한 자세한 정보를 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 약리학 및 돌연변이 마우스 모델의 복잡하고 빠른 청각 프로파일링을 허용한다는 것입니다. alt-er-ed 초기 APP에 대한 새로운 통찰력과 쥐와 쥐의 청각 처리에 대한 관련 변경은 인간에게 번역 될 수 있습니다.따라서,이 방법은 청각, 신경 및 질병의 특성화 및 표화에 중심적으로 중요합니다. 이 방법은 난독증, 저혈당 및 항문증의 식별에 가장 중요합니다. 예를 들어, 연령 관련, 소음 유발 대사, 선천성 및 aspi-met-acury 청력 손실뿐만 아니라 기형 이나 기형, 부상 및 신 생물로 인한 청력 적자.이 기술에 익숙하지 않을 경우 시스템의 적절한 전기 배치 및 사전 실험 적 교정에 특별한주의를 기울여야합니다. 이 방법의 시각적 데모는 마취, ABR 레코딩, ABR 필터링 프로세스 및 자동화된 ABR neur-o-lass-es를 설명하는 데 매우 중요합니다. 먼저 마이크에 연결된 사전 증폭기를 보정하기 최소 5분 전에 켜서 시스템의 평형을 허용합니다.오실로스코프를 켭니다. 그런 다음 마이크를 배치, 실험 뮤린 귀를 모방하기 위해, 큐비 칸을 감쇠 소리 내부 사전 앰프에 연결. 다음으로, 시판되는 처리 및 획득 소프트웨어를 열고 클릭 및 톤 버스트에 대한 자극 프로토콜을 프로그래밍합니다.클릭 자극 엔터티로 시작하여 클릭 임계값을 분석하고 결정합니다. 왼쪽 귀와 오른쪽 귀의 ABR 대칭이 뒤따릅니다. 그리고 ABR 진폭과 대기는 나중에.다음으로 동일한 소프트웨어를 사용하여 Sig-Gen RZ 자극 설계 소프트웨어를 사용하여 톤 버스트 자극 프로토콜을 확인합니다. 또한 Bio-Sig RZ 인수 소프트웨어에서 자극 설정을 검사합니다. 과학적 질문에 따라 테스트할 적절한 주파수 범위를 프로그래밍하고 적용해야 하는 주파수 범위가 큰 스피커의 기술적 기능을 충족하는지 확인합니다.평균화의 경우, 예를 들어 클릭 또는 톤 버스트 수를 초당 20회, 평균 25밀리초의 평균 지속 시간 및 사전 증폭기의 증폭 계수20회로 설정합니다. 그런 다음 ABR 데이터 수집에 적합한 샘플링 속도를 확인한 다음 6개의 폴링 버터 가치 필터를 사용하여 필터를 전달합니다. 필요한 경우 노치 필터를 활성화합니다.보정:CAL200K 파일을 선택하고 소프트웨어 내에서 보정 구성 모드를 활성화하여 톤 버스트 교정을 시작합니다. 그리고 실험 조건에 따라 둘레를 선택합니다. 프로세서 시스템을 사용하여 교정 절차를 실행합니다.음압 레벨 또는 SPL 제한, 주파수 범위 및 분포면에서 마이크와 스피커의 기술 사양이 조화를 이루는지 확인합니다. 그런 다음 미리 정의된 클릭 자극 프로토콜을 선택하고 시작합니다. 한 번의 클릭 SPL을 실행하여 오실로스코프의 온라인 빠른 4-ay 변환에 의해 사운드 자극스펙트럼을 분석하여 요구 사항과 일치하는지 확인합니다.1~42킬로헤르츠 범위 내에서 미리 정의된 톤 버스트 자극 프로토콜을 선택하고 시작합니다. 오실로스코프 및 온라인 FFT를 사용하여 기록된 음향 테스트 자극의 주파수 스펙트럼을 확인합니다. 마지막으로 생성된 교정 파일을 톤 버스트 자극 프로토콜에 로드하여 톤 버스트 보정을 완료합니다.먼저 음향 감쇠 칸막이 안에 마취 된 마우스를 배치하여 음향 폼이 늘어서 있습니다. 축기 뇌줄기의 기록을 위해 청각 전위전도, 측정할 귀에 따라 좌우 피나의 정점에 하부 진피 스테인리스 스틸 전극을 삽입한다. 다른 쪽 끝에는 바이노럴 레코딩을 위해 음극을 오른쪽과 왼쪽 피나 에 배치합니다.동물의 엉덩이에 접지 전극을 배치합니다. 삽입 전에, 전극의 하부 진피 고정이 보장되는 스테인레스 스틸 전극의 끝에 후크 모양을 형성한다. 그리고 일단 삽입되면, 마우스의 로스트럼을 큰 스피커 반대 10센티미터 제대로 놓습니다.모든 전극을 헤드 스테이지에 연결하고 임피던스를 확인합니다. 그런 다음, 각 기록 전에 모든 전극의 임피던스 측정을 수행하여 적절한 전극 위치 지정 및 전도도를 확인합니다. 하나의 라우드 스피커를 사용하여 무료 필드 조건에서 AR을 기록합니다.마지막으로 자동화된 임계값 감지 및 웨이브 대기 시간 분석을 통해 ABR 분석을 수행하여 양수 피크및 음파를 결정합니다. 일반 청력 성능을 분석하는 첫 번째 단계로 0에서 90 사이의 다양한 SPL에 대한 클릭 유발 AR을 자동화된 ABR 임계값 감지 시스템을 사용하여 조사되었습니다. 다른 톤 버스트 주파수에 의해 연상되는 ABR 임계값 수준에서잠재적인 변경이 분석되었습니다.예시 마우스 라인에서 Cav3.2 plus, 마이너스 및 Cav3.2 마이너스에서 마이너스는 대조군에 비해 클릭 및 톤 버스트 관련 청력 임계값을 증가시켰습니다. 마지막으로, 클릭 유발 ABR 진폭 성장 기능 및 ABR 파형 대기 시간 분석은 웨이블렛 기반 접근법을 통해 수행되었다. 후자는 내이와 뇌간 내 청각 정보 처리에 관심있는 유전자의 가능한 스파시오 - 측두적 영향에 대한 통찰력을 허용합니다.피카의 측정 및 시스템 교정에 적절한 ABR 전극 배치는 이 기술을 수행하는 데 필수적입니다. 여기에 제시된 청각 접근 방식은 원격 분석 시스템과 함께 사용하여 복잡하고 중간 대기 시간 및 후기 청각 방출 잠재력을 분석할 수도 있습니다. 이것은 청각, 신경 및 신경 질환의 특성화와 phenotyping에 도움이됩니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

