Name: 마우스에 있는 정점 치주염 유도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: 배우세요 마우스 정점 치주염 유도 방법을 통해 치아 주변 조직의 염증 반응과 골 흡수를 연구하는 기법입니다. 이 프로토콜은 치과 및 면역학 연구에 활용됩니다.

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우리는 동물 포지셔닝에 대한 그의 도움에 대한 박사 오드 헤이먼, 마이크로 CT 분석에 대한 도움을 라파엘 리버, 그리고 교수 안디아라 드 로시 달데건 은 실험을 미리 형성에 대한 조언을 인정하고 싶습니다. 우리는 또한 비판적 독서와 편집에 대한 박사 시드니 코헨을 인정하고 싶습니다.
이 작품은 이자도르 I. 카바코프 연구 기금에서 MK와 IA에 대한 보조금과 이스라엘 과학기술부의 이츠학 나본 펠로우십을 통해 지원되었습니다.

여기에 설명된 모든 방법은 히브리 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다 (윤리 없음. MD-17-15093-5).
1. 동물 마취 및 위치
<ol><li>아래에 설명된 대로 멸균 솔루션을 준비합니다.<ol>
<li>5 mL의 케타민 7 mg/mL과 인산염 완충액(PBS)/식염수로 희석된 0.09 mg/mL 의 메데토미딘을 준비합니다.</li>
		<li>PBS/식염수로 희석된 아티파메졸(0.4 mg/mL)의 멸균 용액을 준비하십시오(5 mL의 양을 준비하는 것이 좋습니다).</li>
		<li>국소 마취를 위해 PBS/식염수로 희석된 메피바카인(7.5 mg/mL)의 멸균 용액을 준비하십시오(메피바카인 의 공급된 유리병 1개만으로도 7.2 mL의 재고에 충분합니다).</li>
	</ol>
</li>
	<li>실험을 위해 6-8주 된 암컷 C57BL/6 마우스를 사용하십시오. 시설과 동물 먹이 광고 리비텀에서 제공하는 표준 물과 음식과 함께 특정 병원균 (SPF) 동물 단위에 동물을 유지합니다.</li>
	<li>마우스를 계량하고 무게의 각 그램에 대해 10 μL의 부피를 복강 내 (IP)를 주입합니다. 예를 들어, 무게가 20그램인 마우스의 경우, 케타민/메데토미딘 용액 200 μL을 주입합니다. 이것은 (70 mg/kg) 케타민과 (0.9 mg/kg) 메데토미딘의 최종 농도를 줄 것이다 각 동물에 대해.</li>
	<li>시술 중 건조로 인한 눈 궤양을 방지하기 위해 클로람페니콜을 함유한 눈 연고(5%)를 바르십시오. 마취 하에 있는 동안 동물의 눈에. 동물을 마취하는 동안 램프로 따뜻하게 유지하십시오. 페달 반사 (회사 발가락 핀치를 수행)를 확인하여 마취의 깊이를 확인합니다.</li>
	<li>마우스가 마취된 후, 마우스를 오른쪽(오른손잡이 연구원의 경우)에 놓고 닫힌 셀 압출 폴리스티렌 폼 표면에 놓고 테이프를 사용하여 발을 표면에 부착합니다.</li>
	<li>앞니 주위에 작은 고무 밴드를 사용하여 입을 엽니 다 (상부 절개 에 대한 1, 하부 절치에 대한 1) 폐쇄 셀 압출 폴리스티렌 폼 표면에 고정 긴 바늘에 의해 장소에 개최.</li>
	<li>표면에 테이핑 된 집게를 사용하여 오른쪽 뺨을 철회하십시오. 정상 상태에서 닫힌 집게를 사용합니다.</li>
	<li>적절한 배율 (쌍안경 현미경 또는 임상 현미경)과 빛을 사용하여 하악 대구치에 액세스 할 수 있도록 편안한 작업 위치에 마우스로 표면을 배치합니다.</li>
	<li>집게 또는 치과 주걱을 사용하여 혀를 철회하고 첫 번째 하악 골치에 인접한 점막 접힌에 27 게이지 바늘로 국소 마취를 주입합니다. 25-50 μL로 충분합니다. 주사 부위 주변의 조직의 붓기가 시각화되어야합니다.</li>
</ol>2. 펄프 노출
<ol><li>적절한 치과 모터(예: 자동 토크 감소(ATR) 모터에 부착된 분당 800라운드(rpm)의 속도로 1/4 라운드 치과 용 버 또는 동일한 크기의 다이아몬드 버(긴 생크가 권장됨)를 사용하십시오.</li>
	<li>펄프 뿔이 상아질을 통해 볼 때까지 첫 번째 오른쪽 하악 대구치의 교합 부분에 드릴. 모터의 짧은 버스트를 사용하여 과열을 방지합니다.</li>
	<li>K-파일 또는 H 파일 #8 또는 #10 사용하여 펄프를 관통하고 그들을 덮는 상아를 파괴하여 펄프 혼 (mesial 및 distal)에 파일을 삽입합니다. 파일은 오토 클레이브에 의해 살균됩니다.</li>
	<li>파일의 개구부를 넓히는 동안 펄프 내부의 파일을 가능한 한 깊게 작업하십시오. 일반적으로 펄프에서 볼 수있는 출혈이있을 것입니다.</li>
	<li>실험 중 통증을 줄이기 위해 버로 치아의 날카로운 가장자리를 둥글게 하고 치아를 폐색에서 제거하십시오. 마이크로 브러시로 시술 중에 이물질을 청소하십시오.</li>
	<li>대조군 치아 (왼쪽 첫 번째 하악 어금니)를 대조군으로 둡니다.</li>
</ol>3. 임상 절차 종료
<ol><li>고정 상태에서 마우스를 방출하고 Atipamezole IP (체중의 각 그램당 10 μL)를 주입하십시오. 이것은 (4 mg / kg) 아티파메졸의 최종 복용량을 줄 것이다.</li>
	<li>PBS/식염수(0.05 mg/kg) IP로 희석된 부프레노르핀을 주입하십시오(시술 당일 3 mL의 양을 준비하는 것이 좋습니다). 통증 완화가 필요한 이유에 대한 설명은 토론을 참조하십시오.</li>
	<li>동물들이 마취에서 회복되는지 확인한 후 떠나십시오. 그들은 치아 통증으로 인해 하드 음식을 먹을 수 없기 때문에 그들에게 부드러운 음식을 제공합니다.</li>
</ol>4. 사후 절차 후속 조치(42일)
<ol><li>절차 후 처음 3 일 동안, 동물의 무게와 부프레 노르 핀을 주입 (0.1 mg/kg) 하루에 한 번 IP (6mL의 양을 준비하는 것이 좋습니다).</li>
	<li>실험 시간 동안(염증이 쌓이는 42일) 체중및 일반 행동평가로 동물을 일주일에 2-3회 모니터링한다.</li>
	<li>후속 기간 동안 동물에게 부드러운 음식을 전달하십시오. 음식을 물로 적시고 케이지 바닥에 페트리 접시에 넣습니다.</li>
</ol>5. 실험 종료 및 분석
<ol><li>후속 조치가 42일동안 11일 완료되면 케타민/자일라진으로 동물 IP를 106.25 mg/kg의 케타민 농도로 마취하고, 75 mg/kg의 자일라진(42.5 mg/mL 케타민의 재고 용액, 총 부피 의 1.5 mg/mL 자일라진은 총 부피의 1.5 mg/mL 자일라진입니다. 자궁 경부 탈구를 프리폼합니다. 참고 : 염증20,21을평가하기 위해 가능한 분석에 대한 다양한 옵션이 있습니다. 여기서 마이크로 CT 및 조직학적 염색에 의한 조직의 분석이 설명될 것이다.</li>
	<li>안락사 후, 외과 용 가위와 집게를 사용하여 3 개의 대구치 (각 측면 처리 및 비 처리 된 대조군에 대해 별도로)를 포함하여 턱의 일부를 잘라냅니다. 집게를 사용하여 가능한 한 연조직을 벗겨 내고 대부분 뼈와 치아를 시료에 남깁니다.</li>
	<li>PBS에서 조직을 간략하게 헹구고, 포름알데히드(PFA)에 4% (PBS에서 희석) 24-48시간 동안 고정을 위해 넣습니다. 주의: 화학 적 후드에 PFA를 사용하고 재료 안전 데이터 시트 (MSDS) 지침에 따라.</li>
	<li>24-48시간 후에, PFA를 씻어내기 위하여 PBS 3x로 헹구는다.</li>
	<li>마이크로 CT<ol>
<li>마이크로 CT 분석의 경우, 수확된 조직(약 4mm x 5mmx 1mm 크기의 대구치 3개 포함 하악골의 일부)을 마이크로 CT 스캐너에 놓고 1.5 mL의 PBS 로 채워진 직경 튜브에 놓아 볼 또는 언어 표면이 되도록 합니다. 치아와 뿌리의 튜브의 바닥에 평행하게 누워있다. 스폰지로 샘플을 분리하고 유연한 필름으로 튜브의 상단을 덮습니다.</li>
