A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

Laszlo Radnai; Rebecca F. Stremel; James R. Sellers; Gavin Rumbaugh; Courtney A. Miller

doi:10.3791/60017

소분자 억제제 스크리닝을 위한 NADH 결합 ATPase 분석의 반 높은 처리량 적응

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Biochemistry

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A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

소분자 억제제 스크리닝을 위한 NADH 결합 ATPase 분석의 반 높은 처리량 적응

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10:28 min

August 17, 2019

DOI: 10.3791/60017-v

Laszlo Radnai^1,2, Rebecca F. Stremel^1,2, James R. Sellers³, Gavin Rumbaugh², Courtney A. Miller^1,2

¹Department of Molecular Medicine,The Scripps Research Institute, ²Department of Neuroscience,The Scripps Research Institute, ³Laboratory of Molecular Physiology, NHLBI,National Institutes of Health

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니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(NADH)-결합 된 ATPase 분석제는 소분자 미오신 억제제의 반고 처리량 스크리닝에 적응되었다. 이 운동 분석은 384웰 마이크로플레이트 형식으로 실행되며 총 반응량은 웰당 20 μL에 불과합니다. 이 플랫폼은 거의 모든 ADP 생산 효소에 적용되어야 합니다.

이 프로토콜은 기본 연구를 위한 프로브 또는 잠재적인 임상 화합물을 위한 조사로 ATPase 억제제 개발을 목표로 하는 광범위한 선별 프로젝트에 적용됩니다. 이 방법은 반 고처리량 스크리닝 애플리케이션에 최적화되어 있습니다. 또한 여러 가지 일반적인 유물을 피하도록 설계되었으며 유해 물질 취급이 필요하지 않습니다.

우리의 실험실에서 우리는 메담페타민 사용 장애의 치료를위한 새롭고 특정 비 근육 myosin II 억제제를 개발하기 위해이 분석체를 사용하고있다. 이론적으로, 이 방법은 ATP를 생성하는 모든 효소에 쉽게 적용될 수 있다. 시각적 데모는 모든 중요한 기술적 세부 사항을 명확히 하는 데 도움이 됩니다.

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