Name: 전체 종자 크기의 수지 섹션 및 응용 프로그램을 얻기위한 간단한 건조 단면 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 학습하세요 옥수수 전체 종자의 수지 섹션 제작 방법을 LR White 수지를 사용하여 세포, 전분 과립, 단백질 소체의 형태를 관찰하고 정량 분석하는 기술입니다. 이 방법은 종자 발달 생물학 및 품질 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

기금은 중국 국립 자연과학 재단(32071927), 양주대학교 인재프로젝트, 장쑤고등교육기관의 우선학술프로그램 개발등을 통해 지원되었다.

1. 수지 임베디드 씨앗의 준비 (그림 1)
<ol><li>48h4°C에서 2.5%의 인산염 완충 글루타랄데히드(0.1M, pH7.2)의 10mL에서 6개의 옥수수 성숙한 커널을 수정한다. 연구원은 다른 고정 혼합물을 선택할 수 있습니다., 고정 농도, 그리고 그들의 연구 목표 및 조직 유형에 따라 고정 조건.</li>
	<li>커널을 꺼내 날카로운 양면 블레이드를 사용하여 2-3mm 두께로 세로 또는 반경적으로 슬라이스하고 48h에 대해 다시 2.5 % 인산염 버퍼링 글루타랄데히드 (0.1 M, pH 7.2)의 10 mL로 고정하십시오.</li>
	<li>매번 30분 동안 0.1M 인산염 버퍼(pH 7.2)의 10mL로 시료를 3회 세척한다.</li>
	<li>에탄올 수성 용액(10mL)의 등급이 30%에서 50%, 70%, 90%, 1회, 매번 30분 동안 100% 3회 씩 샘플을 탈수합니다.</li>
	<li>10mL에 샘플을 침투하여 에탄올로 희석된 LR 화이트 수지 용액의 등급을 25%에서 50%, 75%, 1회 100% 4°C에서 100% 2회 12시간 동안 침투한다.</li>
	<li>포함하기 전에 샘플을 위해 받침대를 준비합니다. 2mL 원심분리기 튜브에 100% LR 화이트 수지의 0.25 mL을 추가하고 48h에 대해 60°C로 중합합니다.</li>
	<li>순LR 화이트 수지(0.5mL)와 침투된 샘플을 받침대가 있는 원심분리기 튜브에 연속적으로 추가합니다. 해부학 바늘로 샘플을 곧게 펴고 48 h의 오븐에서 60 °C로 중합하십시오.</li>
</ol>2. 전체 종자 크기의 섹션을 준비하기위한 건식 단면(그림 1)
<ol><li>원심분리기 튜브에서 임베디드 커널을 꺼내 날카로운 블레이드를 사용하여 샘플 주위의 과잉 수지를 잘라냅니다.</li>
	<li>초미세토메(EM UC7)의 샘플 홀더에서 수지 블록을 고정하고, 샘플 표면과 블레이드로 시료 주변의 불필요한 수지에서 트림한다.</li>
	<li>완전한 단면이 형성될 때까지 유리 칼로 시료표면을 미세하게 연마한다.</li>
	<li>절단하기 전에 블레이드 가장자리 위에 약 2mm 작은 구리 후크를 넣고 샘플을 2 μm 섹션으로 자른다. 후크의 역할은 섹션의 위쪽으로 컬링을 피하는 것입니다.</li>
