Name: 레이저 도플러 흐름 측정을 사용하여 쥐에 대뇌 혈액 흐름 자동 조절의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 배우세요 레이저 도플러 흐름 측정법을 사용하여 쥐의 대뇌 혈류 자동 조절 능력을 평가하는 방법을. 이 비침습적 기술은 실시간 혈류 모니터링과 신경과학 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자들은 이 연구를 완료하고 원고를 준비하는 데 탁월한 도움을 준 칼리 코자크, 메건 스텀프, 잭 불리스에게 진심으로 감사를 표한다. 교부금 지원: NIH #R01-HL128242, #R21-OD018309 및 #R21-OD024781.

위스콘신 의과 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 이 논문에 설명 된 모든 프로토콜을 승인하고 모든 절차는 국립 보건원 (NIH) 실험실 동물 복지 (OLAW)를 준수합니다 규정.
1. 실험 동물 및 기록 준비
<ol><li>무게가 250-300 g의 8-12주 된 수컷 스프라그-다울리 쥐를 사용하십시오. 이러한 실험을 위해, 사료 쥐에 0.4% NaCl, 200 g/kg 카제인, 3 g/kg DL-메티오닌, 497.77 g/kg 수크로오스, 150 g/kg 옥수수 전분, 50 g/kg 옥수수 오일, 50 g/kg 셀룰로오스, 2 g/kg 콜린 비트 아트, 35 kg/ g.</li>
	<li>데이터 수집 소프트웨어 또는 유사한 기록 방법을 사용하여 동맥 혈압과 LDF 판독값을 기록합니다.</li>
	<li>동맥 압력 트랜스듀서를 레코딩 시스템의 한 채널에 연결하고 LDF 프로브를 레코딩 시스템의 다른 채널에 연결합니다.</li>
	<li>측정에 앞서 레이저 도플러 프로브를 보정하여 운동성 표준을 설정하고 레이저 도플러 유량계가 안정적인 출력을 제공하는지 확인합니다.</li>
	<li>해부 현미경, 설치류 인공호흡기, 끝 조석 CO2 모니터, 쥐의 머리를 제자리에 고정하는 입체 적 소기, Pial 미세 순환을 통해 LDF 프로브를 찾아 꾸준한 위치에 유지하는 마이크로 조작기 : 준비 수술 및 실험에 필요한 추가 장비를 준비하십시오.</li>
</ol>2. 외과 준비
<ol><li>쥐를 무게와 유도 챔버에서 동물을 마취 3.5% 이소플루란 과 30% O2 보충.</li>
	<li>유도 챔버에서 동물을 제거하고 30 % O2 보충제로 1.5-3 %의 이소플루란을 전달하는 마취 마스크를 대체하십시오.</li>
	<li>37 °C에서 유지 순환 물 담요에 쥐를 배치하고 철수 반사가 있는지 확인하기 위해 발가락 핀치와 반사를 확인합니다. 각막 건조를 방지하기 위해 두 눈에 멸균 안과 연고를 적용하십시오.</li>
	<li>두개골, 복부 목 부위 및 대퇴 삼각형의 상단을 면도하십시오. 그 지역에서 느슨한 머리카락을 제거하고 마찰 알코올로 청소하십시오.</li>
	<li>37 °C에서 동물의 체온을 유지하기 위해 순환 온수 펌프와 가열 패드에 supine 위치에 쥐를 배치하고 일시적으로 의료 테이프를 사용하여 패드에 고정.</li>
	<li>다른곳에서 설명한 바와 같이 목내 복부 절개를 통해 기관 캐뉼러(PE240 폴리에틸렌 튜브)를 설치한다.</li>