		<li>스캐닝 패널을 열고 측정 번호를 선택합니다. 70kV의 에너지, 114 μA의 강도 및 6 μm3 복셀 크기의 해상도와 같은 매개 변수로 제어 파일을 선택합니다.</li>
		<li>스카우트 보기를클릭하고 이미지가 나타나면 참조선을 클릭하고 스캔을 위해 샘플 영역을 표시합니다. 각 샘플 후 클릭스캔을 추가합니다. 샘플 표시가 완료되면 작업 목록으로 이동하여 상호 작용 작업을선택합니다. 참고 : 동일한 샘플을 나중에 역학에 사용할 수 있습니다. CT 스캔 중에 건조하지 않는 것이 중요합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>마이크로 CT 정렬 및 분석을 위해 적절한 컴퓨터 프로그램을 사용하십시오.<ol><li>마이크로 CT 평가에서 XY 평면에서 샘플을 엽니다. 정렬을 위해 각 샘플에서 세 점을 선택합니다. 메사얼 상체 수축 -은 좌표계의 원점을 정의합니다. 메사운하의 관상 부 - Z 축에 대한 점을 정의합니다. 단위 정점 수축 -은 XZ 평면의 점을 정의합니다.</li>
		<li>왼쪽 패널의 측정 도구를 사용하고 각 점에 도달하는 선을 그립니다. 오른쪽 패널에 나타나는 X, Y 및 Z 값으로 세 점 각각을 정의합니다.</li>
		<li>μCT평가에서 작업을 선택하여 샘플의 관심 영역을 정의하고 3D 평가를클릭합니다. 사각형과 축당 치수가 있는 창이 화면에 나타납니다. 마우스의 가운데 버튼으로 모서리를 클릭하여 XY 축의 관심 영역에 맞게 사각형의 크기를 일치시면 됩니다. VOI Start아래의 Z 사각형에 관심있는 첫 번째 슬라이스 수를 삽입하고 첫 번째 조각부터 Dim아래의 Z 사각형에 대한 마지막 슬라이스 수까지의 슬라이스 수를 삽입하여 Z 축의 치수를 선택합니다.</li>
		<li>세션관리자에서 응용 프로그램을 클릭하고 DECterm을선택합니다. 창이 열릴 때까지 몇 초 간 기다린 다음 다음 지침에 따라 아래에 설명된 기울어진 스크립트의 다섯 단계를 입력합니다(줄 클릭 사이 enter): Ipl isq_to_aim aim1</li>
		<li>isq (관심 파일) 이름을 복사 : 세션 관리자에서 보기를 선택하고 microCTdata를클릭합니다. 작업 중인 파일을 찾아 파일을 가운데로 클릭합니다. 그런 다음 DECterm의 창을 다시 가운데로 클릭합니다.</li>
		<li>관심 영역을 선택할 때 VOI로 결정된 X, Y 및 Z 값(둘 사이의 공백 포함)을 입력합니다.</li>
		<li>관심 영역을 선택할 때 희미한 상태에서 결정된 X, Y 및 Z 값(둘 사이의 공백 포함)을 입력합니다.</li>
		<li>메시지가 수신될 때까지 기다립니다. (단계 II- 정렬): z 정렬 aim1 목표2</li>
		<li>좌표계의 원점으로 결정된 X, Y 및 Z 값(둘 사이에 공백포함)을 입력합니다.</li>
		<li>z축의 점에 대해 결정된 X, Y 및 Z 값(둘 사이에 공백포함)을 입력합니다.</li>
		<li>XZ 평면의 점에 대해 결정된 X, Y 및 Z 값(둘 사이에 공백포함)을 입력합니다.</li>
		<li>메시지가 수신될 때까지 기다립니다: "align_Z 완료됨" (단계 III- 헤더): 헤더 목표2 0 0 0 0 0 0</li>
		<li>을 클릭합니다. (단계IV- 목표에서 isq로다시 파일을 변환): 토이스크 (토스크) 목표2</li>
		<li>isq (관심 파일) 이름을 복사 : 세션 관리자에서 보기를 선택하고 microCT 데이터를클릭합니다. 작업 중인 파일을 찾아 파일을 가운데로 클릭합니다. 그런 다음 DECterm의 창을 다시 가운데로 클릭합니다. 지우기 ("백스페이스"를 사용 하 여) ". 파일 끝에 ISQ"를 쓰고 쓰기:"_new. 정렬된 파일을 인식하는 ISQ"입니다.</li>
		<li>입력을 클릭합니다 . 입력합니다.</li>
		<li>메시지가 수신될 때까지 기다립니다. (단계 V- 플립): 이스크 (것) a.</li>
		<li>새 isq(관심 파일) 이름 복사: 세션 관리자 에서 보기를 선택하고 microCT 데이터를클릭합니다. 작업 중인 파일을 찾아 파일을 가운데로 클릭합니다. 그런 다음 DECterm의 창을 다시 가운데로 클릭합니다.</li>
		<li>입력을 클릭합니다 . 입력합니다. 메시지를 받을 때까지 기다립니다: "isq_to_aim 완료" 플립 a. Aa Zx "플립_aim 완료" 보낸 사람 Aa</li>
		<li>새 isq 이름 복사: 세션 관리자에서 보기를 선택하고 microCT 데이터를클릭합니다. 작업 중인 파일을 찾아 파일을 가운데로 클릭합니다. 그런 다음 DECterm의 창을 다시 가운데로 클릭합니다. 지우기 ("백스페이스"를 사용 하 여) ". 파일 끝에 ISQ"를 쓰고 "_flip. 정렬된 파일을 인식하는 ISQ"입니다.</li>
		<li>메시지가 수신될 때까지 기다립니다.</li>
	</ol></li>
	<li>컨투어링<ol>
<li>관상 동맥 펄프, 두 운하의 방사펄프, 그리고 두 정점 포어멘이 제시되는 치아의 대략 중간을 나타내는 슬라이스를 선택하십시오.</li>
		<li>수동으로 왼쪽 상단 윤곽 패널을 클릭하여 중간 슬라이스에 관심의 윤곽을 표시 - 말단 루트 정점의 말단 점에서 시작하여 정점 테두리를 관상적으로 방사성 정점 영역으로 표시, mesial 루트 정점의 mesial 테두리를 통해 모독 뿌리의 말단 테두리와 분노 영역을 통해 말단 뿌리의 mesial 테두리를 따라 (그림 3 II, IV 참조).</li>
		<li>이 윤곽선(Ctrl+C, Ctrl+V)을 복사하고 중간 슬라이스의 양쪽에 배치된 5개의 슬라이스로 조정합니다.</li>
		<li>각 샘플에 대해 표시된 윤곽의 조직 부피를 계산하려면 μCT평가에서 작업을 선택하고 3D 평가를클릭합니다. 3D 평가의 창에서 작업 근처를 선택하고 조직 볼륨 (TV)를 계산하는 필터를 선택클릭합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>조직학<ol>
<li>마이크로 CT 스캐너에서 조직을 제거한 후, 10일 동안 1 mL의 에틸렌디아미네테트라아세트산(EDTA) 0.5M pH 8.0을 가진 마이크로원심지 튜브에 각 샘플을 넣어 조직을 탈문한다. 3일마다 EDTA 솔루션을 변경합니다.</li>
		<li>탈수: 조직학적 카세트에 샘플을 넣고, 다음과 같이 각각 1시간씩 에탄올 농도를 증가시다: 70% 에탄올 (이 시점에서 샘플이 에탄올에 보관되는 한 몇 주 동안 중지될 수 있음), 90% 에탄올 2x, 100% 에탄올 2x, 자일렌 2x (주의 : 화학 후드에 자일렌을 사용하고 MSDS 지침에 따라).<ol>
<li>카세트를 액체 파라핀(60°C)으로 옮기고 자일렌이 증발할 수 있도록 밤새 화학 후드에 둡니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>차단: 조직학적 차단 기계를 사용하여 샘플을 파라핀에 포함시킵니다. 시상 절편을 얻으려면 올바른 위치에 포함해야합니다 (즉, 크라운과 뿌리는 치아가 "누워있는"방식으로 금형의 바닥 부분에 평행하게 지향되어야합니다). 샘플은 이제 마이크로토메로 절단할 준비가 되었습니다.</li>
		<li>절개: 조직의 관련 부분에 도달할 때까지 ~ 20 μm의 두꺼운 조각을 자르는 것으로 시작하십시오. 일단 치아(크라운 또는 뿌리)의 임의의 부분을 인식하면 6 μm의 단면으로 변화하고, 이전 섹션에 따라 절단 각도를 변경한다.<ol>
<li>예를 들어, 이전 섹션에 크라운이 포함되지만 뿌리가 없는 경우, 뿌리가 칼에 가까워지도록 마이크로톤에서 블록의 각도를 변경하고 크라운이 돌아갑니다 (치아의 부분은 블록 자체에 육안으로 인식 할 수 있음).</li>
