Name: 초파리 멜라노가스터의 구연산 신타제 활동의 대색 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster 조직 균질액에서 구연산 신타제 활성을 측정하는 대색 분석법을. 이 방법은 미토콘드리아 분리 없이 빠르고 효율적으로 완전한 미토콘드리아 질량을 정량화합니다.

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이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (31401013 및 31471010), 상하이 시 과학 기술위원회, 상하이 푸장 프로그램 (14PJ1405900), 그리고 자연 과학 재단의 보조금에 의해 지원되었다 상하이 (19ZR1446400).

1. D. 멜라노가스터에대한 대색 구연산 신타제 활동 분석16
<ol><li>각 샘플에 대해 10 개의 성인 파리를 수집합니다. 각 유전자형에 대해 적어도 세 배의 샘플을 수집합니다.</li>
	<li>각 시료에 대해 1.5 mL 시험관에서 20 mM HEPES (pH = 7.2), 1 mM EDTA 및 0.1 % 트리톤 X-100을 포함하는 얼음 차가운 추출 완충액 500 μL을 준비합니다.</li>
	<li>성인이 마취 패드에CO2로 파리를 마취하고 원하는 조직을 분리. 예를 들어, 성인 플라이 흉부들을 분리하기 위해 한 쌍의 포셉으로 플라이 흉부를 고정한 다음 가위를 사용하여 흉부와 복부의 경계를 따라 절단하여 플라이 복부를 분리합니다. 근육 구연산염 합성 활성 분석에 대한 플라이 토락을 수집합니다. 참고 : 구연산염 합성 활동을 정상화하는 데 사용하는 경우이 단계에서 조직의 신선한 무게를 결정하십시오.</li>
	<li>10 명의 성인 플라이 토락을 얼음 차가운 추출 완충액 100 μL로 즉시 옮기고 얼음에 유봉으로 균질화하십시오. 샘플을 얼음 차가운 상태로 유지하려면 얼음에 5-10 초 동안 샘플을 균질화 한 다음 샘플을 5 s용 얼음에 앉게하고 튜브의 모든 조직이 완전히 균질화 될 때까지 반복하십시오. 참고 : 튜브테이프, 균질화에 혈전이 없는지, 튜브의 조직이 완전히 균질화되었는지 확인하십시오. 모든 샘플 처리는 얼음에서 수행해야합니다.</li>
	<li>단백질 함량 측정을 위해 새로운 튜브에서 각 균질화된 샘플의 10 μL을 섭취하십시오. 얼음에 단백질 측정을 위해 샘플을 보관하십시오. 참고: 단백질 샘플을 동결하여 나중에 분석을 위해 -80°C에서 보관할 수 있습니다. 단백질 농도 구연산 염 합성 활동의 정상화에 대 한 내부 매개 변수 역할을.</li>
	<li>남은 각 시료에 400 μL의 얼음-차가운 추출 버퍼를 추가하여 총 부피를 500 μL로 만듭니다. 각 반응에 대해, 1 μL의 희석 된 세포 용해액을 150 μL의 신선하게 제조 된 반응 용액 (20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.1 mM DTNB, 0.3 mM 아세틸 CoA, 1 mMoxaloacetic 산)을 추가합니다. 거품 형성을 피하면서 부드럽게 파이펫팅하여 철저하고 즉시 섞으세요. 최소 10초 간격으로 412 nm에서 흡광도를 측정할 수 있는 플레이트 리더를 사용하여 25°C에서 4분 동안 10-30초마다 412 nm에서 흡광도를 측정합니다. 참고: 다른 시약을 파이펫팅하기 전에 팁을 변경하고 웰에서 거품이 형성되지 않도록 하십시오. 시약의 불완전혼합은 측정에 변화를 일으킬 수 있다. 구연산염 합성 활성 분석은 시료가 수집된 직후 실온에서 수행되어야 하며, 이 분석제는 그대로 미토콘드리아 질량을 정량화하는 데 사용된다. 반응 버퍼는 사용 직전에 준비해야 하며 저장해서는 안 됩니다.</li>
	<li>광 밀도(OD) 흡광도(abs) 대 시간(분) (X축)으로 데이터를 플롯합니다. 그런 다음 반응 속도가 있는 곡선의 선형 부분에 대한 경사를 계산합니다. <img src="/files/ftp_upload/59454/59454eq1.jpg"> 구연산염 합성 활성을 정규화하기 위해 시료 단백질 농도로 값을 나눈다. 구연산염 합성 활성은 <img src="/files/ftp_upload/59454/59454eq2.jpg"> 참고: 샘플 단백질 농도는 단백질 농도 분석 키트에 의해 측정될 수 있다.</li>
</ol>

