Name: 골격 근 생검 절차에서 인간 근육 선조 세포의 격리, 배양, 특성화 및 분화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 s
Description: 학습하세요 골격 근 생검 조직에서 인간 근육 선조 세포를 분리하고 배양하는 방법을. 이 기술은 근육 재생 연구와 세포 증식 및 분화 능력 분석에 활용됩니다.

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저자는 형광 활성화 세포 분류에 그들의 도움을 위한 코넬 대학, 생명 공학 자원 센터 화상 진찰 시설에 감사드립니다. 우리는 또한 참가자 모집과 골격 근육 생검을 실시에 대한 에리카 벤더와 그녀의 도움 몰리 겔러에게 감사드립니다. 마지막으로, 우리는 그들의 시간과 연구에 참여에 대한 참가자들에게 감사드립니다. 이 작품은 수상 번호 R01AG058630 (B.D.C. 및 A.E.T.에 따라 국립 보건원의 노화에 대한 국립 연구소에 의해 지원되었다), 의학 연구를위한 글렌 재단과 주니어 교수에 대한 노화 연구 보조금을위한 미국 연맹에 의해 (B에 . DC), 그리고 코넬 여성대통령위원회(A.E.T.)에 의해.

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

1 차적인 hMPCs는 골격 근육 생물학 및 재생 과정을 이해하는 데 사용되는 중요한 연구 모델입니다. 추가적으로, hMPC는 치료에 이용될 가능성이 있습니다. 그러나, 인간10으로부터 유래된 세포의 제한된 이해를 포함하여 연구 및 치료 모두에 대한1차 hMPC 사용에 대한 인식된 과제가 있다. 또한 hMPC의 사용 가능성을 제한하고 연구 결과11에영향을 미칠 수 있는 기증자 문화 사이에서 확장 능력에 있는 큰 정도의 변이가 있습니다. 예를 들어, 최근에는 이 프로토콜에 기재된 방법을 사용하여 단리된 hMPC가 확장 용량에서 다양한 세포를 생산한다는 것이 입증되었으며, 이는 성별 또는연령 11과일치하지 않는 전사 프로파일에 의해 구동되었다.
여기서, 우리는 myotube로의 분화를 포함하여 다수의 다운스트림 애플리케이션에 대해 충분한 수량으로 hMPC를...

