Name: 초고구조 분석 및 항체 염색을 위한 Planarian 난소 절제 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: 배우세요 Schmidtea mediterranea 플라나리아 난소 절제법으로 난세포 세포 및 아세포 분석을 수행하는 방법을 알아보세요. TEM과 항체 염색을 통해 고해상도 이미징이 가능하며, 생식세포 생물학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Brubacher, J. L., Vieira, A. P., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea+for+high-resolution+histology+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of the planarian Schmidtea mediterranea for high-resolution histology and transmission electron microscopy.</a> Nature Protocols. 9 (3), 661-673 (2014).</li>
<li>Carpenter, K. S., Morita, M., Best, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+the+photoreceptor+of+the+planarian+Dugesia+dorotocephala.+I.+Normal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of the photoreceptor of the planarian Dugesia dorotocephala. I. Normal eye.</a> Cell Tissue Research. 148 (2), 143-158 (1974).</li>
<li>Ishii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+protonephridial+flame+cell+of+the+freshwater+planarian+Bdellocephala+brunnea%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the protonephridial flame cell of the freshwater planarian Bdellocephala brunnea.</a> Cell Tissue Research. 206 (3), 441-449 (1980).</li>
<li>Morita, M., Best, J. B., Noel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopic+studies+of+planarian+regeneration%3A+I.+Fine+structure+of+neoblasts+in+Dugesia+dorotocephala%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ultrastructure+Research%22%5BJournal%5D)">Electron microscopic studies of planarian regeneration: I. Fine structure of neoblasts in Dugesia dorotocephala.</a> Journal of Ultrastructure Research. 27 (1), 7-23 (1969).</li>
<li>Hyman, L. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHyman%2C+LH+%22The+invertebrates%3A+Platyhelminthes+and+Rhynchocoela%2C+the+acoelomate+Bilateria%22">The invertebrates: Platyhelminthes and Rhynchocoela, the acoelomate Bilateria</a>. 2, 550(1951).</li>
<li>Higuchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+categorization+of+fluorescence+activated+cell+sorted+planarian+stem+cells+by+ultrastructural+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Characterization and categorization of fluorescence activated cell sorted planarian stem cells by ultrastructural analysis.</a> Development, Growth & Differentiation. 49 (7), 571-581 (2007).</li>
<li>Chong, T., Stary, J. M., Wang, Y., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+markers+to+characterize+the+hermaphroditic+reproductive+system+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular markers to characterize the hermaphroditic reproductive system of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Developmental Biology. 11, 69(2011).</li>
<li>Handberg-Thorsager, M., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+planarian+nanos-like+gene+Smednos+is+expressed+in+germline+and+eye+precursor+cells+during+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">The planarian nanos-like gene Smednos is expressed in germline and eye precursor cells during development and regeneration.</a> Development Genes and Evolution. 217 (5), 403-411 (2007).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+D-tryptophan+as+a+bioactive+substance+for+postembryonic+ovarian+development+in+the+planarian+Dugesia+ryukyuensis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The identification of D-tryptophan as a bioactive substance for postembryonic ovarian development in the planarian Dugesia ryukyuensis.</a> Scientific Reports. 7, 45175(2017).</li>
<li>Maezawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+D-amino+acid+oxidase+is+involved+in+ovarian+development+during+sexual+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Planarian D-amino acid oxidase is involved in ovarian development during sexual induction.</a> Mechanisms of Development. 132, 69-78 (2014).</li>
<li>Rouhana, L., Tasaki, J., Saberi, A., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+the+planarian+reproductive+system+through+characterization+of+Schmidtea+mediterranea+CPEB+homologs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of the planarian reproductive system through characterization of Schmidtea mediterranea CPEB homologs.</a> Developmental Biology. 426 (1), 43-55 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+origin+of+the+germline+stem+cells+as+revealed+by+the+expression+of+nanos-related+gene+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Identification and origin of the germline stem cells as revealed by the expression of nanos-related gene in planarians.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (9), 615-628 (2006).</li>
<li>Tharp, M. E., Collins, J. J., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lophotrochozoan-specific+nuclear+hormone+receptor+is+required+for+reproductive+system+development+in+the+planarian%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A lophotrochozoan-specific nuclear hormone receptor is required for reproductive system development in the planarian.</a> Developmental Biology. 396 (1), 150-157 (2014).</li>
<li>Wang, Y., Zayas, R. M., Guo, T., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nanos+function+is+essential+for+development+and+regeneration+of+planarian+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">nanos function is essential for development and regeneration of planarian germ cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (14), 5901-5906 (2007).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nuclear+hormone+receptor+and+lipid+metabolism+axis+are+required+for+the+maintenance+and+regeneration+of+reproductive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A nuclear hormone receptor and lipid metabolism axis are required for the maintenance and regeneration of reproductive organs.</a> bioRxiv. , 279364(2018).</li>
