Name: 슈완 세포 표현형 사양을 평가하기 위한 튜블드 세포 외 세포 매트릭스 미세 환경의 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: 배우세요 슈완 세포 표현형 사양을 평가하기 위한 튜블드 세포 외 세포 매트릭스 미세 환경 준비 방법을. 미세 접촉 인쇄와 면역형광 염색을 활용하여 기질 경도와 단백질 구성을 정밀하게 제어할 수 있습니다.

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저자는 감사 신시내티 대학의 자금 지원을 인정합니다. 저자는 또한 지원을 신시내티 대학 고급 재료 특성화 연구소의 론 Flenniken 감사.

저자에 의해 잠재적 이해 상충이 보고되지 않았습니다.

SC는 신경 손상 에 따라 그들의 표현성 변환 및 재생 잠재력으로 인해 신경 재생을 촉진할 수 있습니다. 그러나, ECM 큐가 이 재생 능력을 통제하는 방법은 신경 재생을 승진시키는 것을 목표로 하는 생체 재료의 발달뿐 아니라 신경 재생에 관련되었던 기계장치의 이해를 잠재적으로 방해하는, 주로 불분명남아 있습니다. 이러한 상호 작용을 조사하기 시작하기 위해, 세포 배양 기질은 강성, 단백질 코팅 및 접착제 지형과 같은 ECM 큐를 조절할 수 있는 곳에서 만들어졌습니다. 미세 패턴 접착 지형을 하는 기능은 마이크로컨택 인쇄의 일반적인 방법을 활용하여 프로토콜 내의 주요 기능입니다. 그러나, 이러한 기판은 PDMS 우표에 적용되는 압축력이 세포 배양 기판에 대한 셀 접착제 영역의 원하는 형상을 달성하기 위해 적절한 수준에 있어야 한다는 점에서 유리와 다르다. 형광소 세럼 알부민(fBSA)을 모델 단백질로 활용하여 세포 접착제 영역을 시각화하고 PDMS 우표에 대한 압축력을 조절하면 궁극적으로 이러한 문제를 완화할 수 있다. 유리의 ...

