Name: ESLP를 위한 어린 돼지 모델에서의 좌측 폐 정형외과적 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: 학습하세요 어린 돼지 모델에서 좌측 폐 정형외과적 이식 기법을 통해 폐 기능 평가 및 수술 관리 방법을. 이 프로토콜은 ESLP 연구 및 인공 장기 테스트에 활용됩니다.

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이 연구는 대학 병원 재단을 대신하여 자금을 지원합니다.

모든 절차는 캐나다 동물 관리 위원회(Canadian Council on Animal Care)의 지침과 실험실 동물의 관리 및 사용 지침에 따라 수행되었습니다. 이 프로토콜은 앨버타 대학의 기관 동물 보호 위원회의 승인을 받았습니다. 이 프로토콜은 35-50kg 사이의 암컷 어린 요크셔 돼지에 적용되었습니다. 돼지는 병원균이 없는 식품 등급 표본입니다. 그들은 캐나다 AB 주 에드먼턴에 있는 돼지 연구 및 기술 센터(https://srtc.ualberta.ca)에서 구입합니다. ESLP 절차에 관련된 모든 개인은 적절한 생물 안전 교육을 받았습니다.
1. 수술 전 준비 및 마취
참고: 돼지는 수술 전 최대 12시간 동안 밤새 금식합니다.
<ol><li>수술실에서 이식 돼지에 대한 사전 약물로 케타민(20mg/kg)과 아트로핀(0.05mg/kg)을 근육 주사합니다.</li>
	<li>돼지를 가열된 수술대에 올려 놓고 정상 체온증을 유지하고 마스크 유도를 진행합니다.</li>
	<li>동물의 무게와 마취 시스템에 따른 적정 산소 유량. 알림: 산소 유량은 20-40mL/kg이어야 합니다.</li>
	<li>이소플루란을 4%-5%로 투여하고 3-1분 후에 2%로 줄입니다.</li>
	<li>마취 깊이를 평가하고 돼지가 유해한 자극에 반응하여 금단 반사가 없는지 확인합니다. 5분마다 반복합니다. 알림: 통증 반응이 있는 경우 적절한 마취 깊이에 도달할 때까지 이소플루란 투여의 비율을 높입니다. 케타민과 하이드로모르폰을 사용한 유지 진통제에 대한 자세한 내용은 이 섹션의 10단계를 참조하십시오. 중풍 환자는 투여되지 않습니다. 이를 통해 금단 반사를 평가할 수 있습니다. 코를 꼬집는 것은 유해한 자극으로 사용됩니다.</li>
	<li>정확한 마취 깊이가 확인되면 돼지를 삽관합니다. 40-50kg의 돼지를 위해 맞춤형 10인치 납작한 블레이드 후두경과 크기 9 또는 10 기관내 튜브를 사용하십시오.</li>
	<li>맥박 산소 측정기 프로브를 혀(선호) 또는 귀에 놓고 산소 포화도를 90% 이상으로 목표로 합니다. 알림: 온도는 비강 프로브를 통해 모니터링됩니다. 가열 패드는 정상 체온증을 유지하는 데 사용됩니다.</li>
	<li>마취를 유지하려면 산소 흐름(20-40mL/kg)과 흡입 가스 속도(1%-3%)를 조정합니다.</li>
	<li>인공호흡기 설정을 분당 12-30회 호흡수, TV 6-10mL/kg, PEEP 5cm H 2O, 최고 압력 20cm H2O로 유지하십시오. 알림: 표준 ICU 스타일 양압 인공호흡기는 마취 및 환기를 위한 폐쇄 시스템을 만드는 데 사용됩니다. 바이탈은 15분 간격으로 지속적으로 모니터링되고 기록됩니다. ABG는 동물의 안정성에 따라 15-60분마다 그려집니다. TV는 최대 10mL/kg을 목표로 하지만 6-8mL/kg을 달성합니다. 그림 1 은 실험실에 적용된 이식 프로토콜에 대한 음압 환기(NPV)-ESLP의 개략적인 개요를 제공합니다.</li>
