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DOI: 10.3791/59629-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for genetically editing CAR-T cells using the CRISPR/Cas9 system. The method aims to enhance the efficacy and reduce the toxicity of CAR-T cell therapies.
여기에서는 CRISPR/Cas9 시스템을 통해 CAR-T 세포를 유전적으로 편집하는 프로토콜을 제시합니다.
우리의 프로토콜은 CRISPR 기술을 통해 제조 하는 동안 CAR-T 세포의 유전자 변형을 설명 하 고 더 효과적이 고 덜 독성 제품을 생성. 이 기술의 장점은 CAR-T 세포 생산 및 유전 조작모두 좋은 효율을 가진 한 세포에서 발생할 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 로잘리 스테너, MD 박사 과정 학생, 미셸 콕스, 기술자 및 대학원생, 그리고 내 실험실에서 박사 후 동료 인 로나 사케무라 (Reona Sakemura)가 될 것입니다.
수확된 말초 혈액 단핵 세포로부터 T 세포를 격리한 후, 먼저 T 세포 배지를 제조한 다음 0.45 마이크로미터 멸균 진공 필터를 통해 필터링한 다음 0.22 마이크로미터 멸균 진공 필터로 이를 살균하여 배양하기 시작합니다. T 세포 자극 또는 일 제로의 날에, 자극 하기 전에, 세척 CD3/CD28 구슬의 필요한 볼륨멸균 에 구슬의 필요한 볼륨을 배치 하 여 1.5 밀리 리터 미세 원심 분리 기 튜브 및 TCM의 1 밀리 리터에서 다시 중단. 튜브를 자석과 1분 동안 접촉합니다.
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