말초 신경계(PNS) 부상은 환자의 삶의 질을 손상시키고 다양한 사회경제적 인자를 통해 상당한 영향을 미치게 함으로써 헬스케어의 주요 임상과제로남아 있다1,2. Schwann 세포 (SC), PNS에 있는 주요 신경교 세포로, PNS 재생을 유도하고 짧은 간격 상해에 있는 기능적인 복구에 있는 원조에 필요한 분자 및 물리적 단서를 제공합니다. 이는 SC가 골수성 또는 Remak 표현형3으로부터"수리" 세포 표현형으로 분화하는 놀라운 능력 때문입니다. 수리 SC는 여러 가지 면에서 독특한 세포 표현형입니다. 부상 후, SC는 세포 주기를 다시 입력하여 증식 속도를 증가시키고 재인교정을 용이하게하기 위해 여러 전사 적 요인의 발현을 시작합니다. c-Jun 및 p75 NTR과 같은 이러한 요인은 미엘린 기본 단백질(MBP)과 같은 골수화 SC 마커를 증가시키는 동안4,,5로조절된다. 또한, SC는 형태학을 변경하여 길어지고 서로 정렬하여 부상 부위6을가로질러 Büngner 밴드를 형성한다. 이것은 축축이 올바른 탈모 표적7로확장하기 위한 물리적 지도 메커니즘을 제공한다. 그러나, SC가 짧은 간격 부상에서 신경 재생을 촉진하기 위하여 소유하는 능력에도 불구하고, 기능적인 회복의 결과는 가혹한 상해에 있는 가난한 남아 있습니다. 이는 세포외 매트릭스(ECM) 유도 단서의 손실뿐만 아니라 오랜 기간 동안 재생 형형을 유지하기 위한 SC의무능력8에기인한다.
신경 재생 및 회복 과정은 부상 후 기저 라미나 상태에 밀접하게 묶여 있습니다. 기저 라미나는 지도를 용이하게하고 부상 후 그대로 남아있는 경우 축축및 SC에 대한 ECM 바인딩 큐를 제공하는 신경 주위ECM의층입니다 9. ECM의 상태와 세포에 행렬 바운드 큐를 전달하는 능력은 매우 중요하며 이전에는 다양한컨텍스트(10,,11,,12,,13,,14)에서탐구되었다. 예를 들어, ECM의 강성은 증식 및 분화(11,,15,,16)와같은 세포 기능을 유도할 수 있는 것으로 나타났다.15 ECM의 조성물은 또한 세포내 신호 전달 경로를 통해 이동 및 분화와 같은 세포 행동을 뚜렷한 세포 반응으로 이끌어 내고17,,18을조절할 수 있다. 더욱이, 세포 형태학은, 확산 영역 및 세포 신장을 포함하여, 기능을 조절하는 데 중요한 역할을 하며, ECM-바운드큐(19,,20)에의해 지배될 수 있다. 많은 이전 연구는 정의된 혈통으로 분화하는 줄기 세포에 초점을 맞추었지만, SC는 신경 부상5,,21에따라 ECM을 리모델링하면서 단백질과 성장 인자를 분비할 수 있는 수리 SC로, 건강한 신경 내에서 숙성, 성인 SC로부터 표현형을 변경하는 유사한 능력을 가지고 있다. 따라서, 본질적으로 신경 재생을 위한 이 용량을 이용하기 위하여 통찰력에 대한 선천적인 SC 재생 능력 과 ECM 바운드 단서 사이 관계의 근본적인 기계장치를 확인하는 것이 특히 중요합니다.
이를 해결하기 위해, 우리는 기계적 강성과 리간드 유형이 생리학적으로 관련된 범위에서 쉽게 조정할 수있는 세포 배양 기판을 생산하는 상세한 방법론을 개발했습니다. 폴리디메틸 실록산(PDMS)은 폴리아크릴아미드 젤과 비교하여 고도의 튜닝 역학으로 인해 기판으로 선택되었으며, 최대 영의 계수는 약 1000kPa22,,23,,24에서PDMS와 대조된다. 이것은 손에 작업에 도움이, 최근 연구는 토끼 sciatic 신경의 영의 계수를 초과 할 수 있음을 보여 주었다으로 50 kPa 개발 하는 동안, 따라서 PNS 내신경의 강성의 범위가 이전에 검사 보다 넓은 제안. 상이한 단백질은 SC 행동에 역학 및 리간드의 조합 조절을 분석하기 위해 PDMS 기판에 흡착할 수 있습니다. 이를 통해 PNS 재생 공정에 존재하는 다중 미세환경 적 단서를 조사하고기판(25)의강성에만 초점을 맞춘 작업과 높은 수준의 튜닝성을 비교할 수 있다. 또한, 이러한 엔지니어링 된 세포 배양 기판은 면역 조직 화학, 서부 블롯 및 정량 중합효소 연쇄 반응 (q-PCR)과 같은 다양한 정량 적 분석 방법과 호환됩니다.
이 엔지니어링 된 세포 배양 플랫폼은 각 ECM 바인딩 신호의 높은 수준의 개별 튜닝성으로 인해 기계화 경로를 분석하는 데 매우 적합합니다. 또한, 마이크로접촉 인쇄를 포함한 세포 마이크로패싱에 대한 인기 있는 방법은 다른 ECM 바운드큐(24)와관련하여 세포 형상을 분석하기 위해 조절된 세포 접착을 허용하기 위해 기판상에서 달성될 수 있다. 이는 세포 집단의 신장을 촉진하는 선 패턴 기판이 신경 재생 중에 Büngner 대역 내에서 길쭉한 재생 식 SC를 모방하고 연구하는 도구를 제공하기 때문에 매우 중요합니다. 또한, 세포 형태는 다중 세포 기능의 강력한 레귤레이터이며,26,,27을제어하지 않으면 잠재적으로 혼란스러운 실험 결과를 도입할 수 있다. 현재 ECM cues28,,29,,30에의해 조절되는 SC 재생 표현형을 지배하는 메커니즘에 상당한 주의가 제공되고 있다. 이것은 PNS 신경 재생에 있는 원조를 위한 신경 지도 도관으로 적용될 수 있는 생물 물질의 디자인에 통찰력을 제공하기 위하여 필수적입니다. 