Name: 인간 조직형 심장 슬라이스의 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑에 의한 전임상 심장 전극생리학 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-16T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: 배우세요 인간 심장 조직 슬라이스를 이용한 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑 방법으로 심장 생리학 및 전임상 약물 테스트를 수행하는 기술입니다. 이 프로토콜은 연구자들이 인간 심장 조직의 전기적 활동과 칼슘 신호를 동시에 기록하여 약물 반응을 정확하게 평가할 수 있게 합니다.

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NIH (R21 EB023106, R44 HL139248 및 R01 HL126802)에 의한 자금 지원은 Leducq 재단 (프로젝트 리듬)과 미국 심장 협회 후 펠로우십 (19POST34370122)에 의해 감사하게 인정됩니다.

<ol><li>Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+history+of+animal+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Missouri+Medicine%22%5BJournal%5D)">A brief history of animal modeling.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 201-205 (2013).</li>
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<li>Ou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+Biomimetic+Culture+System+for+Pig+and+Human+Heart+Slices%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Physiological Biomimetic Culture System for Pig and Human Heart Slices.</a> Circulation Research. 125 (6), 628-642 (2019).</li>
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<li>Kang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Organotypic+Cultured+Cardiac+Slices%3A+New+Platform+For+High+Throughput+Preclinical+Human+Trials%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human Organotypic Cultured Cardiac Slices: New Platform For High Throughput Preclinical Human Trials.</a> Scientific Reports. 6, 28798(2016).</li>
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<li>Halbach, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+slices+of+adult+mouse+hearts+-+A+new+multicellular+in+vitro+model+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Ventricular slices of adult mouse hearts - A new multicellular in vitro model for electrophysiological studies.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 18 (1-3), 1-8 (2006).</li>
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<li>Qu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+potential+recording+and+pro-arrhythmia+risk+analysis+in+human+ventricular+trabeculae%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Action potential recording and pro-arrhythmia risk analysis in human ventricular trabeculae.</a> Frontiers in Physiology. 5 (8), 1109(2018).</li>
<li>Franz, M. R., Swerdlow, C. D., Liem, L. B., Schaefer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cycle+length+dependence+of+human+action+potential+duration+in+vivo.+Effects+of+single+extrastimuli%2C+sudden+sustained+rate+acceleration+and+deceleration%2C+and+different+steady-state+frequencies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Cycle length dependence of human action potential duration in vivo. Effects of single extrastimuli, sudden sustained rate acceleration and deceleration, and different steady-state frequencies.</a> Journal of Clinical Investigation. 82 (3), 972-979 (1988).</li>
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여기에서, 우리는 심장마비로 체포된 인간의 심혼에서 실행 가능한 심장 조각을 얻고 세포간 전위 및 세포내 칼슘의 이중 광학 매핑을 사용하여 조각을 기능적으로 특성화하는 단계별 방법을 제시합니다. 보존된 세포 외 환경과 기본 세포 세포 커플링을 통해 인간의 심장 조각은 근본적인 과학적 발견과 약리학 제제 및 유전자 치료의 효능 및 심독성 검사를 위한 인간의 심장의 정확한 모델로 사용될 수 있습니다. 이 기술은 또한 부농 노드, 대실 노드 및 Purkinje 섬유와 같은 심장의 특정 영역의 구조적 기능 적 매핑을 허용합니다. 여기에 설명된 프로토콜은 단기 연구에 가장 적합한 심장 슬라이스 생성, 이미징 및 분석을 위한 기본 단계를 나열합니다. 조직 슬라이스의 정적 배양은 장기간 에 걸쳐 심장 조직의 변화를 유도하는 것으로 나타났기 때문에 장기 연구를 위해 독자가 전기 기계적 자극12,,13,,<sup clas...

