Name: 전신 흡입 시스템을 사용하여 쥐의 담배 연기 노출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 배우세요 전신 흡입 시스템을 사용하여 쥐의 담배 연기 노출 방법을. 폐기종과 조혈에 미치는 영향을 연구하여 만성 호흡기 질환의 병태생리를 이해할 수 있습니다.

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AR, XH 및 PE는 NIH 보조금 R01HL140398 및 길슨 롱겐바우 재단 보조금에 의해 지원되었습니다. DEMM과 KK는 NIH 보조금 R01HL136333 및 R01HL134880(KYK)과 헬리스 의학 연구 재단의 보조금으로 지원받았습니다. DEMM은 또한 하워드 휴즈 의학 연구소에 의해 지원됩니다 (HHMI) 고급 연구를위한 길리엄 펠로우십. PE는 또한 정밀 환경 건강 과학 NIEHS T32 ES027801 펠로우십 프로그램 교육을 통해 지원됩니다. JC와 MF는 후성 유전학 및 분자 발암발생학과와 MD 앤더슨의 후성유전학 센터(MF에 대한 학자 상)의 담배 연구 기금에 의해 지원됩니다. FK와 YZ는 NIH 보조금 R01 ES029442-01 및 R01 AI135803-01뿐만 아니라 VA 메리트 보조금 CX0000104에 의해 지원됩니다. 이 프로젝트는 베일러 의과 대학의 세포 측정 및 세포 선별 코어에 의해 지원되었으며 CPRIT 코어 시설 지원 상 (CPRIT-RP180672), NIH (CA125123 및 RR024574), 조엘 M. 세더스트롬의 지원.

