Name: 고형암의 병리학적 진행을 재구성하기 위한 3D 세포 인쇄 저산소암-온-어칩 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-05T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: 학습하세요 3D 바이오프린팅을 활용한 저산소암-온-어칩 제작 방법으로 고형암의 중심 저산소증을 재현하고 약물 효능을 예측하여 환자 맞춤형 항암제 처방과 공격성 암의 신속한 진단을 가능하게 하는 기술입니다.

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이 연구는 교육부(2020R1A6A1A03047902호) 및 NRF-2018H1A2A1062091호와 한국정부(MSIT)가 지원하는 한국국가연구재단(NRF)의 지원을 받았다. NRF-2019R1C1C1009606 및 NRF-2019R1A3A3005437).

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이 연구에서는 3D 세포 인쇄 기술을 기반으로 하는 저산소암 온어칩의 제조 과정을 설명합니다. 설계 된 칩의 저산소 그라데이션의 형성은 컴퓨터 시뮬레이션을 통해 예측되었다. 이질저산소그라데이션을 유도할 수 있는 환경은 3D 프릭 가스 투과성 장벽과 유리 커버를 결합한 간단한 전략을 통해 재현되었다. 암 줄기 세포의 의사 팔래산염 및 작은 인구를 포함하여 교모 세포종의 저산소 관련 병리학적 특징은 칩의 저산소 그라데이션 조건하에서 다시 항복하였다.
생산성과 반복성을 향상시키기 위해 이전에 게시된모델(15)에비해 두 가지 주요 제작 단계가 순차적으로 수정되었습니다. 첫째, PDMS 장벽은 1단계 직접 인쇄 방법보다는 실시간으로 경화되는 경화를 포함하는 PDMS의 인쇄성이 떨어지는 것을 극복하기 위해 간접적으로 생성되었다. 따라서, 생체 적합성 PEVA는 더 높은 인쇄성을 갖는 희생 금형 및 PDMS를 제조하여 가스 투과성 장벽을 생성하도록 ...