동물 모델은 인간 생리학 및 병리학의 기본 메커니즘을 이해하는 데 사용되는 귀중한 도구뿐만 아니라 다양한 질병을 치료하는 치료의 예비 테스트를위한플랫폼이었습니다 1. 이 동물 연구 2에 근거를 둔 생물 의학 연구의 분야에서 큰 보폭을 취했습니다2. 그러나, 마우스, 쥐, 기니피그, 토끼, 양, 돼지 및 개3,,4를포함하여 인간과 동물 생리학 사이에 중요한 종 간 차이가 존재한다. 그 결과, 동물 실험 단계에서 약속을 보였지만 임상 시험5의결과에 부응하지 못하는 수많은 약물, 유전자 및 세포 치료법이 있었습니다. 이러한 격차를 해소하기 위해, 고립된 심장 심근세포와 인간 유도만능 줄기세포(iPSC)는 다양한 약물 및 질병에 대한 인간 생리학의 반응을 시험하는 모델로 개발되었다6. 줄기 세포 유래 심근세포는,심장6,7,78의대리로서 장기-온-칩 시스템에서 널리 사용되고 있다. 그러나, iPSC 유래 심근세포(iPSC-CM)의 유용성은 상대적으로 미성숙표현형과 심근세포 하위집단의 표현부족에 의해 방해된다. 성숙한 심근은 섬유아세포, 뉴런, 대식세포 및 내피 세포와 같은 여러 공존세포 유형으로 구성된 복합구조이다. 한편, 고립된 인간 심근세포는 전기적으로 성숙하며, 상이한 심근세포 하위집단은 배양 파라미터9를변경하여 얻을 수 있다. 여전히, 이러한 근세포는 일반적으로 세포 세포 커플링의 부족, 신속한 분화 및 시험관 내의 비리듬 거동의 발생으로 인해 변경된 작용 잠재적형태론을나타낸다10,11. 일부 제한 사항은 iPSC-CM 및 심장 심근세포의 3D 세포 배양 모델에 의해 해결되었습니다. 스페로이드, 하이드로겔 스캐폴드 캡슐화 된 3D 배양, 엔지니어링 심장 조직 (EHTs), 및 심장 온 칩 시스템을 포함하는 이 모델은 심근세포, 섬유아세포 및 내피 세포와 같은 다중 심장 세포 집단을 사용합니다. 그들은 3D 구조를 형성하기 위해 비계를 따라 자체 조립하거나 조립하고 일부는 심근의 복잡한 이색성 특성을 재현합니다. 이 모형은 성숙한 표현형의 세포가 있기 위하여 보고되었습니다, 수축 속성, 및 심장 조직과 유사한 분자 단면도. 심장 에 칩 시스템은 또한 약물 테스트 및 질병 모델에서 전신 효과의 연구를 할 수 있습니다. 그러나, 체외 세포 기반 모델은 네이티브 세포 외 매트릭스가 부족하므로 기관 수준 전기 생리학을 정확하게 모방 할 수 없습니다. 반면 인간의 심장 조각은 그대로 세포 외 매트릭스와 네이티브 세포 대 세포 접촉을 가지고 있어 인간 심근의 부정맥 특성을 보다 정확하게 검사하는 데 유용합니다.
연구진은 급성 및 만성 약물 검사를 위한 생리학적 전임상 플랫폼으로서 인간 심장 조직화 슬라이스를 개발하여 심장 전기생리학과 심장질환 진행,12,13,,,14,,15,,16,17,,18,19를연구하고 있다., iPSC 유래 심근세포와 비교했을 때, 인간 심장 조각은 성숙한 심근세포 표현형으로 성인 심장 전기 생리학을 보다 충실하게 복제합니다. 고립 된 인간 심근 세포와 비교할 때, 심장 조각은 잘 보존 된 세포 세포 커플링과 그들의 토착 세포 내 및 세포 외 환경의 본질적인 존재 때문에 생리적 작용 잠재적 인 기간을 나타낸다.
이 프로토콜은 전체 기증자 심혼에서 인간 적인 심장 조각을 생성하는 과정을 설명합니다, 광학 매핑을 통해 심장 전기 생리학 파라미터를 테스트하기 위하여 급성 (즉, 시간 긴) 및 만성 (즉, 일- 긴) 연구 결과를 능력을 발휘합니다. 이 프로토콜은 좌심실(LV) 조직의 사용만을 설명하지만, 마우스, 쥐, 기니피그 및돼지(14,,20,,21,,22)와같은 다른 종뿐만 아니라 심장의 다른 부위에도 성공적으로 적용되었다. 우리의 실험실은 지난 5 년 동안 이식을 위해 거부 된 전체 인간 기증자 심장을 사용하지만, 조직이 큐브로 절제 될 수있는 능력을 가지고 있는 한 대안적 수단 (예를 들어, 좌심실 보조 장치 [LVAD] 이식, 생검, myectomies)에 의해 얻은 모든 기증자 심장 샘플 조직에서 이러한 동일한 절차를 수행 할 수 있습니다. 광학 매핑은 광학 작용 잠재력과 칼슘 과도를 높은 공간(100 x 100 픽셀) 및 측두구(>1,000 프레임/s) 해상도로 동시에 매핑할 수 있는 능력으로 인해 이 연구에서 분석을 위해 사용됩니다. 다중 전극 어레이(MEA) 또는 마이크로 전극과 같은 대체 방법도 사용할 수 있지만 이러한 기술은 상대적으로 낮은 공간 해상도에 의해 제한됩니다. 또한, MEA는 세포 배양과 함께 사용하도록 설계되었으며, 날카로운 미세 전극은 전체 하트 또는 큰 조직 웨지와 함께 사용하기 위해 보다 쉽게 관리됩니다.
이 기사의 목표는 더 많은 연구원이 심장 전기 생리학 연구를 위해 인간 심장 조직을 사용할 수 있도록 하는 것입니다. 이 문서에 설명 된 기술은 상대적으로 간단 하 고 단기 연구에 대 한 도움이 (몇 시간의 순서에 일). 장기 연구를 위한 더 많은 생리적 생체 mimetic 배양 (주 순서에) 다른 연구의 숫자에 의해 논의 및 설명 되었다12,,18,,23. 전기 자극, 기계적 적재 및 조직 스트레칭은 체외,조직 리모델링12,,18,23의발병을 제한하는 데 도움이 되는 유리한 컨디셔닝 메커니즘이다.

