Name: 과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: 학습하세요 쥐에서 과도 양측 공통 경동맥 폐색을 이용한 망막 허혈 모델링 방법을. 이 기술은 허혈성 망막병증의 병태생리 연구와 생체 내 약물 스크리닝에 활용됩니다.

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이 작품은 과학연구보조금(KAKENHI)(18K09424)과 구리하라 도시히데, 20K18393, 미와 유키히로(MEXT)가 지원했다.

여기에 설명된 모든 방법은 게이오 대학 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 기구 및 동물의 준비
<ol><li>자동 클캐브 수술 기구와 70 % 에틸 알코올에 보관하십시오. 새로운 수술 전, 70% 에틸 알코올을 사용하여 수술 기구를 조심스럽게 청소하십시오.</li>
	<li>수술 전, 수술 중 및 수술 후 멸균 상태를 유지하기 위해 특정 병원균(SPF) 실에서 남성 BALB/cAJc1 마우스(6주 전, 26-28kg)를 준비한다.</li>
</ol>2. 일시적인 양자 공통 경동맥 폐색 (tBCCAO)
<ol><li>미다졸람(40 μg/100 μL), 메데토미딘(7.5 μg/100 μL) 및 부안소솔 타르테레이트(50 μg/100 μL)의 조합으로 관내 주사를 통해 마취하에 마우스를넣어8,9. 마우스의 뒤쪽 스킨을 잡고 마우스가 완전히 마취될 때까지 마우스가 눈을 부딪히지 않도록 합니다.<ol>
<li>응답이 없을 때까지 마우스 발가락을 꼬집어 마취의 깊이를 판단하며, 그 중 어떤 방법은 일반적으로 완전한마취(10)를확인하는 데 사용됩니다. 참고: 일반적으로 생쥐가 잠들기 위해서는 5분 미만이 필요합니다. 전신 마취를위한 적절한 조리법은 기관에 의해 다를 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>마취 하에 눈의 건조를 방지하기 위해 피부에 0.1 % 정제 된 히알루네이트 안약 용액을 1 방울을 적용하십시오.</li>
	<li>마우스를 뒷면에 놓고 접착제 테이프를 사용하여 마우스의 발을 고정합니다.</li>
	<li>수술 전 70%의 에틸 알코올을 사용하여 마우스의 목 부위를 소독합니다. 참고: 모피의 추가 클리핑은 후속 피부염증(11,12)을유발할 수 있으므로 수행되지 않았다.</li>
	<li>칼날(도1)으로목의 처상 절개를 수행합니다. 참고 : 절개는 목, 흉골 및 기관 사이의 중간선에서 만들어져야합니다.</li>
	<li>두 개의 집게를 사용하여 침샘을 조심스럽게 분리하고 이를 동원하여 기본 CCA를 시각화합니다.</li>
	<li>올바른 CCA를 각 진골 신경과 동반 정맥으로부터 조심스럽게 분리하고 구조물에 해를 끼치지 않고 CCA 아래에 6-0 실크 봉합사 2개를 배치합니다. 혈류를 차단하기 위해 두 넥타이를 단단히 묶습니다(도1). 참고: 시술 중에 작은 정맥이 손상될 수 있습니다. 출혈이 보이는 경우 CCA를 명확하게 시각화하려면 닦아야 합니다.</li>