	<li>섹션이 길어질 때 이를 지원하기 위해 후크를 섹션 아래에 놓습니다.</li>
	<li>처리되지 않은 슬라이드에 100μL의 물을 추가하고 완전하고 부서지지 않은 부분을 핀셋으로 물로 조심스럽게 옮겼습니다.</li>
	<li>주름진 부분을 부드럽게 하기 위해 밤새 50°C의 평탄식 테이블의 샘플을 가열하고 건조시합니다.<ol>
<li>단면이 무너지거나 찢어지는 경우, 샘플의 각 수지 침투에 대한 시간을 12h에서 24h 또는 48h로 연장한다.</li>
		<li>단면에 칼과 평행한 선이 있는 경우 샘플 블록을 단단히 고정합니다. 단면에 칼에 수직으로 된 선이 있는 경우, 새 칼을 사용해 주세요.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 섹션의 염색 및 관찰
참고: 세포, 전분 과립 및 단백질 신체의 조직 구조 및 형태를 관찰하기 위해 연구의 목적에 따라 특정 얼룩으로 섹션을 얼룩지게합니다. 여기서, 우리는 형광 브라이트너(28), 요오드 용액, 쿠마시 브릴리언트 블루 R250을 사용하여 세포벽, 전분 과립 및 단백질 바디를 각각 염색합니다.
<ol><li>세포의 형태를 관찰하기 위해, 40mL의 0.1% (w/v) 형광 브라이트너 28 수성 용액으로 45°C에서 45°C에서 염색한 다음, 5분 동안 흐르는 물로 헹구는 다. CCD 카메라가 장착된 형광 현미경으로 섹션을 관찰하고 촬영합니다.</li>
	<li>전분 과립의 형태를 관찰하기 위해, 요오드 용액 40 μL (0.07 % (w /v) I2 및 0.14 % (w / v) KI를 1 분 동안 염색하고, 커버 슬립으로 요오드 용액을 포함하는 샘플을 커버한다. CCD 카메라가 장착된 가벼운 현미경으로 샘플을 보고 촬영합니다.</li>
	<li>단백질 바디의 형태를 관찰하기 위해, 40mL의 10% (v/v) 아세트산으로 40mL의 아세트산을 70mL 컴팩트 유리 스테인딩 용기에 넣고 45°C에서 10분 동안 염색한 다음, 40mL에서 1%(w/v) 쿠마시 브릴리언트 블루 R250을 25%(v/v) 이프로포탄올과 10%(v/v)로 10%(v/v)로 담급니다. 스테인드 섹션을 흐르는 물로 5분 동안 씻고 말리십시오. CCD 카메라가 장착된 가벼운 현미경으로 섹션을 관찰하고 촬영합니다.</li>
</ol>4. 형태 매개 변수의 정량적 분석
<ol><li>Zhao 외9의 절차에 따라 형태 분석 소프트웨어(Image-Pro Plus 6.0 소프트웨어)를 사용하여 종자의 다양한 영역에서 영역, 긴/짧은 축 및 세포의 원도, 전분 과립 및 단백질 체에 대한 촬영된 이미지를 정확하게 분석하고 정량적으로 분석한다.</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