<table><tbody><tr><td>1mL BD 주사기</td><td>Thomas Scientific</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>2,3-부탄디온 모노심</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>6 웰 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>생물 안전 캐비닛</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1377</td><td></td></tr><tr><td>Blebbistatin</td><td>Cayman</td><td>13186</td><td></td></tr><tr><td>버블 트랩</td><td>Radnoti</td><td></td><td></td>130149</tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>코닝 세포 여과기</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-201-432</td><td></td></tr> DMSO <tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3c 겸</td>자 <td>정밀 과학 도구</td><td>11231-20</td><td></td></tr>에서 1.25 <tr><td>mg/mL의</td><td>Di-4-ANEPPS</td><td>Biotium</td><td></td> 저장 용액</tr><tr><td>방출 이색성 거울</td><td>Chroma</td><td>T630LPXR-UF1</td><td></td></tr><tr><td>방출 필터 (RH237)</td><td>Chroma</td><td>ET690/50m</td><td></td></tr><tr><td>방출 필터 (Rhod2AM)</td><td>Chroma</td><td>ET590/33m</td><td></td></tr><tr><td>여기 이색성 미러</td><td>Chroma</td><td>T550LPXR-UF1</td><td></td></tr><tr><td>여기 필터</td><td>Chroma</td><td>ET500/40x</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50mL 원추형 원심분리기 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>열교환기</td><td>Radnoti</td><td>158821</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50145502</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 트랜스페린 셀레늄(ITS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td></td></tr><tr><td>LED 여기 광원</td><td>Prizmatix</td><td>UHP-Mic-LED-520</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>Micam Ultima L형 CMOS 카메라</td><td>Scimedia</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Minutien Pins</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>콜 파머</td><td>EW-07522-20</td><td></td></tr><tr><td>플래티넘 페이싱 와이어</td><td>Alfa Aesar</td><td>43275</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F127</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P6867</td><td>비이온성, 계면활성제 폴리올</td></tr><tr><td>염화칼</td>륨 <td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Powerlab 데이터 인수 및 자극기</td><td>AD Instruments</td><td>Powerlab 4/26</td><td></td></tr><tr><td>RH237</td><td>Biotium</td><td>61018</td><td></td></tr><tr><td>Rhod2AM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R1245MP</td><td></td></tr><tr><td>Rhod-2AM</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>살균기, 건조 비드</td>, <td>Sigma-Aldrich</td><td>Z378550</td><td></td></tr><tr><td>Stone 산소 확산기</td><td>, Waterwood</td><td>B00O0NUVM0</td><td></td></tr><tr><td>TissueSeal - Histoacryl 국소 피부 접착제</td>, <td>gobiomed</td>, <td>AESCULAP</td><td></td>,</tr><tr><td>UltraPure, Low Melting Point, Agarose</td><td>, Thermo, Fisher Scientific</td>, <td>16520100</td><td></td></tr>, <tr><td>Ultrasound, sonicator</td><td></td><td>, Branson 1800</td><td></td></tr><tr><td>비브라톰</td><td>Campden 악기</td><td>7000 smz</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 조직형 심장 슬라이스의 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑에 의한 전임상 심장 전극생리학 평가