골격 근은 인체에서 가장 큰 장기 시스템으로 전신 질량의 30-40 %를 차지합니다1. 운동에서 잘 알려진 역할 외에도 골격 근은 체온과 자세를 유지하고 전신 영양소 항상성에 중심적인 역할을합니다. 인간 참가자, 동물 및 세포 배양 모델과 관련된 연구는 모두 골격 근 생물학 및 재생과 관련된 질문을 해결하는 데 가치가 있습니다. 인간 1차 근육 전구 세포(hMPC)의 분리 및 배양은 인간 샘플에 세포 배양 기술 및 조작을 허용하는 견고한 모델을 제공한다. hMPC를 사용하는 장점은 각 기증자2,3으로부터유전및 대사 표현형을 유지한다는 것입니다. 기증자 표현형의 유지 보수는 연구원이 myogenic 프로세스에 있는 개별적인 변이를 검토하는 것을 허용합니다. 예를 들어, 우리는 hMPC 인구 확장 용량 4의 연령 및 성별 관련 차이를식별하기 위해 hMPC 특성화 방법을 사용했습니다.
이 프로토콜의 목적은 골격 근 생검 조직으로부터 hMPC를 분리, 배양, 특성화 및 구별하는 기술을 자세히 설명하는 것입니다. hMPC를 설명하고 hMPC 격리5,6에대한 잠재적 인 세포 표면 제조 자를 식별 한 이전 작업을 기반으로이 프로토콜은 hMpc의 특성화에 격리를 연결하여 지식의 중요한 격차를 채웁니다. 또한, 이 프로토콜에 포함된 상세한 단계별 지침은 hMPC에 대한 사전 경험이 제한된 사람들을 포함하여 광범위한 과학 청중에게 hMPC 격리 및 특성화에 접근할 수 있도록 합니다. 우리의 프로토콜은 세포 집단을 추적하기 위하여 화상 진찰 세포계의 사용을 기술하는 첫번째 중 입니다. 새로 설계된 이미징 세포계는 최첨단, 높은 처리량 및 마이크로플레이트 기반으로, 몇 분 내에 배양 용기의 각 우물에서 모든 세포의 라이브 세포 이미징, 세포 카운팅 및 다채널 형광 분석을 가능하게 합니다. 이 시스템은 배양에 최소한의 중단으로 전체 세포 집단의 증식 및 생존력의 동적 변화를 신속하게 정량화할 수 있습니다. 예를 들어, 우리는 상이한 공여자로부터 유래된 각 배양물의 성장 역학을 결정하기 위해 시험관 내에서 연속적인 날에 합류의 객관적인 척도를 수행할 수 있다. 문헌의 많은 프로토콜, 특히 MPC의 분화를 수반하는 프로토콜은, 분화 또는 치료를 개시하기 전에 세포가정의된 수준의 합류에 도달하도록 요구한다 7. 우리의 방법은 연구원이 편견, 비 주관적인 방식으로 처리를 시작하는 것을 허용하는 문화 용기에 있는 각 우물의 합류의 객관적인 결정을 허용합니다.
과거에는 1차 hMPC를 사용하는 주요 제한은 실험에 사용할 수 있는 셀 수를 제한하는 낮은 수율이었습니다. 우리와 다른 사람들은 골격 근 생검 조직에서 MPC의 수율을 보여 주었다 조직의 밀리그램 당1-15 MPC (그림 1)8. 우리의 프로토콜은 형광 활성화 세포 선별 (FACS)으로 정제하기 전에 세포의 네 개의 통로를 허용하기 때문에, 소량의 생검 조직 (50-100 mg)에서 파생 된 극저온 보존 된 hMPC 수율은 연구 목표를 해결하기에 충분합니다. 여러 실험이 필요합니다. 우리의 FACS 프로토콜은 ~ 80 % 순수 (Pax7 양성) MPC 인구를 생성하므로 우리의 프로토콜은 수율과 순도 모두에 최적화되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>0.25% 트립신, 2.21mM EDTA</td><td>Corning</td> 세포 <td>배양 용기에서 부착성 hMPC를 제거하는 데 사용되는</td><td>25-053-Cl</td> 트립신</tr><tr><td>10cm 세포 배양 플레이트</td><td>VWR</td><td>664160</td><td>hMPC 배양에 사용되는</td></tr><tr><td>15mL Falcon 튜브</td><td>Falcon</td><td>352196</td><td>hMPC 분리 및 배양 프로토콜 전반에 사용되는 15mL 원추형 튜브</td></tr><tr><td>24 웰 세포 배양 플레이트</td><td>Grenier Bio-One</td><td>662 160</td><td>플레이트 hMPCs</td></tr><tr><td>7-AAD 생존력 염색 솔루션</td><td>eBioscience</td><td>00-6993-50</td><td>FACS 분류 중 살아있는 세포를 식별하기 위한 생존력 염색</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-human CD29, 클론: TS2/16</td><td>BioLegend</td><td>303016</td><td>FACS용 접합 항체&nbsp;</td></tr><tr><td>검은색 96웰 세포 배양 플레이트</td><td>Grenier Bio-One</td><td>655079</td><td>96웰 세포 배양 플레이트</td></tr>는 <tr><td>hMPC 배양을 추적하는 데 사용되는</td><td>Celigo S Celigo S</td><td>Nexcelcom Bioscience</td><td></td> 이미징 세포분석기</tr>를 사용한 형광 이미징에 이상적 <tr><td>Cell Strainer</td><td>VWR</td><td>352350</td><td>세포 스트레이너는 근육 생검 처리 중 큰 파편을 제거합니다</td></tr>. 