씨앗은 식품, 사료 및 산업 원료에 가장 중요한 재생 가능한 자원이며 전분 및 단백질과 같은 저장 재료가 풍부합니다. 세포의 형태와 수량 및 저장 재료의 함량 및 구성은 종자7,12의무게와 품질에 영향을 미친다. 입체 및 이미지 분석 기술은 조직 지구에 있는 세포의 규모 그리고 양을 측정할 수 있더라도, 많은 실험실에서 부족합니다. 파라핀 과 수지 섹션은 2차원 (2D) 그림을 제공하여 세포의 실제 크기와 양을 분석할 방법이 없습니다. 그러나, 세포는 임의의 평면에서 무작위로 절단되며, 조직 영역의 적어도 3개의 상이한 섹션에서 많은 세포(100 이상)의 평균 크기는 세포의 2D 형태 매개변수(길이, 폭 및 면적)를 반영할 수 있으며, 선택된 영역 영역의 비율은 세포 영역을 의미하는 세포의 양을 반영할 수 있다. 따라서, 종자의 상이한 영역에서 세포 및 저장 물질의 형태를 관찰하고 분석하는 것이 매우 중요하다. 파라핀 섹션은...

식물 씨앗은 전분과 단백질과 같은 저장 물질을 포함하고 사람들에게 에너지와 영양을 제공합니다. 셀 및 저장 재료의 모양, 크기 및 양은 종자의 무게와 품질을 결정합니다. 종자의 다른 영역에서 세포 및 저장 물질은 전분 분지 효소 IIb1의억제와 일부 높은 아밀로오스 시리얼 작물에 대한 크게 다른 형태를 가지고1,2,3. 따라서, 종자의 다른 영역에서 세포 및 저장 물질의 형태를 조사하는 것이 매우 중요하다.
파라핀 단면은 종자 크기의 전체 섹션을 제조하는 좋은 방법이며 종자4,5,6의다른 영역에서 종자의 조직 구조 및 저장 물질의축적을나타낼 수 있다. 그러나 파라핀 섹션은 일반적으로 낮은 해상도로 6-8 μm 두께를 가지며; 따라서, 세포 및 저장 물질의 형태를 명확하게 관찰하고 정량적으로 분석하는 것은 매우 어렵다. 수지 섹션은 일반적으로 1-2 μm 두께와 고해상도를 가지며 세포 및 저장 재료7의형태를 관찰하고 분석하는 데 매우 적합합니다. 그러나, 일상적인 수지 단면 방법은 전체 종자 크기의 섹션을 준비하는 데 어려움이 있다, 특히 큰 볼륨과 높은 전분 함량을 가진 씨앗; 따라서, 종자의 상이한 영역에서 세포 및 저장 물질의 형태를 관찰하고 분석할 수 있는 방법은 없다. LR 화이트 수지는 아크릴 수지이며 낮은 점도와 강한 투과성을 나타내며, 특히 대량및 높은 전분 함량의 시리얼 성숙한 커널을 위해 씨앗의 수지 섹션을 준비하는 데 좋은 응용 프로그램으로 이어집니다. 또한, LR 백색 수지에 내장된 시료는 많은 화학염료로 쉽게 염색되어 빛 또는 형광 현미경7하에서 세포 및 저장 물질의 형태를 명확하게 나타낼 수 있다. 이전 논문에서, 우리는 LR 화이트 수지에 내장 된 성숙한 시리얼 커널의 전체 종자 크기의 섹션을 준비하기위한 건조 단면 방법을보고했습니다. 이 방법은 또한 개발, 발아 및 조리 된 시리얼 커널 8의 전체 종자 크기의 섹션을 준비 할 수있습니다. 획득된 전종자 크기의 섹션은 특히 종자8,9의다른 영역에서 세포 및 저장 물질의 형태 차이를 명확하게 보고 정량적으로 분석하기 위해 미세 형태학 관찰 및 분석에서 많은 응용 을 가지고 있다.
이 기술은 빛의 현미경을 사용하여 종자의 다른 지구에 있는 조직의 미세 구조 및 세포의 모양 그리고 크기, 전분 과립 및 단백질 바디를 관찰하고 싶은 연구원을 위해 적당합니다. 세포, 전분 과립 및 단백질 바디를 전시하기 위해 특별히 염색된 전체 종자 크기의 섹션의 이미지는 형태 분석 소프트웨어에 의해 분석되어 종자의 다른 영역에서 세포, 전분 과립 및 단백질 체의 형태 학적 매개 변수를 정량적으로 측정할 수 있습니다. 기술적 적용가능성과 종자 크기의 섹션 응용 을 입증하기 위해, 우리는 옥수수와 오일 시드 강간의 성숙한 씨앗과 이 연구에서 쌀의 개발, 발아 및 조리 된 커널을 조사했습니다. 프로토콜에는 네 개의 프로세스가 포함되어 있습니다. 여기서는 대형 부피와 높은 전분 함량으로 인해 전체 종자 크기의 섹션을 준비하는 데 가장 어려운 성숙한 옥수수 커널을 단계별로 공정을 전시하는 샘플로 사용합니다.

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A501931</tr><tr><td>소형 유리 염색 용기 (5개소)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>E678013</tr><tr><td>Coomassie 브릴리언트 블루 R-250</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100472</tr><tr><td>커버슬립</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518211</tr><tr><td>양면 블레이드</td><td>질레트 상하이 Co., Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 앱솔루트</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500737</tr><tr><td>평탄화 테이블</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Olympus</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>형광 증 백제 28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>유리 스트립</td><td>Leica</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde 50 % 용액</td><td>물 Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600875</tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td> (영어)<td></td><td></td>A600232</tr><tr><td>요오드</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500538</tr><tr><td>이소프로판올</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A507048</tr><tr><td>광학 현미경</td><td>올림푸스</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR 백색 수지</td><td>한천 과학</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>오븐</td><td>상하이 Jing Hong Laboratory Instrument Co., Ltd.</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>요오드화칼륨</td><td>Sangon Biotech(Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100512</tr><tr><td>Slide</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. (주)</td><td></td><td></td>F518101</tr><tr><td>핀셋</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F519022</tr><tr><td>인산나트륨 이염기성 십수화물</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A607793</tr><tr><td>인산나트륨 일염기성 이수화물</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A502805</tr><tr><td>초박절편기</td><td>Leica</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