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

인간 심장 슬라이스 제제는 최근 인간 생리학 연구 및 치료 테스트를 위한 플랫폼으로 개발되어 동물 실험과 임상 시험 사이의 격차를 해소하고 있습니다. 수많은 동물 및 세포 모델은 약물의 효과 검사 하는 데 사용 되었습니다., 하지만 이러한 응답은 종종 인간에서 다릅니다. 인간의 심장 조각은 실행 가능한 인간의 마음에서 직접 파생된다는 점에서 약물 검사에 대한 이점을 제공합니다. 다세포 구조, 세포 세포 커플링 및 세포 외 매트릭스 환경을 보존하는 것 외에도 인간 심장 조직 조각은 성인 인간 심장 생리학에 무수한 약물의 효과를 직접 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델을 전체 하트 나 웨지와 같은 다른 심장 준비와 구별하는 것은 슬라이스가 장기적인 문화를 받을 수 있다는 것입니다. 따라서 심장 조각은 급성뿐만 아니라 약물의 만성 효과를 연구 할 수 있습니다. 더욱이, 단일 심장에서 수백에서 천 조각을 수집하는 능력은 동시에 다른 약물과 다양한 농도와 조합에서 여러 약물을 테스트하는 높은 처리량 모델을 만든다. 슬라이스는 심장의 주어진 부위에서 제조 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는 왼쪽 심실 프리 월에서 조직 큐브를 분리하고 고정밀 진동 미세 토메를 사용하여 조각으로 분할하여 왼쪽 심실 슬라이스의 준비를 설명합니다. 이 조각은 그 때 기준선 심장 전기 생리학적 기능을 측정하기 위하여 심각한 실험을 복종하거나 만성 약 연구 결과를 위해 배양될 수 있습니다. 이 프로토콜은 또한 조사되는 약의 효력을 결정하기 위하여 세포내 전위 및 세포내 칼슘 역학의 동시 기록을 위한 심장 조각의 이중 광학 매핑을 기술합니다.

인간 organotypic 조각은 위에 상세하고 상세한 프로토콜에 따라 기증자 인간의 심장의 좌심실에서 수집되고그림 1. 이중 카메라 광학 매핑 시스템그림 2직립 이미징 구성에서 전압 및 칼슘의 동시 광학 매핑을 수행 하 여 약 1 시간 슬라이스 프로토콜의 완료 후 사용 되었다. 데이터는 RHYTHM1.2 (를 사용하여 분석되었다)그림 3), 이전에 우리의 실험실에 의해 출판 및 Github (https://github.com/optocardiography/Rhythm-1.2)에서 자유롭게 사용할 수있는 오픈 소스 광학 매핑 데이터 분석 도구. 측정된 전기생리학적 파라미터는그림 4. 작용 잠재력 및 칼슘 과도 추적은 신호 조절되었고 추가 분석에 사용되는 대표적인 흔적이그림 4A</...