	<li>왼쪽 CCA를 각각의 진골 신경과 동반정맥으로부터 조심스럽게 찾아내고, 클램프(그림1)에의해 2초 동안 왼쪽 CCA를 폐포한다. 참고: 클램핑 을 위한 사이트를 표시하기 위해 왼쪽 CCA 아래에 6-0 실크 봉합사 바늘을 배치해야 합니다.</li>
	<li>왼쪽 CCA의 재개 후, 6-0 실크 봉합사에 의해 목의 봉합상처와 세균 감염을 억제하기 위해 목에 항생제(50 μL)를 적용한다. 참고: 왼쪽 CCA를 다시 열 때 동맥 벽이 손상되지 않도록 클램프를 부드럽게 제거합니다.</li>
	<li>마우스에 0.75 mg/kg의 아티파메졸 염산염을 마우스에 삽입하여 마우스가 깊은 마취에서 신속하게 회복할 수 있도록 돕습니다. 미리 가열 된 패드가있는 마우스 케이지에 마우스를 반환합니다. 참고: 마우스가 흉골 의상환을 유지하기에 충분한 의식을 되찾을 때까지 마우스를 방치하지 마십시오.</li>
	<li>마우스가 깨어날 때 통증의 관리를 위해 마우스에 0.4 mg/kg의 부차톨타르트를 주입하십시오. 참고: 프로토콜은 여기에서 일시 중지할 수 있습니다. 성공적인 tBCCAO에 대한 첫 번째 힌트로서 마우스의 눈꺼풀 처짐을 관찰할 수있습니다(그림 2).</li>
	<li>안락사의 경우, 마우스에 MMB 혼합물의 3x를 주입하고 실험을 위해 그들을 희생.</li>
</ol>3. 일반적인 관찰 (생존율과 눈꺼풀 처진)
<ol><li>수술 후, 0일째(수술 후), 1, 3, 7일의 모든 사망 원인에 대한 생존율을 확인한다.</li>
	<li>눈꺼풀을 4점 등급 척도로 평가합니다: 1 = 처진 없음, 2 = 가벼운 처진 (~50%), 3 = 심한 처진 (50%), 및 4 = 눈 배출이 심한 처진.</li>
</ol>4. 망막 혈액 관류
<ol><li>FITC-dextran(25 mg/mL)을 마우스의 좌심실로 200 μL을 주입하며, 이는 일반적으로 마우스 망막혈관(13,14)의혈액 관류 관찰에 일반적으로 사용된다.</li>
	<li>순환 후 2분 후, 눈을 방출하고 1 시간 동안 4 % 파라 포름 알데히드에 고정합니다. 망막은 이전에 설명된15와같이 신중하게 얻어지고 평평하게 장착되었고, 형광 현미경을 통해 검사하였다.</li>
	<li>4배 배율로 망막 전체 마운트의 사진을 찍고 이전에 설명한16개의병합 분석기를 사용하여 단일로 병합한다.</li>
	<li>NIH 피지/ImageJ 소프트웨어의 선박 분석 도구를 통해 perfused 영역을 측정합니다.</li>
</ol>5. 웨스턴 블롯
<ol><li>tBCCAO 후 3 시간 및 6 시간, 마우스의 눈을 얻고 즉시 망막을 분리하기 위해 차가운 PBS를 포함하는 페트리 접시로 전송.</li>
	<li>망막의 격리 후, 이전에 설명 된 바와 같이, 서쪽 블로팅을 수행9.</li>
	<li>저산소유도인자-1α(HIF-1α; 일반 저산소증 마커)와 hrP-접합 이차 항체의 배양이 이어지는 β-액틴(내부 적재 제어)에 대한 항체를 배양한다. 화학 발광을 통해 신호를 시각화합니다.</li>
</ol>6. 정량적 PCR (qPCR)
<ol><li>tBCCAO 후 6, 12 및 24시간 후, 이전에 설명된 바와 같이 qPCR에 대해 얻은 망막을처리한다.</li>