<ol><li>Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intrinsic+apoptosis+pathway+mediates+the+pro-longevity+response+to+mitochondrial+ROS+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans.</a> Cell. 157 (4), 897-909 (2014).</li>
<li>Sarasija, S., Norman, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gamma-Secretase+Independent+Role+for+Presenilin+in+Calcium+Homeostasis+Impacts+Mitochondrial+Function+and+Morphology+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).</li>
<li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li>
<li>Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+ROS+and+the+Effectors+of+the+Intrinsic+Apoptotic+Pathway+in+Aging+Cells%3A+The+Discerning+Killers%21%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers!</a> Frontiers in Genetics. 7, 161(2016).</li>
<li>Kim, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+Biosynthesis+Coordinates+a+Mitochondrial-to-Cytosolic+Stress+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response.</a> Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals%3A+Untangling+the+knot%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot.</a> Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).</li>
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<li>Gillen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twelve+Weeks+of+Sprint+Interval+Training+Improves+Indices+of+Cardiometabolic+Health+Similar+to+Traditional+Endurance+Training+despite+a+Five-Fold+Lower+Exercise+Volume+and+Time+Commitment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment.</a> PLoS One. 11 (4), e0154075(2016).</li>
<li>Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+functional+similarities+and+divergences+between+Drosophila+Spargel%2FdPGC-1+and+mammalian+PGC-1+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein.</a> Frontiers in Genetics. 5, 216(2014).</li>
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<li>Wei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNF34+modulates+the+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+capacity+in+muscle+and+lipid+metabolism+through+ubiquitination+of+PGC-1+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).</li>
<li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li>
<li>Bosco, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxygen+concentration+and+pressure+on+Drosophila+melanogaster%3A+oxidative+stress%2C+mitochondrial+activity%2C+and+survivorship%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Insect+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).</li>
</ol>

저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.

Drosophila를 모델로 사용하는 신진 대사 연구는 파리의 유전적 배경, 식단 및 재고 유지 를 고려해야합니다18. 구연산염 합성 활동의 측정에 다른 유전 적 배경의 영향을 피하기 위해, 초파리의 다른 변종은 10 세대에 대한 제어 균주에 역교차되어야한다. 우리의 실험에 사용된 모든 Drosophila 긴장의 유전 배경은 w1118입니다,그래서 우리는 대조군으로 w1118를 이용했습니다. 일반적으로, 우리는 w1118이 대부분의 Drosophila 긴장에 대한 유전 적 배경이며 캔톤-S보다 백크로스가 훨씬 쉽기 때문에 좋은 통제라고 생각합니다. 식이 요법과 재고 유지 보수는 모든 실험 그룹에 대해 정확히 동일해야합니다. 우리의 실험에서, 파리는 일반적으로 25 °C와 50-60 % 상대 습도에서 유지됩니다. 샘...