	<li>면도, 세척 및 무균 상태로 포비돈 요오드를 사용하여 절개 부위를 준비합니다. 참고: 케타민/아트로핀으로 진정 후 진통제 요법에는 귀 정맥에 말초에 삽입된 IV 라인을 통해 3mg/kg 케타민 IV q 1시간(환자 매개변수에 따라 범위 1-3mg/kg) 및 하이드로모르폰 0.05mg/kg IM q 2시간을 투여하는 것이 포함됩니다. 투여 사이의 지속 시간이 길어지면 심박수 상승 및 비정상적인 호흡 패턴/복부 근육 움직임과 같은 획기적인 통증 반응이 발생합니다.</li>
</ol>2. 중심정맥 및 동맥선 삽입
<ol><li>수액 및 헤파린 투여를 위해 중심선을 삽입합니다. 참고: 총 IV 수액 투여는 1mL/kg/h로 계산되고 수액 볼루스는 MAP>60mmHg를 유지하기 위해 PRN을 투여합니다. 중심선은 또한 스테로이드, 항생제, 승압제 및 inotropes를 투여하는 데 사용됩니다. 라인 포지셔닝에 대해서는 그림 2A 를 참조하십시오.<ol><li>포비돈 요오드 준비 용액을 사용하여 피부를 준비하고 완전히 말리십시오. 전기 소작을 사용하여 기관 중앙에 5-8cm의 정중선을 절개하고 흉골 노치에서 두개골로 확장합니다.</li>
		<li>소작을 사용하여 피부와 피하 지방을 나눕니다.</li>
		<li>스트랩 근육 사이의 정중선 평면을 나눈 다음 결합 조직층을 나누어 기관 측면의 왼쪽 또는 오른쪽 경동맥 혈관 내 다발을 식별합니다.</li>
		<li>실크 타이(크기 2-0)를 혈관 고리로 사용하여 경정맥의 근위 및 원위 제어를 얻습니다.</li>
		<li>두개골 주변 넥타이를 묶고 근위 넥타이를 위쪽으로 집어넣어 혈류를 조절합니다.</li>
		<li>Metzenbaum 가위( 재료 표 참조)를 사용하여 정맥을 작게 절개하여 2포트, 7Fr 중심선(혈관 둘레의 ~1/3)을 수용합니다.</li>
		<li>동시에 근위부 혈관 루프의 장력을 풀고 정맥을 캐뉼레이션한 다음 묶어 캐뉼라를 10cm 깊이의 정맥에 고정합니다.</li>
		<li>헤파린으로 라인을 씻어내고, 0.9% 생리식염수의 IV 라인에 연결하고, 돼지가 탈수로 인해 혈관 내 고갈된 경우 수액을 투여합니다. 알림: 헤파린은 사용하지 않는 포트를 잠급니다.</li>
		<li>메틸프레드니손 500mg과 세파졸린 IV 1g을 투여합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>정확한 혈압 관리를 위해 7 Fr 동맥선을 사용하여 총경동맥을 캐뉼레이션하는 동일한 기술을 따르십시오.</li>
</ol>3. 좌측 폐 조달
<ol><li>돼지를 오른쪽 측면 욕창 위치에 놓습니다.</li>
	<li>왼쪽 전외측 개흉술을 시행합니다(그림 2).<ol><li>포비돈 요오드 준비 용액을 사용하여 피부를 준비하고 완전히 말리십시오. 다음 랜드마크를 사용하여 개흉술 절개부(20cm)를 표시하십시오: 촉진을 사용하여 왼쪽 견갑골의 끝을 식별합니다. 마찬가지로, 흉골보다 열등한 xiphoid 돌기를 촉진으로 식별하십시오. 그림 2B와 같이 둘을 연결합니다.</li>
		<li>총 10mL의 0.25% 부피바카인을 절개선과 절개 부위 위아래 2개의 늑골 공간에 주사합니다.</li>
		<li>전기 소작을 사용하여 피부, 피하층 및 근육층을 해부합니다. latissimus dorsi는 나뉘어야합니다. 절개 부위 바로 아래의 갈비뼈를 확인하고 갈비뼈 위에 소작하여 늑간 신경혈관 다발을 피하면서 늑간근을 노출시킵니다.</li>
