한 토끼에서 서로 다른 혈역학을 가진 두 개의 천골 엘라스타제 소화 동맥류 생성
April 15th, 2021
이 프로토콜은 서로 다른 혈역학 (그루터기 및 분기 별자리)을 가진 두 개의 엘라 스타제 소화 동맥류가있는 토끼 모델을 만드는 단계를 설명합니다. 이를 통해 단일 동물 내에서 다양한 혈관 구조 및 혈역학 적 상태를 가진 동맥류에서 새로운 혈관 내 장치를 테스트 할 수 있습니다.
우리의 프로토콜은 단일 동물에서 그루터기 및 분기 혈류 역학과 퇴화 벽 상태를 모두 가진 토끼 동맥류 모델을 만들고 이환율과 사망률이 낮고 개통률이 높은 단일 수술 접근 중에 재현 가능한 기술을 설명합니다. 이 모델은 혈류 역학의 역할과 관련하여 천골 동맥류의 자연적 경과를 직접 비교할 수있을뿐만 아니라 두 가지 별개의 동맥류 구성 및 흐름 조건에서 혈관 내 장치를 테스트 할 수 있습니다. 이 방법의 주요 단점은 고전적인 분기 및 그루터기 동맥류 모델의 생성, 정교한 실험실 장비 및 특정 미세 수술 기술의 필요성과 동일합니다.
메스를 사용하여 설골에서 1.5cm 꼬리까지 중앙 피부 절개를합니다. 세심한 지혈을 수행하면서 내측 절개에서 피하 및 지방 조직을 준비하십시오. 부착 결합 조직에서 흉골 두부 근육을 제거하고 근간 대성을 피하기 위해 리도카인을 국소 적으로 적용하십시오.
흉골 두부 근육의 내측에있는 오른쪽 총 경동맥 (CCA)을 노출시키고 젖은 면봉으로 젖게 유지하십시오. 흉골 두부 근육의 측면 및 근위 부분을 준비하고 혈관 루프로 내측으로 수축시켜 CCA를 노출시킵니다. 외부 경정맥을 식별하고 젖은 마이크로 면봉으로 보호하십시오.
동맥을 노출시키기 위해 상완 두부 줄기의 분기점까지 CCA를 따라 결합 조직을 조심스럽게 해부하십시오. 작은 가지가 동맥에서 나오면 소작기로 응고시킵니다. 두 개의 임시 클립을 적용하되, 첫 번째 클립은 CCA의 원점에 있고 두 번째 클립은 CCA에서 2cm 떨어져 있습니다.
용기 아래에 고무 패드를 놓고 혈관 확장을 위해 파파 베린 하이드로 클로라이드로 헹굽니다. 마이크로 가위를 사용하여 외막을 조심스럽게 제거하십시오. 22게이지 4개의 카테터로 원위 클립 아래에서 동맥 절개술을 수행하고 카테터를 근위 클립까지 꼬리로 삽입합니다.
혈액이 보이지 않을 때까지 헤파린 화 된 염화나트륨으로 세그먼트를 강내 플러시하십시오. 그런 다음 카테터를 4-0 합자로 고정하십시오. 카테터를 통해 0.1 내지 0.2 밀리리터의 엘라스타제를 동맥 세그먼트에 주입하고 20분 동안 배양한다.
엘라스타제로 20분의 배양 시간 후, 엘라스타제 용액을 제거하고 주사기를 교체하여 0.9% 식염수로 동맥 세그먼트를 약 10회 헹굽니다. 두 개의 합자를 적용하는데, 첫 번째는 근위 클립의 5mm 원위에, 두 번째는 동맥 절개술 바로 아래에 있습니다. 첫 번째 합자보다 약 3 밀리미터 위에 용기를 자르고 두 번째 합자와 원위 클립 사이에 한 번 더 자릅니다.
이자가 이식편은 분기 동맥류가 생성 될 때까지 헤파린 화 된 용액에 보관하십시오. 첫 번째 근위 클립을 조심스럽게 열고 동맥류를 측정합니다. 분기 동맥류를 만들려면 외막을 조심스럽게 제거하고 오른쪽 CCA의 그루터기에 측면으로 약 2mm 세로 절개를하십시오.
왼쪽 CCA에 두 개의 임시 클립을 적용하여 약 1cm의 세그먼트를 구분하고 그 사이의 외막을 제거합니다. 23 게이지 바늘로 동맥 절개술을 시행하십시오. 그런 다음 헤파린 화 된 염화나트륨으로 세그먼트를 플러시하십시오.