콜라<tr><td>겐 I형(Rat 꼬리)</td><td>세포</td><td>배양 플레이트 코팅을 위한 Corning 354236 Collagen&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase D</td><td>Roche</td><td>11 088 882 001</td><td>골격근 생검 조직에서 콜라겐 및 기타 결합 조직의 분해에 사용</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>VWR</td><td>WN182</td><td>hMPCs</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Sigma Life Sciences</td><td>D4693</td><td>골격근 생검 조직의</td></tr> <tr><td>효소 소화에 사용되는 프로테아제Dulbecco's Modified Eagle Medium Low Glucose Powder</td><td>Gibco</td><td>31600-034</td><td>근육 생검 처리를 위한 저포도당 DMEM</td></tr><tr><td>Dulbecco의 Phosphate Buffered</td><td>Saline Gibco</td><td>21600-010</td><td>PBS 근육 생검 처리</td></tr><tr><td>EDTA Disodium Salt Dihydrate</td><td>J.T. Baker</td><td>4040-01&nbsp;</td><td>FACS 버퍼에 필요</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>VWR</td><td>89510-186&nbsp;</td><td>hMPC 성장 배지에 사용되는 소 태아 혈청</td></tr><tr><td>Ham's F12</td><td>Gibco</td><td>21700-026</td><td>hMPC용 기본 배지</td></tr><tr><td>열 비활성화 말 혈청</td><td>Gibco</td><td>26-050-070</td><td>hMPC 분화 매체를 만드는 데 사용되는 말 혈</td></tr><tr><td>청</td>계 <td>iNCyto</td><td>DHC-N0105</td><td>세포 계수에 사용</td></tr><tr><td>동면 골</td>격근 생검을 보존하기 위한 <td>Gibco</td><td>A1247501</td><td>배지 조직</td></tr><tr><td>Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate</td><td>Life Technologies</td><td>H21492</td> Celigo S Isopropanol Fisher Scientific A416P-4를 <td>사용하여 모든 세포를 식별하기 위한 DNA 염색</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>hMPC의 제어 속도 동결에 사용</td></tr><tr><td>Moxi 버퍼</td><td>Orflo</td><td>MXA006</td><td>자동 세포 계수기용 버퍼</td></tr><tr><td>Moxi 카세트</td><td>Orflo</td><td>MXC002</td><td>자동 세포 계수기용 Cassesttes</td></tr><tr><td>Moxi z Mini 자동 세포 계수기</td><td>Orflo</td><td></td><td>자동 세포 계수기</td></tr><tr><td>Mr. Frosty 냉동 용기</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>5100-0001</td><td>상업적으로 이용 가능한 제어 속도 세포 동결 용기</td></tr><tr><td>Normal Goat Serum (10%)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50062Z</td><td>FACS 완충액</td></tr><tr><td>에 사용되는 염소 혈청PE-Cy7 마우스 안티-휴먼 CD56, 클론: B159</td><td>BD Pharmingen</td><td>557747</td><td>FACS용 접합 항체&nbsp;</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신 100x 용액</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td>항생제</td></tr><tr><td>Propidium iodide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P3566</td><td>DNA 염색을 사용하여 Celigo</td></tr><tr><td>S 재조합 인간 염기 섬유아세포 성장 인자</td><td>Promega</td><td>G5071</td> Supplement를 사용하여 죽은 세포를 식별<td>하기 위한 <h/em>MPC 성장 배지 내 자발적 분화 방지</td></tr><tr><td>회수 세포 배양 동결 배지&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12648-010</td><td>cryoperseve 근육 생검 슬러리에 사용되는 배지</td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233-3</td><td>Ham의 F12</td></tr><tr><td>멸균 원형 바닥 5 mL 튜브</td>에 추가 <td>VWR</td><td>60818-565</td><td>FACS</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-2222-42</td><td>보상 비드 포트 교정 흐름 FACS 설정</td></tr></tbody></table>