전체 종자 크기의 수지 섹션 및 응용 프로그램을 얻기위한 간단한 건조 단면 방법

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

종자에 있는 세포의 형태, 크기 및 양, 전분 과립 및 단백질 바디는 종자의 무게 그리고 질을 결정합니다. 그들은 씨앗의 다른 영역 중 크게 다릅니다. 세포, 전분 과립 및 단백질 신체의 형태를 명확하게 보고 형태 매개 변수를 정확하게 정량적으로 분석하기 위해서는 전체 종자 크기의 섹션이 필요합니다. 전체 종자 크기의 파라핀 섹션은 종자에서 저장 재료의 축적을 조사 할 수 있지만, 두꺼운 섹션의 낮은 해상도로 인해 세포 및 저장 재료의 형태 매개 변수를 정량적으로 분석하기가 매우 어렵습니다. 얇은 수지 섹션은 고해상도를 가지고 있지만, 일상적인 수지 단면 방법은 큰 부피 및 높은 전분 함량으로 성숙한 씨앗의 전체 종자 크기의 섹션을 준비하는 데 적합하지 않습니다. 이 연구에서는 종자 크기의 수지 섹션을 준비하기위한 간단한 건조 단면 방법을 제시합니다. 이 기술은 LR White 수지에 내장된 개발, 성숙, 발아 및 조리된 씨앗의 교차 및 세로 전체 종자 크기의 섹션을 준비할 수 있으며, 심지어 높은 전분 함량이 높은 큰 씨앗에도 사용할 수 있습니다. 전체 종자 크기의 섹션은 형광 브라이트너(28, 요오드 및 쿠마시)로 염색할 수 있으며, 특히 세포, 전분 과립 및 단백질 체의 형태를 명확하게 나타낼 수 있다. 얻어진 이미지는 또한 종자의 상이한 지역에서 세포, 전분 과립 및 단백질 체의 형태 파라미터를 보여주기 위해 정량적으로 분석될 수 있다.

전체 종자 크기의 섹션을 얻기위한 간단한 건조 단면 방법 LR-화이트 수지(도1)에내장된 종자의 전체 종자 크기의 부분을 준비하기 위한 간단한 건식 단면 방법을 수립합니다. 이 방법은 2 μm의 두께를 가진 횡단 및 세로 전종 종자 크기의 섹션을 준비할 수있습니다(도 2-5,보충도 1-4). 예를 들어, 오일시드 강간의 성숙한 씨앗은 반경적으로 그리고 세로로 단면될 수있다(도 2). 시리얼 작물의 경우, 성숙한 커널은 전분 과립으로 가득차 있어 종자 크기의 전체 섹션을 준비하는 것이 매우 어렵습니다. 본 기술을 이용하여, 대용량으로 성숙한 옥수수의 트랜스버및 세로 전종종크기 섹션도 제조될 수있다(도 4,</stron...

이 기술은 종자의 다른 지구에 있는 세포, 전분 과립 및 단백질 바디의 관측 그리고 분석을 위한 전체 종자 크기의 수지 단면도의 빠르고 간단한 준비를 허용합니다.