실험과이 기술의 개발에 관련된 모든 동물은 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)와 실험실 동물 관리 (AAALAC)의 평가 및 인증 협회에 의해 인가 된 베일러 의과 대학 및 MD 앤더슨 기관에서 승인 한 동물 사용 프로토콜에 따라되었습니다.
1. 장치 구축
<ol><li>밸브 시스템으로 공기 압축기 조립.
	<ol>
<li>1/8 인치 나사 로 처리 된 남성 어댑터 젖꼭지 피팅을 사용하여 유량계 (Y 막대와 2 개의 전원 이륙과 2 개의 전원 이륙)를 소형 압력 조절기에 연결합니다. 스레드가 있는 모든 끝에 스레드 씰 테이프를 사용해야 합니다.</li>
		<li>조립된 압력 레귤레이터를 컴프레서 공기 콘센트의 1/8 인치 육각 형 젖꼭지, 1/8 인치 나사 커플링 피팅 및 압력 조절에 연결되는 1/8 인치 나사 남성 어댑터 젖꼭지 피팅과 같은 유량계와 유량계를 연결합니다.</li>
		<li>각 (4) 유량계에 산소 회전 가시 커넥터를 설치합니다.</li>
		<li>공기 압축기의 상단 공기 콘센트에 남성 어댑터를 설치합니다 (의료 공기 압축기 기기에 포함 된 부분).</li>
	</ol></li>
	<li>어셈블 챔버(4유닛 확인)
	<ol>
<li>3/4 인치 염소 화 폴리 염화 비닐 (CPVC) 파이프를 8 개의 4 인치 세그먼트로 자른다.</li>
		<li>각 세그먼트를 3/4 인치 90° 팔꿈치 CPVC 피팅에 삽입하고 팔꿈치의 피팅 측면을 3/4 인치 직경 CPVC 남성 어댑터에 부착합니다. CPVC 세그먼트는 8개여야 하며, 각 세그먼트는 하나의 CPVC 팔꿈치 피팅과 1개의 CPVC 남성 어댑터에 부착되어야 합니다.</li>
		<li>뚜껑이 있는 8.5L 밀폐 용기(11.25 x 7.75 x 6인치)의 반대편에서 두 개의 구멍(직경 1 1/4인치)을 드릴링합니다(그림 1 노출 챔버 참조). 구멍의 위치는 위에서 아래로, 왼쪽에서 오른쪽으로 중앙으로 지정됩니다.</li>
		<li>용기의 각 구멍에 미리 조립된 CPVC 수컷 어댑터의 나사측면을 삽입합니다.</li>
		<li>용기 의 내부에서, 다른 쪽에 3/4 인치 CPVC 캡을 부착 (챔버 연기 입력) 한쪽에 3/4 인치 CPVC 드립 관개 여성 어댑터 (챔버 연기 출력).</li>
		<li>챔버 연기 출력의 CPVC 캡 상단에 5 개의 3mm 구멍을 퀸쿤스 (샤워 헤드) 패턴으로 드릴. 이렇게 하면 담배 연기가 더 높은 속도의 챔버에 들어갈 수 있으며 모든 방향으로 챔버 내부에 고르게 퍼집니다.</li>
	</ol></li>
	<li>조립 담배 챔버 (4 뮤린 노출 단위까지 구성)
	<ol>
<li>1홀 고무 스토퍼(제조사 크기 8.5)를 가지고 넓은 면에 1/4 인치 가시 Y 커넥터와 좁은 면에 직선 가시 피팅 (8mm 개구부)을 삽입하십시오. 담배는 흡연 시술(담배 받침대)에 배치됩니다.</li>
		<li>12인치 길이의 의료용 비닐 파이프의 한쪽 끝을 고무 스토퍼에 부착된 Y 커넥터의 가시 커넥터 중 하나에 연결하고 다른 쪽 끝은 1/4 인치 피팅에 부착하고 이 피팅의 반대쪽을 1 홀 고무 스토퍼 (제조업체 크기 1)에 삽입합니다.</li>
		<li>다른 고무 스토퍼(제조업체 크기 8.5)에 1/4인치 직선 튜브 커넥터를 스토퍼의 넓은 측면에 삽입하고 피팅의 외부 끝을 7피트 의학적 등급의 비닐 파이프에 연결합니다.</li>
		<li>실험실 유리 드레인 튜브에서 1.3.1-1.3.3 단계 에서 조립 된 두 개의 고무 스토퍼 구조를 8 인치 x 1.75 인치 유리 실린더에 연결합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>밸브 제어 시스템
	<ol>
<li>이 시스템은 담배 연기와 깨끗한 공기의 흡입 (퍼핑)을 시뮬레이션하는 솔레노이드 밸브의 리듬 개폐에 의해 제어됩니다. 솔레노이드 밸브를 제어하는 시스템은 상업적으로 설계되었습니다(재료 표참조).</li>
	</ol></li>
	<li>모든 구성 요소를 함께 조립(그림 1참조)
	<ol>
<li>1인치 패스너를 사용하여 밸브 제어 시스템의 측면에 4개의 솔레노이드 밸브를 장착합니다.</li>
		<li>솔레노이드 밸브를 제조업체의 지시에 따라 밸브 제어 시스템에 연결합니다.</li>
		<li>10-32(M) 나사 직선 커넥터를 솔레노이드 밸브의 배기("EXH") 연결과 동일한 솔레노이드 밸브의 "IN" 및 "OUT" 연결에 나사로 된 포트 어댑터를 부착합니다.</li>
		<li>7피트 의료급 비닐 튜브를 사용하여 "OUT" 연결을 통해 압축기에 부착된 유량계를 솔레노이드 밸브에 연결합니다.</li>
		<li>1.3.3 단계에서 고무 스토퍼와 조립 된 7 피트 비닐 튜브를 연결합니다. 솔레노이드 밸브의 "IN" 커넥터에.</li>
		<li>챔버 연기 입력에 담배 챔버의 작은 고무 스토퍼를 삽입합니다.</li>
		<li>솔레노이드 밸브를 1.3.1 단계에서 조립한 담배 받침대에 가시 Y 커넥터의 두 번째 연결에 연결합니다.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61793/61793fig01.jpg"> 그림 1: CS에 노출하기 위한 WBIS 연결의 회로도. 이 그림은 모든 구성 요소가 작업 장치를 형성하기 위해 조립되는 방법을 보여줍니다. 이 그림은 기계가 작동 할 수있는 4 개의 조립 흡연 챔버 를 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61793/61793fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
2. 담배 연기 노출
주의: 담배 연기에 대한 두 번째 및 세 번째 노출을 피하십시오. 담배 및 노출 챔버는 클래스 II 유형 B2 라미나르 흐름 생물학적 안전 캐비닛 내에서 사용되어야한다. 적절한 PPE는 연기 노출 실험 (즉, 마스크, 장갑, 헤어 넷, 가운)을 수행하는 동안 착용해야합니다.
<ol><li>
압력 및 기류 설정
	<ol>
<li>그림 1에표시된 대로 모든 구성 요소가 조립되면 공기 압축기를 켜고 안전 경보가 자체적으로 꺼지기를 기다립니다.</li>
		<li>압력 조절기의 노브를 돌려 공기 압축기의 압력을 40-50 psi로 조정합니다.</li>
		<li>유량계를 사용하여 공기 압축기에서 5L로 공기 흐름을 조정합니다.</li>
		<li>밸브 컨트롤러를 켭니다.</li>
		<li>밸브 컨트롤러의 디지털 타이머를 PULSE-C(디스플레이에 "Pu-c"로 표시됨)로 조정하여 SET/LOCK 키를 눌러 타이머의 첫 번째 숫자에서 UP 키를 누른다. 그런 다음 Pu-c 모드에 도달할 때까지 UP 키를 누릅니다. 리셋 키를 눌러 표시된 작동 모드(예: Pu-C)를 작업 모드로 설정합니다.</li>
		<li>SET/LOCK을 눌러 타이머 1을 변경합니다(디스플레이에 "T1"으로 표시됨).</li>
		<li>UP 또는 DOWN 키를 눌러 T1을 20s로 설정합니다.</li>
		<li>SET/LOCK을 눌러 타이머 2를 변경합니다(디스플레이에 "T2"로 표시됨).</li>
		<li>UP 또는 DOWN 키를 눌러 T2를 3으로 설정합니다. 참고: 단계 2.1.5 ~ 2.1.9는 특정 타이머와 함께 사용할 수 있도록 조정됩니다(재료 표참조). 이 제품의 다른 용도에 대한 자세한 지침은 해당 사용자 설명서를 참조하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
담배 연기 치료 참고 : 이 시스템은 동시에 1-4 뮤린 노출 챔버의 사용을 허용합니다.<ol>
<li>공기 압축기를 켜고 안전 경보가 자체적으로 꺼지기를 기다립니다.</li>
		<li>밸브 컨트롤러를 켭니다.</li>
		<li>8.5L의 부피를 가진 밀폐 된 탈착식 뚜껑을 가진 4개의 노출 챔버각각에 5 마우스를 전송하는 것은 클래스 II 타입 B2 Laminar 흐름 생물 안전 캐비닛 내의 마우스로 4개의 노출 챔버를 놓습니다.</li>
		<li>라미나르 플로우 생물학적 안전 캐비닛 내부에 담배를 밝히고 담배 실 내부에 담배를 삽입합니다. 켄터키 3RF4 연구 담배 (9.5 mg /cig tar 및 0.73 mg/cig 니코틴)에 비해 15 mg /cig 타르 및 1.1 mg /cig 니코틴8을 포함하는 시판되는 담배를 사용하십시오9.</li>
		<li>현재 사용 중인 챔버에 해당하는 밸브 컨트롤러의 밸브를 켭전환합니다. 노출은 2단계로 나뉩니다: (T1) 깨끗한 공기는 20s용 노출실로 펌핑되고 (T2) 공기흐름은 담배챔버로부터 연소및 연기가 3s에 대한 노출실로 펌핑된다. 담배가 필터에 도달할 때까지 완전히 타버릴 수 있도록 합니다.<ol>
<li>타이머 설정을 조정하여 ~4분 동안 평균 ~10퍼퍼/담배를 수행합니다. 타이머와 시스템은 조사자의 연구 요구에 따라 CS 투약 요법을 향상시크거나 낮추기 위해 쉽게 사용자 정의 할 수 있습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>담배 필터를 제거하고 담배 꽁초를 유리 비커에 물로 놓고 불을 끄고 냄새를 약화시킴으로써 폐기하십시오.</li>
		<li>담배 실이 담배 없이 다시 닫혀 있는지 확인하십시오. 기계가 10 분 동안 깨끗한 공기를 펌프하자. CS에 노출된 척추동물에 대한 지속적인 모니터링을 유지하는 것이 가장 중요합니다. 이 노출 요법은 노출 챔버 당 9 주 이상 5 여성 마우스에 최적화됩니다.</li>
		<li>하루에 챔버당 총 4개의 담배에 대해 2.3.4~2.3.7을 3회 반복합니다. 이 절차는 연구원이 그들의 실험을 위해 필요로 하는 한 주 5 일 반복됩니다.</li>
		<li>노출 실에서 마우스를 해당 케이지로 다시 제거합니다.</li>
		<li>밸브 컨트롤러와 공기 압축기에서 끕니다.</li>
		<li>노출 및 담배 챔버를 제거하고 타르의 잔류물을 제거하기 위해 물과 비누로 씻어.</li>
		<li>다시 사용하기 전에 챔버를 완전히 건조시키십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Current Cigarette Smoking Among Adults in the United States. Center for Disease Control and Prevention. , Available from: 
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</ol>