		<li>모기 지혈제를 사용하여 갈비뼈 바로 위의 늑간 근육에 구멍을 뚫은 다음 손가락으로 가슴 안쪽을 만져보세요. 흉곽 절개술을 확장하기 위해 갈비뼈의 상단 가장자리를 따라 소작할 때 Yankauer 흡입 또는 손가락( 재료 표 참조)을 사용하여 폐를 밀어냅니다.<ol><li>흉골에서 1인치 떨어질 때까지 흉곽 절개술을 전방으로 확장합니다. 흉곽 절개술을 척추 주위 근육까지 후방으로 확장합니다.</li>
		</ol></li>
		<li>Cooley 흉골 견인기( 재료 표 참조)를 삽입하여 개흉술을 넓게(10cm) 엽니다(그림 2C). 폐를 수축시켜 왼쪽 반접합 정맥을 노출시킵니다(그림 2D).</li>
		<li>Metzenbaum 가위와 미세한 Lauer를 사용하여 왼쪽 반접합 정맥을 원주종으로 절개합니다. 실크 타이로 용기를 둘러싼 다음 결찰하고 횡단합니다(그림 2E). 추가 제어를 위해 근위 그루터기에 실크 넥타이를 유지하십시오. 알림: Lauer는 직각 클램프 또는 셀리악 클램프입니다.amp 조직 해부에 사용됩니다.</li>
		<li>좌측 폐동맥(PA)과 좌측 폐정맥(PV)을 절개합니다. 제어를 위해 실크 넥타이로 정맥을 둘러쌉니다(그림 2F). 알림: 우수한 PV는 매우 작으며 개별 해부학적 구조에 따라 분기 지점 또는 공통 줄기에서 봉합됩니다. 좌측 기관지는 PA와 LA(좌심방)까지 깊숙이 있기 때문에 동맥과 정맥이 고정되고 절개될 때까지 쉽게 절개할 수 없는 경우가 있습니다(그림 2G).</li>
		<li>PA를 클램핑하기 전에 5000단위의 헤파린 IV를 5분 동안 투여합니다. 알림: 헤파린 5000 단위 IV도 PA를 풀기 5분 전에 투여됩니다. 그 후 매 시간마다 1000 단위의 IV 헤파린이 투여됩니다.</li>
		<li>Clamp PA(DeBakey 크로스 클램프), 왼쪽 하부 폐정맥(Satinsky clamp) 및 왼쪽 기관지(Spoon Potts clamp) 개별적으로( 재료 표 참조). 왼쪽 기관지가 클램핑되면 일회 호흡량을 5mL/kg으로 줄입니다.</li>
		<li>PA, 좌측 하부 폐정맥 및 좌측 기관지를 절제합니다. 최소 0.5cm의 티슈 커프를 꿰매십시오. 좌측 하부 폐인대를 나누고 좌측 폐를 제거합니다. 알림: 왼쪽 폐는 제어 조직학을 위해 폐기하거나 보관할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>4. ESLP의 종료, 좌측 폐의 분할, 전해질액으로 세척
<ol><li>Clamp 최대 영감으로 환기 튜브를 연결하고 관류 및 환기를 종료하고 ESLP 장치에서 폐를 분리합니다.</li>
	<li>부종 형성의 양을 결정하기 위해 폐의 무게를 잰다. 알림: 부종은 과도한 체액의 축적으로 인한 조직 부종입니다.</li>
	<li>액세서리 로브의 조직 생검을 실시하여 3개의 동일한 조각으로 나누고 최적 절단 온도(OCT) 겔, 포르말린 및 액체 질소의 스냅 프리즈에 각각 한 조각을 넣습니다. 참고: 이 단계는 일반적으로 작성자의 랩에서 수행됩니다. 그런 다음 시료는 향후 분석을 위해 보관됩니다: OCT 및 급속 냉동 시료는 -80°C 냉동고에 보관하고, 포르말린이 저장된 시료는 적절하게 밀봉된 용기에 넣어 4°C 냉장고에 보관합니다. 특정 ESLP 프로토콜 및 조직 분석에 대한 자세한 내용은 다른 곳에 게시되어 있다16.</li>
	<li>왼쪽 기증자 폐와 오른쪽 폐를 나눕니다. 기증자 PA 1cm, 기증자 기관지 1cm, 적절한 기증자 LA 커프(원주 ~0.5cm)를 남겨 수혜자 LA에 꿰맬다(그림 2H). 왼쪽 하부 PV와 왼쪽 상위 PV를 기증자 LA 벽과 연속적으로 남겨 두어 나중에 문합을 용이하게 합니다.</li>
	<li>왼쪽 폐의 무게를 잰다.</li>