미토콘드리아는 대부분의 진핵 생물에서 전력 생산 세포기관으로 가장 잘 알려져 있으며, 이는 에너지 통화인 ATP를 삼차갈래산 주기(즉, 크렙스 주기) 및 산화 인산화를 통해 생산합니다. 미토콘드리아는 또한 세포사멸1,Ca2+ 항상성2,3,반응성 산화 종(ROS)4세대및 내포성 망상(ER)-스트레스반응의조절과 같은 많은 다른 생리적 과정에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 미토콘드리아 기능 장애는 모든 연령대의 신체에 영향을 미칠 수 있으며 대사, 노화 관련6및 퇴행성 신경 질환의 주요 원인입니다7. 본래 미토콘드리아는 미토콘드리아 기능과 기계적으로 관련이 있습니다. 따라서, 미토콘드리아 질량의 적절한 정량화는 미토콘드리아 기능을 평가하는 데 매우 중요하다8. 구연산 신타제는 트리카르복실산 주기9의제1단계에서 속도 제한 효소로서, 진핵 세포 내의 미토콘드리아 매트릭스에 국한되어 있으며, 따라서 그대로 미토콘드리아 질량9,10의존재에 대한 정량적 마커로서 사용될 수 있다. 구연산염 합성 활성은 또한 온전한 미토콘드리아 단백질11,12에대한 정상화 인자로 사용될 수 있다.
열매 파리, Drosophila melanogaster는미토콘드리아에서 중추적 인 역할을하는 많은 분자 및 경로가 진화적으로 인간13,14,15로보존되기 때문에 미토콘드리아 기능을 연구하기위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 여기서, 우리는 96웰 플레이트 포맷에서16개의 동질성 혈색 분석법에 의한 구연산염 합성 활성의 측정을 위한 빠르고 간단한 방법을 제시한다. 구연산염 합성 활성 분석에서, 구연산염 합성효소는 초파리 조직에서 동질화 촉매 작용을 아세틸 코엔자임 A(아세틸 CoA)와 함께 옥살로아세테이트의 반응을 형성하여 구연산염 CoA-SH 및H+를형성한다. CoA-SH는 이어서 5,5'-디티오비스-(2-니트로벤조산)(DTNB)와 반응하여 412 nm에서 분광광도 측정을 쉽게 측정할 수 있는 2-니트로-5-티오벤조에이트(TNB)의 유색 생성제품을 생성합니다. 구연산염 합성 활성은 색상 생산의 속도에 의해 반영될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산(HEPES)</td><td>시그마-알드리치</td><td>V900477</td><td></td></tr> 2<tr><td>-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올(트리즈마 베이스)</td><td>시그마-알드리치</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>아세틸-CoA</td><td>시그마-알드리치</td><td>A2181</td><td></td></tr><tr><td>디티오-비스-니트로벤조산(DTNB)</td><td>시그마-알드리치</td><td>D8130</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)</td><td>시그마-알드리치</td><td>V900106</td><td></td></tr><tr><td>옥살로아세테이</td><td>트 시그마-알드리치</td><td>O4126</td><td></td></tr><tr><td>펠렛 유봉</td><td>상곤</td><td>F619072</td><td></td></tr><tr><td>펠렛 유봉 모터</td><td>Tiangen</td><td>OSE-Y10</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 리더</td><td>BioTek</td><td>Eon</td><td></td></tr><tr><td>단백질 BCA 분석 키트</td><td>Beyotime</td><td>P0010S</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>WPI</td><td>14124</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>상곤</td><td>A110694-0100</td><td></td></tr></tbody></table>

초파리 멜라노가스터의 구연산 신타제 활동의 대색 분석

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

미토콘드리아는 산화 인산화를 통해 ATP를 생산하고 다양한 생리적 과정을 조절함으로써 세포 대사에서 가장 중요한 역할을 합니다. 미토 콘 드리 아 기능 장애는 다양 한 신진 대사 및 신경 퇴행 성 질환의 주요 원인. 그대로 미토콘드리아는 적절한 기능에 매우 중요합니다. 효소 구연산염 신타제는 미토콘드리아 매트릭스에 국한되어 그대로 미토콘드리아 질량의 정량효소 마커로서 사용될 수 있다. 미토콘드리아에서 중요한 기능을 가진 많은 분자와 통로가 인간과 Drosophila사이에서 높게 보존된다는 것을 감안할 때, 강력한 유전 도구의 배열은 Drosophila에서유효하다는 것을, Drosophila는 미토콘드리아 기능을 공부하기 위한 좋은 모형 시스템 역할을 합니다. 여기서, 우리는 미토콘드리아를 분리하지 않고 성인 파리에서 조직 균질화에서 구연산염 합성 활성의 빠르고 간단한 측정을 위한 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 또한 유충, 배양 된 세포 및 포유류 조직에서 구연산염 합성 활성을 측정하는 데 적합합니다.

도 1은 상이한 유전자형의 Drosophila 흉부 조직 균질화를 측정하기 위해 구연산염 합성 활성 색인식 분석법을 사용하여 얻은 시간이 지남에 따라 412 nm에서 의 OD 흡광도에 대한 운동 곡선의 예를 제시한다. PGC-1α는 미토콘드리아 생물발생의 마스터 레귤레이터라는 것은 잘 알려져 있습니다. PGC-1α는 초파리와 인간 사이에서 기능적으로 보존된다. 초파리 RNF34(dRNF34)는 초파리 PGC-1α, dPGC-1에 대한 E3 유비퀴틴 리가제이며, dPGC-1 단백질분해를 촉진한다 17. 전송 전자 현미경 및 미토콘드리아 DNA qPCR은 dPGC-117의녹다운에 의해 억압되는 미토콘드리아 함량을 증가시키는 초파리 근육에서 dRNF34의 녹다...