이러한 상세한 프로토콜은 궁극적으로 ECM 바운드 큐에 의해 조절되는 SC 및 기타 세포 유형 함수의 메커니즘을 해독하는 잠재적 인 도구로 적용 될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>소 혈청(BSA)의 알부민, 텍사스 레드 접합체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A23017</td><td>BSA 염색으로 미세패턴</td></tr><tr><td>표시 안티-마우스 IgG, HRP 결합 항체</td><td>세포 신호 기술</td><td>7076S</td><td>웨스턴 블롯 분석에 사용되는 항체</td></tr><tr><td>안티-토끼 IgG, HRP 결합</td><td>항체 세포 신호 기술</td><td>7074S</td><td>웨스턴 블롯 분석</td></tr><tr><td>에 사용되는 항체세포</td><td>증식을 측정하는 데 사용되는</td>BrdU <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B23151</td> 시약</tr><tr><td>Alexa Fluor 488과 결합된 BrdU 1차 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B35130</td><td>세포 증식 분석에서 BrdU를 시각화하는 데 사용</td></tr><tr><td>콜라겐 I</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10483-01</td><td>커버슬립을 코팅하는 데 사용되는 단백질</td></tr><tr><td>압축력 시험기</td><td>TestResources</td><td></td><td>고분자의 기계적 특성을 정량화하는 기기</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>11965092 Cell Culture Medium</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16000044</td><td>Cell Culture Medium supplemental</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>33010-018</td><td>Protein used to coat coverslips</td></tr><tr><td>Fluorescence 현미경</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti2</td><td>형광 현미경</td></tr><tr><td>Halt 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제 칵테일 (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>78440</td><td>프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제</td></tr><tr><td>라미닌</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td>커버슬립 코팅에 사용되는 단백질</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36971</td><td>커버슬립 마운트앤트 및 핵 염색</td></tr><tr><td>마우스 c-Jun 1차 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>711202</td><td>c-Jun 단백질을 시각화하기 위한 1차 항체</td></tr><tr><td>Mouse &beta;-Actin 1차 항체</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>3700S</td><td>웨스턴 블롯 실험을 위한 로딩 제어</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>세포 배양 배지 보충</td></tr><tr><td>포토레지스트 SU 2010</td><td>KAYAKU</td><td>SU8-2010</td><td>포토레지스트</td></tr><tr><td>플루로닉 F-127</td><td>시그마 알드리치</td><td>P-2443</td><td>블록 비특이적 단백질 결합</td></tr><tr><td>토끼 c-Jun 1차 항체</td><td>세포 신호 기술</td><td>9165S</td><td>c-Jun 단백질의 시각화를 위한 1차 항체</td></tr><tr><td>토끼 미엘린 염기성 단백질 1차 항체</td><td>Abcam</td><td>ab40390</td><td>시각화를 위한 1차 항체 MBP</td></tr><tr><td>Rabbit p75NTR 1차 항체</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>8238S</td><td>p75NTR</td></tr><tr><td>Rhodamine phalloidin</td> 시각화를 위한 1차 항체 <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>세포 세포골격</td></tr><tr><td>RIPA 완충액</td>의 시각화 <td>Abcam</td><td>ab156034</td><td>세포 용해 완충액</td></tr><tr><td>RT4-D6P2T Schwann 세포주</td><td>ATCC</td><td>CRL-2768</td><td>세포주 실험</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 PDMS 염기 및 경화제</td><td>Sigma Aldrich</td><td>761036</td><td>커버슬립 코팅에 사용되는 조정 가능한 중합체</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15090-046</td><td>세포 해리 시약</td></tr><tr><td>UV-오존 세정제</td><td>Novascan</td><td></td><td>PDMS의 친수성 향상</td></tr><tr><td>Versene (1x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>15040066 세포 해리 시약</td></tr></tbody></table>