암 미세 환경은 암 진행을 이끄는 중요한 요소입니다. 생화학, 생물리, 세포 단서를 포함한 여러 구성 요소는 암의 병리학적 특징을 결정합니다. 이들 중 저산소증은 암 생존, 증식 및 침입 1과 밀접한 관련이있다. 암세포의 무한한 성장과 분열로 인해 영양소와 산소가 지속적으로 고갈되고 저산소 그라데이션이 생성됩니다. 낮은 산소 조건에서, 세포는 저산소증 유도할 수 없는 전사 인자 (HIF)-관련 분자 캐스케이드를 활성화합니다. 이 과정은 괴사 코어를 유도하고, 신진 대사 변화를 유발하며, 혈관 증식 및 전이2,3을개시한다. 그 후, 암세포에 있는 저산소증은 이웃한 정상 조직의 파괴를 일으키는 원인이 됩니다. 더욱이, 저산소증은 다인성 매너에서 고형 종양의 치료 저항과 강하게 연관된다. 저산소증은 반응성 산소 종1,4로인해 방사선 반응이 제한되기 때문에 방사선 요법을 심각하게 방해할 수 있다. 또한, 약물 축적을 감소시키는 암 미세환경의 pH 수준을 감소시키는1. 따라서, 체외에서 저산소증과 관련된 병리학적 특징을 재현하는 것은 과학적 및 전임상 연구 결과를 위한 유망한 전략입니다.
암의 특정 미세 환경을 모델링하는 것은 암 발달을 이해하고 적절한 치료를 탐구하는 데 필수적입니다. 동물 모델은 강한 생리적 관련성 때문에 널리 사용되었지만 종 차이 및 윤리적 문제와 관련된 문제는5. 더욱이, 기존의 2D 및 3D 모델은 심층 분석을 위해 암세포의 조작 및 실시간 이미징을 허용하지만, 그들의 건축 및 세포 복잡성은 완전히 재구성될 수 없다. 예를 들어, 암 스페로이드 모델은 스페로이드에서 암세포 응집이 코어에서 저산소증을 자연적으로 생성할 수 있기 때문에 널리 사용되고 있다. 더욱이, 균일한 크기의 셀룰러 스페로이드의 다수는 플라스틱 또는 실리콘 기반 멀티웰 시스템을 사용하여 생산되었다6,7. 그러나, 종래의 플랫폼을 통해 암 조직의 정확한 이질적 구조를 포착하는 것과 관련하여 유연성이 낮을수록 암 연구를 개선하기 위한 고생물학적 플랫폼을 구축하기 위한 첨단 생체 제조 기술의 확립이 요구되고있다 8.
3D 미생물학적 시스템(MPS)은 암세포9의복잡한 기하학적 및 병리학적 진행을 재구성하는 유용한 도구이다. 암세포가 생화학적 그라데이션을 감지함에 따라 성장인자와 케모키인의 생화학적 그라데이션과 시스템에서 재현된 기계적 이질성, 암 발달의 중요한 특징은 시험관내에서 조사될 수 있다. 예를 들어, 암 생존가능성, 전이성 악성, 및 다양한 산소 농도에 따른 약물 내성은 MPSS10,11을사용하여 연구되고 있다. 최근의 발전에도 불구하고, 체외 모델의 저산소 조건을 생성하는 것은 물리적 가스 펌프와의 연결을 포함하여 복잡한 제조 절차에 의존합니다. 따라서 암별 마이크로 환경을 구축하는 간단하고 유연한 방법이 필요합니다.
3D 세포 인쇄 기술은 토착 생물학적 구조를 재구성하기 위해 생체 재료의 공간 적 배치를 정밀하게 제어하여 상당한 주목을 받고있다(12) 특히, 이 기술은 암 미세 환경의 공간 적 특징을 구축하기 위한 높은 제어력과 타당성으로 인해 3D 저산소증 모델의 기존 한계를 극복한다. 또한 3D 프린팅은 층별 공정을 통해 컴퓨터 지원 제조를 용이하게 하여 실제 조직 아키텍처를 모방하기 위해 복잡한 형상을 신속하고 정확하며 재현 가능한 시공을 제공합니다. 3D MPS에 대한 기존 제조 전략의 장점 외에도, 암 진행의 병리학적 특징은 생화학적, 세포 및 생물물리학성분(13,14)을패턴화하여 재현될 수 있다.
본 명세서에서, 고형암의 이질성을 회수하기 위한 저산소암-온-어칩을 위한 3D 세포 인쇄 전략을 제시한다(도1)15. 제조 파라미터는 시스템의 중앙 저산소형성의 전산 시뮬레이션을 통해 결정되었다. 암-스트로마 동심링은 교모세포종 세포와 내피세포를 함유한 콜라겐 바이오잉크를 사용하여 인쇄하여 고형암의 일종인 교모세포종의 병리생리학을 모방하였다. 방사형 산소 그라데이션의 형성은 강화 된 공격성을 나타내는 암 악성 종양을 악화시켰다. 또한, 당사는 환자 별 전임상 모델에 칩의 적용에 대한 미래의 관점을 나타냅니다. 고체 암-미량 미생물 시스템을 만들기 위한 제안된 접근법은 암의 생체 내 및 체외 모델 사이의 격차를 해소할 것으로 예상된다.