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여기서 우리는 CS에 마우스의 WBIS에 대한 장치의 건설에 필요한 정보를 제공합니다. 시스템의 설치 후, 조사관이 동물에서 니코틴 또는 코티닌의 전달 된 복용량에 따라 시스템을 보정하는 것이 매우 중요합니다. 이 장치에는 담배 퍼프 볼륨, 퍼프 주파수, 결합된 연기 노출 기간 및 동물이 각 담배 사이에 받는 휴식 간격을 조절하는 데 사용할 수 있는 타이머 및 압력 게이지가 포함되어 있습니다. 더욱이, 매일 투여되는 담배의 실제 수는 타르 및 니코틴 함량에 따라 달라질 수 있다. 마지막으로, 담배 연기에 노출된 모든 성분은 동물의 적절한 연기 순환과 일관된 연기 노출을 보장하기 위해 정기적으로 청소해야 합니다.
CS 및 공기 독성물질을 가진 마우스의 처리를 위해 적어도 반 다스 상용 시스템 및 프로토콜이 있습니다. 그러나 이러한 목적으로 사용되는 장비의 대부분은 상업용 공급업체 또는 조립용 전자 제품 및/또는 전기 공학에 대한 심층적인 지식이 필요합니다. 그 시스템 중 일부는 W...