골격 근 생검 절차에서 인간 근육 선조 세포의 격리, 배양, 특성화 및 분화

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

1 차적인 인간 조직 및 세포의 사용은 골격 근 재생 과정과 같은 생물학적 및 생리적 과정의 조사에 이상적입니다. 수집된 조직으로부터의 낮은 세포 수율및 많은 정도의 공여자 이질성을 포함하여 골격근 생검에서 유래한 인간 1차 성인 줄기 세포, 특히 인간 근육 전구 세포(hMPC)와 함께 일하는 데 있어 인식된 과제가 있습니다. 문화 간의 성장과 죽음의 매개 변수. 이질성을 실험 설계에 통합하려면 더 큰 샘플 크기가 필요하지만, hMPC 확장 용량의 가변성을 뒷받침하는 메커니즘을 식별할 수 있으므로 더 잘 이해할 수 있습니다. 골격 근육 재생의 이질성. 배양물의 확장 능력을 구별하는 새로운 메커니즘은 골격 근 재생을 개선하기 위한 치료법의 개발로 이어질 가능성이 있다.

인간의 근육 조직으로부터의 hMPC 격리의 대표적인 유동 세포분석 결과는 도1에서 볼 수 있다. hMPC는 죽은 세포 또는 파편을 제거하기 위해 측면 산란 및 전방 산란을 기반으로 한 첫 번째 게이팅 이벤트로 식별 할 수 있으며 7-AAD에 대해 부정적이며 따라서 실행 가능한 세포만 선택합니다. 세포 표면 마커 CD56 및 CD29 모두에 대해 양성 세포의 선택은 hMPC 집단을 나타낸다. 60 mg의 생검은 약 75-250 hMPC를 제공합니다.
대표적인 합류 스캔은 그림 2A에나와 있습니다. 도 2B의 녹색 윤곽선은 이미징 세포계에 의해 생성되었고, 이미징 세포계가 선택한 분석 설정에 기초하여 어떻게 ...

우리는 골격 근 생검 조직에서 얻은 인간 1 차적인 근육 전구 세포 (hMPCs)를 분리, 배양, 특성화 및 분화하는 기술을 제시합니다. 이러한 방법을 통해 획득되고 특징지어지는 hMPC는 인간 근생 및 골격 근 재생과 관련된 연구 질문을 이후에 해결하는 데 사용될 수 있다.