<li>Saberi, A., Jamal, A., Beets, I., Schoofs, L., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPCRs+direct+germline+development+and+somatic+gonad+function+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">GPCRs direct germline development and somatic gonad function in planarians.</a> PLoS Biology. 14, 1002457(2016).</li>
<li>Steiner, J. K., Tasaki, J., Rouhana, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+defects+caused+by+Smed-boule+RNA-interference+reveal+that+egg+capsule+deposition+occurs+independently+of+fertilization%2C+ovulation%2C+mating%2C+or+the+presence+of+gametes+in+planarian+flatworms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Germline defects caused by Smed-boule RNA-interference reveal that egg capsule deposition occurs independently of fertilization, ovulation, mating, or the presence of gametes in planarian flatworms.</a> PLoS Genetics. 12, 1006030(2016).</li>
<li>Iyer, H., Issigonis, M., Sharma, P. P., Extavour, C. G., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+premeiotic+function+for+boule+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A premeiotic function for boule in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (25), 3509-3518 (2016).</li>
<li>Rouhana, L., Vieira, A. P., Roberts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+and+the+role+of+symmetrical+dimethylarginine+in+chromatoid+bodies+of+planarian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">PRMT5 and the role of symmetrical dimethylarginine in chromatoid bodies of planarian stem cells.</a> Development. 139 (6), 1083-1094 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Stary, J. M., Wilhelm, J. E., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomic+screen+in+planarians+identifies+novel+regulators+of+germ+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">A functional genomic screen in planarians identifies novel regulators of germ cell development.</a> Genes & Development. 24 (18), 2081-2092 (2010).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular+analyses+of+planarian+meiosis+implicates+a+novel%2C+double-membraned+vesiculation+process+in+nuclear+envelope+breakdown%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Subcellular analyses of planarian meiosis implicates a novel, double-membraned vesiculation process in nuclear envelope breakdown.</a> bioRxiv. , 620609(2019).</li>
<li>Grudniewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+signatures+of+somatic+neoblasts+and+germline+cells+in+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Transcriptional signatures of somatic neoblasts and germline cells in Macrostomum lignano.</a> Elife. 5, 20607(2016).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-living+flatworm+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">The free-living flatworm Macrostomum lignano.</a> Evodevo. 11, 5(2020).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transgenesis+and+annotated+genome+sequence+of+the+regenerative+flatworm+model+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Efficient transgenesis and annotated genome sequence of the regenerative flatworm model Macrostomum lignano.</a> Nature Communications. 8 (1), 2120(2017).</li>
<li>Maezawa, T., Sekii, K., Ishikawa, M., Okamoto, H., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaezawa%2C+T+%22Reproductive+and+Developmental+Strategies%3A+The+Continuity+of+Life%22">Reproductive and Developmental Strategies: The Continuity of Life</a>. Kobayashi, K., Kitano, T., Iwao, Y., Kondo, M. , Springer. Japan, Tokyo. 175-201 (2018).</li>
<li>Newmark, P. A., Reddien, P. W., Cebria, F., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+bacterially+expressed+double-stranded+RNA+inhibits+gene+expression+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ingestion of bacterially expressed double-stranded RNA inhibits gene expression in planarians.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, Suppl 1 11861-11865 (2003).</li>
<li>Orii, H., Mochii, M., Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+%22soaking+method%22+for+RNA+interference+in+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">A simple "soaking method" for RNA interference in the planarian Dugesia japonica.</a> Development Genes and Evolution. 213 (3), 138-141 (2003).</li>
<li>Rouhana, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+by+feeding+in+vitro-synthesized+double-stranded+RNA+to+planarians%3A+methodology+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">RNA interference by feeding in vitro-synthesized double-stranded RNA to planarians: methodology and dynamics.</a> Developmental Dynamics. 242 (6), 718-730 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>16% 파라포름알데히드</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15710</td><td>EM 등급</td></tr><tr><td>2% 수성 OsO4</td><td>전자 현미경 과학</td><td>19152</td><td></td></tr><tr><td>50% 글루타르알데히드</td><td>전자 현미경 과학</td><td>16320</td><td>EM 등급</td></tr><tr><td>디지털 현미경 사진</td><td>Gatan Inc.</td><td></td><td>버전 2.33.97.1, TEM 데이터 수집</td></tr><tr><td>Epon resin</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>14120</td><td>Embed 812 Kit, liquid, epoxy resin</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Ted Pella</td><td>19207</td><td>Denatured</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Sigma</td><td>H1138</td><td></td></tr><tr><td>Lead Acetate</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td></td><td></td>6080564</tr><tr><td>MilliQ 물</td><td></td><td></td><td>역삼투압 처리수</td></tr><tr><td>N-아세틸-L-시스테인</td><td>Sigma</td><td>A7250</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>sigma</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36965</td><td></td></tr><tr><td>프로필렌 옥사이드</td><td>전자 현미경 과학</td><td>75569</td><td>EM grade</td></tr><tr><td>&nbsp; Proteinase K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine blue O</td><td>전자 현미경 과학</td><td>92319</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경</td><td>FEI</td><td></td><td>Tecnai G2 Spirit BioTWIN</td></tr><tr><td>우라닐 아세테이트</td><td>전자 현미경 과학</td><td>541093</td><td></td></tr></tbody></table>