			<li>관상 동맥 및 방사 펄프, 정점 포어맨을 포함한 시상 단면을 얻을 때까지 각도를 계속 조정합니다. 관련 조직이 모두 절단 될 때까지 가능한 한 많은 슬라이스로 이 방향으로 자른다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>염색 프로토콜(예를 들어, 해모톡실린 및 이오신 염색(H&E), 브라운 & 브렌 염색, 타르타르산 내성 산 인산 인산염(TRAP) 염색, 면역히스토화학,20,21을참조하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+IL-6+on+apical+periodontitis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endodontics+Journal%22%5BJournal%5D)">The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review.</a> International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).</li>
<li>Marton, I. J., Kiss, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+protective+and+destructive+regulatory+pathways+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Overlapping protective and destructive regulatory pathways in apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (2), 155-163 (2014).</li>
<li>Graunaite, I., Lodiene, G., Maciulskiene, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+apical+periodontitis%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Research%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of apical periodontitis: a literature review.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Research. 2 (4), e1(2012).</li>
<li>Hussein, F. E., Liew, A. K., Ramlee, R. A., Abdullah, D., Chong, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+Associated+with+Apical+Periodontitis%3A+A+Multilevel+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Factors Associated with Apical Periodontitis: A Multilevel Analysis.</a> Journal of Endodontics. 42 (10), 1441-1445 (2016).</li>
<li>Takahashi, K., MacDonald, D. G., Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+immunoglobulin-synthesizing+cells+in+human+dental+periapical+lesions+by+in+situ+hybridization+and+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+Medicine%22%5BJournal%5D)">Analysis of immunoglobulin-synthesizing cells in human dental periapical lesions by in situ hybridization and immunohistochemistry.</a> Journal of Oral Pathology Medicine. 25 (6), 331-335 (1996).</li>
<li>Lin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterococcus+faecalis+lipoteichoic+acid+regulates+macrophages+autophagy+via+PI3K%2FAkt%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Community%22%5BJournal%5D)">Enterococcus faecalis lipoteichoic acid regulates macrophages autophagy via PI3K/Akt/mTOR pathway.</a> Biochemical and Biophysical Research Community. 498 (4), 1028-1036 (2018).</li>
<li>Wu, Y., Sun, H., Yang, B., Liu, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5-Lipoxygenase+Knockout+Aggravated+Apical+Periodontitis+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">5-Lipoxygenase Knockout Aggravated Apical Periodontitis in a Murine Model.</a> Journal of Dental Research. 97 (4), 442-450 (2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+mRNA+expression+of+RANK%2C+RANKL%2C+OPG%2C+TLR2+and+MyD88+during+apical+periodontitis+progression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and mRNA expression of RANK, RANKL, OPG, TLR2 and MyD88 during apical periodontitis progression in mice.</a> Journal of Applied Oral Science. 26, e20170512(2018).</li>
<li>Barreiros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP2+and+MMP9+are+Associated+with+Apical+Periodontitis+Progression+and+Might+be+Modulated+by+TLR2+and+MyD88%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Dentistry+Journal%22%5BJournal%5D)">MMP2 and MMP9 are Associated with Apical Periodontitis Progression and Might be Modulated by TLR2 and MyD88.</a> Brazillian Dentistry Journal. 29 (1), 43-47 (2018).</li>
<li>Virtej, A., Papadakou, P., Sasaki, H., Bletsa, A., Berggreen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR-2+reduces+while+combined+VEGFR-2+and+-3+signaling+increases+inflammation+in+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">VEGFR-2 reduces while combined VEGFR-2 and -3 signaling increases inflammation in apical periodontitis.</a> Journal of Oral Microbiology. 8, 32433(2016).</li>