	<li>기관 캐뉼라를 말조 CO2 모니터와 2.5-3.0% 이소플루란(동물의 크기에 따라 다름)과 30%O2 흡입 보충제를 전달하는 인공호흡기에 부착합니다. 실험 전반에 걸쳐 약 35 mmHg의 만료된 단면CO2를 보장하기 위해 호흡속도, 흡기 시간 및 미세 한 환기 볼륨이 설정되고 모니터링되는지 확인하십시오. 참고 : 이것은 일반적으로 약 48-60 호흡 / 분의 호흡 속도, 1.70-2.30 mL의 조수 볼륨, 그리고 250-300 g 쥐에 대한 0.50-0.60s의 영감 시간으로 달성된다.</li>
	<li>응고를 방지하고 카테터의 개통을 유지하기 위해 원소 NaCl 용액에 1 U/mL 헤파린으로 PE50 폴리에틸렌 캐뉼라 2개를 채웁니다. 충전 후, 동맥에 삽입을 용이하게하기 위해 수술 가위로 각 캐뉼러의 열린 끝을 경사.</li>
	<li>다른 곳에서 설명된 대로 좌우 대퇴 동맥을캔브레이트(27)는 다른 카테터에서 동맥 압의 지속적인 모니터링과 다른 카테터로부터의 혈액 철수를 허용한다.<ol>
<li>해부 현미경으로 주변 조직에서 동맥을 조심스럽게 분리 한 후 동맥의 말단을 분리하고 매듭을 조이지 않고 동맥의 중간 및 근위 끝 주위에 두 개의 추가 봉합사를 배치하십시오.</li>
		<li>캐뉼라 삽입을 위해 절개 후 동맥에서 출혈을 방지하기 위해 근위 봉합사를 리프팅 합자로 사용하십시오 (단계 2.11).</li>
	</ol>
</li>
	<li>캐뉼라가 고정될 때까지 혈관을 가리기 위해 동맥 아래에 있는 종이 클립으로 만들어진 V자 형 와이어를 삽입합니다.</li>
	<li>해부 현미경으로 Vannas 가위를 사용하여 말단 결찰 근처의 대퇴 동맥에서 작은 절개를합니다. 절개에 캐뉼라의 절마된 끝을 삽입하고 대퇴 동맥으로 진행합니다. 리프팅 합자 또는 종이 클립을 제거 할 때 동맥 압력에 의해 빠지지 않도록 캐뉼러를 제자리에 고정하기 위해 중간 합자에 매듭을 조입니다.</li>
	<li>중간 합자를 조인 후 리프팅 합자에 장력을 해제하거나 종이 클립을 제거하고 근위 합자를 조입니다.</li>
	<li>미세 봉합사 (3-0 실크) 또는 수술 스테이플로 절개를 닫습니다. 또는 절개 부위 위에 축축한 거즈를 놓습니다.</li>
</ol>3. LDF 측정을위한 두개골 숱이
<ol><li>캐뉼라가 제자리에 놓인 직후, 동물을 흉골 위치에 놓고 카테터 나 기관관을 빼내지 않도록주의하면서 스테레오 택시 장치에 머리를 고정하십시오.</li>
	<li>두개골을 덮는 피부에 타원형 절개를 만들기 위해 수술 가위를 사용합니다. 면봉을 사용하여 결합 조직을 제거하여 두개골이 깨끗하고 건조해지도록 하십시오. 두피에 절개 주위에 작은 길쭉하고 압연 된 티슈 페이퍼를 놓아 출혈을 막습니다.</li>
	<li>해부 현미경에서, 왼쪽 또는 오른쪽 체민 관능 피질 위에 정수리 영역에서 뼈의 작은 영역 (쥐의 크기에 따라 약 0.5-1 cm)를 얇게 2.15mm 드릴 비트와 드레멜 도구 또는 치과 드릴을 사용합니다. 주의: 두개골이 침투하지 않도록 뼈를 천천히 조심스럽게 얇게 합니다. 이 단계를 수행하는 동안 식염수는 영역이 과열되지 않도록 자유롭게 적용해야 합니다.</li>
	<li>두개골이 얇아지고 영역이 분홍색 모양 및 / 또는 혈관이 시각화되면, 미네랄 오일로 영역을 커버하고 프로브의 끝이 미네랄 오일 풀의 상단에 닿을 수 있도록 노출 된 대뇌 미세 순환 위에 레이저 도플러 프로브를 배치하는 마이크로 조작기를 사용합니다(그림 1). 참고: 레이저 도플러 판독값을 방해하는 외부 진동이 없고 실험 기간 동안 동일한 목표 영역에 프로브가 안전하게 고정되는 영역에서 LDF 측정을 수행하는 것이 필수적입니다.</li>
