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성인 인간의 뇌에서 단기 자유 부동 슬라이스 문화
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JoVE Journal Neuroscience
Short-Term Free-Floating Slice Cultures from the Adult Human Brain

성인 인간의 뇌에서 단기 자유 부동 슬라이스 문화

Full Text
9,738 Views
09:14 min
November 5, 2019

DOI: 10.3791/59845-v

Artur Fernandes1,2, Niele Dias Mendes1,3, Glaucia Maria Almeida1, Giovanna Orlovski Nogueira1, Carla de Moraes Machado4, Jose de Anchieta de Castro Horta-Junior4, João Alberto Assirati Junior5, Norberto Garcia-Cairasco2, Luciano Neder3, Adriano Sebollela1

1Department of Biochemistry and Immunology, Ribeirão Preto Medical School,University of São Paulo, 2Department of Physiology, Ribeirão Preto Medical School,University of São Paulo, 3Department of Pathology and Forensic Medicine, Ribeirão Preto Medical School,University of São Paulo, 4Department of Anatomy, Institute of Biosciences,São Paulo State University, 5Clinical Hospital at the Ribeirão Preto Medical School,University of São Paulo

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for preparing free-floating slice cultures from adult human brain tissue, enhancing the understanding of neurodegeneration in age-associated brain diseases. The method is a simplified and cost-effective alternative to traditional slice culture techniques, suitable for biochemical and immunohistochemical assays.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Neurodegeneration

Background

  • Existing slice culture methods can be complex and costly.
  • Neurodegenerative diseases present significant research challenges.
  • Advancements in culture techniques can improve biological insights.
  • This research involves collaboration among graduate students and researchers.

Purpose of Study

  • To simplify the preparation of slice cultures from human brain tissue.
  • To facilitate short-term assays investigating neurodegeneration mechanisms.
  • To provide a reliable culture system for neurobiological research.

Methods Used

  • Free-floating slice cultures using human brain tissue.
  • Protocol involves the excision of meninges and precision slicing using a vibratome.
  • No multiomics work is described in the text.
  • Slicing produces 200 micrometer thick sections, followed by culture in BDNF-supplemented medium.
  • Histological assessment is conducted post-culture.

Main Results

  • The study indicates that slice preservation allows for normal cellular morphology and neurophysiological responses post-culture.
  • Neuronal cell types and glial cells present typical architecture even after surgical procedures.
  • Short-term neurophysiological assays confirm neuron responsiveness.

Conclusions

  • This protocol simplifies access to human brain tissue for neurobiological studies.
  • Contributes to the understanding of neurodegeneration mechanisms in aged populations.
  • Implications for enhanced research methodologies in studying age-associated neurological disorders.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of this slice culture method?
This method is simpler and more cost-effective than traditional slice culture protocols, making it more accessible for researchers.
How is the main biological model implemented in this study?
Human brain tissue from living donors is used, allowing for the study of neurodegeneration mechanisms directly relevant to human health.
What types of data can be obtained from using these slice cultures?
The methodology facilitates biochemical assays, immunohistochemistry, and assessment of neuronal and glial morphology.
Can this method be adapted for other types of neural tissue?
While primarily designed for human brain tissue, the protocol could be customized for various neural tissue types with appropriate adjustments.
What are the key limitations or considerations in this study?
The complexity of some procedural steps may require visual demonstration to ensure accurate execution.
How does this study contribute to understanding neurodegeneration?
By elucidating cellular responses and morphology under cultured conditions, it advances knowledge of neurodegenerative processes associated with aging.
What is the expected cell morphology in cultured slices?
Cultured slices exhibit typical neuronal and glial architecture, demonstrating the method’s efficacy in preserving cell types.

성인 인간의 뇌에서 자유롭게 떠있는 슬라이스 문화를 준비하는 프로토콜이 제시된다. 상기 프로토콜은 멤브레인 인서트를 이용한 널리 사용되는 슬라이스 배양 방법의 변형이다. 그것은 간단 하 고, 비용 효율적인, 그리고 단기 측정 을 실행 하기 위한 권장 연령 관련 된 뇌 질환 뒤에 신경 변성의 메커니즘을 해명 하는 것을 목표로.

우리는 절제된 두뇌 수술에 제출된 살아있는 인간 기증자에게서 집합된 두뇌 조직에서 자유로운 떠있는 슬라이스 문화를 준비하는 프로토콜을 제시합니다. 이 배양은 생화학 및 세포 생물학 분석 또는 면역 히스토케를 수행 할 수 있습니다. 그것은 관련 된 뇌 질환에 신경 변성의 기본 메커니즘의 해명에 기여할 것으로 예상 된다.

이 기술의 주요 장점은 멤브레인 삽입을 사용하여 고전적인 슬라이스 배양 프로토콜에 대한 보다 간단하고 비용 효율적인 대안이라는 것입니다. 전반적인 프로토콜은 복잡하지 않지만, 수막 제거, 진동편 디스크에 조직을 접착, 면역조직화학에 대한 절제 와 같은 몇 가지 단계는 시각적으로 입증될 때 가장 잘 이해된다. 이 절차를 시연하는 데 도움이 되는 것은 졸업생인 닐 멘데스와 글라우샤 알메디아, 또 다른 졸업생인 조반나 노게이라입니다.

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