손상 또는 유령 인식 (주관적 이명)을 듣고, 청력 임계 값과 같은 매개 변수를 청각의 행동 결정에 대한 신속하고 저렴한 방법을 설명합니다. 그것은 음향 펄쩍 뛰게하다 응답의 사전 펄스 억제를 사용하여 쉽게 프로그래밍 AD / DA-컨버터 및 압전 센서를 사용하여 개인용 컴퓨터에 구현 될 수있다.

쥐의 행동 Audiometry를위한 저비용 설정

이 비디오는 새끼 쥐의 청각 뇌간 반응(ABR)을 기록하는 방법을 보여줍니다. 신경 반응을 평가하기 위해 전극 배치, 소리 자극 적용 및 뇌간의 신호 처리 분석 단계를 간략하게 설명합니다.

새끼 쥐의 청각 뇌간 반응 기록

이 동영상은 청각 장애가 있는 쥐에게 인공와우를 이식하고 전기 자극을 가하여 청각 뇌간 반응을 기록하는 절차를 보여줍니다. 이 절차를 통해 전기 청력의 기본 메커니즘을 이해할 수 있으며 인공와우 기술 및 청각 신경 과학의 발전에 기여할 수 있습니다.

귀가 먹먹한 쥐에서 전기적으로 유발된 청각 뇌간 반응 기록

이 비디오는 쥐 달팽이관의 특정 영역에서 리본 시냅스를 평가하는 방법을 보여줍니다. 면역염색 및 컨포칼 이미징 기술을 활용하여 각 달팽이관 회전에서 서로 다른 주파수 영역에 걸쳐 기능적 시냅스를 식별합니다.