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

형태 과학과 세포의 품질, 전분 과립 및 커널의 단백질 몸은 씨앗의 무게와 품질을 결정합니다. 이 연구에서는, 우리는 LR 백색 수지에 내장된 전체 커널의 간단한 인구로 제시하고 전체 커널의 간단한 건조 흡입 방법을 설정합니다. 우리는 두 가지 주요 이유로 내장 된 매체로 LR 화이트 수지선택합니다.첫째, 점도와 강한 투과성으로, 특히 대량의 고분 함량이 있는 시리얼 성숙 커널을 위해 이 강력한 씨앗 섹션을 준비하는 데 좋은 응용 프로그램으로 이어집니다. 둘째, LR 백색 수지에 내장된 시료는 형광 현미경으로 빛 하에서 시료의 형태를 명확하게 나타내기 위해 많은 화학 염료로 쉽게 염색될 수 있다. 준비된 단면은 전체 커널의 출현시 세포, 전분 과립 및 단백질 바디를 명확하게 나타내기 위해 구체적으로 염색될 수 있고, 형태학적 매개변수도 정량적으로 분석될 수 있다.이 방법에는 연구가 포함되어 있습니다. 여기서는 더 큰 볼륨과 높은 전분 함량을 가진 성숙한 옥수수 커널을 샘플로 사용하여 프로세스단계를 단계별로 전시합니다. 시작하려면 커널을 간단한 병에 넣습니다.약 10밀리미터의 2.5%의 인산염 완충글루타랄데히드를 추가합니다. 한 번 더 pH 7.2를 배치하고 48 시간 동안 섭씨 4도에 배치하여 두 가지를 모두 수정합니다. 그런 다음 이 커널을 꺼내 2~3밀리미터 두께로 세로 또는 반경적으로 슬라이스합니다.날카로운 양면 블레이드가 필요합니다. 그리고 또 다른 48 시간 동안 그들을 수정합니다. 다음으로, 샘플을 약 10mm로 세 번 세척하므로 0.1 M 인산염 버퍼, pH 7.2는 매번 30 분 동안 세척하십시오.시료를 단계적으로 수화하려면 30분 동안 약 10mm의 30%에탄올 수성 용액에 담그고 10밀리미터로 연속적으로 담그면 50%70%90%,100%를 3회 흡수합니다. 시료 단계에 단계별로 침투하려면 10mm의 LR 화이트 수지 용액을 10mm의 LR 화이트 수지 용액으로 10밀리미터로 10밀리미터로 15%50%75%,12시간 동안 4도에서 100%로 연속적으로 회수합니다. 포함하기 전에 샘플을 위해 받침대를 준비해야합니다.순수 LR 화이트 수지 250마이크로리터를 2mm 원심분리기 튜브에 넣고 48시간 동안 6도 의 섭씨로 중합합니다. 다음으로, 순수 LR 화이트 수지 500마이크로리터를 연속적으로 추가하고 샘플을 원심분리기 튜브에 받침대로 침투합니다. 해부학 바늘로 샘플을 곧게 한 후, 48 시간 동안 오븐에 섭씨 6도에 수지하십시오.원심분리기 튜브에서 내장된 커널을 꺼내 날카로운 블레이드를 사용하여 샘플 주위의 과도한 수지를 잘라냅니다. 수지 블록을 마이크로톤 샘플 홀더에 놓고 시료 표면과 블레이드로 샘플 주위에 불필요한 수지를 잘라낸다. 완전한 단면이 형성될 때까지 유리 칼로 최종적으로 시료의 표면을 연마합니다.이제 두 개의 미크론 두께로이 놀라운 섹션을 준비할 시간입니다. 슬라이스하기 전에 작은 구리를 블레이드 가장자리 에서 약 2 밀리미터 높이로 말하여 단면이 컬링되는 것을 방지하십시오. 단면도가 길게 지을 때, 그것을 지원하기 위해 섹션 아래에 스포크를 넣습니다.다음으로, 프로비처되지 않은 슬라이드에 100 마이크로리터의 물을 추가하고 완전하고 깨지지 않은 부분을 치료자와 함께 물에 조심스럽게 옮길 수 있습니다. 50도에서 가열하여 건조하여 주름이 있는 부분을 부드럽게 합니다. 마지막으로 두 가지 중요한 팁에 주의가 필요합니다.첫째, 단면도가 무너지거나 찢어지는 경우, 샘플의 각 수지 침투에 대한 시간을 연장한다. 둘째, 단면에 칼과 평행한 선이 있는 경우 샘플 블록을 단단히 고정합니다. 단면에 칼에 수직으로 된 선이 있는 경우, 새 칼을 사용해 주세요.