초고구조 분석 및 항체 염색을 위한 planarian 난소 절제

Planarian Ovary Dissection for Ultrastructural Analysis and Antibody Staining

여기에 제시된 방법은 Guo et al.21에 의해 설명되었습니다. 성공적인 절개의 핵심은 난소 색소 침착을 식별하고 가이드를 올바르게 배치하는 것입니다. 이 방법의 전략은 넓은 위치에서 특정 위치로 이동하는 것입니다. 첫째, 이를 달성하기 위해 등쪽 및 배쪽 색소 침착 패턴에 의존합니다(그림 1A,B). 난소가 위치한 복부 색소 침착은 5%의 NAC 치료와 4%의 PFA 고정 후 하얗게 변합니다. 사용된 웜이 색소 침착을 명확하게 구분하지 못하는 경우 다른 웜을 사용하는 것이 좋습니다.
그런 다음 관련 없는 조직을 단계적으로 잘라냅니다(그림 1C-E). 난소가 노출되면(그림 1E) 주변 ...

초고구조 분석 및 항체 염색을 위한 Planarian 난소 절제

Accessibility to germ cells allows the study of germ cell development, meiosis, and recombination. The sexual biotype of the freshwater planarian, ...

planarian-ovary-dissection-for-ultrastructural-analysis-antibody

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 성인 zebrafish에서 장기를 식별하고 해부를위한 절차를 설명합니다.

성인 Zebrafish에서 기관의 해부

틈새와 줄기 세포를 개발하는 동안 양식 얼마나 실용적인 의미가있는 중요한 질문이다.