	<li>IV 라인에 연결된 드롭 빨판을 사용하여 공여체 왼쪽 PA를 캐뉼레이션하고 500mL의 세포 외, 저칼륨, 덱스트란 기반 전해질 보존 용액을 폐 혈관을 통해 전방으로 플러시합니다. 세척하는 동안 실크 넥타이로 PA에 캐뉼라를 고정하고 세척이 완료되면 해제합니다. 참고: 언급된 단계는 이 작업에 사용되는 특정 ESLP 장치와 관련이 있으며 다른 장치에 직접 적용되지 않을 수 있습니다.</li>
</ol>5. 왼쪽 폐 이식
<ol><li>기증자의 폐를 하엽부터 시작하여 수혜자의 가슴에 삽입합니다. 폐를 제자리에 억지로 밀어 넣지 마십시오. 알림: 흉골 견인기를 비틀어 기증자의 폐를 수용하기 위해 하부 흉곽을 위쪽으로 들어 올려야 할 수도 있습니다. 이상적으로는 수혜자가 기증자보다 몇 킬로그램 더 커서 크기 일치를 용이하게 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>먼저 TF 바늘에 4-0 프롤렌을 사용하여 기관지 문합을 수행합니다(그림 2I). 알림: 달리기, 종단 간 문합이 잘 작동합니다. 중복 조직으로 인한 꼬임을 방지하기 위해 재봉하기 전에 두 문합 끝에서 과도한 길이를 다듬습니다.</li>
	<li>달리기, 종단 간 문합을 사용하여 BV-6 바늘에 0-1 prolene으로 LA 문합을 두 번째로 수행합니다. 다시 말하지만, 꼬임을 방지하기 위해 여분의 조직을 다듬습니다. 알림: LA는 부서지기 쉽고 작은 BV-1 바늘의 이점을 누릴 수 있습니다. 기증자의 수평 교합은 적절한 조직을 구입하고 기증자 IPV 및 SPV를 수혜자 IPV/LA 개구부에 꿰매어 발생하는 크기 불일치를 수정해야 할 수 있습니다.</li>
	<li>기증자 SPV를 하부 PV 및 LA 문합에 통합하여 왼쪽 상부 폐엽 정맥 배액을 허용합니다(그림 2J). 알림: 분지 상폐정맥(SPV)은 직경이 0.5cm 미만입니다. 일반적인 SPV 줄기는 길이가 다양하고 일상적으로 존재하지 않기 때문에 기증자와 수혜자 SPV 사이의 직접적인 문합은 좋지 않은 선택입니다.</li>
	<li>달리는 종단 간 문합을 사용하여 BV-6 바늘에 0-1 프롤렌으로 PA 문합을 완료합니다. 다시 말하지만, 꼬임을 방지하기 위해 여분의 조직을 다듬습니다.</li>
	<li>기관지 클램프를 제거하고 TV를 10mL/kg을 목표로 늘립니다.</li>
	<li>헤파린화를 확인하고, 칼륨 이동(푸로세미드 40mg, 인슐린 10단위, 25% 포도당 용액 100mL)을 투여하고, PA 클램프를 부분적으로 열고, 공기를 제거하고, PA 봉합사를 묶습니다. PA cl을 완전히 해제amp 10분 후.</li>
	<li>한편, LA의 공기를 제거하고 봉합사를 묶고 LA 클램프를 제거합니다.</li>
	<li>중심선에서 재관류 혈액 가스를 채취하고 왼쪽 중간 엽에서 재관류 조직 생검을 실시합니다. 참고: 조직 생검을 하려면 크기 0-실크 넥타이를 사용하여 중간 엽 정점의 1cm 부분을 둘러싸고 조직을 묶은 다음 Metzenbaum 가위로 분리된 부분을 자릅니다. 생검을 3등분하여 앞서 설명한 대로 관리한다.</li>
	<li>좌우 폐 기관지 내시경을 시행하여 기관지 문합을 평가하고 분비물을 흡입합니다. 어댑터 연결을 사용하여 기관지 내시경을 기관내 튜브에 삽입합니다.<ol><li>스코프를 흡입구에 연결합니다. 기관지 내시경을 왼쪽 기관지로 전진시킵니다. 기관지 문합을 검사합니다(그림 2N). 스코프를 세기관지 아래로 전진시키고 액체를 흡입합니다. 오른쪽에서 반복합니다. 알림: 산소 포화도가 90% 이하로 떨어지지 않도록 하십시오. 포화도가 이 수준 아래로 떨어지면 내시경을 제거하고 돼지가 회복할 수 있도록 몇 분 동안 중단 없이 환기를 시키십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>20Fr 가단성 흉관을 삽입하고(그림 2L), 개흉술을 3층으로 봉합하고(그림 2M), 동맥혈 가스(ABG)가 안정되는 즉시 돼지를 엎드립니다(그림 2O).</li>