미세 가위를 사용하여 동맥 절개술을 약 4-5mm로 확대하여 오른쪽 CCA와 동맥류 주머니를 봉합 할 수 있습니다. 문합을 수행하려면 왼쪽 CCA의 동맥 절개술의 근위 가장자리에서 시작하여 5 바늘로 오른쪽 경동맥 둔기의 근위 뒷벽을 봉합하십시오. 그런 다음 왼쪽 CCA의 동맥 절개술의 말단 가장자리에서 시작하여 4-5 바늘로 동맥류 주머니의 뒷면을 봉합합니다.
물고기 입 절개 수준에서 원위 뒷면을 계속하여 동맥류 이식편의 수직 뒷면을 3 바늘로 봉합합니다. 물고기 입 절개의 앞면을 세 바늘로 봉합하여 위쪽으로 시작하여 아래쪽으로 이동합니다. 동맥류 이식편의 왼쪽 CCA와 앞면 사이의 전면 봉합사와 오른쪽 CCA를 약 6바늘로 마무리합니다.
문합을 끝내기 전에 혈관을 헤파린 화 된 0.9 % 식염수로 헹굽니다. 지혈을 위해 마이크로 면봉으로 문합에 약간의 압력을 가하면서 오른쪽 CCA의 클립을 제거합니다. 그런 다음 왼쪽 CCA에서 원위 클립을 제거하여 계속합니다.
큰 출혈이 없으면 혈류를 허용하기 위해 왼쪽 CCA의 근위 클립을 계속 빼냅니다. 추적 관찰에서, 동맥류 개통은 자기 공명 혈관 조영술로 확인되었다. 목 동맥에 초점을 맞춘 3 테슬라 MRI로 획득 한 3 차원 TOF 시퀀스가 표시됩니다.
그루터기 동맥류는 오른쪽 쇄골 하 동맥에서 관찰되며, 분기 동맥류는 왼쪽 쇄골 하 동맥의 오른쪽 CCA를 문합하여 생성 된 분기점에서 관찰됩니다. 동맥류 개통성은 또한 조직 추출 후 거시적 검사에 의해 확인되었다. 클립의 주요 홈은 1mm를 나타내고 작은 홈은 0.5mm를 나타냅니다.
그루터기 및 분기 동맥류의 현미경 분석은 샘플을 헤마톡실린-에오신으로 염색한 후 수행하였다. 수술 중 두 단계가 중요한데, 첫째, 상완두증까지 우경동맥의 노출 및 해부, 둘째, 기관, 경정맥 및 후두 신경과 같은 중요한 구조의 보호입니다.
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개요
이 프로토콜은 서로 다른 혈역학을 특징으로 하는 두 개의 엘라스타제 소화된 동맥류를 갖는 토끼 모델을 만드는 재현 가능한 기술을 설명합니다. 이 모델은 혈관 구조와 흐름 조건이 다른 동맥류에서 새로운 혈관 내 장치를 테스트하는 것을 용이하게 합니다.
주요 연구 요소
과학 분야
- 신경과학
- 혈관 생물학
- 혈관 내 수술
배경
- 이 모델은 통제된 환경에서 낭상 동맥류의 연구를 가능하게 합니다.
- 동맥류 발생에서 혈역학의 역할에 대한 통찰력을 제공합니다.
- 이 수술 접근법과 관련된 낮은 발병률과 사망률이 있습니다.
- 높은 개통률은 장치 테스트에 대한 모델의 신뢰성을 향상시킵니다.
연구 목적
- 비교 연구를 위한 토끼의 이중 동맥류 모델을 만드는 것입니다.
- 다양한 혈역학 조건이 동맥류 행동에 미치는 영향을 평가하는 것입니다.
- 단일 수술 환경에서 새로운 혈관 내 장치의 효과를 테스트하는 것입니다.
사용된 방법
- 근위골에서 흉골 손잡이까지 중앙 피부 절개의 생성.
- 조심스러운 지혈을 통한 피하 및 지방 조직의 준비.
- 결합 조직에서 목빗근의 분리.
- 근육 수축을 최소화하기 위한 리도카인의 국소 적용.
주요 결과
- 모델은 성공적으로 뚜렷한 혈역학 조건을 입증했습니다.
- 다양한 흐름 조건에서 동맥류 행동의 직접 비교를 가능하게 했습니다.
- 혈관 내 장치는 두 구성에서 효과적으로 테스트되었습니다.
- 전반적으로, 이 기술은 낮은 합병증 발생률을 보였습니다.
결론
- 토끼 모델은 동맥류 연구를 위한 귀중한 도구입니다.
- 동맥류 진행에 대한 혈역학의 영향에 대한 통찰력을 제공합니다.
- 이 방법은 재현 가능하며 새로운 장치 테스트에 적합합니다.
