Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

Michael Vilkhovoy; David Dai; Sandra Vadhin; Abhinav Adhikari; Jeffrey D. Varner

doi:10.3791/60329

역상 액체 크로마토그래피-질량 분광법에 의한 무세포 단백질 합성 대사의 절대 정량화

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Biochemistry

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Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

역상 액체 크로마토그래피-질량 분광법에 의한 무세포 단백질 합성 대사의 절대 정량화

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08:06 min

October 25, 2019

DOI: 10.3791/60329-v

Michael Vilkhovoy¹, David Dai¹, Sandra Vadhin*¹, Abhinav Adhikari*¹, Jeffrey D. Varner¹

¹Robert Frederick Smith School of Chemical and Biomolecular Engineering,Cornell University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서, 우리는 무세포 단백질 합성 반응에 있는 중앙 탄소 및 에너지 물질 대사에 관련시킨 40의 화합물을 정량화하는 강력한 프로토콜을 제시합니다. 무세포 합성 혼합물은 역상 액체 크로마토그래피를 사용하여 효과적인 분리를 위해 아일린으로 유도한 다음 동위원소로 표시된 내부 표준을 사용하여 질량 분석법에 의해 정량화됩니다.

세포 없는 단백질 합성은 단백질의 체외 생산을 위한 시스템 및 합성 생물학에서 새로운 기술입니다. 세포없는 단백질 합성 시스템은 세포벽이 없으므로 대사 산물에 직접 접근할 수 있습니다. 이 프로토콜에서, 우리는 우리가 세포 없는 신진 대사를 특징지을 수 있는 중앙 탄소 및 에너지 물질 대사에 관련시키는 40개의 대사 산물의 절대 측정을 정량화합니다.

프로토콜은 더 나은 분리 및 더 높은 질량 분광법 해상도를 허용하는 애니라인으로 화합물을 전이에 의존합니다. 또한, 대사 산물의 절대적인 정량화를 위해, 우리는 애니라인을 라벨을 붙이는 등소와 내부 표준을 사용합니다. 태그된 대사산물은 철 분억제효과를 제거하는 코엘루테를 제거합니다.

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