	<li>엎드린 자세에서 4시간 이상 돼지를 모니터링합니다. 30분마다 ABG 분석을 수행합니다. 재관류 후 매시간 1000단위의 헤파린을 투여합니다.<ol><li>염증 마커의 원심분리 및 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA) 분석을 위해 매시간 10mL 혈액 샘플을 채취합니다16. 참고: 원심분리 매개변수는 나중에 자세히 설명합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>6. 고립된 좌측 폐 평가
<ol><li>돼지를 앙와위 위에 놓고 포비돈 요오드 준비 용액을 사용하여 흉골을 다시 준비합니다. 최종 분리된 좌측 폐 평가를 위해 정중선 흉골 절개술을 수행합니다(그림 2P).</li>
	<li>Metzenbaum 가위를 사용하여 왼쪽 흉막을 열고 앞에서 설명한 대로 왼쪽 하엽에서 조직 생검을 수행합니다(5.9단계 참고).</li>
	<li>액세서리 엽 흉막을 열고 Metzenbaum 가위를 사용하여 총맥을 절개합니다. 참고: 이것은 나중에 고정됩니다.</li>
	<li>21G 바늘을 사용하여 LA 문합에서 혈액 샘플을 채취합니다. 바늘을 왼쪽 폐 정맥 쪽으로 향하게 하고 총좌심방 또는 액세서리 엽 몸통에서 멀리 떨어뜨립니다.</li>
	<li>오른쪽 흉막을 열어 오른쪽 힐라 클램프를 위한 공간을 만듭니다( 재료 표 참조). 우측 하부 폐 인대를 하골까지 절개합니다. 클램프가 힐럼 주위에 상부, 하부 및 전방으로 배치될 수 있는지 확인하십시오. 참고: 이렇게 하면 폐가 폐색되고 모든 산소 공급이 왼쪽 폐에 의존하게 됩니다. 이 때 오른쪽 폐는 인공호흡을 하지 않으며, 이는 인공호흡기 호흡을 통한 팽창/수축이 없는 것으로 분명해야 합니다. 이를 위해 오른쪽 하엽을 가슴 밖으로 들어 올릴 수 있습니다.</li>
	<li>Clamp DeBakey 대동맥 교차 클램프( 재료 표 참조)를 사용하여 액세서리 로브 정맥을 사용하여 LA로 들어오는 액세서리 로브 배출을 차단합니다(그림 2Q).</li>
	<li>오른쪽 힐륨을 고정하고 왼쪽 폐를 향하게 한 21G 바늘로 왼쪽 PV 문합에서 다음 연속 혈액 샘플을 채취합니다.amp클램핑 후 0분, 1분, 2분, 5분 및 10분. 참고: 산소 분압(PaO2)의 추세를 모니터링하기 위해 5개의 샘플을 채취합니다(그림 2R). PaO2 는 적절한 좌측 폐 기능을 나타내기 위해 비교적 안정적으로 유지되어야 합니다. 또한 5개의 샘플은 샘플의 응고에 문제가 있거나 ABG 분석에 문제가 발생하는 경우 품질 평가에 대한 보험을 제공합니다.</li>
	<li>문합부를 절제하고 왼쪽 폐를 제거합니다. IVC를 Transect하여 마취 상태에서 안락사를 촉진합니다. 참고: 수용 돼지의 총 마취 시간은 8시간입니다.</li>
	<li>기증자의 폐의 무게를 측정하여 부종 형성을 평가하고 전체적인 외관을 검사합니다. PA, 기관지 및 LA 커프에서 기증자 폐와 수혜자 종격동 내의 혈전 또는 기타 병리학적 징후가 있는지 검사합니다.</li>