우리는 Drosophila 조직 균질제에서 온전한 미토콘드리아 질량의 정량화를 위한 구연산염 합성 활성의 색색 분석법을 제시한다.

Mitochondria play the most prominent roles in cellular metabolism by producing ATP through oxidative phosphorylation and regulating a variety of ...

Drosophila는 미토콘드리아 기능을 연구하기위한 좋은 모델 시스템 역할을합니다. 여기서 우리는 성인 파리에서 조직 균주에서 구연산 합성 활성을 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 미토콘드리아의 격리를 요구하지 않습니다.그것은 빠르고 간단하며 유충, 배양 세포 및 포유류 조직에서 구연산 합성 활동을 측정하는 데 적합합니다. 각 샘플에 대해 성인 파리를 수집하여 각 유전자형에 대해 적어도 삼중 시료를 수집하십시오. 각 샘플에 대해 1.5 밀리리터 테스트 튜브에 20 밀리머 HEPES, 1 밀리머 EDTA 및 0.1% 트리톤 X-100을 사용하여 500마이크로리터의 얼음 냉기 추출 버퍼를 준비합니다.마취 패드에 이산화탄소로 성인 파리를 마취합니다. 흉부를 분리하려면 한 쌍의 집게로 고정하고 흉부와 복부의 테두리를 가위로 절단하여 비행 복부를 분리합니다. 구연산 신디사이저 활동 분석체에 대한 플라이 두악을 수집합니다.성인 플라이 토렉스 10개소는 얼음냉기 추출 버퍼 100마이크로리터로 즉시 옮기고 얼음 에 유봉을 넣음하여 균질화합니다. 얼음에 5~10초 동안 균질화하여 샘플을 차갑게 유지한 다음, 5초 동안 얼음 위에 앉은 다음 모든 조직이 완전히 균질화될 때까지 반복합니다. 각 균질화 샘플의 Aliquot 10 마이크로리터는 단백질 함량 측정을 위한 새로운 튜브로 하여 이러한 튜브를 얼음에 보관합니다.400 마이크로리터의 얼음 냉기 추출 버퍼를 남은 각 샘플에 추가하여 총 500마이크로리터와 파이펫을 위아래로 섞어 섞습니다. 각 반응에 대해, 새로 준비된 반응 용액의 150 마이크로리터에 희석된 세포 용액1마이크로리터를 추가합니다. 부드럽게 파이펫팅하여 철저히 섞어 거품 형성을 피한 다음 플레이트 판독기를 사용하여 섭씨 25도에서 4분 동안 10~30초마다 412나노미터의 흡광도를 측정합니다.데이터를 시간이 지남에 따라 흡광도로 플롯한 다음 곡선의 선형 부분에 대한 경사를 계산합니다. 마지막으로, 반응속도 또는 경사를 시료 단백질 농도로 나누어 구연산 신디사이저 활성을 정상화한다. 드로소필라 근육에서 dRNF34의 녹다운이 미토콘드리아 구연산 신디사이저 활동을 증가시킬 것이라는 가설이 있었고 dPGC-1의 녹다운은 이 증가를 되돌릴 것입니다.각 분석지에 대해 초기 선형 효소 비율이 설정되었습니다.추세선의 경사는 상이한 유전자형의 최대 구연산 시화 활동에 해당하는 최대 반응 속도를 나타낸다. 최대 구연성 신디사이저 활동은 운동 곡선에서 계산되고 단백질 농도에 의해 정규화되었다. 결과는 플라이 두종의 신체 활동이 실제로 근육 별 dRNF34 넉다운으로 증가하고 증가근육 별 dPGC-1 넉다운에 의해 반전되었다는 것을 입증했다.시료를 균질화할 때, 튜브를 팁하고 균질화를 확인하여 혈전이 없고 튜브의 조직이 완전히 균질화되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 샘플 수집 후 모든 샘플 치료는 얼음에서 수행해야합니다. 구연산 신디사이저 활성 분석은 미토콘드리아 질량을 정량화하는 데 사용됩니다.미토콘드리아 질량의 적절한 정량화는 미토콘드리아 기능을 평가하는 데 매우 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

이 비디오는 초파리의 조직 균질화에 존재하는 미토콘드리아 구연산염 합성 효소 활성 분석을 측정하기 위한 비색 분석을 설명합니다.