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

여기 우리는 그대로 마우스 난소에서 수동 선명도 난소 맥 관 구조 및 follicular 모세 혈관의 시각화를 위한 3D 재구성 방법의 적응을 제시.

수동 선명도 삭제 마우스 난소의 혈관 구조의 3 차원 재구성

Drosophila 난소 줄기 세포 틈새 시장 개발을 공부 하는 우수한 모델 시스템입니다. 애벌레와 성인 난소를 해 부 방법 출판 되었습니다 비록 번데기 난소 해 자세히 게시 되지 않은 다른 기술이 필요 합니다. 여기 우리는 해 부, 얼룩, 번데기 난소를 장착 한 프로토콜 개요.

해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩

여기, 선물이 직렬 구분 없이 교양된 난소 젊은 쥐의 모 낭을 계량 하는 프로토콜. 전체 기관 면역 형광 및 조직 삭제를 사용 하 여, 실제 단면 광 단면으로 대체 됩니다. 샘플 준비 및 시각화의이 방법은 기관 무결성을 유지 하 고 특정 셀의 자동화 된 정량화를 용이 하 게.

전체 산 면역 형광 및 교양된 마우스 난소의 여 포 정량화

여기에서는 전체 탑재 면역 염색, 다중 광자 현미경 검사, 3D 시각화 및 분석을 사용하여 정량적 및 정성적 분석을 위해 전체 난소를 이미징하는 데 최적화된 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 독성학, 임상 진단 및 난소 기능의 게놈 분석에 적용 할 수있는 높은 처리량, 신뢰성 및 반복 가능한 처리를 수용합니다.

전체 난소 면역 형광, 클리어링 및 마우스에서 난소 예비의 정량적 3D 분석을위한 다중 광자 현미경 검사

RNA 무결성을 유지하면서 개별 세그먼트의 수집을 허용하는 마우스 배반의 미세 절제 방법이 제시된다. 또한, 비효소 성 배관 세포 해리 절차가 설명된다. 이 방법은 기능적으로 상이한 배반 분과 및 해리된 배관 세포의 후속 유전자 및 단백질 분석에 적합합니다.

뮤린 오비덕트의 미세 절제 및 해리: 개별 세그먼트 식별 및 단일 세포 격리

이것은 항체 염색을 통해 면역형광을 위한 생식계열 샘플을 생성하거나 DNA를 시각화하기 위한 간단한 DAPI 염색을 위해 C. elegans 생식선 해부 후 동결 균열에 일반적으로 사용되는 방법입니다. 이 프로토콜은 연구실과 과정 기반 학부 연구 경험의 학부생에게 성공적이었습니다.

C. 엘레 간스 면역형광 및 DAPI 염색을 위한 생식선 해부 및 동결 균열

이 프로토콜은 탐조등 트랩으로 포획한 야생형 철새 암컷 곤충에 적합한 간단하고 쉬운 해부 방법을 보여줍니다. 이 기술은 두 생식 조직, 즉 야생형 암컷 곤충의 짝짓기 주머니와 난소 발달을 비교하여 동일한 종을 크게 명확히 할 수 있습니다.

야생형 암컷 곤충의 난소 발달 해부 및 등급

이 동영상은 모든 마운트 immunohistochemistry, 항원의 공간 및 시간적 표현식 패턴이 젊은 여자는 태아의 시각 될 수있는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 원래 제인 다드와 톰 Jessell에 의해 도입되었다.

칙의 전체 마운트 항체 스테 이닝을위한 방법

배우세요 Schmidtea mediterranea 플라나리아 난소 절제법으로 난세포 세포 및 아세포 분석을 수행하는 방법을 알아보세요. TEM과 항체 염색을 통해 고해상도 이미징이 가능하며, 생식세포 생물학 연구에 활용됩니다.

초고구조 분석 및 항체 염색을 위한 Planarian 난소 절제

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