	<li>실시간 PCR 시스템을 통해 qPCR을 수행합니다. 사용되는 프라이머는 표 1에나열됩니다. ΔΔCT 메서드에 의해 서로 다른 전사체 수준 간의 접기 변화를 계산합니다.</li>
</ol>7. 면역 화학 (IHC)
<ol><li>tBCCAO 후 3 일, 마우스의 눈을 얻고 파라핀에 포함.</li>
	<li>눈 섹션을 얻기 위해 마이크로 토메에 의해 파라핀 임베디드 눈을 잘라.</li>
	<li>앞서 설명한 바와 같이 5 μm 두께의 눈 단면을 분리하고염색하였다.</li>
	<li>신경교 세동 산성 단백질 (GFAP; 망막에 있는 성상 세포 및 뮐러 세포를 위한 믿을 수 있는 마커)에 대한 항체와 함께 배양한 다음 알렉사 플루어 555-공주 이차 항체의 배양에 선행됩니다.</li>
	<li>망막에 핵을 염색하기 위해 DAPI (4′,6-디아미드노-2-페닐린돌)를 사용합니다. 형광 현미경을 통해 신호를 시각화합니다.</li>
	<li>이전에 설명한 바와 같이 4점 등급 척도로 형태 점수를 평가하였고,13,18: 신호 없음, 1 = 신경절 세포 층(GCL)에서 몇 가지 양성 신경교 말발, 2 = GCL에서 외부 핵층(ONL)까지 도달하는 몇 가지 라벨이 붙은 공정, 그리고 3 = GCL에서 ONL로 도달하는 가장 라벨이 붙은 공정이 거의 없다.</li>
</ol>8. 전기 전하 (ERG)
<ol><li>tBCCAO 후 3 및 7일 후, 이전에 설명한 바와 같이 간즈펠트 돔, 획득 시스템 및 LED 자극기를 사용하여 ERG를수행한다.</li>
	<li>하룻밤 어두운 적응 에 따라, 희미한 붉은 빛 아래 MMB의 조합으로 마우스를 마취.</li>
	<li>0.5% 열대아미드와 0.5% 페닐레프린의 혼합 용액을 사용하여 동공을 넓힙시다.</li>
	<li>활성 전극을 콘택트 렌즈에 놓고 참조 전극을 입에 놓습니다.</li>
	<li>각 동물의 양눈에서 ERG 응답을 얻습니다.</li>
	<li>다양한 자극으로 어두운 적응하에 스쿠토피 응답을 기록합니다.</li>
	<li>기준선에서 가장 낮은 파도 지점까지 의 진폭을 측정합니다.</li>
	<li>파도의 가장 낮은 지점에서 b-wave의 피크까지 b-wave의 진폭을 측정합니다.</li>
	<li>열 패드를 사용하여 시술 중에 모든 마우스를 따뜻하게 유지하십시오.</li>
</ol>9. 광학 일관성 단층 촬영 (10월)
<ol><li>tBCCAO 후 2 주, SD-OCT 시스템을 사용하여 OCT를 수행, 이전에보고 된 대로8,9.</li>
	<li>측정을 위해, 피험자 마우스는 0.5% 열대성 및 0.5% 페닐레프린의 혼합 용액에 의한 mydriasis, 및 MMB의 혼합물에 의한 전신 마취에 의해.</li>
	<li>en-face 스캔의 적도 조각에서 B 스캔 이미지를 가져옵니다.</li>
	<li>시신경 헤드에서 망막 0.2, 0.4 및 0.6 mm에서 망막을 검사하십시오.</li>
	<li>망막 신경 섬유 층(NFL)에서 외부 제한 막(ELM)으로 망막 두께를 측정하고 측정된 값의 평균을 개별 마우스의 망막 두께로 고려한다.</li>
	<li>결과를 거미 다이어그램으로 플롯합니다.</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