세포, 전분 과립 및 단백질 신체의 형태를 관찰하기 위해 형광 브라이트너 28, 요오드 용액 및 쿠마시 브릴리언트 블루 R250으로 섹션을 각각 얼룩지게 할 수 있습니다. 다른 특정 얼룩에 대 한, 제안 연구에 기초. 여기서는 요오드 솔루션을 사용하여 전분 과립을 염색하는 예입니다.요오드 솔루션 40마이크로리터를 추가하여 단면을 몰입시다. 그리고 1 분 동안 항아리에 보관하십시오. 그런 다음 샘플을 커버 슬리브로 덮습니다.그리고 그 주위에 초과 에이전트 솔루션을 블롯. CCTV 카메라가 장착된 조명 현미경 아래에서 즉시 샘플을 관찰하고 촬영합니다. 우리는 형태 분석 소프트웨어를 사용하여 커널에 대한 영역, 길거나 짧은 접근, 세포의 원도, 전분 과립 및 단백질 신체의 원도에 대한 촬영 된 이미지를 처리하고 정량적으로 분석 할 수 있습니다.우리는 LR 화이트 수지에 전체 커널 크기의 섹션을 유지하기위한 간단한 건조 단면 방법을 설정합니다. 이 방법은 두 개의 미크론으로 전체 커널의 횡방향 및 세로 섹션을 준비할 수 있습니다. 또는 예, 오일 시드 강간의 성숙한 전체 씨앗은 횡방향과 세로로 단면 될 수 있습니다.더 큰 볼륨옥수수의 성숙한 전체 커널의 섹션도 성공적으로 준비 될 수있다. 또한, 발전커널, 조리된 커널 및 발아커널도 방법을 이용하여 조사할 수 있다. 전체 커널의 준비된 섹션에는 아래 응용 프로그램이 있습니다.첫째, 전체 커널의 단면도는 씨앗의 조직 구조를 관찰하기 위하여 이용될 수 있습니다. 예를 들어, 사프란으로 얼룩진 오일시드 강간의 전체 배아의 단면은 명확하게 급진적 인, 하이퍼 캐주얼, 내부 및 외부의 나타낼 수 있습니다 전체 커널의 섹션은 관찰하고 세포의 형태를 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 오일시드 강간의 전체 배아의 트랜스버라클 부분은 형광 브라이트너(28)로 염색되고, 세포오일은 구체적으로 염색된다.전체 배아의 모든 영역에서 세포의 미세 형태는 높은 배율로 표시 될 수있다. 빈약한 세포의 형태 매개 변수는 형태 분석 소프트웨어를 사용하여 정량적으로 분석할 수 있으며 배아의 다양한 영역에서 일부 차이를 보여줄 수 있다. 형광 브라이트너(28)로 염색된 옥수수의 전체 커널의 트랜스버럴 섹션은 또한 세포의 형태로서 전시할 수 있으며, 세포의 형태 매개변수는 내정자의 다양한 영역에서 상이하다.전체 커널의 섹션은 전분 과립의 형태를 나타내기 위해 요오드 솔루션으로 염색 할 수 있습니다, 예를 들어, 요오드로 얼룩 옥수수 커널의 트랜스 버라저 및 세로 섹션은 명확하게 전분 과립의 형태를 나타낼 수 있습니다. 다양한 지역의 전분 과립은 내정자 세포에서 현저하게 다른 형태, 크기 및 양을 보여줍니다. 따라서 전분 과립의 형태학적 매개 변수에 대한 정량적 분석은 내정자를 위해 다양한 영역에서 상당히 다르다는 것을 보여줍니다.단면도는 단백질 바디의 형태를 관찰하고 분석하기 위하여 이용될 수 있습니다. 예를 들어, 전분 단백질은 쿠마시 브릴리언트 블루 R250을 사용하여 파란색으로 염색됩니다. 유종유의 전체 배아에서 전분 단백질의 공간 분포는 낮은 배율에서 관찰될 수 있으며, 마이크로 구조는 높은 배율에서 명확하게 나타낼 수 있다.또한, 선택된 지역에서 단백질 체의 숫자 오류 지수 및 형태학적 매개변수도 정량적으로 분석될 수 있다. 이 기술은 개발 및 성숙한 씨앗에서 전체 커널의 수지 섹션의 첫 번째 간단한 준비를 제공합니다. 전체 커널의 조직 구조에 있는 단면 응용 은 전체 커널의 다른 지구에 있는 세포, 전분 과립 및 단백질 바디의 형태에 조사합니다.획득된 심상은 세포, 전분 과립 및 단백질 바디의 형태 학적 매개 변수를 보여주고 전체 커널의 다른 영역에서 더 비교하도록 정량적으로 분석 될 수 있습니다.

