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Cancer Research
CRISPR/Cas9를 사용하여 CAR-T 셀에서 GM-CSF를 제거합니다.
CRISPR/Cas9를 사용하여 CAR-T 셀에서 GM-CSF를 제거합니다.
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Cancer Research
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JoVE Journal Cancer Research
Using CRISPR/Cas9 to Knock Out GM-CSF in CAR-T Cells

CRISPR/Cas9를 사용하여 CAR-T 셀에서 GM-CSF를 제거합니다.

Full Text
12,027 Views
07:56 min
July 22, 2019

DOI: 10.3791/59629-v

Rosalie M. Sterner1,2, Michelle J. Cox3, Reona Sakemura3, Saad S. Kenderian2,3

1Mayo Clinic Medical Scientist Training Program,Mayo Clinic College of Medicine and Science, 2Department of Immunology,Mayo Clinic, 3Division of Hematology,Mayo Clinic

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a protocol for genetically editing CAR-T cells using the CRISPR/Cas9 system. The method aims to enhance the efficacy and reduce the toxicity of CAR-T cell therapies.

Key Study Components

Area of Science

  • Genetic engineering
  • Immunotherapy
  • Cell manufacturing

Background

  • CAR-T cells are engineered to target specific cancer cells.
  • CRISPR/Cas9 technology allows precise genetic modifications.
  • Combining cell production and genetic editing can improve efficiency.
  • This approach aims to create safer and more effective CAR-T therapies.

Purpose of Study

  • To develop a streamlined protocol for CAR-T cell genetic modification.
  • To demonstrate the effectiveness of CRISPR/Cas9 in CAR-T cell production.
  • To provide a detailed methodology for researchers in the field.

Methods Used

  • Isolation of T-cells from peripheral blood mononuclear cells.
  • Preparation and sterilization of T-cell culture medium.
  • Use of CD3/CD28 beads for T-cell stimulation.
  • Application of CRISPR/Cas9 for genetic editing during manufacturing.

Main Results

  • The protocol allows for efficient genetic modification of CAR-T cells.
  • Demonstrated successful integration of CRISPR technology in cell production.
  • Results indicate improved efficacy and reduced toxicity of CAR-T cells.
  • Collaboration among researchers enhances the protocol's reliability.

Conclusions

  • The CRISPR/Cas9 system is effective for CAR-T cell genetic editing.
  • This method can streamline CAR-T cell manufacturing processes.
  • Future studies may further optimize this approach for clinical applications.

Frequently Asked Questions

What is the significance of CAR-T cell therapy?
CAR-T cell therapy is a groundbreaking treatment for certain types of cancer, utilizing genetically modified T-cells to target and destroy cancer cells.
How does CRISPR/Cas9 work in genetic editing?
CRISPR/Cas9 is a tool that allows for precise modifications in DNA by cutting the DNA at specific locations, enabling the addition or removal of genetic material.
What are the advantages of combining cell production and genetic editing?
Combining these processes can enhance efficiency, reduce time, and potentially lower costs in the development of CAR-T therapies.
Who are the contributors to this study?
The study features contributions from Rosalie Sterner, Michelle Cox, and Reona Sakemura, all affiliated with the laboratory conducting the research.
What are the potential implications of this research?
This research could lead to more effective CAR-T cell therapies with fewer side effects, improving outcomes for patients with cancer.

여기에서는 CRISPR/Cas9 시스템을 통해 CAR-T 세포를 유전적으로 편집하는 프로토콜을 제시합니다.

우리의 프로토콜은 CRISPR 기술을 통해 제조 하는 동안 CAR-T 세포의 유전자 변형을 설명 하 고 더 효과적이 고 덜 독성 제품을 생성. 이 기술의 장점은 CAR-T 세포 생산 및 유전 조작모두 좋은 효율을 가진 한 세포에서 발생할 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 로잘리 스테너, MD 박사 과정 학생, 미셸 콕스, 기술자 및 대학원생, 그리고 내 실험실에서 박사 후 동료 인 로나 사케무라 (Reona Sakemura)가 될 것입니다.

수확된 말초 혈액 단핵 세포로부터 T 세포를 격리한 후, 먼저 T 세포 배지를 제조한 다음 0.45 마이크로미터 멸균 진공 필터를 통해 필터링한 다음 0.22 마이크로미터 멸균 진공 필터로 이를 살균하여 배양하기 시작합니다. T 세포 자극 또는 일 제로의 날에, 자극 하기 전에, 세척 CD3/CD28 구슬의 필요한 볼륨멸균 에 구슬의 필요한 볼륨을 배치 하 여 1.5 밀리 리터 미세 원심 분리 기 튜브 및 TCM의 1 밀리 리터에서 다시 중단. 튜브를 자석과 1분 동안 접촉합니다.

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