담배 흡연은 지난 50~60년 동안 담배 흡연 성인의 수가 꾸준히 감소했음에도 불구하고 미국에서 예방 가능한 질병의 주요 원인중하나입니다. 흡연은 폐종 과 만성 기관지염2,3,4를포함하는 질환군인 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)을 포함한 폐와 혈액의 여러 질환과 관련이 있는 것으로 널리 알려져 있다. 질병 통제 센터 (CDC)에 따르면, 2014년에, COPD는 이 질병 때문에 손해를 입은 1,500만 명 이상의 미국인과 미국에서 죽음의 세 번째 주요한 원인이었습니다5.
CS는 또한 최근에 단일 조혈 줄기 세포가 불균형하게 사람의 말초 혈액의 큰 비율을 생성하는 조건인 클로날 조혈 (CH)6,7을개발의 고위험과 연관되었습니다. 이 발견은 흡연과 골수 기능 사이의 잠재적인 연결을 나타냅니다. CS의 광범위하고 매우 중요한 건강 영향을 감안할 때 질병의 뮤린 모델은 생물 의학 연구에서 진보의 초석임을 감안할 때, 마우스에서 CS를 모델링하는 효율적이고 저렴한 시스템을 개발하는 것이 유용합니다.
여기에서, 우리는 폐 폐기종과 골수 항상성에 CS의 생체 내 효과를 치료하고 공부하기위한 저렴한 시스템을 구축하기위한 단계별 가이드를 제공합니다. 이 장비의 조립은 사용자가 전문 지식을 가질 필요가 없으므로 DIY 조립을 허용합니다.