연구에서, 우리는 tBCCAO, 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여, 망막 허혈및 동반망막 기능 장애를 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 더욱이, 망막 허혈의 마우스 모델 의 개발을 위한 현재 의정서가 망막 허혈성 상해 모델2,3,7의개발을 위한 다른 이전 프로토콜과 비교하여 더 쉽고 빠르다는 것을입증했습니다.
해부학적으로, 좌우 뇌동맥은 윌리스의 원에 부수적인 혈액 공급을 제공하는 후방 통신 동맥(PCA)을 통해 연결될 수 있으며, 개별 혈관의 폐색 또는 협착으로부터의 흐름 중단으로부터의 혈류 중단에 대하여 중추신경계에 적절한 혈액 공급을 유지한다(도1).</str...

망막은 시각 기능을 위한 신경 감각 조직입니다. 시각 기능에 상당한 양의 산소가 필요하기 때문에 망막은 신체1에서가장 높은 산소 를 요구하는 조직 중 하나로 알려져 있습니다. 망막은 산소가 혈관을 통해 전달되기 때문에 혈관 질환에 취약합니다. 당뇨병 성 망막병증 및 망막 혈관 (정맥 또는 동맥) 폐색과 같은 다양한 유형의 혈관 질환은 망막 허혈을 유발할 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 조사하기 위해, 망막 허혈의 재현 가능하고 임상적으로 관련된 실험 모델은 필요하다고 간주됩니다. 중간 대뇌 동맥 폐색(MCAO)은 내트라루민 필라멘트의 삽입에 의한 실험대뇌 허혈2,3의생체 내 설치류 모델의 개발을 위해 가장 일반적으로 활용되는 방법이다. MCA에 안과 동맥(OpA)의 근접성으로 인해 MCAO 모델은 망막 허혈4,5,6의병리생리학을 이해하는 데 동시에 사용된다. 망막 허혈과 함께 대뇌 허혈을 유도하기 위해, 긴 필라멘트는 전형적으로 일반적인 경동맥 (CCA) 또는 외부 경동맥 (ECA)의 절개를 통해 삽입됩니다. 이러한 방법은 수행하기 어렵고, 수술을 완료하는 데 오랜 시간이 걸리며(한 마우스의 경우 60분 이상), 수술 후 결과에 높은 변이성을 초래할수 있다 7. 이러한 문제를 개선하기 위해 더 나은 모델을 개발하는 것이 중요합니다.
이 연구에서는, 우리는 단순히 짧은 일시적인 양자 CCA 폐색 (tBCCAO)을 바늘과 클램프로 사용하여 쥐의 망막 허혈을 유도하고 망막에서 허혈성 부상의 전형적인 결과를 분석했습니다. 이 비디오에서는 tBCCAO 절차를 시연할 것입니다.

<table><tbody><tr><td>아티 파메졸 염산염</td><td>Zenoaq</td><td>Antisedan</td><td>마취 방지</td></tr><tr><td>Applied Biosystems 7500 Fast</td><td>Applied Biosystems-qPCR</td><td></td> <td>용</td></tr><tr><td>부토르 파놀 타르트 레이트</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>마취 용</td></tr><tr><td>BZ-II 분석기</td><td>KEYENCE-</td><td></td><td>이미지 병합</td></tr><tr><td>용 BALB / cAJc1</td><td>CLEA</td><td>-</td><td>마우스 strain</td></tr><tr><td>&beta;-Actin (8H10D10) 마우스 mAb</td><td>CST</td><td>3700</td><td>웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>클램프 집게</td><td>세계 정밀 기기</td><td>WPI 500451</td><td>수술 용</td></tr><tr><td>Dumont 집게 # 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>수술</td></tr><tr><td>용 DAPI 솔루션</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Envisu SD-OCT 시스템</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td>OCT의 경우</td></tr><tr><td>FITC-dextran</td><td>Merk</td><td>FD2000S</td><td>망막 혈액 관류</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>형광 검출</td></tr><tr><td>용 Gatifloxacin 수화물</td><td>Senju Pharmaceutical</td><td>Gachifuro</td><td>항균 감염 용</td></tr><tr><td>GFAP 단일 클론 항체 (2.2B10)</td> <td>Thermo</td><td>13-0300</td><td>IHC</td></tr><tr><td>용 가열 패드</td><td>Marukan</td><td>RH-200</td><td>수술용</td></tr><tr><td>HIF-1&alpha; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td><td>CST</td><td>36169</td><td>웨스턴 블롯 ImageQuant</td></tr><tr><td>LAS 4000 mini</td><td>GE Healthcare</td><td>-</td><td>화학 발광</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz K.K</td><td></td><td>SANDOZ 마취</td></tr><tr><td>용 Microtome Tissue-Tek TEC 6</td> <td>Sakura-Medetomidine</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Orion Corporation</td><td>Domitor</td><td>마취</td></tr><tr><td>용 바늘 홀더</td><td>Handaya</td><td>HS-2307</td><td>수술 용</td></tr><tr><td>PuREC</td><td>MAYO</td> <td>Corporation-ERG</td><td></td></tr> <tr><td>가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>91460-11</td><td>수술 용</td></tr><tr><td>히알루 론산</td><td>나트륨 Santen 제약</td><td>Hyalein</td><td>눈 윤활</td></tr><tr><td>용 Tropicamide / Penylephrine hydrochloride</td><td>Santen Pharmaceutical</td><td>Mydrin-P</td><td>산동증 용</td></tr><tr><td>6-0 실크 봉합사</td><td>나츠메</td><td>E12-60N2</td><td>수술용</td></tr></tbody></table>