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

골격 근 재생을 조절 하는 인간의 근육 전구 세포를 격리 하는 우리가 기증자 가변성을 유지 하면서 재생 프로세스의 기초 프로세스를 조사 할 수 있습니다. 이 기술은 소량의 조직과 소수의 세포를 사용하여 그들의 phenotypic 분석에서 얻어지는 인간 근육 전구 세포의 큰 수확량을 허용합니다. 이 방법은 특히 인간의 근육 전구 세포를 분리하여 증식 및 분화 기능을 추적하고 이러한 데이터를 골격 근육 재생 과정에 연관시키도록 설계되었습니다.이 매우 간단한 기술의 가장 어려운 측면은 모든 단계가 세포의 수율과 순도를 최적화하기 위해 재현적으로 수행되도록하는 것입니다. 셀의 성공적인 격리를 위해 완료해야 하는 여러 단계가 있습니다. 몇 가지 단계는 시각적으로 관찰되었는지 쉽게 이해할 수 있습니다.생검 조직에서 인간의 근육 전구 세포를 분리하려면 근육 조직을 멸균 조건하에서 멸균 페트리 접시에 넣고 멸균 메스를 사용하여 조직을 1mm 큐브 조각으로 다진다. 모든 조직이 다진 경우, PBS의 10 밀리리터를 포함하는 15 밀리리터 튜브로 조각을 전송하고, 조직을 방해하지 않고 신중하게 상퍼를 심기 전에 조직이 중력에 의해 정착 할 수 있도록. 방금 입증 된 대로 두 번째로 조각을 세척 한 후 PBS를 저혈당 덜벡코의 수정 된 독수리 매체의 10 밀리리터로 대체하십시오.조직이 해결된 후 상체를 제거하고 소화 배지의 3 밀리리터로 조각을 다시 중단합니다. 조직을 섭씨 37도에서 30분간, 10분마다 근육 조각을 트리튜레이션하여 1밀리리터 세로지피펫을 장착합니다. 인큐베이션이 끝나면 83마이크로리터의 추가 소화 배지와 24마이크로리터의 디스파스 용액을 샘플에 추가하고, 균일한 슬러리가 이루어질 때까지 와이드 보어 파이펫 팁으로 5~10분마다 조직을 세타게 한다.균일 한 슬러리는 인간의 근육 전구 세포의 최대 복구에 중요합니다. 슬러리가 표준 1, 000 마이크로리터 파이펫 팁을 통과하지 못하면 계속 소화하십시오. Pax7 양성 세포를 격리하려면 프로토콜에 따라 세포를 얼룩및 게이트합니다.CD56, CD29 이중 양성 인간 근육 전구세포를 100마이크로미터 노즐의 압력으로 100마이크로미터 노즐을 제곱인치당 20파운드의 압력으로 형광 활성화 셀 선별 버퍼의 300마이크로리터 쿠션을 포함하는 수집 튜브로 정렬한다. 그런 다음 정렬된 인간 근육 전구 세포를 3.5배 10에서 제4 세포에 3.5배 10분에서 제곱계 제곱 농도로 미리 데운 성장 배지를 포함하는 콜라겐 코팅 24웰 플레이트로 시드한다. 합류 스캔을 수행하려면 플레이트를 이미징 사이토미터에 로드하고 새 스캔 및 플레이트 범주, 플레이트 프로파일 및 플레이트 ID 를 선택하고 인플루언서 및 인플루언션 1을 선택하고 볼 수 있는 웰을 선택합니다.셀이 배경에 비해 흰색으로 보이는 초점 평면을 찾아 서설명서 등록을 선택합니다. 마우스를 사용하여 스캔해야 하는 모든 우물을 강조 표시하고 시작 스캔을 선택합니다. 전체 웰 영역이 자동으로 스캔됩니다.플레이트 및 셀 유형에 최적 분석 설정을 선택하고 시작 분석을 선택합니다. 화상 진찰 세포계를 사용하여 처음에 합류를 측정하십시오. 그런 다음 이미징 세포계에 세포를 계산하려면 각 우물의 배지를 염색 용액 200 마이크로리터로 교체하십시오.섭씨 37도에서 15분 후, 스테인딩 액액을 신선한 Ham의 F12 100 마이크로리터로 교체하십시오. 플레이트를 이미징 사이토미터로 반환하고 응용 프로그램에서 셀 생존 가능성과 라이브 데드 토탈을 선택합니다. 라이브 채널은 밝은 필드 이미지가 될 것입니다, 죽은 채널은 프로피듐 요오드 스테인링을 표시합니다, 총 채널은 Hoechst 될 것입니다 33342 염색.포커스 설정에서 자동 등록을 클릭합니다. 총 채널에서 채널을 파란색으로 설정합니다. 포커스 찾기를 사용하여 핵을 포커스로 가져오고 간격띄우기를 클릭하여 포커스를 선택합니다.데드 채널 에서 채널을 빨간색으로 설정하고 포커스 찾기를 사용하여 죽은 세포를 집중시합니다. 오프셋 설정을 클릭하여 포커스를 선택하고 스캔 시작을 선택하여 검사를 시작합니다. 그런 다음 플레이트 및 셀 유형에 적합한 분석 매개 변수를 선택하고 분석을 시작하도록 선택합니다.분석이 완료되면 분석이 셀을 적절하게 계산했는지 시각적으로 확인합니다. 스캔 및 분석이 만족스러운 경우 플레이트를 인큐베이터로 반환하거나 분석 매개 변수를 재구성하거나 수정합니다. 인간 근육 전구 세포는 죽은 세포 또는 파편을 제거하기 위하여 측 및 전진 분산 지역에 근거를 둔 첫번째 게이징 사건에 의해 확인될 수 있고, 7-AAD에 대하여 부정적인 세포만을 선택하 및 그러므로 실행 가능합니다.CD56 및 CD29 세포 표면 마커 모두에 대해 양성 세포는 인간 근육 전구 세포 집단을 나타낸다. 인간 근육 전구 세포는 또한 그들의 Pax7 표현에 의해 확인될 수 있습니다. 실제로 Pax7은 FACS 이후 총 인구가 풍부하며 여러 구절을 통해 유지됩니다.여기서, 대표적인 합류 스캔이 표시됩니다. 녹색 윤곽선은 이미징 세포계에 의해 생성되었으며 이미징 세포계가 선택한 분석 설정에 따라 인플루엔지를 결정하는 방법을 보여줍니다. 이질성과 핵 수는 기증자 사이에서 일반적입니다.이 이질성을 발견하고 정확하게 특성화하는 것은 이미징 세포계의 핵심 응용 프로그램입니다. 그러나 독특한 기증자의 합류 측정 및 핵 수는 매우 상관 관계가 있습니다. 심혈관을 형성하기 위해 분화된 인간 근육 전구 세포는 배아 묘신 중형으로 구별될 수 있다.모든 기증자로부터 동일한 세포 집단을 격리하기 위해 유동 세포계에 게이팅 파라미터를 선택할 때 일관성을 유지해야 합니다. 일단 고립되면, 인간 근육 전구 세포는 인간 근육 전구 세포의 증식 및 분화의 독특한 신진 대사 요구 사항을 식별하는 것을 포함하여 다중 목적을 위해 사용될 수 있습니다. 인간 근육 전구 세포의 격리는 인간및 마우스 근육 전구 세포에 세포 표면 마커 발현의 차이의 차별을 허용하고있다.

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

마이크로 해부 explants 기술은 골격 근육 줄기 세포의 원천으로 청소년, 성인이나 배아 근육에서 proliferative 골격근 세포를 분리를위한 강력하고 안정적​​인 방법입니다. 유니 클리,이 세포는 clonally 생체내 이식에 사용되는 골격 근육 줄기 세포 라인을 생산하기 위해 파생되었습니다.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

효소 분리, fibro / adipogenic 및 murine 골격근에서 myogenic progenitors의 유동세포계측법에 의해 표면 라벨 및 정화를위한 방법.