<table><tbody><tr><td>Cells</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human umbilical vein endothelial cells</td><td>Promocell</td><td>C-12200</td><td></td></tr><tr><td>U-87 MG cells</td><td>ATCC</td><td>ATCC HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>Disposable</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.2 &mu; m 주사기 필터</td><td>Sartorius</td><td>16534-K</td><td></td></tr><tr><td>10mL 일회용 주사기</td><td>Jung Rim</td><td>10ml 21G32</td><td></td></tr><tr><td>10mL 유리 바이알</td><td>Hubena</td><td>A0039</td><td></td></tr><tr><td>10mL 혈청 피펫 팁</td><td>SPL lifescience</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>15mL 원추형 튜브</td><td>SPL lifescience</td><td>50015</td><td></td></tr><tr><td>18G 플라스틱 바늘</td><td>무사시 엔지니어링</td><td>PN-18G-B</td><td></td></tr><tr><td>20G 플라스틱 테이퍼 디스펜스 팁</td><td>무사시 엔지니어링</td><td>TPND-20G-U</td><td></td></tr><tr><td>22x50 유리 커버</td><td>MARIENFIELD</td><td>0101142</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 혈청학 피펫 팁</td><td>SPL lifescience</td><td>90125</td><td></td></tr><tr><td>3 mL 일회용 주사기</td><td>HENKE-JET</td><td>4020-X00V0</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; m 세포 여과기</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 혈청 학적 피펫 팁</td><td>SPL lifescience</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔 튜브</td><td>SPL lifescience</td><td>50050</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 혈청 학적 피펫 팁</td><td>SPL lifescience</td><td>90150</td><td></td></tr><tr><td>50N 정밀 노즐</td><td>Musashi engineering</td><td>HN-0.5ND</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>SINKWANG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>모세관 팁</td><td>Gilson</td><td>CP1000</td><td></td></tr><tr><td>Cell-Scrapper</td><td>SPL lifescience</td><td>90030</td><td></td></tr><tr><td>Confocal dish</td><td>SPL lifescience</td><td>200350</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Pre-coated histology slide</td><td>MATSUNAMI</td><td>MAS-11</td><td></td></tr><tr><td>Reservoir</td><td>SPL lifescience</td><td>23050</td><td></td></tr><tr><td>T-75 세포 배양 플라스크</td><td>SPL lifescience</td><td>70075</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3DX 프린터</td><td>T& R Biofab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>JEIOTECH</td><td>AC-12</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Cyrozen</td><td>1580MGR</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 레이저 현미경</td><td>Olympus Life Science</td><td>FV 1000</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>FISHER SCEINTIFIC</td><td>O221S366</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>Korea Ace Scientific</td><td>HC.203-30</td><td></td></tr><tr><td>핸드 집계 카운터</td><td>KTRIO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈구계</td><td>MARIENFIELD</td><td>0650030</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Panasonic</td><td>MCO-170AIC</td><td></td></tr><tr><td>층류 캐비닛</td><td>DAECHUNG SCIENCE</td><td>CB-BMMS C-001</td><td></td></tr><tr><td>금속 주사기</td><td>IWASHITA 엔지니어링</td><td>SUS BARREL 10CC</td><td></td></tr><tr><td>작동 가위</td><td>Hirose</td><td>HC.13-122</td><td></td></tr><tr><td>오븐</td><td>JEIOTECH</td><td>OF-12, H070023</td><td></td></tr><tr><td>용적형 피펫</td><td>GILSON</td><td>NJ05652</td><td></td></tr><tr><td>냉장고</td><td>SAMSUNG</td><td>CRFD-1141</td><td></td></tr><tr><td>볼텍스 믹서</td><td>DAIHAN Scientific</td><td>VM-10</td><td></td></tr><tr><td>수조</td><td>DAIHAN SCIENTIFIC</td><td>WB-11</td><td></td></tr><tr><td>정수기</td><td>WASSER LAB</td><td>DI-GR</td><td></td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.25 % Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Intron</td><td>IBS-BP007a</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>Biosesang</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Daejung</td><td>4018-4410</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31 항체</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>Anti-HIF-1 alpha 항체</td><td>Abcam</td><td>ab16066</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SHMT2/SHMT 항체</td><td>Abcam</td><td>ab88664</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SOX2 항체</td><td>Abcam</td><td>ab75485</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Thermo scientific</td><td>J10857-22</td><td></td></tr><tr><td>돼지 피부의 콜라겐</td><td>Dalim tissen</td><td>PC-001-1g</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6- Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermofisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Endothelial Cell Growth Medium-2</td><td>Promocell</td><td>C22011</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsobed Secondary 항체, Alexa Fluor 488</td><td>Theromofisher</td><td>A-11001</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary 항체, Alexa Fluor 594</td><td>Theromofisher</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>High-glucose Dulbecco' s Modified Eagle Medium(DMEM)</td><td>Hyclone</td><td>SH30243-0</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric</td><td>acid Sigma-Aldrich</td><td>311413-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Live/dead assay kit</td><td>Invitrogen</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG1, kappa monoclonal [15-6E10A7] - Isotype Control</td><td>Abcam</td><td>ab170190</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phenol red 솔루션</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290-100ML</td><td></td></tr><tr><td>폴리(에틸렌-비닐 아세테이트)&nbsp;</td><td>폴리 사이언스</td><td>06108-500</td><td></td></tr><tr><td>폴리디메틸실록산</td><td>도화이트치</td><td>실가드 184</td><td></td></tr><tr><td>토끼 IgG, 폴리클로날 - 이소타입 제어</td><td>Abcam</td><td>ab37415</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨 용액</td><td>삼천</td><td>S0610</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>바이오세상</td><td>TRI020-500-50</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>시그마-알드리치</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>COMSOL Multiphysics 3.5a</td><td>COMSOL AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IMS beamer</td><td></td><td></td><td>사내 소프트웨어</td></tr><tr><td>솔리드 웍스 패키지</td><td>Dassault Systems SolidWorks Corporation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