<li>De Rossi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cementocytes+Express+Receptor+Activator+of+the+Nuclear+Factor+Kappa-B+Ligand+in+Response+to+Endodontic+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Cementocytes Express Receptor Activator of the Nuclear Factor Kappa-B Ligand in Response to Endodontic Infection in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (8), 1251-1257 (2016).</li>
<li>Rider, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD14+%28Cluster+of+Differentiation+14%29+and+Toll-Like+Receptor+%28TLR%29+4+Signaling+Deteriorate+Periapical+Inflammation+in+TLR2+Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+Records+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Elevated CD14 (Cluster of Differentiation 14) and Toll-Like Receptor (TLR) 4 Signaling Deteriorate Periapical Inflammation in TLR2 Deficient Mice.</a> Anatomy Records (Hoboken). 299 (9), 1281-1292 (2016).</li>
<li>Martins, C. M., Sasaki, H., Hirai, K., Andrada, A. C., Gomes-Filho, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+hypertension+and+periapical+lesion%3A+an+in+vitro+and+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brazillian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">Relationship between hypertension and periapical lesion: an in vitro and in vivo study.</a> Brazillian Oral Research. 30 (1), e78(2016).</li>
<li>Rao, N. J., Wang, J. Y., Yu, R. Q., Leung, Y. Y., Zheng, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Periapical+Diseases+in+Medication-Related+Osteonecrosis+of+the+Jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research+International%22%5BJournal%5D)">Role of Periapical Diseases in Medication-Related Osteonecrosis of the Jaws.</a> Biomedical Research International. 2017, 1560175(2017).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+Periapical+Inflammatory+Condition+Exacerbates+Tooth+Extraction-induced+Bisphosphonate-related+Osteonecrosis+of+the+Jaw+Lesions+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Preexisting Periapical Inflammatory Condition Exacerbates Tooth Extraction-induced Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaw Lesions in Mice.</a> Journal of Endodontics. 42 (11), 1641-1646 (2016).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxic+Preconditioning+Enhances+Dental+Pulp+Stem+Cell+Therapy+for+Infection-Caused+Bone+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxic Preconditioning Enhances Dental Pulp Stem Cell Therapy for Infection-Caused Bone Destruction.</a> Tissue Engineering Part A. 22 (19-20), 1191-1203 (2016).</li>
<li>Eichele, D. D., Kharbanda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+colitis+murine+model%3A+An+indispensable+tool+for+advancing+our+understanding+of+inflammatory+bowel+diseases+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate colitis murine model: An indispensable tool for advancing our understanding of inflammatory bowel diseases pathogenesis.</a> World Journal of Gastroenterology. 23 (33), 6016-6029 (2017).</li>
<li>Choudhary, N., Bhatt, L. K., Prabhavalkar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+animal+models+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology+and+Immunotoxicology%22%5BJournal%5D)">Experimental animal models for rheumatoid arthritis.</a> Immunopharmacology and Immunotoxicology. 40 (3), 193-200 (2018).</li>
<li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clastic+cells+are+absent+around+the+root+surface+in+pulp-exposed+periapical+periodontitis+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Disease%22%5BJournal%5D)">Clastic cells are absent around the root surface in pulp-exposed periapical periodontitis lesions in mice.</a> Oral Disease. 24 (1-2), 57-62 (2018).</li>