골격근에서 Progenitors의 정화

myofibers의 절연과 문화는 황금...

성인 골격근의 개인 Myofibers 및 위성 세포의 분리와 문화

재생 애플리케이션에 이상적이다 인간의 골격 근육 항구 여러 멀티 혈통 전구체 집단 내에서 혈관. 내막 근육 조직에서 혈관 내피 세포, 혈관 주위 세포 매체 및 외막 세포 외막에서이 분리 방법은 혈관의 세 층 구조에서 각각 세 능성 전구 세포 집단의 동시 정제를 허용한다.

인간의 골격 근육에서 혈관 유래 다 능성 전구체의 분리

인간의 근육에서 유래한 주요 부착 세포 유형은 근육 세포와 섬유아세포입니다. 여기에서 세포 집단은 CD56 항원을 기반으로 하는 자기 활성화 세포 분류를 사용하여 농축됩니다. 이후 특정 항체를 사용한 면역 라벨링과 이미지 분석 기법을 사용하여 개별 세포의 세포질 및 핵 특성을 정량화할 수 있습니다.

인간의 골격근에서 기본 근육 조직 세포와 섬유 아 세포의 분리 및 정량 면역 세포 화학 특성

이 프로토콜은 근육 또는 피부 조직에서 근육 및 섬유아세포 세포주의 살아있는 세포를 분리하고 1차 배양하는 기술을 설명합니다.  이러한 세포주를 불멸화하는 기술도 설명됩니다.  전체적으로 이러한 프로토콜은 다운스트림 애플리케이션을 위해 환자 유래 세포를 생성하고 보존할 수 있는 신뢰할 수 있는 도구를 제공합니다.

질병 모델링을위한 근육 조직 검사에서 환자 유래 세포주의 분리 및 멸화

이 프로토콜은 성인과 노인의 골격 근육에서 분리 및 근원 세포의 전구 세포의 문화의 강력한 재현하고 간단한 방법을 설명합니다. 여기에 사용되는 근육은 발과 다리 근육을 포함한다. 이 방법은 기능 연구를위한 주요 근육 아세포의 풍부한 인구의 분리를 할 수 있습니다.

성인 및 노인 인간의 골격 근육에서 근육 조직 전구체 세포 / 차 근육 아세포의 준비 및 문화

여기, 우리는 성인 근육 조직에서 인간 myoblasts의 순수 인구를 얻기위한 방법을 설명합니다. 이 세포들은 생체 외 골격근 분화를 연구하고, 특히 Ca 2+ 신호 전달에 관여하는 단백질을 연구하는데 사용됩니다.

인간의 Myoblast의 분리, Myogenic 분화의 평가 및 저장 운영 칼슘 항목 측정

근세포는 다핵근화 된 myotubes를 형성하고 결국 골격 근섬유를 형성하기 위해 분화 전구세포를 증식시. 여기에서, 우리는 젊은 성인 마우스 골격 근육에서 1 차적인 근분의 능률적인 격리 그리고 문화를 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 배양에서 근육 세포의 분자, 유전 및 대사 연구를 가능하게합니다.

마우스 골격 근 이식에서 기본 근구의 격리 및 분화

이 프로토콜은 마우스의 개별 골격근에서 근육 줄기 세포와 섬유 지방 생성 전구체의 분리를 설명합니다. 이 프로토콜에는 단일 근육 해부, 형광 활성화 세포 분류에 의한 줄기 세포 분리, 면역형광 염색에 의한 순도 평가, 5-ethynyl-2'-deoxyuridine 혼입 분석에 의한 S상 진입의 정량적 측정이 포함됩니다.

개별 골격근에서 정지 줄기 세포 집단의 분리

이 프로토콜은 조직 해리, 순차적 여과, 사전 플레이트 및 정의된 배양 조건을 통해 성체 및 신생아 마우스 골격근에서 1차 근모세포를 분리하고 농축하는 표준화된 방법을 제공하여, 위성 세포 유래 근아세포 배양을 하위 실험 응용으로 구축하고 유지할 수 있게 합니다.

시험관 내 근형성 연구를 위한 골격근 위성 세포 분리

학습하세요 골격 근 생검 조직에서 인간 근육 선조 세포를 분리하고 배양하는 방법을. 이 기술은 근육 재생 연구와 세포 증식 및 분화 능력 분석에 활용됩니다.

골격 근 생검 절차에서 인간 근육 선조 세포의 격리, 배양, 특성화 및 분화

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