고형암의 병리학적 진행을 재구성하기 위한 3d 세포 인쇄 저산소암-온-어칩

3D Cell-Printed Hypoxic Cancer-on-a-Chip for Recapitulating Pathologic Progression of Solid Cancer

암 미세 환경은 질병의 진행에 중요한 영향을 미칩니다. 특히 저산소증은 암 생존, 침략 및 화학 저항의 핵심 동인입니다. 저산소증 관련 암 병리학을 연구하기 위해 여러 체외 모델이 개발되었지만, 생체 내에서 관찰된 암 미세 환경의 복잡한 상호 작용은 정확한 공간 제어의 부족으로 인해 아직 재현되지 않았습니다. 대신, 3D 생체 제조 접근법은 암 생태학의 더 나은 에뮬레이션및 정확한 항암 치료 평가를 위한 미생물 계통을 만들기 위하여 제안되었습니다. 본원에서, 우리는 저산소암을 제조하기 위하여 3D 세포 인쇄 접근을 제안합니다- 에-a-칩. 칩내저산소유도 성분은 산소 분포의 컴퓨터 시뮬레이션에 기초하여 결정되었다. 암-스트로마 동심링은 교모세포종 세포와 내피 세포를 포함하는 바이오 잉크를 사용하여 인쇄하여 고형암의 유형을 재구성하였다. 결과 칩은 대표적인 병리학 적 마커의 형성과 암에 중앙 저산소증과 악화 악성 을 실현. 전반적으로, 고체 암-미량 미생물 계통을 만들기 위한 제안된 접근은 암 연구를 위한 생체 내 및 체외 모델 사이 격차를 해소할 것으로 예상됩니다.

저산소암-온-어칩은 저산소증 및 암 관련병리학(그림 1)을재구성하기 위해 컴퓨터 보조 3D 세포 인쇄 기술을 사용하여 개발되었다. 산소 수송 및 소비는 3D 형상 모델을 사용하여 시뮬레이션되었습니다. 칩은 항암조직(도 2A)에서방사형 산소 확산 및 고갈을 모방하기 위해 동심 고리의 형태로 설계되었습니다. 산소가 분산되어 세포에 의해 소비된 공간의 제어 부피를 정의한 후, 중앙 저산소증 생성에 적합한 세포 밀도는 전산 유한 요소분석(도 2B,C)을통해 결정되었다.
저산소암에 대한 3D 프린팅 경로 코드는 이전 결과에 기초하여생성되었다(그림 ...

저산소증은 종양 미세 환경의 특징이며 암 진행에 중요한 역할을합니다. 이 문서에서는 3D 세포 인쇄 기술을 기반으로 저산소 암 온 어 칩의 제조 과정을 설명하여 저산소증 관련 암 병리학을 재구성합니다.

고형암의 병리학적 진행을 재구성하기 위한 3D 세포 인쇄 저산소암-온-어칩

Cancer microenvironment has a significant impact on the progression of the disease. In particular, hypoxia is the key driver of cancer survival, invasion, ...