<li>Wan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP9+deficiency+increased+the+size+of+experimentally+induced+apical+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">MMP9 deficiency increased the size of experimentally induced apical periodontitis.</a> Journal of Endodontics. 40 (5), 658-664 (2014).</li>
<li>Bezerra da Silva, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MyD88+knockout+mice+develop+initial+enlarged+periapical+lesions+with+increased+numbers+of+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22International+Endod+Journal%22%5BJournal%5D)">MyD88 knockout mice develop initial enlarged periapical lesions with increased numbers of neutrophils.</a> International Endod Journal. 47 (7), 675-686 (2014).</li>
<li>Mehrazarin, S., Alshaikh, A., Kang, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Apical+Periodontitis%3A+Emerging+Role+of+Epigenetic+Regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Dental+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Apical Periodontitis: Emerging Role of Epigenetic Regulators.</a> Dental Clinics of North America. 61 (1), 17-35 (2017).</li>
<li>Metzger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Endodontics+Dentisrty+and+Traumatology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in periapical lesions.</a> Endodontics Dentisrty and Traumatology. 16 (1), 1-8 (2000).</li>
<li>Lungova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth-bone+morphogenesis+during+postnatal+stages+of+mouse+first+molar+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development.</a> Journal of Anatomy. 218 (6), 699-716 (2011).</li>
<li>Zilberstein, L. F., Moens, Y. P., Leterrier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+local+anaesthesia+on+anaesthetic+requirements+for+feline+ovariectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">The effect of local anaesthesia on anaesthetic requirements for feline ovariectomy.</a> Veterinary Journal. 178 (2), 214-218 (2008).</li>
<li>Kaufman, E., Epstein, J. B., Gorsky, M., Jackson, D. L., Kadari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preemptive+analgesia+and+local+anesthesia+as+a+supplement+to+general+anesthesia%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+Progress%22%5BJournal%5D)">Preemptive analgesia and local anesthesia as a supplement to general anesthesia: a review.</a> Anesthesia Progress. 52 (1), 29-38 (2005).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Direct+Pulp-capping+Model+for+the+Evaluation+of+Pulpal+Wound+Healing+and+Reparative+Dentin+Formation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experimentalization%22%5BJournal%5D)">Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice.</a> Journal of Visual Experimentalization. (119), (2017).</li>
<li>Yoneda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+root+canal+treatment+model+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development of a root canal treatment model in the rat.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3315(2017).</li>
<li>AlShwaimi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+in+mouse+periapical+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells in mouse periapical lesions.</a> Journal of Endodontics. 35 (9), 1229-1233 (2009).</li>
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저자는 공개 할 것이 없다

방법은 마우스에 있는 정점 치주염의 유도를 위해 여기에서 소개됩니다. 이 방법의 목표는이 염증 과정의 메커니즘과 결과를 연구하기위한 정점 치주염 상태를 이용하는 것입니다. 정점 치주염은 뿌리가 완전히 발달되는 나이인 6-8주령생에서24세로유도되었다. 이 모델에서 치주염을 일으키기 위해 마우스 하악골의 치아 펄프는 치과 용 버를 사용하여 노출됩니다. 쥐의 경구 식물군 (SPF 조건에서)의 박테리아가 치아의 펄프와 근관을 침범하여 펄프 괴사를 일으키고 정점 조직에 LPS를 분비하여 정점 염증을 유발합니다.
이 절차를 수행할 때는 다음 중요한 단계에 주의하십시오. 펄프 노출 시 동물의 정확한 위치는 절차의 성공에 매우 중요합니다. 중요한 단계는 펄프의 적절한 노출입니다. 운하 노출이 부족하면 치과 교량 형성이 발생할 수 있으며, 이로 인해 시술의 실패와 AP를 생성할 수 없게 될 수 있습니다. 펄프 노출 하는 동안, 부...

이 방법의 목적은 자연 미생물로 정점을 오염시킴으로써 마우스에서 정점 치주염을 유도한 다음이 병리학 적 과정의 다양한 특성을 연구하는 것입니다.