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

당뇨병 성 망막병증, 망막 정맥 또는 동맥 및 안구 허혈 증후군의 폐색과 같은 다양한 혈관 질환은 망막 허혈으로 이어질 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학 적 메커니즘을 조사하려면 관련 실험 모델을 개발해야합니다. 해부학적으로, 주요 망막 혈액 공급 혈관은 안과 동맥 (OpA) 및 OpA는 일반적인 경동맥의 내부 경동맥에서 유래 (CCA). 따라서 CCA의 중단은 망막 허혈을 효과적으로 유발할 수 있습니다. 여기서, 우리는 6-0 실크 봉합사를 가진 오른쪽 CCA를 묶고 클램프를 통해 2 초 동안 좌측 CCA를 폐색하기 위하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색(tBCCAO)에 의하여 망막 허혈증의 마우스 모형을 설치하고, tBCCAO가 재발성 기능 장애로 선도하는 급성 망막증증을 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 현재 방법은 수술 바늘과 클램프를 사용하여 수술 기구에 대한 의존도를 줄이고, 중간 뇌동맥 폐색의 마우스 모델에서 흔히 볼 수 있는 예기치 않은 동물 사망을 최소화하기 위해 폐색 시간을 단축하며, 일반적인 망막 허혈성 발견의 재현성을 유지합니다. 이 모델은 마우스의 허혈성 망막병증의 병리학을 조사하기 위해 활용될 수 있으며 생체 내 약물 스크리닝에 더 사용될 수 있다.

FITC-dextran의 전신 순환 후 2분 동안, 가짜 작용 마우스 및 tBCCAO 수술 마우스에서 좌우 망막의 망막 혈관을 검사하였다(보충도 1). FITC-dextran은 tBCCAO 수술 마우스에서 샴 작동 마우스와 왼쪽 망막의 두 망막모두에서 완전히 보였으며 tBCCAO 수술 마우스의 오른쪽 망막에서 부분적으로 검출되었습니다.
tBCCAO 후, 눈꺼풀 처진 검사(그림 2). 오른쪽 눈은 온화한 나타났다 (점수 2; 75%) 심한 눈꺼풀 (점수 3 및 4; 25%) 처진, 왼쪽 눈은 처져 없는 동안 (점수 1; 93.75%) 마우스 1개를 제외한 (점수 2, 6.25%). tBCCAO 수술 마우스에서 눈 배출로 처진 심한 눈꺼풀이 상당히 관찰되지는 않았지만, 우리는 이 표현형에 대한 마우스 1개(점수 4; 6.25%)를 볼 수 있었다.
조직...