슈완 세포 표현형 사양을 평가하기 위한 튜블드 세포 외 세포 매트릭스 미세 환경의 준비

Preparation of Tunable Extracellular Matrix Microenvironments to Evaluate Schwann Cell Phenotype Specification

외상성 말초 신경계 (PNS) 부상은 현재 완전한 기능 적 회복을 회복하기위해 적절한 치료가 부족합니다. 슈완 세포 (SCs), PNS의 주요 신경교 세포로, 부상 다음 재생 세포 표현형으로 분화하여 PNS 재생을 촉진에 중요한 역할을한다. 그러나, SC의 차별화된 상태는 재생에 필요한 기간을 통해 유지하기 가 어렵고 주변 세포외 매트릭스(ECM)의 변화에 의해 영향을 받고 있다. 따라서 SC와 ECM 간의 복잡한 상호 작용을 결정하여 SC의 재생 잠재력에 대한 단서를 제공하는 것이 필수적입니다. 이를 해결하기 위해, 다른 ECM 단백질이 강성과 단백질 조성물을 조절할 수 있는 플랫폼을 제공하는 튜닝 가능한 폴리디메틸실록산(PDMS) 기판에 흡착된 전략이 만들어졌습니다. SC는 SC 표현형의 역학을 나타내는 튜닝 가능한 기판 및 중요한 세포 기능에 시드되었다. SC 단백질 발현과 세포 형태 사이의 상호 작용을 설명하기 위해 개별 마이크로접촉 인쇄 세포 패턴 이외에 SC의 다른 종자 밀도가 면역 형광 염색 및 서부 얼룩을 특징으로하고 활용되었습니다. 결과는 더 작은 퍼설리고 세포 신장의 더 높은 넓이를 가진 세포가 SC 재생 현상관 마커의 상부를 승진시켰다는 것을 보여주었습니다. 이 방법론은 SC의 ECM과 세포 기능 사이의 중요한 관계를 해명하기 시작할뿐만 아니라 말초 신경 수리에서 생체 재료의 미래 최적화에 대한 지침을 제공합니다.

SC 표현형에 대한 기판 강성과 단백질 조성간의 상호작용을 분석하고 정량화하기 위해, 튜닝 가능한 PDMS 세포 배양 기판(도1A)이개발되었다. 서로 다른 기지에서 중합체의 압축 테스트: 경화제 비율은 기판의 영의 계수(E)를 정량화하기 위해 활용되었다(도1B). 계수 값의 결과 범위는 생리학적으로 관련된 기판 조건을 나타냅니다. 기판의 준비에 따라, SC는 조정 가능한 미세 환경에서 배양 및 세포 특성을 분석했다. 다른 단백질 조성물의 기판에 대한 SC의 증식율이 먼저 분석되었다. 라미닌 코팅 기판은 콜라겐 I및 fibronectin 흡착에 비하면 10 μg/mL(도2A, B)에서모두 더 높은 증식률을 초래하였다. 라미닌 코팅 및 다른 계열이 있는 기판에 대한 SC는 상대적으로 부드러운 기판(E=3.85kPa)이 모든<strong clas...

이 방법론은 기판 강성, 단백질 조성 및 세포 형태와 같은 세포 외 매트릭스 큐가 슈완 세포 (SC) 표현형을 조절하는 메커니즘을 설명하는 것을 목표로합니다.

Traumatic peripheral nervous system (PNS) injuries currently lack suitable treatments to regain full functional recovery. Schwann cells (SCs), as the ...