정점 치주염 (AP)은 치아 뿌리를 둘러싼 치주 조직에서 염증성 성질의 일반적인 병리학입니다. 이 치과 질환은 심한 통증을 유발할 수 있으며 치과 의사가 치료해야합니다. 치료 옵션은 근관 치료 (기본 또는 보조), endodontic 수술, 치아 추출, 또는 임상 및 방사선 연구 결과에 따라 후속, 임상의의 의견. 이 염증 과정의 메커니즘은 수십 년동안 연구되었지만 1,2,3은아직 포괄적으로 이해되지 않습니다. 이 병리학의 심각성을 고려할 때, 따라서 근본적인 본질을 다루는 연구에 대한 명확한 필요성이 있습니다. 따라서 AP 의 연구가 가능한 시스템은 과학적으로 큰 관심사입니다.
AP는 국부 조직과 면역 체계를 수반하는 복잡한 병리학 적 과정이기 때문에 시험관 내 연구는 프로세스의 완전한 이해를 위해 충분하지 않습니다. 이 질병의 임상 샘플의 연구는 또한 윤리적 한계와 다른 사람들과 다른 임상 단계사이의 상당한 가변성으로 인해 문제가 4,5,따라서 생체 내 모델의 필요성. 이들 모델은 치과 펄프를 오염에 노출시키고 신체의 염증 반응을 관찰하여 근문 조직에서 이러한 자극을 관찰하는 개념을 기반으로6,7. 일반적인 생체 내 모델은 설치류 또는 개와 같은 더 큰 동물을 포함합니다. 소형 치아를 가진 아주 작은 동물인 마우스 를 치료하는 임상 적 과제에도 불구하고 마우스 모델의 장점은 중요합니다 : 실질적으로 마우스와 함께 일하는 것은 기술적으로 간단하며 가장 비용 효율적입니다. 과학적으로, 마우스는 쉽게 사용할 수있는 유전 및 분자 도구와 잘 연구 된 게놈과 잘 연구 된 동물 모델입니다. 실제로, 이전 연구는 정점 치주염8,9,10,11에관여하는 염증성 및 뼈 흡수 신호 및 세포를 연구하기 위한 마우스 모델을 사용했다. 따라서 AP 연구에 마우스 모델을 사용하는 방법에 대한 명확한 프로토콜이 필요합니다. 여기서는 이러한 프로토콜을 설명합니다.
여기서 설명된 프로토콜은 녹아웃(KO) 마우스를 연구하고 특정 유전자의 부족이 치과 염증에 어떻게영향을 미치는지 배우기에 적합하다는 큰 장점을 갖는다 7,12. 이 프로토콜의 다른 유용한 응용 프로그램은 정점 치주염의 개발에 약물 및 전신 조건의 연구의 연구를 포함13,턱의 골괴사 개발에 정점 치주염의 효과14 , 도 15 및 골재생을 위한 줄기세포 치료제16.
이 프로토콜은 또한 국소 염증을 연구하는 모델로 일반화 될 수있다. 염증 과정을 연구하기 위해, 여러 마우스 모델이 개발되었으며, 이는 예를 들어 유도된 대장염 또는 관절염17,18을포함한다. 이 모델은 전신 효과가 있으며 동일한 동물에 내장 된 제어가 없습니다. 염증없이 반대측 조절을 포함하는 유도 된 치주염에 대한 모델은 이러한 한계를 극복하는 장점이 있습니다14,19.
아래에 설명된 프로토콜은 따라서 국부적인 염증 과정에 관심이 있는 연구자를 위해 유용합니다. 이 염증의 통제 된 특성, 특정 위치에 대한 감금 및 반대쪽 제어 치아는 모두이 과정에 관련된 메커니즘을 연구하는 데 이 프로토콜을 가치있게 만듭니다. 더욱이, 프로토콜은 근문 염증의 임상적 측면에 관심이 있는 연구자들에게 유용하다. 마우스 모델은 마우스 모델에서 유전자 조작을 용이하게 수행할 수 있다는 장점 외에도, 질병의 다양한 변수를 연구하고, 근문 염증에서 특정 유전자의 활성을 조사하는 데 이상적입니다.
기술적으로, 임상 절차는 마우스 치아의 작은 크기로 인해 수행하기가 어렵습니다. 위치 지정, 필요한 장비 및 성능에 대해 알아보려면 이 절차를 시각화하는 것이 좋습니다.