<table><tbody><tr><td>1 인치 패스너</td><td>Lowes</td><td>756990</td><td></td></tr><tr><td>1/4 인치 바베드 Y 커넥터</td><td>VWR</td><td>89093-282</td><td></td></tr><tr><td>1/4 인치 스트레이트 튜빙 커넥터</td><td>VWR</td><td>62866-378</td><td></td></tr><tr><td>1/8 육각 니플</td><td>Lowes</td><td>877221</td><td></td></tr><tr><td>1/8 인치 나사식 커플링 피팅</td><td>Lowes</td><td>877208</td><td></td></tr><tr><td>1/8 인치 나사식 남성 어댑터 니플 피팅</td><td>Lowes</td><td>877243</td><td></td></tr><tr><td>10/32 (M) 나사산 직선 커넥터</td><td>Bimba</td><td>EB60</td><td></td></tr><tr><td>3/4 in 90도 엘보우 CPVC 피팅</td><td>Lowes</td><td>22643</td><td></td></tr><tr><td>3/4 in 염소화 폴리염화비닐 (CPVC) 파이프</td><td>Lowes</td><td>23814</td><td></td></tr><tr><td>3/4 in CPVC 캡</td><td>Lowes</td><td>23773</td><td></td></tr><tr><td>3/4 in CPVC 드립 관개 암 어댑터</td><td>Lowes</td><td>194629</td><td></td></tr><tr><td>직경 3/4 인치 CPVC 남성 어댑터</td><td>Lowes</td><td>23766</td><td></td></tr><tr><td>8.5 L 밀폐 용기 뚜껑 포함 (11.25in x 7.75in x 6 in)</td> <td>Komax</td><td>N/A</td><td>"Komax Biokips 대형 빵 상자"로 등재됨 | (280온스) 대형 저장 용기"</td></tr><tr><td>유리 배수관(직경 1.75인치 x 길이 8인치)</td><td>KIMAX</td><td>6500</td><td></td></tr><tr><td>아이소닉 솔레노이드 밸브</td><td>빔바</td><td>V2A02-AW1</td><td></td></tr><tr><td>말보로 레드 100's</td><td>말보로</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>산소 회전 철조망 커넥터</td><td>Global Medical Solutions</td><td>RES002</td><td></td></tr><tr><td>파나소닉 타이머 LT4H-W</td><td>파나소닉</td><td>LT4HW</td><td>항목은 Shepherd Controls & Associates</td></tr><tr><td>압력 조절기</td><td>Allied Electronics and Automation</td><td>70600552</td><td>"Norgren R07-100-RGKA"로도 등재</td></tr>되어 <tr><td>있습니다. 고무 마개 # 1 (한 구멍)</td><td>VWR</td><td>59581-163</td><td></td></tr><tr><td>고무 마개 # 8.5 (한 구멍)</td><td>VWR</td><td>59581-389</td><td></td></tr><tr><td>Scireq inExpose 시스템</td><td>Scireq 및 Emka Technologies</td><td>N/A</td><td>우리의 비교를 위해 사용되는 상업용 시스템입니다. DIY WBIS</td></tr><tr><td>스트레이트 바브 피팅 (8mm 개구부)</td> <td>VWR</td><td>10028-872</td><td></td></tr><tr><td>스레드 실란트 테이프</td><td>Lowes</td><td>1184243</td><td></td></tr><tr><td>스레드 포트 어댑터</td><td>Bimba</td><td>P1SA1</td><td></td></tr><tr><td>Timeter Aridyne 2000 의료용 공기 압축기</td><td>MFI Medical</td><td>AHC-TE20</td><td></td></tr><tr><td>Timeter 유량계</td><td>Allied Healthcare Products</td><td>15006-03YP2</td><td>또한 "청교도 공기 미터"로 나열</td></tr> <tr><td>된 밸브 제어 시스템</td><td>Shepherd Controls and Associates</td><td>N / A</td><td>Company는이 모델의 밸브 제어 시스템을 맞춤 설계했습니다.</td></tr><tr><td>비닐 파이프</td><td>바이탈리티 메디컬</td><td>RES3007</td><td></td></tr></tbody></table>