저산소증은 게놈 불안정과 종양 발생을 유도하는 암 발달의 핵심 동인입니다. 우리는 3D 바이오 프린팅 기술을 기반으로 시험관 내고형 암에서 중앙 저산소증을 생성하는 방법을 시연합니다. 이 방법을 사용하여 3D 인쇄 가스 투과성 장벽과 유리 커버를 결합한 간단한 전략을 사용하여 무선 저산소 그라데이션을 재현할 수 있습니다.이러한 저산소암 온칩 기술은 환자 특이적 항암제 처방을 용이하게 하기 위해 약물 효능을 예측하는 데 사용될 수 있다. 그리고 그것은 또한 공격적인 암의 빠른 진단을 가능하게 할 것으로 예상됩니다. 3밀리리터 중화 콜라겐 프리젤 용액의 제조를 돕기 위해 30밀리그램 콜라겐 스폰지를 5mm 곱곱피스로 자른다.멸균 10 밀리리터 유리 바이알에 조각을 넣고 0.2 미크론 주사기 필터 0.1 일반 염산의 2.4 밀리리터를 바이알에 추가하여 섭씨 4도, 분당 15회전으로 3일간 의 배양에 사용한다. 소화 후, 40 미크론 세포 스트레이너를 통해 소화되지 않은 콜라겐 입자를 변형시키고 산성 콜라겐 용액을 섭씨 4도에서 최대 7일 동안 보관하십시오. 1% 중화 콜라겐 프리젤 용액의 pH를 조정하려면, 10X PBS의 최종 농도에 페놀 레드 용액 30마이크로리터를 10%와 300 마이크로리터를 혼합 및 원심분리 후 최종 농도에 추가하고, 일반 수산화 나트륨 1개를 사용하여 3개의 일반 수산화나트륨을 사용하여 총 3개의 미립수를 획득하여 수분 변화를 확인한다.그런 다음 pH 조정 된 1 % 중화 콜라겐 프리 젤 용액을 섭씨 4도에 저장하여 3 일 이내에 사용합니다. 중화 콜라겐 프리젤 용액의 겔화를 미리 확인하려면 양극률 피펫을 사용하여 작은 접시에 콜라겐 방울 50 마이크로리터를 추가하고 1시간 동안 37°C의 인큐베이터에 물방울을 배양합니다. 인큐베이션이 끝나면 콜라겐이 투명 한 색상에서 불투명한 흰색으로 변경되었는지 확인하십시오.콜라겐이 용기의 바닥에 부착되어 있는지 확인하기 위해 용기를 기울입니다. 그리고 콜라겐 구조가 용액에 침입하지 않는지 확인하기 위해 액적에 PBS를 부어. 희생 PEVA 금형의 3D 프린팅을 위해 파일을 클릭하고 파일 유형을 STL로 저장하여 3D CAD 파일을 STL 파일로 변환하고 옵션 및 출력 양식을 ASCII로 클릭하여 G 코드를 생성합니다.생성된 STL 파일을 가져오려면 파일을 클릭하고 STL 파일을 열고 저장된 STL 파일을 선택합니다. 희생 PEVA 금형의 G 코드를 자동으로 생성하려면 STL-CAD 교환기의 슬라이스 모델을 선택합니다. 그런 다음 칩 제조를 위한 인쇄 경로를 생성하려면 섭씨 110도에서 500킬로파스칼의 공압에서 50 게이지 정밀 노즐을 사용하여 희생 PEVA 금형을 멸균 접착제 유혈성 조직성 슬라이드에 인쇄합니다.PDMS 장벽을 주조하기 위해, 플라스틱 저수지에 5 분 동안 PDMS 베이스 엘라스토머와 600 마이크로 리터의 6 밀리리터를 혼합하고 균일하게 혼합 된 용액을 10 밀리리터 일회용 주사기에 로드합니다. 주사기를 20 게이지 플라스틱 테이퍼 디스펜스 팁으로 장착하고 식소 PEVA 금형을 혼합 된 PDMS 솔루션으로 채웁니다. 혼합 된 PDMS는 볼록한 표면이 희생 PEVA 금형을 채우고 장벽은 금형보다 높을 것입니다.PEVA의 용융을 피하기 위해 섭씨 40도 오븐에서 PDMS 장벽을 경화한 후 정밀 핀셋 을 사용하여 희생 PEVA 금형을 분리하고 오토클레이브에서 120°C에서 가스 투과성 장벽을 살균합니다. 