<table><tbody><tr><td>아티파메졸 염산염</td><td>Eurovet 동물 건강</td><td>CAS 104075-48-1</td><td></td></tr><tr><td>ATR</td><td>덴스플라이</td><td>테크니카</td><td></td></tr><tr><td>차단 기계</td><td>라이카</td><td>EG1150H</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>베트마켓</td><td>163451</td><td></td></tr><tr><td>임상 현미경/쌍안</td><td>올림푸스</td><td>Sz61</td><td></td></tr><tr><td>치과 버</td><td>Komet 치과</td><td>ZR8801L 315 008</td><td></td></tr><tr><td>치과 주걱</td><td>프리미어</td><td>1003737</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>JT 베이커</td><td>8993</td><td></td></tr><tr><td>엔텔란</td><td>수은</td><td>1.07961</td><td></td></tr><tr><td>에오신 Y 용액, 알코올</td>성 <td>시그마</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린 용액, Mayer의</td><td>SIGMA MHS</td><td>16</td><td></td></tr><tr><td>케타민 염산염</td><td>Vetoquinol</td><td>CAS 1867-669</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride (cepetor)</td> <td>CP-pharma GmbH</td><td>CAS 86347-15-1</td><td></td></tr><tr><td>Mepivacaine HCl 3 %</td> <td>Teva</td><td>CAS 96-88-8</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 브러시 - 조정 가능한 정밀 애플리케이터</td><td>PARKELL</td><td>S379</td><td></td></tr><tr><td>micro-ct 스캐너</td><td>scanco</td><td>uCT 40</td><td></td></tr><tr><td>파라 핀</td><td>Leica</td><td>39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>SIGMA</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>EMS</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>클로람페니콜 눈 연고 (5%)</td><td>Rekah 제약</td><td>CAS 56-75-7</td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td><td>WAM</td><td>Ref-CT</td><td></td></tr><tr><td>자일라진</td><td>Eurovet 동물 건강</td><td>CAS 7361-61-7</td><td></td></tr><tr><td>크실렌</td><td>가돗</td><td>CAS 1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 있는 정점 치주염 유도

Inducing Apical Periodontitis in Mice

국소 유도 염증에 관여하는 메커니즘은 여러 가지 사용 가능한 동물 모델을 사용하여 연구 될 수있다. 이들 중 하나는 정점 치주염 (AP)의 유도입니다. 정점 치주염은 치아 뿌리를 둘러싼 치주 조직에서 염증성 성질의 일반적인 병리학입니다. 이 병리학의 특성과 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해서는 마우스에서 절차를 수행하는 것이 유리합니다. 이 치과 펄프가 노출 될 때까지 이 치과 성 염증의 유도는 마우스 치아로 드릴링하여 달성됩니다. 다음으로, 치아 펄프는 시간이 지남에 따라 자연 구강 세균총에 의해 오염되어 정점 치주염을 유발하여 노출됩니다. 이 기간 이후에는 동물을 희생시키고 치아와 턱뼈를 다양한 방법으로 분석할 수 있습니다. 일반적인 분석은 마이크로 CT 화상 진찰 (뼈 재흡수를 평가하기 위하여), 조직학적 염색, 면역 조직 화학 및 RNA 발현을 포함합니다. 이 프로토콜은 균일 한 조건으로 생체 내 실험 환경에서이 염증 과정을 더 잘 이해하기 위해 경구 생물학 분야의 연구에 유용합니다. 절차는 마우스와 고립 된 턱의주의 깊은 취급을 필요로하며, 기술의 시각적 데모가 유용합니다. 유도 된 치주염으로 이어지는 절차의 모든 기술적 측면과 마우스 모델의 특성화가 입증됩니다.

실험 단계의 흐름도는 그림1에 표시됩니다. 프로토콜에서 언급 한 바와 같이, 마우스는 마취되고, 한쪽에 그들의 첫 번째 하악 대구치 펄프 노출까지 드릴, 반대 측 치아는 대조군으로 남아있는 동안. 다음으로, 치아는 42 일 동안 구강 식물에 의해 오염되어 모니터링되고 진통제를 받습니다. 42 일 후에 마우스는 안락사되고 치아와 인접한 턱은 분석을 위해 취합니다.
도 2는 첫 번째 우측 몰 펄프 노출 후 마우스 하악의 임상 이미지를 보여 준다. 도 2A에서 전체 하악골은 도시되고, 도 2B의 인셋은 처리된 제1 우측 어금니의 확대를 나타낸다. 왼쪽 첫 번째 대구치가 대조군으로 ...

여기서, 우리는 마우스에서 국소치성 치주염을 유도하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 마우스의 치아에 구멍을 뚫고 국소 염증을 유발하기 위해 펄프를 노출시키는 방법을 보여줍니다. 마이크로 CT 및 조직학과 같은 이 염증의 본질을 조사하는 분석 방법도 입증됩니다.

The mechanisms involved in local induced inflammation can be studied using several available animal models. One of these is the induction of apical ...