전신 흡입 시스템을 사용하여 쥐의 담배 연기 노출

Cigarette Smoke Exposure in Mice using a Whole-Body Inhalation System

2018년 미국 성인의 14%에 가까운 사람들이 담배를 피우는 것으로 보고되었습니다. 폐와 심혈관 질환에 대한 담배 연기(CS)의 영향은 널리 연구되었지만 혈액및 골수와 같은 다른 조직 및 장기에서 CS의 영향은 불완전하게 정의되어 있습니다. 설치류에서 CS의 효과를 연구할 적절한 시스템을 찾는 것은 엄청나게 비싸고 시판되는 시스템을 구입해야 합니다. 따라서, 우리는 마우스에서 CS의 병리학적 효과를 연구하기 위해 저렴하고 신뢰할 수 있으며 다재 다능한 시스템을 구축하기 시작했습니다. 이 전신 흡입 노출 시스템(WBIS)은 CS와 깨끗한 공기에 대한 노출을 번갈아 가며 담배의 호흡과 퍼핑을 모방합니다. 여기서 우리는 이 do-it-yourself (DIY) 시스템이 담배 연기 노출의 4 달 후에 마우스에 있는 기도 염증 및 폐 폐기종을 유도한다는 것을 보여줍니다. 이 장치를 사용하여 골수에서 조혈 줄기 및 선조 세포 (HSPC)에 대한 CS의 전신 흡입 (WBI)의 효과도 도시되어 있습니다.

CS 노출의 주요 특징 중 하나는 폐에서 공기 주머니 (폐포)의 손상과 파괴를 특징으로하는 폐기종입니다. 따라서, 초기 실험은 CS에 반복된 전신 노출시 여성 마우스의 폐에 있는 폐기종 변화를 유발하는 DIY 시스템의 기능에 초점을 맞추게 되었습니다. CS 투약 요법은 우리가 CS로 마우스를 치료하고 폐기종10,11, 12,13,14,15,16의분자 병리생리학을 연구하기 위해 여기에 설명된 DIY 시스템을 활용한 우리의 이전 간행물에 기초하여 선택되었다. 구체적으로, 마우스는 매일 필터를 가진 4개의 상용 담배의 연기...

이 프로토콜은 사내에서 지어진 전신 흡입(WBI) 노출 시스템(WBI)을 통해 담배 연기(CS)의 병리학적 효과에 대한 연구를 보여줍니다. 이 시스템은 폐 기종및 혈청증에 대한 CS 중재 효과의 연구를 위한 통제된 반복조건하에서 CS에 동물을 노출할 수 있습니다.

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular ...