이 프로토콜은 전임상 약물 검사를 위해 인간의 심장 조각을 단면화 및 배양하는 절차를 설명하고 이러한 조각에서 동시에 세포간 전압 및 세포내 칼슘 신호를 기록하기 위한 광학 매핑의 사용을 자세히 설명합니다.

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...

이 프로토콜은 전임상 생리 약물 검사를 위해 기증자 인간의 마음을 고용하는 기술을 연구원에게 제공하기 때문에 중요합니다. 이 조직은 인간 조직 조각에 있는 심장 작용 잠재력 및 세포내 칼슘 과도의 동시 특성화를 위해 전압과 칼슘 염료를 모두 활용합니다. 광학 매핑 시스템을 설정하려면, 하부 폴리디메틸실록산 젤 층을 가진 티슈 목욕을 관류 시스템에 부착하고, 온도를 유지하고 배스의 축적을 방지하기에 충분한 속도로 관류 시스템을 통해 100%의 산소로 산소화된 37도에서 1리터의 회수 용액을 순환한다.그런 다음 대상을 사용하여 두 CMOS 카메라의 초점과 정렬을 조정하고 520 플러스 또는 마이너스 5 나노미터 파장을 가진 녹색 LED 광원을 사용하여 전압에 민감한 및 칼슘 표시기 염료를 동시에 자극한다. 조직 섹션을 얻기 전에 냉동 및 액체 심폐 액액을 혼합하고 심장 조직을 얼음 차가운 심폐 성 욕조에 넣고 왼쪽 심실 프리 월을 식별하십시오. 미리 만들어진 아가로즈 젤을 진동기의 금속 조직 홀더 뒷면에 붙입니다.차가운 심근성 용액에 조직의 1 센티미터 큐브 블록을 잘라 신속하게 내막 표면을 향하고 금속 조직 홀더에 조직 블록을 장착하는 국소 피부 접착제를 사용합니다. 금속 홀더를 얼음 냉이 산소 슬라이스 용액의 진동기 욕조로 옮겨 조직이 완전히 침수되고 블레이드를 조직의 전면 가장자리로 이동시다. 진동을 켜서 미리 설정된 매개 변수로 슬라이스하기 시작하여 블레이드가 trabeculae를 넘어 매끄러운 내막 조직으로 도달 할 때까지 처음 여러 조각을 버립니다.실험 조직에 도달하면 각 슬라이스를 각 조각을 각 조각을 실온산소티로드의 복구 용액을 포함하는 배양 접시에 조심스럽게 옮기고 메쉬 와셔로 슬라이스를 덮어 조직 조각을 컬링에서 유지합니다. 모든 슬라이스가 수집되면 각 슬라이스를 각 슬라이스를 6웰 플레이트의 개별 우물로 조심스럽게 옮기면 3밀리리터의 PBS가 들어 있습니다. 부드러운 흔들림으로 슬라이스를 헹구고 신선한 멸균 PBS로 이 과정을 세 번 반복한 후 샘플을 잘 37도의 섭씨 37도 배양 배지를 포함하는 6웰 플레이트의 개별 우물로 옮기.그런 다음 플레이트를 분당 20회전에서 37도, 산소 30%, 이산화탄소 5%로 바톤에 놓습니다. 갓 잘라낸 슬라이스를 위한 회복 용액에서 20분 간 배양한 후, 관심 있는 조각을 관류 시스템 조직 배스로 조심스럽게 옮기고 4개의 모서리를 겔 층으로 고정시키면서 조직에

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 문서 potentiometric 염료 (DI - 8 - ANEPPS)를 사용 Langendorff - perfused 쥐 심장의 표면에 광학 이미지 조치 가능성이 운동에 높은 시간적 및 공간적 해상도 기법을 설명합니다.

Langendorff - perfused 랫 하트의 광학 매핑

이 문서는 파노라마 영상 시스템을 사용 Langendorff - perfused 토끼 마음에 광학 매핑 실험을 실시하기위한 기본 절차 및 듀얼 (전압과 칼슘) 이미징 양상을 설명합니다.