이 프로토콜은 강성, 단백질 조성 및 세포 형태학과 같은 세포 외 매트릭스의 특성이 비용 효율적이고 촉진적인 방식으로 정확하게 제어될 수 있는 세포 배양 플랫폼을 제공한다. 이 방법은 비용 효율적이며 특별한 교육이나 시설이 필요하지 않습니다. 또한 면역형광 염색 및 서부 블롯과 같은 다중 세포 정량화 방법과 도 호환됩니다.이 기술은 슈완 세포 생물학의 기계적 이해를 제공합니다. 신경계 재생을 위한 생체 재료 설계에 대한 추가 통찰력으로, 그것은 모든 앵커리지 종속 세포에 적용 될 수있다. 이 프로토콜의 가장 어려운 부분은 마이크로컨택 인쇄입니다.프로토콜의 시작 전에, 식물성을 사용하여 기판에 마이크로접촉 인쇄를 하여 단백질에 태그를 지정하여 패턴에 대한 최종 인쇄를 시각적으로 검증합니다. 먼저 PDMS 베이스 엘라스토머와 경화 제의를 파이펫 팁과 혼합하여 거품이 혼합물 내에서 균질하게 분산될 때까지 한다. 그런 다음 진공 건조로 기포를 제거합니다.탈지 된 PDMS 혼합물을 사각형 또는 원형 커버 슬립에 넣고 30 초 동안 2, 500 rpm의 스핀 코터에 커버 슬립을 회전시십시오. 커버슬립을 섭씨 60도, 1~2시간 또는 밤새 실온에서 오븐에 배양합니다. 마이크로 패턴기판을 제조하려면 패턴 실리콘 웨이퍼를 15mm 높이에 15mm 높이의 페트리 접시에 넣고 드가스 PDMS를 웨이퍼에 붓습니다.하룻밤 사이에 60도의 오븐에서 PDMS를 고형화했습니다. PDMS를 실온으로 냉각시키십시오. 그런 다음 외과 메스를 사용하여 실리콘 웨이퍼를 손상시키지 않도록주의하는 올바른 패턴을 포함하는 30 x 30 밀리미터 제곱의 우표를 잘라냅니다.PDMS 스탬프와 튜닝 가능한 커버 슬립을 70%에 단올로 30분 간 담그어 소독합니다. 마이크로패턴의 효능을 확인하기 위해, 여과된 공기 스트림과 파이펫 15 마이크로그램당 밀리리터 BSA 용액을 사용하여 PDMS 우표의 표면을 건조하여 스탬프의 전체 패턴 측면을 덮습니다. BSA 용액을 실온에서 1시간 동안 배양하여 단백질 흡착을 허용한 다음, 우표를 공기건조하여 BSA 용액을 제거합니다.여과된 공기 스트림을 사용하여 튜닝 가능한 커버 슬립의 표면을 건조시다. 스탬프의 패턴 측면을 튜닝 가능한 커버슬립과 상식접촉을 하여 커버슬립 표면의 BSA 흡착을 허용하고 5분 동안 커버슬립에 스탬프를 부드럽게 누릅니다. FITC 필터를 사용하여 형광 현미경을 사용하여 마이크로 패턴을 검사합니다.형광 패턴이 아닌 세포 접착제 부위를 인쇄하려면 BSA 단백질용 라미닌을 대체합니다. 커버 슬립에서 우표를 제거하고 커버 전표를 멸균 된 6 웰 플레이트로 옮킨다. 커버 슬립의 표면을 덮고 실온에서 1 시간 동안 플레이트를 배양하기 위해 각 우물에 0.2 %의 플루론 F-127 용액 2 밀리리터를 추가하십시오.F-127 용액을 흡기하고 PBS로 5회 커버를 세척한 다음, 세포 배양 배지와 함께 한 번, 슈완 세포를 1000세포 제곱의 파종 밀도로 시드한다. 세포 파종 후 45분 후, 세포 배양 배지를 제거하고 PBS로 커버 슬립을 두 번 세척하여 여러 세포가 동일한 패턴을 준수하지 않도록 합니다. 정량화 하기 전에 48 시간 동안 원하는 세포 배양 환경에서 세포를 유지 합니다.정렬된 세포를 검사하기 위한 선 패턴 세포 배양 기판을 만들려면 원고 방향에 따라 우표를 만들고 원하는 차원으로 자른다. 