</ol>4. 뇌혈관 자동조절평가
<ol><li>LDF 프로브가 제자리에 고정되면 실험을 시작하기 전에 30-45분 의 평형 기간을 허용합니다. 평형 기간 후, 평균 동맥압(MAP) 및 레이저 뇌혈류(LCBF)를 2분 동안 30초마다 측정하고 평균값을 평균하여 출혈성 혈압 및 LCBF에 대한 기준값을 얻었다.</li>
	<li>동맥 압력 감소에 반응하여 대뇌 혈관 자동 조절을 평가하기 위해, 대퇴 동맥에서 1.5 mL의 연속적인 인금후 LCBF 및 MAP를 측정한다11. 카테터 특허를 유지하려면, 각 혈액 추첨 후 카테터 부피와 거의 동일한 헤파린 용액 (100 U / mL)이 주입되었는지 확인하십시오. 참고 : 카테터 의 개통을 유지하기 위해 헤파린 용액을 주입 할 때 동물이 너무 많은 헤파린을 받지 못하게하여 가능한 한 카테터의 부피에 헤파린 용액의 부피를 일치시키는 것이 중요합니다. 출혈.</li>
	<li>각 혈액 부피 철수 후, 쥐가 2 분 동안 평형을 허용하고, 그 후 MAP와 LCBF는 2 분 동안 30 초마다 기록됩니다. 동물이 약 20 mmHg의 MAP에 도달 할 때까지 혈액 볼륨 인출을 반복하십시오.</li>
	<li>출혈 전 MAP에서 LLA까지의 혈압 범위를 식별하여 효과적인 자동 조절 범위를 결정합니다(단계 4.5 및 5.3, 아래).</li>
	<li>LCBF가 여전히 혈액 부피 철수 다음 출혈 전 제어 값의 20 % 이내로 반환되는 가장 낮은 압력을 식별하여 LLA를 결정, 앞서 설명한 바와 같이11,28 또는 자동 조절의 고원 단계 동안 결정 회귀 라인의 교차점을 식별하여 LLA, LCBF는 각 연속혈액 철수와 함께 감소 (단계 5.3, 아래). 참고: LLA 및 자동 조절 고원을 정의하기 위한 기준은 실험실(예: Takada et al.28 vs. Jones et al.29)과동맥 혈압 을 감소시키는 절차(예: 특정 동맥 혈압 수준에 도달하기 위해 특정 혈액 대 대조 출혈의 특정 볼륨의 철수)와 다를 수 있습니다11.</li>
	<li>실험의 끝에서, IACUC에 의해 승인 된 마취의 수술 평면에서 양측 기흉을 생성하여 동물을 안락사.</li>
	<li>동물이 안락사된 후 조직에서 수득된 LDF 값은 실험 설정에 대한 제로 기준선 유동 값을 제공할 것이다.</li>
</ol>5. 통계분석
<ol><li>선형 회귀 해석을 수행하여 LDF 값과 해당 동맥 압 사이의 상관관계를 평가합니다. 동물이 안락사된 후 얻은 기준선 LDF 수치를 사용하여 측정된 유량에 영향을 미치는 비특이적 LDF 신호가 없는지 확인합니다.</li>
	<li>자동 규제 고원 위와 아래의 회귀 선 사이의 교차를 사용하여 LLA를 계산합니다. 이 방법을 사용하여 LLA를 계산하려면 두 회귀 방정식을 결합하고 동맥 압력에 대한 결과 방정식을 해석합니다.</li>
	<li>다른 실험 군을 비교할 때 선형 회귀 분석을 사용하여 각 동물에 대한 LLA 위와 아래의 LDF 대 동맥 압력 관계의 기울기를 계산하고 해당 실험 군의 동물에 대한 평균 ± SEM으로 요약합니다.</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

