이더말 미세칼로리메트리를 사용하여 새로운 천연 제품의 박테리시달 또는 박테리오정성 효과를 결정하는 대사 프로파일링

새로운 항균 화합물의 행동 모드를 이해하는 것은 중요하지만 어려운 작업입니다. 이 방법은 이러한 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하며 구현하기 쉽습니다. 이 기술은 추가 견본 분석을 가능하게 하는 비침습적인 방식으로 항균 효력의 실시간 관찰을 허용합니다.

미생물 기술로 연습하는 것은 전제 조건이지만 실험은 수행하기 쉽습니다. 처음으로 미세 칼량 분석을 수행 할 때 데이터 분석으로 시간을 보내는 것은 매우 중요합니다. 600 나노미터의 파장에서 분광계를 사용하여 야간 배양의 광학 밀도를 측정합니다.

배양을 신선한 MHB 중간 농도의 밀리리터당 5회 10번으로 희석하고 관심의 농도로 항생제의 각 1.5 밀리리터 튜브에 150 마이크로리터의 세포를 첨가한다. 그런 다음 화합물을 소용돌이에 의해 세포와 혼합합니다. 인서트를 준비하려면 각 박테리아 항생제 혼합물의 120 마이크로리터를 48웰 플레이트의 적절한 우물에 개별 플라스틱 인서트에 넣고 핀셋을 사용하여 모든 티타늄 바이알을 홀더에 넣습니다.

인서트를 홀더 플레이트의 티타늄 바이알에 부드럽게 옮기고 티타늄 뚜껑을 모든 바이알에 느슨하게 놓습니다. 모든 인서트가 전달되면 홀더를 샘플 스테이션의 지정된 영역에 배치하고 40cm뉴턴 미터로 설정된 토크 렌치를 사용하여 모든 뚜껑을 조입니다. 시스템 소프트웨어에서 새로운 실험을 시작하고 계측기에서 샘플 삽입 암을 철회합니다.

컵 홀더를 브리지에 놓고 컬럼 8개가 샘플 삽입 개구부를 향하게 하고 컵 홀더를 1위치에 있는 악기에 부드럽게 밀어 넣습니다. 실험용 우물에 레이블을 지정하기 전에 시스템이 안정화될 때까지 10분 간 기다립니다. 다음으로, 컵 홀더가 2위치에 놓일 때까지 샘플 삽입 암을 밀어 넣습니다.

시스템이 20분 동안 안정화될 수 있도록 허용한 후, 시료 삽입 암을 밀어 3개의 위치를 지정하고 실행 위치에 있을 때까지 시료 삽입 암을 철회합니다. 소프트웨어의 모든 우물을 강조하고 반응 시작을 선택한 다음 열 방출 판독이 0으로 안정적으로 돌아올 때까지 실험을 실행합니다. 분석이 끝나면 중지를 선택합니다.

소프트웨어는 당신이 확신하는 경우 물어볼 것입니다. 예를 선택하고 데이터 분석을 위해 실험을 저장합니다. 그런 다음 샘플 삽입 암을 기기에 완전히 삽입하고 자석을 참여하여 컵 홀더를 회수합니다.

데이터를 분석하려면 소프트웨어를 열고 열린 실험을 선택합니다. 팝업 창에서 관심 있는 실험을 선택하고 열기를 클릭합니다. 모든 것을 선택하고 기준선을 정의하여 각 위치에서 데이터를 정규화합니다.

팝업 창에서 지연 단계 내에서 30분 이상의 기간을 선택합니다. 선택 후 열람에 기준선이 녹색으로 표시됩니다. 정의 기준단 창을 닫은 다음 저장을 클릭하고 소프트웨어를 닫습니다.

다음으로 웹 기반 SymCel 열량 분석 응용 프로그램을 엽니다. 관심 있는 파일을 업로드하고 실험을 선택하려면 찾아보기를 클릭합니다. 대사 매개 변수는 32개의 샘플에 대해 자동으로 계산됩니다.

열 흐름 데이터를 Gompertz 및/또는 Richards Growth 모델에 맞게 하려면 성장 기능을 클릭합니다. 성장 모델은 흐름 섹션의 원시 데이터와 비교하기 위해 누적 섹션에 표시됩니다. 계산된 매개 변수를 다운로드하려면 측정값을 다운로드하고 파일 위치를 선택하고 저장을 클릭합니다.

추가 분석을 위해 파일을 스프레드시트로 내보내집니다. 여기서, A.baumannii DSM-30008을 직렬 희석시 시프로플로사신에 노출시킴으로써 얻은 열화상이 표시됩니다. 0.005와 0.1 마이크로몰라 사이의 농도는 A.baumannii 성장과 신진 대사에 최소한의 영향을 미칩니다.

그러나 0.5 마이크로몰라 ciprofloxacin으로 세포를 치료하는 것은 지연 단계 지속 시간 지속 시간에 상당한 변화를 일으키고 더 낮은 최대 열 흐름으로 이어집니다. 이 두 가지 변경 사항은 함께 피크 시간에 영향을 미치므로 약 6시간이 증가합니다. 이 그림에서 누적 방출 열은 경사경사에 의해 반사되는 각 농도의 효과와 함께 시간에 대해 플롯됩니다.

열화상 경사의 정량화는 0.5 마이크로몰라 ciprofloxacin으로 처리된 세포에서 관찰되는 대사속도의 수반감소와 함께 ciprofloxacin의 존재에 있는 A.baumannii의 최대 신진 대사 속도의 계산을 허용합니다. 리팜피신 치료는 A.baumannii DSM-30008의 열화상에 극적인 영향을 미칩니다. 신진 대사 활동의 감소와 상관 관계가 있는 열 방출의 현저한 감소는 또한 관찰됩니다.

시험된 모든 농도에 대해 피크화하는 시간 증가와 일반적으로 bactericidal 효과에 기인하는 모든 농도에 대한 경사의 감소로 인한 신진 대사 속도의 감소를 유의한다. 최적의 결과를 얻으려면 시료를 전송할 때 역파이프를 사용하고 인서트 측에 추가 유체를 방지하여 뚜껑이 제대로 닫혀 있는지 확인합니다.