구연산염 Synthase 활동 분석실험: 초파리 조직 균질산염에 있는 Mitochondrial 구연산염 Synthase 활동을 측정하는 비색 분석실험

개발 Drosophila의 배아에 작은 분자의 도입은 신규 화합물, 약물 및 독성 물질의 생물학적 활성의 특성뿐만 아니라 기본적인 발달 경로를 프로빙을위한 큰 잠재력을 제공합니다. 설명하는 방법은 여기에 초파리 배아 모델의 유틸리티를 확대,이 방법 자연 장벽을 극복 단계를 설명합니다.

의 Permeabilization의 방법<em&gt; 초파리</em작은 분자 활동의 분석 실험을위한&gt; 태아

이 논문은 미량의 특정 방사성 표지 대사 기질을 파리에게 공급하는 Drosophila melanogaster의 연료 산화 측정 방법을 설명합니다. 연료 산화로 인해 생성된 호기된 방사성 표지된 CO2 가 수집되고 측정됩니다.

방사성 표지 된 기판에서 이산화탄소 생산에서의 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

CApillary FEeder (CAFE) 분석은 음식 섭취의 기저에 있는 메커니즘을 조사하기 위한 간단하고 예산 친화적이며 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 다재다능한 유전자 모델 유기체인 Drosophila melanogaster와 함께 사용되는 이 제품은 음식 섭취의 조절 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 수단을 제공합니다.

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

세포 이온 수송 종종 세포내 pH를 모니터링 하 여 평가 될 수 있다 (pH나). 유전자 Encoded pH-지표 (GEpHIs) 그대로 셀에 세포내 pH의 부 광 량을 제공합니다. 이 프로토콜 내용을 통해 셀룰러 ex vivo 라이브 이미징 pHerry와 초파리 melanogaster 의 말 tubules의 세포내 pH의 정량화, 의사 비율 유전자 인코딩 pH 지시자.

형광 유전자 인코딩 ph 지시자 초파리 melanogaster 말 관 Epithelia에 광학 정량화의 세포내 pH

프로토콜 정상적인 대기 산소 수준에서 산소를 발생 하는 초파리 melanogaster 애벌레를 식별 하는 간단한 분석 결과를 설명 합니다. 이 프로토콜에 hypoxic 애벌레를를 겹치는 고기 느린 성장 부진 등을 보여 주는 다른 돌연변이 구별 될 수 있습니다.

초파리 melanogaster 애벌레에서 Hypoxia의 검출에 대 한 분석 결과 내/터널링

이 논문에서 초파리의 permeabilized 직업적인의 고해상도 respirometry를 사용 하 여 산소 소비량을 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 조직의 고전적인 미토 콘 드 리아 격리 기술에 비해 최소한의 금액을 요구 하 고 얻은 결과 더 순수 관련.

조직의 최소 금액을 사용 하 여 초파리의 Permeabilized 섬유에 미토 콘 드리 아 산소 소비량의 측정

선물이 산소 소비와 초파리 melanogaster 애벌레와 성인 두뇌에 있는 세포 외 산성화를 측정 하기 위한 프로토콜. 신진 대사 분석기는 적응 하 고 최적화 된 프로토콜 활용 됩니다. 마이크로 조직 억제는이 프로토콜의 중요 한 구성 요소 설계 하 고이 분석에 그들의 사용을 위해 특히 창조 되었다.

초파리 melanogaster Larval 및 성인 두뇌의 변화 분석

이 프로토콜에서는 성인 초파리 melanogaster 식 인식 및 미생물 감염의 계량에서 vivo에서 먹어서 분석 결과를 설명 합니다.

과일 파리, 초파리 melanogaster에 비보 먹어서 분석 결과 사용 하 여의 세포 면역 반응 평가

전기량 호흡 측정법은 작은 유기체의 신진대사율을 측정하는 데 이상적입니다. 본 연구에서 Drosophila melanogaster에 대해 적응시켰을 때, 측정된O2 소비량은 이전 연구에서 야생형 D. melanogaster에 대해 보고된 범위 내에 있었습니다. 더 작고 덜 활동적인 CASK 돌연변이의 플라이당 O2 소비량은 야생형보다 현저히 낮았습니다.

전기량 미세호흡계를 사용한 초파리 멜라노가스터의O2 소비량 측정

학습하세요 Drosophila melanogaster 조직 균질액에서 구연산 신타제 활성을 측정하는 대색 분석법을. 이 방법은 미토콘드리아 분리 없이 빠르고 효율적으로 완전한 미토콘드리아 질량을 정량화합니다.

초파리 멜라노가스터의 구연산 신타제 활동의 대색 분석

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