레이저 도플러 흐름 측정을 가진 조직 혈류 반응의 평가 (LDF). 위에서 언급한 바와 같이, LDF 신호는 마이크로 순환에서 이동 입자의 수와 속도에 비례한다. 상이한 기관의 LDF 수치는 전자기 유량계 및 방사성미소구(30)와 같은 확립된 방법으로 평가된 전장기 혈류와 잘 상관되며 일반적으로 굴절식 동맥 제제10,31,32,33,34 및 시투 미세순환 제제35,36에서활성 톤의 조절을 평가하는 연구와 일치한다.
...

대뇌 순환에 있는 자동 조절 기계장치는 두뇌에 있는 항상성과 일반적인 기능을 유지하는 중요한 역할을 합니다. 대뇌 혈류의 자동 조절은 심박수, 혈액 속도, 관류 압력, 뇌 저항성 동맥의 직경 및 미세 순환 저항을 포함한 여러 요인에 의해 영향을 되며, 이 모두는 전신 혈압의 생리적 범위에 걸쳐 뇌에서 총 대뇌 혈류를 일정하게 유지하는 역할을 합니다. 동맥 압력이 증가하면 이러한 메커니즘은 동맥 과 저항 동맥을 수축하여 두개내 압력의 위험한 증가를 방지합니다. 동맥 혈압이 감소 하는 경우, 로컬 제어 메커니즘 조직 관류 및 O2 전달을 유지 하기 위해 동맥을 팽창. hypercapnia, 외상성 또는 글로벌 저산소 성 뇌 손상, 당뇨병 미세 혈관 병증과같은 다양한 병리학 적 조건1,2,3,4,5,6은 혈류를 자가 조절하는 뇌의 능력을 방해 할 수 있습니다. 예를 들어, 만성 고혈압은 뇌미세순환10에서 정상내피의존적 팽창을 방해할 뿐만 아니라,10의동맥압력이감소될때 조직 관류를 수축시키고 유지하기 위해 뇌순환에서 자동조절기전의 능력을 저하시킬 뿐만 아니라7,8,9,및 고염(HS) 식이를 더 높은 압력으로 변화시게 된다. 대뇌 자동 조절은 또한 HS 규정식12를공급할 때 달 소금에 민감한 쥐에서 손상됩니다.
동맥 압력의 감소 동안, 대뇌 저항 동맥과 동맥의 팽창은 처음에 감소 된 관류 압력에도 불구하고 값을 제어하기 위해 대뇌 혈류를 반환합니다. 동맥 압력이 더 감소함에 따라, 대뇌 혈류는 혈관구조가 더 낮은 압력에서 혈류를 유지하기 위해 더 이상 팽창할 수 없을 때까지 낮은 압력(자동 조절 반응의 고원 단계)에서 일정하게 유지됩니다. 기관이 정상적인 혈류를 유지할 수있는 가장 낮은 압력은 자동 조절 (LLA)의 하한이라고합니다. LLA 이하의 압력에서, 대뇌 혈류량은 휴식 값에서 현저하게 감소하고 동맥 관류 압력의 각 감소와 함께 선형 방식으로 감소13,14. 고혈압7,8,9에서관찰된 바와 같이 LLA의 상향 변화는 동맥 관류 압력이 감소되는 조건(예: 심근 경색, 허혈성 뇌졸중 또는 순환쇼크)에서 허혈성 손상의 위험과 중증도를 증가시킬 수 있다.
LDF는 대뇌 순환에서의 혈류의 자동 조절을 포함하여 다양한 상황에서 미세순환에서의 혈류를 평가하는 매우 귀중한접근법으로 입증되었으며, 11,14,15. 자동 조절 반응을 평가하는 것 외에도, LDF는 대사, 근생, 내피, 체액, 또는 뇌혈류를 조절하는 신경 기전을 조사할 때 피질 혈류를 모니터링하는데 사용될 수 있으며, 대뇌 혈류에 대한 다양한 실험적 개입 및 병리학적 조건의 영향을 조절하는10,16,17,18, 19,20.
LDF는 움직이는 입자의 수와 속도에 반응하여 반사된 레이저 광의 변화를 측정합니다.이 경우 적혈구 (RBC). 뇌 혈관 자동 조절에 대한 연구의 경우, 동맥 혈압은 동맥 혈압을 높이기 위해 알파 아드레날린 작용제의 주입에 의해 변경됩니다 (대뇌 순환 자체가 알파 아드레날린 혈관 수축 작용제 작용제에 민감하지 않기 때문에)12,15 또는 동맥 혈압을 줄이기 위해 대조 혈액 볼륨 을 감소시키기 위해 14. 본 연구에서, LDF는 건강한 쥐의 대뇌 자동 조절에 대한 혈압의 등급 이감소의 효과를 입증하기 위해 활용된다. 문헌22,23,24,25에설명되어 있지만, 본 논문은 두개골을 관통하거나 챔버 또는 대뇌 창을 설치하지 않고도 뇌혈류를 평가할 수 있도록 폐쇄된 두개골 준비를 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>3-0 꼰 검은 실크 봉합</td>사 <td>Midwest Vet</td><td>193.73000.2</td><td></td></tr><tr><td>동맥 압력 변환기</td><td>Merit Medical</td><td>041516504A</td><td></td></tr><tr><td>자동 데이터 수집 시스템(WINDAQ & BIOPAC 시스템)</td><td>DATAQ Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈압 표시 장치</td><td>Stoelting</td><td>50115</td><td></td></tr><tr><td>순환 온수 펌프</td><td>Gaymar Industries</td><td>T-pump</td><td></td></tr><tr><td>End-tidal CO2 monitor</td><td>Stoelting</td><td>Capstar-100</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium</td><td>Midwest Vet</td><td>191.46720.3</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td></td></tr><tr><td>레이저 도플러 유량계</td><td>Perimed</td><td>PeriFlux 5000 LDPM</td><td></td></tr><tr><td>레이저 도플러 리필 운동성 표준</td><td>Perimed</td><td>PF1001</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브(PE240)(기관 캐뉼라용)</td><td>VWR</td><td>63018-828</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브(PE50)(대퇴골 카테터용)</td><td>VWR</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>설치류 인공호흡기</td><td>Cwe/ Stoelting</td><td>SAR-830/P</td><td></td></tr><tr><td>식염수</td><td>Midwest Vet</td><td>193.74504.3</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Outbred Rats</td><td>Variable</td><td>N/A</td><td>Rats는 다양한 회사에서 주문했습니다</td></tr><tr>. Standard<td>Rat Chow</td><td>Dyets, Inc.</td>.<td></td><td></td>113755</tr><tr><td>입체택시 기기</td><td>Cwe/Stoelting</td><td>Clasic Lab 표준물질</td><td></td></tr></tbody></table>