Langendorff - perfused 토끼 하트의 Multiparametric 광 매핑

그대로 고립 Langendorff에 transmembrane 잠재력 (VM)과 일시적인 세포 내 칼슘 (CAT)의 광학 매핑하는 동안이 종이 자세히 해부 절차를, 수단 설치, 그리고 실험 조건 마우스 마음을 perfused.

마우스 중심에 액션 후보와 칼슘 과도의 광학 매핑

이 기사에서는 배양된 HL-1 심방 세포 단층에서 이중 채널 광학 매핑을 수행하는 데 사용되는 기술에 대해 설명합니다. 이 고유한 프로토콜을 사용하면 배양 단층의 전기생리학적 특성을 자세히 감지하고 분석하기 위해 동일한 영역에서 칼슘(Ca) 및 전압(Vm) 활성을 동시에 시각화할 수 있습니다.

배양 된 HL-1 심방 근육 세포 단층의 전압 및 칼슘 듀얼 채널 광학 매핑

이 문서에서는 랑겐 돌프 - 관류 토끼 심장의 상세한 프로토콜과 횡단 전위 (V 분)의 이중 광학 매핑 및 무료 내 근질 세망 (SR)에 필요한 장비 칼슘을 설명합니다. 이 방법은 그대로 심장에 직접 관찰 및 V (M)의 정량 및 SR 칼슘 역학 수 있습니다.

인트라 근질 그물 자리 칼슘의 광학 매핑<sup&gt; 2 +</sup&gt;와 랑겐 돌프 - 관류 토끼 심장에 막 횡단 잠재력

이 프로토콜 설명 electrophysiological murine atria는 높은 시간적, 공간적 해상도, 막 전압의 듀얼 녹음을 포함 한 광학 매핑 시스템을 활용 하 여 평가 하 고 캘리포니아2 + 에서 과도 프로그램 특수 전극 카 테 터를 통해 자극입니다.

고해상도 광학 매핑 Murine Atria electrophysiological 평가

여기, 선물이 intracardiac 자율 신경의 변조 및 기본 전기 생리학, arrhythmogenesis, 및 비보 전 Langendorff 설치를 사용 하 여 캠프 역학에 미치는 영향의 평가 대 한 프로토콜.

심장 전기 생리학 및 전 비보 Langendorff 시스템에서 Arrhythmogenesis Intracardiac 뉴런의 영향

이 연구의 목적은 번역 동물 모델을 사용하여 심장 역학을 조사하는 방법을 확립하는 것이었습니다. 기술된 실험 접근법은 분리되고 손상되지 않은 돼지 심장 모델에서 전기 적 활동을 평가하기 위한 전기 생리학 연구와 함께 이중 방출 광검을 통합합니다.

전 비보 랑엔도르프-퍼블릭 하트의 검문 및 전기생리학 연구

우리는 토끼 심근 세포에서 GtACR1 활성화의 전기 기계적 효과를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 당사는 세포 격리, 배양 및 아데노바이러스 전이, 패치 클램프 및 탄소 섬유 기술로 기능적 실험에 대한 자세한 정보를 제공합니다.

광유전학적으로 변조된 심근세포 활동의 전기기계적 평가

이 프로토콜은 높은 시간 및 공간 분해능으로 막관통 전압 및 세포 내 Ca2+ 과도 현상의 전기 생리학적 측정을 포함하여 카테콜아민성 다형성 심실 빈맥의 영향을 받는 야생형 및 녹인 동물에서 얻은 마우스 심장의 이중 염료 광학 매핑을 소개합니다.

Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia의 RyR2R2474S Knock-In 마우스의 심장에 대한 이중 염료 광학 매핑

배우세요 인간 심장 조직 슬라이스를 이용한 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑 방법으로 심장 생리학 및 전임상 약물 테스트를 수행하는 기술입니다. 이 프로토콜은 연구자들이 인간 심장 조직의 전기적 활동과 칼슘 신호를 동시에 기록하여 약물 반응을 정확하게 평가할 수 있게 합니다.

인간 조직형 심장 슬라이스의 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑에 의한 전임상 심장 전극생리학 평가

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