이 기술은 만성 기도 염증 및 폐기종에서 담배 연기의 생리학적 영향과 생쥐의 골수 면역 세포 발달을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 장비는 저렴한 비용과 간단한 제작 절차로 인해 전 세계의 많은 실험실에서 사용할 수 있습니다. 전신 흡입 노출 시스템의 모든 구성 요소를 조립한 후 공기 압축기를 켜고 안전 경보가 저절로 꺼질 때까지 기다립니다.압력 조절기의 손잡이를 돌려 공기 압축기의 압력을 40-50PSI로 조정합니다. 유량계를 사용하여 공기 압축기의 공기 흐름을 5리터로 조정합니다. 그런 다음 밸브 컨트롤러를 켭니다.타이머의 첫 번째 숫자에 있는 위쪽 키를 누른 상태에서 설정된 잠금 키를 눌러 밸브 컨트롤러의 디지털 타이머를 펄스 C 작동 모드로 조정합니다. 그런 다음 PU-C 모드에 도달할 때까지 위쪽 키를 누릅니다. 리셋 키를 눌러 표시된 작동 모드를 작업 모드로 설정합니다.잠금 설정을 눌러 디스플레이에 T1으로 표시된 타이머를 변경한 다음 위 또는 아래 키를 눌러 20초로 설정합니다. 이 과정을 반복하여 타이머 2 또는 T2를 3초로 설정합니다. 공기 압축기를 켜고 안전 경보가 저절로 꺼질 때까지 기다립니다.그런 다음 밸브 컨트롤러를 켭니다. 5마리의 마우스를 밀폐형 탈착식 뚜껑이 있는 4개의 8.5리터 노출 챔버 각각으로 옮깁니다. 노출 챔버를 Class II 유형 B2 층류 생물 안전 캐비닛 내부에 놓습니다.생물 안전 캐비닛 내부에서 담배에 불을 붙이고 담배 챔버에 삽입합니다. 현재 사용 중인 챔버에 해당하는 밸브 컨트롤러의 밸브를 켭니다. 깨끗한 공기가 20초 동안 노출 챔버로 펌핑되어 담배가 타오르고 연기가 3초 동안 노출 챔버로 펌핑됩니다.담배가 필터에 도달할 때까지 담배가 완전히 타도록 하십시오. 타이머 설정을 조정하여 4분 동안 담배당 평균 10번의 담배를 피우도록 합니다. 담배 필터를 제거하고 물이 든 유리 비커에 담배꽁초를 넣어 불을 끄고 냄새를 적셔 폐기합니다.담배 챔버를 닫고 기계가 10분 동안 깨끗한 공기를 펌핑하도록 합니다. 하루에 챔버당 총 4개비의 담배 연기 노출을 반복합니다. 완료되면 노출 챔버에서 마우스를 제거하고 해당 케이지에 다시 넣습니다.밸브 컨트롤러와 공기 압축기를 끕니다. 노출과 담배 챔버를 제거하고 물과 비누로 씻어 타르 잔여물을 제거하십시오. 다시 사용하기 전에 챔버를 완전히 건조시키십시오.생쥐는 4개월 동안 일주일에 5일 동안 각 담배 사이에 10분 간격으로 매일 4개의 상업용 담배 연기에 노출되었습니다. Hematoxylin 및 Eosin 염색 폐 조직학은 담배 연기에 노출 된 마우스에서 폐포의 파괴를 보여주었다. 폐 절편에 대한 맹검 조직형태 분석은 담배 연기에 노출된 쥐에서 평균 선형 절편이 공기 대조군에 비해 유의하게 높다는 것을 확인했습니다.예상대로 담배 연기에 전신이 노출되면 체중이 감소합니다. 노출된 마우스는 또한 면역 세포의 기도 침투가 향상되었을 뿐만 아니라 조직 손상의 원인이 되는 기질 금속단백분해효소 9 및 12 유전자 발현의 유도를 보여주었습니다. 니코틴의 대사 산물인 코티닌은 4개월 동안 담배 연기에 노출된 쥐의 혈청에서 현저하게 증가했지만 공기에 노출된 쥐에서는 검출되지 않았습니다.노출 후, 골수 개체군은 유세포 분석을 사용하여 분석되었습니다. 담배 연기에 노출된 지 4개월 후 조혈 줄기 및 전구 개체군의 현저한 증가가 감지되었습니다. 상업적으로 이용 가능한 시스템을 사용하는 마우스의 담배 연기에 대한 전신 노출도 HSPC 개체군의 변화를 보여주었습니다.공기 또는 담배 연기를 마우스 챔버로 전달하는 모든 도구가 막히지 않고 공기 흐름을 방해할 수 있는 꼬임이 없는지 확인하는 것이 중요합니다. 또한 쥐는 담배 연기에 노출되는 동안 항상 모니터링해야 합니다. 이 절차는 또한 담배 연기가 심장 및 위장관과 같은 다른 장기 시스템에 미치는 생리학적 영향을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.몇 가지 수정을 통해 이 기계는 전자 담배에 대한 마우스의 전신 흡입 노출에도 적응할 수 있습니다. 이를 통해 연구원들은 쥐 동물 모델에서 전자담배와 관련된 잠재적 위험을 연구할 수 있습니다.

cigarette-smoke-exposure-in-mice-using-a-whole-body-inhalation-system

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

폐 상피 세포는 생쥐의 호흡기로부터 격리하고 차별 호흡기 상피의 모델로 공기 - 액체 인터페이스에서 교양 수 있습니다. 프로토콜이 환경 독소에 분자 반응을 연구하기 위해, culturing를 분리하고 주류 담배 연기 이러한 세포를 노출에 대해 설명합니다.

에어 리퀴드 인터페이스에서 마우스 호흡기 상피 세포 및 실험 담배 연기에 노출의 분리

전신 나노 입자 에어로졸 흡입 노출 시설은 (산화 티타늄 나노 크기의 이산화 티탄을 위해...