앞서 설명한 대로 튜닝 가능한 PDMS 표면으로 코팅된 페트리 접시 2개를 준비하고 마이크로컨택트 인쇄를 수행하여 선 무늬 셀 접착 영역을 접시 에 인쇄합니다. 우표를 제거한 후 페트리 접시에 0.2%의 플루론 F-127 용액 4밀리리터를 채우고 한 시간 동안 배양합니다.PDMS 스탬프의 각 면을 70%에탄올로 세 번 헹구고 공기로 말리십시오. PDMS 스탬프를 회전시키고 이전에 설명한 대로 두 번째 Petri 접시에 패턴이 없는 셀 접착제 영역을 인쇄합니다. F-127 용액으로 요리를 배양한 후, PBS로 3회, 신선한 세포 배양 배지로 3회 세척합니다.그런 다음 접시에 세포를 씨앗, lysates를 준비하기 전에 48 시간 동안 원하는 조건에서 유지. 용액을 준비하기 위해, 2 분 동안 얼음 차가운 PBS로 세포를 씻은 다음, 80 마이크로 리터의 RIPA 용액을 추가, 원고 방향에 따라 준비, 각 세포 접착제 영역에, 25 분 동안 얼음 블록에 세포를 배양. 5 분 동안 세포 스크레이퍼로 슈완 세포를 긁어 내고 라벨이 부착 된 1.5 밀리리터 미세 원심 분리튜브로 용액을 수집합니다.1200회 G와 섭씨 4도에서 15분 동안 리세스 원심분리. 상체를 수집하고 깨끗한 미세 원심 분리기 튜브로 전송합니다. 라미닌 코팅 기판은 콜라겐과 섬유넥틴 코팅 기판에 비해 더 높은 증식율을 초래했다.라미닌 코팅 및 다른 moduli기와 기판에 슈완 세포는 상대적으로 부드러운 기판 감소 세포 증식 속도 보여 주었다. 세포는 또한 단백질 발현을 위해 분석되었다. 전사인자 C-Jun 발현은 기판이 부드러워짐에 따라 강화되었다.그러나, 그것은 상당히 부드러운 기판에 규제 했다. 딱딱한 기판에서 콜라겐 코팅 기판은 기판이 부드러워지면서 가장 높은 c-Jun 발현을 보였으며, 라미닌은 c-Jun의 최고 수준을 보였다. 세포는 그 때 c-Jun 발현에 있는 세포 퍼지기 및 지역 탐구하기 위하여 로다민-phalloidin로 염색되었습니다.세포 배양기판상에서 세포 접착제선이 생성되었을 때, 패턴 기판에 시드된 세포의 핵 종횡비는 무패턴 기판에 있는 세포의 그것에 비해 증가하였다. C-Jun과 p75 neurotrophin 수용체의 발현은 더 작은 퍼진 영역을 가진 조밀한 세포에서 강화되었습니다. 선 패턴 세포는 또한 비패턴 세포에 비해 c-Jun 및 p75 NTR모두의 더 높은 발현을 초래했다.마이크로컨택트 인쇄 셀 접착 기하학은 세포 확산 영역과 신장을 정밀하게 제어하면서 셀에서 세포 상호 작용에 대한 세포를 제거하기 위해 만들어졌습니다. 세포 종횡비를 증가시켜 핵 신장이 증가했습니다. c-Jun의 발현은 세포 신장과 세포 확산 억제모두에 의해 강화되었다.핵과 액틴 모두에 대한 면역형광 염색은 세포 확산 영역과 신장이 이 마이크로패턴 방법을 통해 정확하게 제어되었다는 것을 확인하였다. 이 기술은 우리의 튜닝 기판을 재생 및 암의 맥락에서 슈완 세포 생물학 및 신호를 기계적으로 분석하는 방법으로 사용하는 방법을 포장했습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리는 병아리 E4 statoacoustic 신경절 및 E6 척수의 explants을 해부하다 문화하는 방법을 보여줍니다. Explants는 24 시간 동안 3D 콜라겐 젤의 혈청 무료 조건에서 양식입니다. Neurite 대응은 성장 인자 - 보충 매체와 단백질 코팅 비즈와 함께 테스트됩니다.