a-simple-dry-sectioning-method-for-obtaining-whole-seed-sized-resin

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 수지 내장 뇌 조직은 전자 현미경을 스캐닝, 초점을 맞춘 이온 빔의 3 차원에 준비하고 몇 군데 수있는 방법에 대해 설명합니다.

초점을 맞춘 이온 빔은 밀링 및 뇌 조직의 전자 현미경을 스캐닝

여기에서는 성장 구조의 전반적인 평가를 위해 나무 표본을 샘플링하는 방법을 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 잘 복제되고 해상도가 높은 목재 해부학 및 수목 생태학적 데이터 세트를 생성하는 데 필요한 거시적 및 미시적 준비 및 시각화 기술에 대해 설명합니다.

현대 나이테 연구에서 기술적 인 관점 - Dendroecological 및 목재 해부학 적 도전을 극복하는 방법

결정질 셀룰로오스는 식물 세포벽의 중요한 구성 성분입니다. 그러나 세포 분해능에서 정량화하는 것은 기술적으로 어렵습니다.  여기에서는 시공간 해상도에서 세포벽 구성에 대한 정보를 얻기 위해 편광 기술과 뿌리 단면을 사용하는 방법을 보고합니다.

에서 결정 셀룰로오스 축적의 높은 해상도 정량<em&gt; 애기 장대</em&gt; 뿌리 조직 특이 세포 벽 수정을 모니터링하는

이 프로토콜은 난치성 식물 조직에 유용한 간단한 Hybrid-Cut 조직 절편 방법을 설명합니다. 양질의 조직 절편은 해부학적 연구 및 현장 교잡(ISH)을 포함한 기타 생물학적 연구를 가능하게 합니다.

하이브리드 컷 : 난 분해성 식물 조직 샘플에 대한 개선 단면 방법

여기, 우리는 쉽게, 낮은 비용을 제공하고, 시간 효율적인 프로토콜은 화학적으로 투과 전자 현미경에 대한 면역 조직 화학 염색을 미리 내장과 호환되는 장기 보존을 허용, 아크롤레인 정착액와 영장류 뇌 조직을 고정 할 수 있습니다.

면역 조직 화학 및 전자 현미경을 사전은 임베딩에 대한 비 인간 영장류 뇌 조직의 준비

이 연구는 전송 전자 현미경 검사 법에서 고가의 장비 없이 미생물의 직렬 ultrathin 섹션을 얻기 위한 안정적이 고 쉽게 절차를 선물 한다.

전송 전자 현미경 검사 법에서 미생물의 직렬 Ultrathin 섹션을 얻기위한 방법

여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.

절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

이 프로토콜은 주사 전자 현미경 을 사용하여 내시경 및 전분 과립 형태의 분석을 위해 시리얼 씨앗 (예를 들어, 쌀)의 횡단 섹션의 준비를 허용합니다.

성숙한 쌀의 횡단 단면(오리자 사티 라 L.) 파이펫 팁을 사용하여 전자 현미경 이미징을 스캐닝하기 위한 커널

이 프로토콜은 균근 진균으로 발아된 식물 조직 및 종자에서 진균 집락을 연구하기 위해 주사 및 투과 전자 현미경, 빛, 공초점 및 형광 현미경과 같은 다양한 현미경 기술을 적용하여 진균종속영양 식물 샘플을 수집, 고정 및 유지하기 위한 자세한 절차를 제공하는 것을 목표로 합니다.

균종속영양 식물 조직의 곰팡이 집락화 및 종자의 공생 발아를 해석하기 위한 현미경 기술

C3 및 C4 잎 단면 사이의 해부학적 차이를 평가하면 광합성 효율을 이해하는 데 도움이 됩니다. 이 논문은 Triticum aestivum 및 Zea mays 작물 종에 대한 준비 시 주의 사항과 함께 자유형 및 반얇은 잎 단면 준비 및 검사에 대해 설명합니다.

Triticum aestivum 및 Zea mays 의 구조적 특성 평가: Free hand 및 Semi-thin Section을 사용한 C3 및 C4 광합성 분화

학습하세요 옥수수 전체 종자의 수지 섹션 제작 방법을 LR White 수지를 사용하여 세포, 전분 과립, 단백질 소체의 형태를 관찰하고 정량 분석하는 기술입니다. 이 방법은 종자 발달 생물학 및 품질 연구에 활용됩니다.

전체 종자 크기의 수지 섹션 및 응용 프로그램을 얻기위한 간단한 건조 단면 방법

더 많은 동영상 탐색