용액을 암세포와 혼합하려면 각 유형의 수집된 세포 펠릿을 배양 배지 20마이크로리터에 재보중단하고 1밀리리터를 1밀리리터의 1밀리리터를 젖은 얼음의 재일시 중단된 세포 현탁액에 부드러운 혼합으로 첨가한다. 양수 변위 파이펫을 사용하여 각 셀 서스펜션을 혼합합니다.균일한 용액을 얻을 때, 양극 일회용 파이펫을 사용하여 세포 캡슐화된 콜라겐 바이오잉크를 개별 3밀리리터 일회용 주사기로 옮기고 3D 셀 프린팅까지 주사기를 섭씨 4도에 저장합니다. 암 스트로마 동심 형 링의 3D 프린팅의 경우 적절한 3D CAD 파일을 STL 파일 형식으로 변환하고 STL-CAD 교환기를 사용하여 암 스트로마 동심 링의 G 코드를 생성합니다. 셀 캡슐화된 콜라겐 바이오잉크를 3D 프린터 헤드에 적재하고 헤드와 플레이트의 온도를 섭씨 15도로 설정합니다.3D 프린터의 제어 소프트웨어에 생성된 인쇄 경로를 로드하고 15도에서 약 20킬로파스칼의 공압으로 18게이지 플라스틱 바늘을 장착한 로드된 G 코드에 따라 콜라겐 바이오잉크를 가스 투과성 장벽에 인쇄하기 시작합니다. 모든 인쇄 작업이 끝나면 저산소 그라데이션을 생성하기 위해 가스 투과성 장벽 위에 멸균 22 x 50mm 유리 커버를 수동으로 배치합니다. 3개의 저산소암-온칩을 생성한 후 칩을 섭씨 37도인 배양기로 1시간 동안 전달하여 콜라겐 바이오잉크를 교차연결합니다.모든 저산소암온칩이 인쇄되었을 때, 단단한 결합을 위해 세포 스크레이퍼로 가스 투과성 장벽 위에 커버 안경을 부드럽게 문지릅니다. 암 구조를 분리하지 않고 칩에 세포 배양 배지를 새로 고치려면 칩을 기울이고 파이펫을 사용하여 각 칩의 측면에 내피 세포 성장 배지 1.5 밀리리터를 도입한다. 저산소암-온-어칩은 암 조직에서 관찰된 방사형 산소 확산 및 고갈을 모방하기 위해 동심 고리의 형태로 설계되었습니다.산소가 세포에 의해 확산되고 소모되는 공간의 제어 부피를 정의한 후, 중앙 저산소증 생성에 적합한 세포 밀도는 계산 유한 요소 분석을 통해 결정될 수 있다. 3D 세포 인쇄시, 구획화된 암-스트로마 동심순환 구조를 만들어 고형암의 해부학적 특징을 재현할 수 있다. 정량적으로, 인쇄 후 세포 생존가능성은 전형적으로 96% 이상이며 제조 조건이 암 및 기질 세포에 적합하다는 것을 확인합니다.본 대표적인 분석에서, 2개의 단은 암 진행에 저산소 그라데이션의 효력을 확인하기 위하여 산소 그라데이션의 존재 그리고 부재에 따라 비교되었다. 두 조건 모두에서 성숙한 CD31 양성 내피 세포는 주변 영역 내에 존재하였고, 이는 공간적으로 패턴이 있는 살아있는 구조물이 3D 바이오프린팅 기술을 사용하여 생산되었음을 나타낸다. 산소 그라데이션 음성 조건에 비해 그라데이션 양성 상태는 HIF1 알파의 점진적발현을 나타내는 저산소 그라데이션을 입증했다.SHMT2 양성 의사팔수증 세포 및 SOX2 양성 다능성 세포도 관찰되었으며, 이는 고형암의 공격적인 병리학적 특징의 존재를 나타낸다. 저산소암-온-어칩은 고형암의 병리학적 특성과 암세포와 종양발생 사이의 동적 상호토크를 조사하는 데 유용한 도구로 마이크로환경을 촉진한다. 방법론은 합리적인 기간에 환자 특정 약물 설계에 적응 할 수 있기 때문에,이 접근 방식은 암의 생체 내 및 체외 모델 사이의 격차를 해소 할 것으로 예상된다.