전신 나노 입자 에어로졸 흡입 노출

이 프로토콜의 목표는 COPD의 쥐 모델에서 만성 폐 병리학을 정량화하는 자동화된 방법을 제공하는 것입니다. 이 프로토콜에는 생쥐를 담배 연기(CS)에 노출시키고, 폐 기능을 측정하고, 폐를 팽창시키고, 형태 측정 방법을 사용하여 생쥐의 폐기종 및 소기도 재형성을 측정하는 것이 포함됩니다.

담배 연기에 노출 된 마우스의 폐 폐기종 및 작은기도 리모델링 자동 측정

이 프로토콜의 목적은 인체 유기형 3D 기관지 및 코 조직 모델을 공기-액체 계면에서 주류 담배 연기(CS)에 노출시키는 것입니다. 그런 다음 시토크롬 P450 활성 분석, 섬모 박동 측정 및 시스템 생물학 접근 방식을 사용하여 CS가 조직에 미치는 영향을 조사합니다.

전체 담배 연기에의 Organotypic 3D 기관지와 코 조직 문화 모델의 반복 노출의 영향 평가

이 프로토콜은 설치류를 전자 담배 (E-vapor) 및 담배 연기에 노출시키는 방법을 설명합니다. 노출 챔버는 설치류에 전자 증기 또는 담배 연기를 전달하는 자동화 된 펌핑 시스템으로 마취 챔버를 개조하여 구성됩니다. 이 시스템은 많은 실험적 엔드 포인트를 수용하도록 쉽게 수정할 수 있습니다.

전자 담배와 담배 연기의 효과 비교<em&gt; In Vivo</em&gt; 노출 시스템

이 연구는 반복적으로 오존의 높은 농도에 쥐를 노출 하 여 새로운 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 동물 모델의 성공적인 세대를 설명 합니다.

반복된 오존 노출에 의해 쥐에 만성 폐쇄성 폐 질환 모델의 생성

전자 담배 (전자-cig) 사용자는 전 세계적으로 증가 하 고 있다. 그러나 작은,, 전자 cig 흡입된에 어로 졸에 의해 유도 된 건강 효과 대 한 알려져 있다. 이 문서는 전자 cig에 어로 졸 생성 기법 동물 노출 및 후속 독물학 연구를 위한 적합 한 설명. 이러한 프로토콜 실험적으로 재현 하 고 표준화 된 전자 cig 노출 시스템을 설정 해야 합니다.

3 세대 기계 Vaping 장치에서 전자 담배에 어로 졸의 생성: 독물학 연구 응용 프로그램

여기에 제시된 폐 고정을 위한 유용한 프로토콜은 기종의 마우스 모델에서 폐 견본의 조직학적 평가를 위한 안정한 조건을 만드는. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력으로 많은 폐를 고정 할 수 있다는 것입니다.

마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정

본 연구는 실험용 규폐증 마우스에서 니코틴이 폐섬유증 진행에 미치는 시너지 효과를 연구하기 위한 마우스 모델을 설명한다. 이중 노출 마우스 모델은 니코틴과 실리카에 동시에 노출된 후 폐의 병리학적 진행을 시뮬레이션합니다. 설명된 방법은 간단하고 재현성이 높습니다.

폐 상피-중간엽 전이를 촉진하기 위해 실리카 노출 마우스 모델에서 니코틴 사용

대마초 증류액 vape 카트리지는 고농도의 카나비노이드를 함유한 추출물을 에어로졸화하는 배터리 구동 장치입니다. 이러한 제품에 대해 확립된 전임상 모델이 없기 때문에 생리학적 효과를 연구하는 데 어려움이 있습니다. 이 격차를 해소하기 위해, 기화된 대마초 증류액에 대한 표준화된 전임상 흡입 쥐 모델이 개발되었습니다.

기화된 대마초 증류액을 테스트하기 위한 전임상 흡입 모델 개발

배우세요 전신 흡입 시스템을 사용하여 쥐의 담배 연기 노출 방법을. 폐기종과 조혈에 미치는 영향을 연구하여 만성 호흡기 질환의 병태생리를 이해할 수 있습니다.

전신 흡입 시스템을 사용하여 쥐의 담배 연기 노출

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