레이저 도플러 흐름 측정을 사용하여 쥐에 대뇌 혈액 흐름 자동 조절의 평가

Evaluation of Cerebral Blood Flow Autoregulation in the Rat Using Laser Doppler Flowmetry

대뇌 혈류를 조절하기위한 신체의 메커니즘을 조사 할 때, 미세 순환 혈류의 상대측정은 레이저 도플러 유량 측정법을 사용하여 얻을 수있다 (LDF). 이 논문은 두개골을 관통하거나 챔버 또는 대뇌 창을 설치하지 않고 대뇌 혈류를 평가 할 수있는 폐쇄 두개골 준비를 보여줍니다. 자동 조절 메커니즘을 평가하기 위해 등급이 매겨진 출혈을 통한 혈압 감소 조절 모델을 동시에 LDF를 사용하는 동시에 활용할 수 있습니다. 이것은 순환 혈액 볼륨의 철수에 의해 생성된 동맥 혈압의 감소에 응하여 혈류량에 있는 상대적인 변경의 실시간 추적을 가능하게 합니다. 이 패러다임은 동맥 혈압의 감소 동안 대뇌 혈류 자동 조절을 연구하는 귀중한 접근법이며, 프로토콜의 사소한 변형과 함께 출혈성 쇼크의 실험 모델로도 가치가 있습니다. 자동 조절 반응을 평가하는 것 외에도, LDF는 대사, 근생, 내피, 체액, 또는 대뇌 혈류와 다양한 실험의 영향을 조절하는 신경 메커니즘을 조사 할 때 피질 혈류를 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 대뇌 혈류에 대한 개입 및 병리학 적 상태.