3d-cell-printed-hypoxic-cancer-on-chip-for-recapitulating-pathologic

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리는 마이크로 bioreactors에서 세포의 3 차원 배양을위한 칩 기반의 플랫폼을 설명합니다. 하나의 칩 10 미오 최대 집 수 있습니다. 멸균, 폐쇄 순환 루프에서 유체 흐름, 산소 장력 등에 관한 정확하게 정의된 조건 하에서 재배 세포 수 있습니다.

Perfused 마이크로 bioreactors의 칩 기반의 입체 세포 배양

이 방법은 스페로이드에서 주변 3D 매트릭스로의 암세포 침입을 평가합니다.  스페로이드는 행잉 드롭 배양 방법을 통해 생성된 다음 기저막 재료와 I형 콜라겐으로 구성된 매트릭스에 내장됩니다.  이후에 스페로이드 외부로의 침입이 모니터링됩니다.

암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해

여기, 췌장암 세포 및 섬유 아 세포, 세포 외 유출 분석기를 사용 하 여 대사 기능을 측정 하 여 다음의 3 차원 (3D) 회전 타원 체 공동 문화의 준비에 대 한 메서드를 설명 합니다.

준비 및 췌장암 세포 및 섬유 아 세포의 3 차원 회전 타원 체 공동 문화의 변화 분석 결과

우리 불멸 하 게 종양 및 섬유 세포 bioprintable alginate/젤라틴 bioink에 포함 된 구성 된 이기종 유 방 암 모델 개발. 모델이 비보에 종양 microenvironment tumorigenesis 운전 메커니즘에 대 한 통찰력을 양보 하는 다세포 종양 spheroids의 형성을 촉진 한다.

셀 회전 타원 체 형성을 유발 하는 모델 시스템에 3D 생체 외에서 Bioprintable Alginate/젤라틴 하이드로 겔

우리는 셀과 다중 세포 소기관으로 3D 문화와 실험을 위한 장치를 구성 하는 방법을 설명 합니다. 이 장치는 정의 된 화학 유인 구배가 있는 3D 미세 환경에서 가용성 신호에 대 한 셀룰러 응답을 분석 할 수 있습니다. 유기 체는 약한 시끄러운 입력의 검출에 단일 세포 보다 낫다.

화학 유인 그라데이션에 대 한 다중 세포 반응의 3D 분석

우리는 단일 세포에서 잘 정의 된 환경 조건 내에서 암 역학의 장기 실시간 정량 적 연구를위한 제어 가능한 플랫폼을 제공하는 미세 유체 암 온 칩 모델인 "Evolution Accelerator" 기술을 제시합니다. 수준. 이 기술은 근본적인 연구 또는 전임상 신약 개발을 위한 시험관 내 모델로 작동할 것으로 예상됩니다.

실시간 관찰을 위한 미세 유체 진화 가속기에 암 인구에 걸쳐 이기종 약물 그라데이션의 생성

여기에서는 혈액 뇌 장벽 전이성 종양 미세 환경을 준비하고 배양한 다음 공초점 이미징 및 인공 지능 (기계 학습)을 사용하여 상태를 정량화하기위한 프로토콜을 제시합니다.

장기 온-A 칩 3D 모델, 기계 학습 및 공초점 단층 촬영을 사용하여 뇌 전이성 종양 미세 환경을 정량화

이 프로토콜의 목표는 약물 선별 연구에 사용될 수 있는 3D 유방 내피 상양 모델을 빠르게 만들기 위해 사전 형성된 내피 네트워크에 다세포 스페로이드로서 유방 상피 세포를 직접 바이오프린트하는 것입니다.

내피 네트워크에 3D 다세포 유방 스페로이드의 직접 생체 인쇄

여기에서는 미세생리학적 시스템에서 콜라겐 및 콜라겐-아가로스 매트릭스를 사용하여 3D 세포 배양을 구현하기 위한 지침을 자세히 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 이러한 프로토콜은 신장 근위세뇨관 및 신세포 암 스페로이드 공동 배양을 지원하여 생체 내 조건을 시뮬레이션하고 신장암 세포 상호 작용에 대한 고급 조사를 가능하게 합니다.

신장암 진행을 모델링하기 위한 건강한 신장과 종양 상피의 미세유체 공동 배양

암 전이를 연구하기 위해 이세포성 누화를 캡처하는 3D 암 모델이 매우 필요합니다. 우리의 연구는 침입 및 세포 공간 분포를 연구하는 데 사용할 수 있는 골격 및 골격이 없는 환경에서 이종 다세포 기질-상피의 생성을 제시합니다.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

이 프로토콜은 3D 프린팅 하이드로겔 종양 절편에서 맨틀 세포 림프종의 생성, 배양 및 분석에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

맨틀 세포 림프종에 대한 3D 모델로서 하이드로겔 종양 절편의 바이오프린팅

학습하세요 3D 바이오프린팅을 활용한 저산소암-온-어칩 제작 방법으로 고형암의 중심 저산소증을 재현하고 약물 효능을 예측하여 환자 맞춤형 항암제 처방과 공격성 암의 신속한 진단을 가능하게 하는 기술입니다.

고형암의 병리학적 진행을 재구성하기 위한 3D 세포 인쇄 저산소암-온-어칩

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