당사의 프로토콜은 접근 가능하고 통제된 마우스 모델에서 복피 주염을 연구할 수 있습니다. 따라서 이 프로토콜은 환자 샘플 또는 체외 모델보다 이점이 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마우스가 잘 연구되었으며 시설 요구 사항 측면에서 기술적으로 간단하며 비용 효율적이라는 것입니다.이 절차는 치아의 작은 치수로 인해 도전적이기 때문에 기술의 위치 및 성능에 대해 배울 수있는 절차를 시각화하는 것이 좋습니다. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 폐쇄 셀 압출 폴리스티렌 폼 표면에 지배적 인 손 측에 마우스를 배치하고 테이프로 발을 고정. 한 쌍의 절개 당 단일 고무 밴드를 사용하고, 닫힌 셀 압출 폴리스티렌 폼 표면에 고정 긴 바늘, 입을 열어 소품.폼에 테이프로 붙인 닫힌 집게를 사용하여 오른쪽 뺨을 후퇴시킵니다. 그리고 현미경과 광원 아래에 거품과 마우스를 배치합니다. 그런 다음, 치과 주걱을 사용하여 혀를 철회하고 27 게이지 바늘을 사용하여 제1 하악 골수 어금니에 인접한 점막 주름에 국소 마취제 25~50 마이크로리터를 주입한다.주사 부위 주위의 조직 부종을 관찰해야 합니다. 펄프를 노출하려면, 펄프 뿔이 덴틴을 통해 볼 때까지 첫 번째 오른쪽 하악 형 어어의 폐색 부분을 드릴, 분당 800 라운드의 속도로 라운드, 고속 다이아몬드 0.8 밀리미터 치과 트림장착 모든 적합한 치과 모터를 사용합니다. K 또는 H 파일, 번호 8 또는 번호 10을 사용하여 펄프를 관통하고 매관및 단단 펄프 뿔을 덮는 덴틴을 부러뜨려 파일을 뿔에 삽입할 수 있도록 합니다.파일로 개구부를 넓히면서 펄프 내부의 파일로 작업을 계속하고, 펄프에서 출혈은 일반적으로 트림으로 치아의 날카로운 가장자리를 둘러싸고 관찰되며 실험 중 통증을 줄이기 위해 치아를 제거합니다. 마이크로 브러쉬를 사용하여 이물질을 청소하십시오. 그리고 대조군 왼쪽 첫 번째 하악 어어를 제어로 둡니다.시술 후 처음 3 일 동안, 동물을 무게와 하루에 한 번 부프레노르핀의 킬로그램 당 0.1 밀리그램을 주입. 앞으로 42일 동안 동물을 계속 모니터링하여 일주일에 2~3회 계량 및 일반 행동 평가를 실시한다. 그리고 후속 기간 동안 케이지 바닥에 페트리 접시에 물로 부드럽게 식품 펠릿을 제공합니다.실험의 끝에서, 수술 가위와 집게를 사용하여 처리된 및 비처리 측모두에 3개의 어금니를 포함하는 턱의 부분을 수집합니다. 그리고 집게를 사용하여 가능한 한 많은 연조직을 벗겨 내어 대부분 뼈와 치아를 샘플에 남깁니다. PBS에서 조직을 간략하게 헹구는다.24~48시간 동안 4퍼센트 의 파라포름알데히드에 고정하기 전. 그런 다음 신선한 PBS에서 샘플을 세 번 헹구습니다. 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영의 경우, 또는 마이크로 CT 분석은 스캐너 단계에서 PBS의 1.5 밀리리터를 포함하는 12 밀리미터 직경의 튜브에 수확된 조직을 배치합니다.시료를 지향하여 치아와 뿌리의 부칼 또는 언어 표면이 튜브의 바닥에 평행하게 놓이도록 합니다. 스폰지를 사용하여 샘플을 분리하십시오. 그리고 유연한 필름으로 튜브의 상단을 덮습니다.제어 파일을 선택하고 에너지를 70킬로볼트로 설정하고 강도를 114 마이크로 앰프로 설정하고 해상도를 6 마이크로미터 큐브 복셀 크기로 설정합니다. 스카웃 뷰를 클릭합니다. 이미지가 나타나면 참조선을 클릭하고 각 샘플 후 검사 추가를 클릭하여 스캔을 위해 샘플 영역을 표시합니다.모든 샘플이 표시되면 작업 목록으로 이동하여 상호 작용 작업 시작을 선택합니다. Micro-CT 슬라이스의 윤곽을 위해, 코로나 펄프, 두 운하의 복사 펄프, 그리고 두 개의 정맥 포멘이 존재하는 치아의 대략적인 중간을 나타내는 슬라이스를 선택합니다. 윤곽 패널을 클릭하고, 황실 뿌리 정점의 단층 지점에서 시작하여, 심근 뿌리 정점의 매혹적인 경계를 통해, 정변 파퀴 어큐어 영역에 정황 테두리를 정관적으로 표시, 매혹적인 뿌리의 황실 테두리를 따라, 그리고 황량한 뿌리의 매혹적인 경계, 그리고 황량한 뿌리의 매혹적인 경계.결과 윤곽을 복사하여 붙여넣은 다음 중간 슬라이스의 양쪽에 배치된 5개의 슬라이스로 윤곽을 조정합니다. 각 샘플에 대해 표시된 윤곽의 조직 볼륨을 계산하려면 Micro-CT 평가에서 작업을 선택하고 3D 평가를 클릭합니다. 그런 다음 3D 평가 창에서 필터 를 선택하고 선택하여 조직 볼륨을 계산합니다.Micro-CT 분석의 끝에서, 10 일 동안 EDTA의 1 밀리리터를 포함하는 마이크로 원심분리기 튜브에 스캐너에서 조직을 전송합니다. 탈칼화의 끝에서, 농도 당 1 시간 동안 증가 에탄올 농도를 포함하는 조직학적 카세트에 샘플을 배치합니다. 두 번째 에탄올 침수 후, 두 개의 1 시간 침수에 대한 자일렌으로 샘플을 전송, 자일렌이 증발 할 수 있도록 하룻밤 화학 후드에 60 섭씨 액체 파라핀으로 카세트를 전송하기 전에.다음 아침, 탈수된 샘플을 금형 의 바닥과 평행하게 향하여 파라핀에 샘플을 포함시키기 위한 조직학적 차단 기계에 배치합니다. 단면을 얻으려면 파라핀 블록 샘플을 마이크로톤 절삭 블록에 고정하고 관심 있는 조직에 도달할 때까지 샘플을 다듬습니다. 치아의 어떤 부분이 보이면 6 마이크로미터 두께의 단면을 얻기 시작하여 관상 및 복사 펄프및 압정 포먼을 포함하는 간경부 섹션까지 절단 각도를 조정합니다.여기에, 전체 처리 하악이 표시됩니다. 처리 된 첫 번째 오른쪽 어어의 배율, 매심과 말단 펄프 뿔과 운하 입구 모두의 노출의 관찰을 할 수 있습니다. 마이크로 CT 이미징은 매혹적인 펄프 노출과 뼈 배반의 매중 및 단상 적 발적 영역의 시각화를 허용합니다.실제로, 조직 부피의 유의한 회리골 흡수는 대조군과 비교하여 처리된 치아에서 측정된다. 조직학적 분석은 처리된 치아에서 치과 펄프 자체가 대조군 펄프 조직에 비해 H 및 E 염색 후 명확하게 관찰될 수 있는 괴사를 제시한다는 것을 나타낸다. 또한, 중요한 것은, 처리된 치아의 periapical 영역에서, 면역 세포로 구성된 심변 병변이 관찰되고, 이는 대조체 치아에 결석한다.올바른 위치 지정으로 펄프 노출 중에 마우스를 올바르게 배치하여 동물의 입에 대한 좋은 액세스와 최적의 결과를 가능하게하는 것이 중요합니다. 면역조직화학적 조직 염색 및 팩스와 같은 periapical 염증 분석의 추가 방법은 이러한 프로토콜에 따라 수행될 수 있다. 이 프로토콜은 치과 연구뿐만 아니라 면역 학적 연구를위한 중요한 데, 그것은 내장 된 내부 제어와 국소 유도 염증에 대한 모델을 제공하기 때문에.

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