여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

이 프로토콜로 확립된 마우스 모델은 허혈성 망막병증의 병태생리학을 조사하고 생체 내 약물 스크리닝을 수행하는 데 사용할 수 있습니다. 현재의 방법은 다양한 수술 기구에 대한 의존도를 줄이고 수술 시간을 단축하여 망막 허혈을 유발할 수 있습니다. 당뇨병성 망막병증, 망막 정맥 또는 동맥 폐색, 안구 허혈 증후군과 같은 혈관 질환의 발병 기전을 이해할 수 있습니다.시연은 제 연구실의 박사 과정 학생인 이덕호가 시연할 것입니다. 제 연구실의 DVM, PhD 및 조교수인 Yukihiro Miwa가 절차를 시연하는 데 도움을 줄 것입니다. 모든 수술 기구를 오토클레이브하고 수술 전에 70% 에틸 알코올에 보관하십시오.수술 전, 수술 중, 수술 후에 멸균 상태를 유지하기 위해 특정 병원체가 없는 방에 수컷 BALB/c 마우스를 준비합니다. 0.1% 정제된 히알루론산나트륨 점안액 한 방울을 동물의 눈에 바르면 마취 하에서 건조해지는 것을 방지할 수 있습니다. 마우스를 등에 대고 접착 테이프를 사용하여 발을 고정합니다.수술 전에 70% 에틸 알코올을 사용하여 목 부위를 소독하십시오. 칼날을 사용하여 목을 시상으로 절개합니다. 두 개의 겸자를 사용하여 침샘을 조심스럽게 분리하고 아래에 있는 CCA를 시각화하기 위해 따로 보관합니다.각 미주신경 및 동반 정맥에서 오른쪽 CCA를 분리하고 CCA 아래에 두 개의 6-0 실크 봉합사를 배치합니다. 혈류를 차단하기 위해 양쪽 끝을 단단히 묶습니다. CCA가 명확하게 보이도록 시술 중 손상된 작은 정맥에서 흘러나오는 혈액을 닦아냅니다.동반 정맥에 해를 끼치지 않고 왼쪽 CCA를 찾아 그 아래에 6-O 봉합 바늘을 놓아 클램핑 부위를 표시하고 2초 동안 폐색합니다. CL을 부드럽게 제거하십시오.amp 동맥벽 손상을 방지하고 왼쪽 CCA를 다시 엽니다. 다시 개봉한 후 실크 봉합사로 목의 상처를 봉합합니다.완료되면 세균 감염을 억제하기 위해 목에 항생제를 살짝 바르십시오. 생쥐에게 킬로그램당 0.75mg의 아티파메졸 염산염을 복강내로 주입하여 심부 마취에서 빠르게 회복할 수 있도록 한 다음 예열된 패드가 있는 케이지로 마우스를 되돌려 놓습니다. 마우스가 깨어나면 통증 관리를 위해 킬로그램당 0.4mg의 부토르파놀 타르타르산염을 주사합니다.tBCCAO 후 눈꺼풀 처짐을 검사했습니다. 오른쪽 눈은 경증과 심한 눈꺼풀 처짐을 보였고, 왼쪽 눈은 쥐 한 마리를 제외하고는 처진 곳이 없었다. HIF-1 알파 및 베타 액틴에 대한 면역 블롯 및 정량 분석은 HIF-1 알파가 tBCCAO 후 3시간 및 6시간 후에 우측 망막에서 안정화되었음을 보여주었습니다.망막 반응성 신경교증은 tBCCAO 3일 후에 검사하였다. 오른쪽 망막의 GFAP 라벨링에 대한 형태학 점수의 평균은 가짜 수술 마우스의 망막과 tBCCAO 수술 마우스의 왼쪽 망막에서 두 망막에서 가장 높았습니다. 오른쪽 눈의 b-wave 진폭은 dark adapted ERG에서 볼 수 있듯이 tBCCAO 후 3일 및 7일 후에 감소했습니다.반면 정량적 분석에서는 a파 진폭의 변화 없이 오른쪽 눈에서 b파의 진폭이 감소하는 것으로 나타났습니다. 가짜 및 tBCCAO가 조작한 망막의 대표적인 OCT 영상과 정량적 분석은 우측 망막의 망막 두께가 증가한 반면 좌측 망막에는 변화가 없음을 보여주었습니다. 이 프로토콜을 시도할 때는 올바른 CCA를 명확하게 차단해야 한다는 점을 기억해야 합니다.그런 다음 왼쪽 CCA를 엄격하게 차단해야 합니다. 이 방법을 사용하면 고혈압 또는 저혈당증을 인간 안구 질환의 상태를 모방하는 데 적용할 수 있습니다. 이 모델은 일반적인 망막 허혈의 결과와 망막 허혈의 기전을 보여줍니다.