Mouse Cochlea의 특정 주파수 영역에서의 리본 시냅스 평가

출처: Lee, D., et. al입니다. 마우스의 소음성 난청에 대한 수정된 실험 조건과 청력 기능 및 외부 유모 세포 손상 평가. J. Vis. 특급. (2023)이 비디오는 마우스의 청각 뇌간 반응(ABR)을 측정하는 방법을 보여줍니다. 전극은 마취된 쥐의 머리, 귀 뒤, 꼬리 근처에 배치됩니다. 다양한 강도의 음향 자극이 전달되고 생성된 전기 신호가 파형으로 기록됩니다.

마우스의 청각 뇌간 반응 측정(Measuring the Auditory Brainstem Response in Mice)

이 프로토콜에는 출생 후 쥐 새끼에서 청각 brainstem 응답을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 외부 머리 세포의 기능 개발 조사, 고립 된 외부 머리 세포에 기록 하는 전체 셀 패치 클램프 실험 절차 단계별 설명 합니다.

청각 Brainstem 응답 및 출생 후 쥐에 외부 머리 세포 전체 셀 패치 클램프 기록

달팽이 관 임 플 란 트의 동물 모델 영구 난청 전기 자극 치료의 기술 기반 지식을 사전 수 있습니다. 이 연구는 급성 굉음을 쥐 청각 brainstem 응답 기능 평가 있는 전극 배열 인공 와우 이식 수술 프로토콜을 제공합니다.

인공 와우 수술 및 C57BL/6 마우스에 전기 evoked 청각 Brainstem 응답 기록

이 원고는 정상 마우스에서 리본 시냅스의 형태학적 특성 및 기능 상태를 평가하기 위한 실험 프로토콜을 설명합니다. 본 모델은 또한 소음 유발 및 노화 관련 달팽이관 시냅토병 제한 모델에 적합합니다. 이전 마우스 연구의 상관 결과 또한 논의.

마우스 달팽이관의 특정 주파수 영역에서 리본 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

여기서는 소음성 난청(NIHL)의 마우스 모델에 대한 프로토콜을 제시합니다. NIHL을 유도하기 위해 골판지 플라스틱, 쥐덫 케이지 및 스피커를 사용하여 새롭고 간단한 장치를 개발했습니다. 청각 뇌간 반응과 면역형광 영상을 각각 사용하여 청력 기능과 외부 유모 세포 손상을 평가했습니다.

생쥐의 소음성 난청에 대한 수정된 실험 조건 및 청력 기능 및 외부 유모 세포 손상 평가

이 기사에서는 청각 뇌간 응답 파형의 처음 5개 피크와 트로프의 진폭과 대기 시간에 대한 반자동 측정에 대해 설명합니다. 추가 루틴은 실험자 분석을 위해 데이터를 컴파일하고 스프레드시트에 주석을 추가합니다. 이러한 무료 컴퓨터 루틴은 오픈 소스 통계 패키지 R을 사용하여 실행됩니다.

R을 이용한 청각 뇌간 반응 파형에 대한 피크 진폭 및 대기 시간의 반자동 분석

밀리미터 크기의 코일과 결합된 저비용 뇌파 기록 시스템은 생체 내에서 마우스 뇌의 경두개 자기 자극을 유도하기 위해 제안되었습니다. 맞춤형의 유연한 다중 전극 어레이 기판이 있는 기존의 나사 전극을 사용하여 경두개 자기 자극에 대한 반응으로 마우스 뇌에서 다중 부위 기록을 수행할 수 있습니다.

생체 내에서 마우스 뇌를 경두개로 자극하기 위해 밀리미터 크기의 코일과 결합된 저비용 뇌파 기록 시스템

학습하세요 마우스에서 청각뇌간반응(ABR) 측정법을 통해 청각 처리 및 신경학적 상태를 분석하는 방법을. 이 기술은 유전적 및 약리학적 모델에서 청각 결손을 연구하는 데 필수적입니다.

마우스에서 뇌간 에서 데이터 수집 및 분석 음성 응답 청력 측정

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