도 2는 표준 실험실 차우를 먹인 10마리의 수컷 스프라그-다울리 쥐를 대상으로 실시한 실험 결과를 요약한 것이다. 이러한 실험에서, 평균 동맥 압력이 LLA에 도달할 때까지, 평균 LCBF는 처음 3개의 혈액 부피 인출 다음 출혈 전값의 20% 이내로 유지되었다. LLA 아래의 압력에서 후속 혈액 볼륨 인출은 LCBF의 점진적 감소를 일으켰으며, 대뇌 순환이 더 낮은 관류 압력에서 대뇌 혈류를 일정하게 유지하기 위해 충분한 수준의 혈관 확장을 생성 할 수 없음을 보여 주어.
그림 3은 고원상(MAP &gt;65 mmHg)의 평균 동맥 압압과 LCBF 사이의 관계와 CBF 자동 조절의 분해 단계(MAP &lt;65 mmHg) 사이의 관계를 요약한 것입니다. LLA 이상의 압력에서 LCBF와 동맥 압력(r2 = 0.0246; p = 0.3534) 사이에는 ...

이 문서는 동맥 혈압감소 시 혈류를 자동으로 조절하는 대뇌 순환의 능력을 평가하기 위해 레이저 도플러 유동측정의 사용을 보여줍니다.

When investigating the body&#39;s mechanisms for regulating cerebral blood flow, a relative measurement of microcirculatory blood flow can be obtained ...