a-murine-model-ischemic-retinal-injury-induced-transient-bilateral

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐 intraluminal 중간 뇌성 가림 모델은 여기서 제공됩니다. 대뇌 경색의 범위는 neurologic 점수와 cresyl 보라색의 착색, TTC의 대안 얼룩, 병렬 많은 관심 마커에서 테스트 큰 이점을 제공함으로써 평가됩니다.

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 노화된 쥐에서 총경동맥 또는 CCA 결찰술을 사용하여 영구 원위 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 수행하는 절차를 보여줍니다. 이는 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포의 사멸로 이어지며 뇌졸중 메커니즘과 잠재적 치료법을 연구하기 위한 모델을 생성합니다.

쥐 모델에서 중추 및 일반 경동맥 폐색을 통한 허혈 유도

뇌 관류 모니터링은 허혈성 뇌졸중 모델의 정확성을 향상시키기 위해 입증되었습니다. 기술적 인 문제는 종종 뇌 혈관 연구에 대해이 필수적 도구의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 최적화 된 시스템은 쥐의 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 동안 단일 또는 다중 사이트 hemodynamic 모니터링을 얻기 위해 표시됩니다.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

다음 스트로크 뇌 골수 세포 특성화 광학 분별 법을 이용하여 수행 Stereology를, 뇌의 유세포 분석에 의해 현탁액 백혈구 수있다. 둘 허혈성 뇌에서 발견되는 주된 서브 세트 골수 세포 표현형의 정확한 구별을 수행하는 유용한 기술이다.

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

중간 대뇌 동맥의 Intraluminal 필 라 멘 트 폐색 설치류 실험 뇌졸중의 가장 자주 사용 된 vivo에서 모델입니다. 일반적인 경 동맥 복구를 허용 하는 다른 수술 접근 여기, 일반적인 경 동맥의 reperfusion 및 중간 대뇌 동맥 영역 전체 reperfusion 수 있습니다 수행 됩니다.

쥐에 있는 일반적인 경 동맥 수리 통해 Reperfusion를 허용 하는 중간 대뇌 동맥 폐색

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

현재 프로토콜은 손상을 입히지 않고 뇌 혈관의 해부학적 구조를 보존하는 중대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델을 설명합니다.

대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

이 프로토콜은 총경동맥을 통한 중뇌동맥 폐색 재관류를 준비하는 과정을 설명합니다.

중뇌동맥 폐색 재관류를 위한 수정된 모델 준비

혈관 인지 장애 및 치매에 대한 마우스 모델을 만들기 위해 비대칭 양측 총경동맥 협착증의 바늘 방법이 제안됩니다. 이는 이전에 확립된 모델에 비해 장기적인 결과를 가져오며 실시간 MRI와 호환됩니다. 절차를 보여주는 시각적 표현은 수술을 마스터하기 위한 지침을 제공합니다.

A Mouse Model for Vascular Cognitive Impairment and Dementia Based on Needle-guided Asymmetric Bilateral Common Carotid Artery Stenosis(바늘 유도 비대칭 양측 공통 경동맥 협착증에 기반한 혈관 인지 장애 및 치매에 대한 마우스 모델)

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

학습하세요 쥐에서 과도 양측 공통 경동맥 폐색을 이용한 망막 허혈 모델링 방법을. 이 기술은 허혈성 망막병증의 병태생리 연구와 생체 내 약물 스크리닝에 활용됩니다.

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

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