Neurite 가지의 Assays에 대한 해부와 칙 Statoacoustic 신경절과 콜라겐 젤에서 척수의 Explants의 문화

세포 기능에 microenvironments의 분자 구성의 영향에 통찰력을 얻기위한 조합 기능 검사 방법을 설명합니다. 방법은 세포 접착 및 기능 분석을 지원하는 정의 조합 microenvironments의 배열을 생성하기 위해 기존의 microarray 기반 기술을 활용합니다.

제조 및 MicroEnvironment의 microArrays의 사용 (MEArrays)

이 동영상은 다분화능 골수 기질 세포(BMSC)에서 슈반 세포 유사 세포를 얻는 방법을 보여줍니다. 초기에 BMSC는 저산소증(hypoxia) 치료를 받은 후 신경 전구 세포(neuronal progenitor cell)로 직접 분화합니다. 그 후, 특정 배지 및 배양 조건을 사용하여 이러한 전구 세포가 슈반 세포와 같은 세포로 형질전환을 유도합니다.

골수 기질 세포에서 Schwann 세포 유사 세포 생성

이 비디오는 배측근신경절(DRG) 뉴런과 슈반 세포의 공동 배양을 보여줍니다. DRG 뉴런은 정렬된 축삭 성장을 위해 미리 늘어난 막에서 먼저 성장합니다. 그런 다음 슈반 세포(Schwann cell)를 도입하여 축삭돌기에 부착하여 축삭을 절연하고 신경 세포의 생존과 기능을 촉진합니다.

Pre-Stretched Membrane에서 Schwann 세포와 DRG 뉴런의 공동 배양

이 비디오는 세포 표현형 사양을 연구하기 위한 마이크로패턴 기질의 준비에 대해 설명합니다. 단백질 코팅된 마이크로패턴 PDMS 스탬프는 PDMS 코팅된 커버슬립에서 마이크로패턴을 전송하는 데 사용됩니다. 그런 다음 커버슬립을 계면활성제로 처리하여 원치 않는 표면에서 세포 부착을 방지합니다. 그런 다음 세포를 추가하여 패턴에 정착시키고 추가 분석을 위해 배양합니다.

Schwann 세포 표현형 연구를 위한 마이크로패턴 기질의 준비

여기 SCS는 확장 axons을 함께 개발 할 수 있습니다하는 Schwann 세포 (SC) 마이그레이션 분석을 설명합니다.

성장 Axons 함께 손쥐 Schwann 세포 개발 분석

상피에서 중간엽으로의 전이(EMT)는 암이 침습적이 될 수 있도록 합니다. EMT를 조사하기 위해 혈청과 효소가 없는 신경줄기세포(NSC) 기반 체외 모델을 설명합니다. 이 표준화된 시스템을 통해 세포 이동, 유전자 및 단백질 발현에 대한 정량적 및 정성적 평가를 수행할 수 있습니다. 이 모델은 신약 개발에 적합합니다.

약 발견에 적합 EMT 조사를위한 효소 - 및 혈청이없는 신경 줄기 세포 배양 모델

이 프로토콜은 랫트에서 분리된 등뿌리 신경절(DRG) 뉴런의 분리와 축삭 정렬을 향상시키기 위한 정적 사전 스트레치 세포 배양 시스템에서 DRG 뉴런의 배양을 설명하며, 이후 슈반 세포(SC)의 공동 배양은 수초화를 촉진합니다.

접근 방법은 등쪽 뿌리 신경절 뉴런의 정렬 및 수초를 강화하는

골수 내에서 골수 간질 세포 (MSC)가 존재합니다. 우리의 프로토콜은 hypoxic preconditioning을 통해 세포의 인구를 풍요롭게하고 이후 그들이 성숙한 Schwann 세포가되도록 지시합니다.

성숙한 슈반 세포 생성을위한 골수 유래 선조 세포의 저산소 전처리

이 문서에서는 물리와 화학의 높은 처리량 조작 신호 세포 microenvironments vivo에서 흉내 낸 고을 다중화 인공 세포 MicroEnvironment (MACME) 배열 준비 하 상세한 방법론 단일 셀 프로 파일링 인간 만능 줄기 세포 (hPSCs)를 위한 최적의 휴대폰 환경을 식별 합니다.

멀티플렉스 인공 세포 MicroEnvironment 배열의 제작

여기서는 3D 매트릭스에서 축산이 자라는 동작을 분석하여 자연 발달을 모방하는 방법을 제공합니다.

신경계 발달 중 축산 성장과 행동을 분석하는 3-D 콜라겐 기반 하이드로겔 생성

배우세요 슈완 세포 표현형 사양을 평가하기 위한 튜블드 세포 외 세포 매트릭스 미세 환경 준비 방법을. 미세 접촉 인쇄와 면역형광 염색을 활용하여 기질 경도와 단백질 구성을 정밀하게 제어할 수 있습니다.

슈완 세포 표현형 사양을 평가하기 위한 튜블드 세포 외 세포 매트릭스 미세 환경의 준비

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