이 프로토콜은 정상 및 병리학 적 조건하에서 혈압 변화 중에 자체 혈류를 조절하는 대뇌 미세 순환의 능력을 평가하는 데 이상적입니다. LDF는 다른 방법으로는 불가능하지 않은 다양한 조건 하에서 대뇌 혈류의 지속적인 모니터링을 위한 비교적 비침습적 방법을 제공한다. 레이저 도플러 유동량은 비침습적 혈류 평가에 사용될 수 있다.예를 들어, 건강한 젊은 여성의 혈액 흐름 조절장애에 대한 높은 염분 식이요법의 효과를 평가한다. LDF는 인간과 동물의 다양한 혈관 침대에서 혈류를 쉽게 모니터링할 수 있으며 다양한 연구에서 사용할 수 있습니다. Adrienne Allen과 함께 절차를 시연하는 것은 내 연구 기술자이자 실험실 매니저인 메건 스텀프가 될 것입니다.절차를 시작하기 전에, 37섭씨에서 유지되는 순환하는 물 담요에 쥐를 놓고 마취 된 실험 쥐에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인합니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 두개골, 복부 목 부위 및 대퇴 삼각형의 상단을 면도합니다. 노출된 피부에서 머리카락을 잃어버리면 제거합니다.그리고 마찰 알코올로 피부를 소독. 순환 하는 따뜻한 물 펌프와 난방 패드에 쥐를 이동 합니다. 그리고 의료 용 테이프를 사용하여 쥐를 일시적으로 고정시 배치합니다.이소토닉 나트륨 염화액에 헤파린의 mL 당 하나의 단위로 두 PE 50 캐뉼라를 채웁니다. 그리고 동맥에 삽입을 용이하게하기 위해 외과 가위로 카테터의 열린 끝을 구부리라. 해부 현미경으로 주변 조직으로부터 대퇴 동맥을 조심스럽게 분리한 후, 고립된 대퇴동맥 세그먼트의 해실 끝을 리위칭하고 매듭을 조이지 않고 동맥의 중간 및 근해 끝 주위에 두 개의 추가 봉합사를 배치합니다.캐뉼라가 고정될 때까지 동맥 아래에 종이 클립에서 만들어진 V자 형 와이어를 삽입하여 선박을 폐백합니다. 그런 다음 반나스 가위를 사용하여 태스탈 결찰 근처의 대퇴동맥에 작은 절개를 합니다. 캐뉼라의 굴절 끝을 절개에 넣고 캐뉼라를 대퇴 동맥으로 전진시키게 한다.용지 클립을 제거합니다. 캐뉼라 위에 중간 합자에서 매듭을 조이어 캐뉼라를 제자리에 고정시합니다. 리프팅 합자에 장력을 해제한 다음 근위 합자를 조인하고 절개를 닫습니다.캐뉼라가 제자리에 있는 직후, 동물을 흉골 자세로 배치합니다. 그리고 카테터를 빼내지 않도록 주의하는 스테레오탁틱 장치에서 머리를 고정하십시오. 두개골을 덮고 피부에 타원형 절개를합니다.면봉을 사용하여 결합 조직을 제거하여 두개골이 깨끗하고 건조하도록 합니다. 두피에 절개 주위에 작고 연이긴 티슈 페이퍼를 놓고 출혈을 멈추고 해부 현미경 으로, 쥐의 크기에 따라 왼쪽 또는 오른쪽 색소 감각 피질 부위에 있는 뼈의 0.5~ 1cm 영역을 얇게 하는 2.15mm 드릴 비트로 적절한 크기의 드릴을 사용하십시오. 두개골을 관통하지 않도록 뼈를 천천히 조심스럽게 얇게 합니다.이 단계를 수행하는 동안 식염수 용액을 자유롭게 적용하여 영역이 난방과 함께 발생하지 않도록 해야 합니다. 이 부위에 분홍색 모양 및 /또는 혈관을 시각화 할 수 있는 경우, 미네랄 오일로 얇게 썬 뼈를 덮습니다. 그리고 마이크로 조작기를 사용하여 레이저 도플러 프로브를 노출된 대뇌 미세 순환 위에 배치하여 프로브의 끝이 미네랄 오일 풀의 맨 위에 닿도록 합니다.초기 프로브 배치의 경우 약 150단위의 신호로 시작하여 프로브가 마이크로 순환 위에 위치하도록 하는 것이 가장 좋습니다. 레이저 도플러 흐름 측정 프로브가 제자리에있을 때, 30 초 동안 적절한 대퇴 동맥 캐뉼라에서 1.5mL의 혈액을 철회하기 전에 30 ~ 45 분 근접 기간 동안 동물을 휴식을 허용하십시오. 카테터 특허를 유지하기 위해, 각 혈액 그리기 후 카누라에 이소토닉 식염수에 헤파린의 mL 당 100 단위를 주입한다.쥐가 2분 동안 회복한 다음 2분 동안 30초마다 LDF와 혈압을 측정합니다. 혈압과 LDF 측정 후, 동물이 약 20mmHg의 평균 동맥 압력에 도달 할 때까지 2 분마다 혈액 볼륨 철수를 반복합니다. 이러한 대표적인 실험에서, 표준 실험실 차우를 공급한 10개의 Sprague-Dawley 쥐의 평균 레이저 뇌혈흐름은 평균 동맥 압력이 자동 조절의 하한에 도달할 때까지 처음 3개의 혈액 부피 철수 에 따라 전출혈 값의 20% 이내에 유지되었다.자동 조절의 하한 이하 압력에서 후속 혈액 볼륨 인출, 대뇌 순환이 더 이상 낮은 증혈 압력에서 뇌혈 흐름을 일정하게 유지하기 위해 혈관 확장의 충분한 수준을 생성 할 수 없음을 보여주는 레이저 대뇌 혈류의 점진적 감소를 일으켰다. 자동 조절의 하한 또는 그 이상의 압력에서, 레이저 대뇌 혈류와 동맥 압력 사이에 는 유의한 상관관계가 없었으며, 이는 레이저 대뇌 혈류가 자동 조절 곡선의 고원 범위내동맥 압력과 무관했음을 나타낸다. 자동 조절의 하한 이하, 레이저 뇌 혈류 동맥 압력 관계는 부정적인 경사를 했다.그리고 레이저 대뇌 혈류는 동맥 압력과 유의하로 상관관계가 있었다. 기억해야 할 가장 중요한 것은 두개골을 매우 신중하게 얇게 하고 LDF 프로브가 조직의 동일한 영역에 단단히 고정되어 있는지 확인하는 것입니다. 이 절차는 경동맥을 통한 역행 주입 후 다양한 제제의 미세순환의 반응성을 테스트하거나, 대뇌 순환에서 기능성 충혈및 신경혈관 커플링을 평가하는 데 사용될 수 있다.이 기술은 대뇌 순환에 다른 약물과 마취제의 효과와 고혈압과 같은 질병 모델의 대뇌 자동 조절의 변화에 대한 조사를 가능하게했습니다.

evaluation-cerebral-blood-flow-autoregulation-rat-using-laser-doppler

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

대뇌 국소 빈혈의 여러 동물 모델은 스트로크의 인간의 조건을 시뮬레이션하기 위해 개발되었습니다. 이 프로토콜은 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 (동부 표준시-1) 유발 중간 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델에 대해 설명합니다. 또한 중요한 고려 사항, 장점,이 모델의 단점은 설명되어 있습니다.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

뇌 관류 모니터링은 허혈성 뇌졸중 모델의 정확성을 향상시키기 위해 입증되었습니다. 기술적 인 문제는 종종 뇌 혈관 연구에 대해이 필수적 도구의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 최적화 된 시스템은 쥐의 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 동안 단일 또는 다중 사이트 hemodynamic 모니터링을 얻기 위해 표시됩니다.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

대뇌 관류는 대뇌 자기조절을 통해 다양한 압력에서 유지됩니다. 그러나 자동 조절을 특성화하려면 조절된 주파수에서 눈에 띄는 압력 변동이 필요합니다. 설명된 프로토콜은 진동 하체 음압이 어떻게 압력 변동을 생성하여 자동 조절 곡선의 정량화를 위한 투영 추적 회귀에 대한 데이터를 제공할 수 있는지 보여줍니다.

진 동성 하체 부정적인 압력 및 프로젝션 추구 회귀 분석을 통해 뇌 혈류의자가 평가

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

여기 우리 레이저 도플러 관류 (LDPI) 이미징의 조합을 제시 하 고 소개 하는 척수에 대 한 표준화 된 절차 뿐만 아니라 국부 적으로 혈액 흐름과 산소 포화 (2등), 코드 레이저 도플러 관류 모니터링 (LDPM) 척추를 측정 하 쥐에 외상입니다.

레이저 도플러 이미징 및 모니터링을 사용 하 여 쥐에서 척수 미세 분석 하

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

여기에는 레이저 도플러 프로브를 쥐와 생쥐에게 적합한 안와 주위 위치인 중간 대뇌 동맥(MCA)의 원위 영역 위에 두개골에 배치하여 일시적인 MCA 폐색 중 혈류를 평가하는 것이 포함됩니다.

설치류 모델에서 중뇌동맥 폐색 전 대뇌 혈류 모니터링을 위한 레이저 도플러 프로브의 안와 주변 배치

생체 내에서 뇌의 혈류 조절을 연구하기 위해 전통적인 약리학적 방법은 침습적이며 종종 두개골, 경막 및 연수막을 손상시킵니다. 이 연구에서 우리는 나노인젝터 유도 시스터내 마그나(ICM) 주입과 레이저 스페클 대비 이미징을 결합하여 두개골과 연극의 무결성을 보존하는 최소 침습 기술을 개발했습니다.

Paired Cisterna Magna Nanoinjection 및 Laser Speckle Contrast Imaging Assay를 통해 In Vivo에서 대뇌 혈류 조절 연구

intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델은 실험 허혈성 뇌졸중 모델 중 가장 자주 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 전체 레이저 도플러 flowmetry의 가이드와 함께 상세하게 모델 및 대표 결과를 보여줄 것입니다.

마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델

혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​의 Microbubble-매개 집중 초음파 장애는 두뇌의 비침습 타겟 약물 전달을위한 유망...

쥐 모델에서 Transcranial 집중 초음파를 사용하여 혈액 - 뇌 장벽의 MRI를 유도 장애

배우세요 레이저 도플러 흐름 측정법을 사용하여 쥐의 대뇌 혈류 자동 조절 능력을 평가하는 방법을. 이 비침습적 기술은 실시간 혈류 모니터링과 신경과학 연구에 활용됩니다.

레이저 도플러 흐름 측정을 사용하여 쥐에 대뇌 혈액 흐름 자동 조절의 평가

더 많은 동영상 탐색