	<li>최종 가스 분석을 실행하고, 관류수 샘플을 원심분리하고, 앞에서 설명한 대로 조직 생검을 저장합니다(4.3단계 참고). 알림: 원심분리 설정은 112 x g, 9 가속, 9 감속, 4 °C 및 15분 지속 시간입니다.</li>
</ol>

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<li>Clark, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+porcine+model+of+reperfusion+injury+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A new porcine model of reperfusion injury after lung transplantation.</a> Laboratory Animals. 33, 135-142 (1999).</li>
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<li>Aboelnazar, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+pressure+ventilation+decreases+inflammation+and+lung+edema+during+normothermic+ex+vivo+lung+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+The+Official+Publication+of+the+International+Society+for+Heart+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Negative pressure ventilation decreases inflammation and lung edema during normothermic ex vivo lung perfusion.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation: The Official Publication of the International Society for Heart Transplantation. 37 (4), 520-530 (2018).</li>
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DHF는 Ex situ 장기 관류 기술 및 방법에 대한 특허를 보유하고 있습니다. DHF와 JN은 Tevosol, Inc.의 설립자이자 대주주입니다.

이 프로토콜에는 몇 가지 중요한 수술 단계가 포함되며 성공적인 이식 및 폐 평가를 위해서는 문제 해결이 필요합니다. 어린 돼지 폐는 성인 인간의 폐에 비해 매우 연약하기 때문에 수술 의사는 돼지 폐를 다룰 때 주의해야 합니다. ESLP를 12시간 동안 실행하면 장기가 체액의 양을 흡수하고 과도한 조작으로 인한 부상에 취약하기 때문에 특히 그렇습니다. 과도한 압력은 실험용 폐에 무기폐 또는 외상을 일으켜 평가 결과에 영향을 미칩니다. 마찬가지로, 어린 돼지의 혈관 구조는 매우 섬세합니다. PA 클램프의 비틀림은 조직층이 찢어지거나 해부될 수 있으므로 피하는 것이 중요합니다. PA가 찢어지면 이식 폐에 문합할 수 있는 왼쪽 PA의 더 근위 부분에 접근하기 위해 심낭을 열어야 합니다. DeBakey 혈관 클램프는 수술 분야에 잘 맞는 로우 프로파일을 가지고 있지만 이 기구는 외과의가 주의하지 않으면 섬세한 PA에 부상을 입힐 수 있습니다. cl을 고정하는 것이 도움이 됩니다.amp 탈락이나 비틀림을 방지하기 위해 드레이프에 끼워진 실...

폐 이식은 말기 폐 질환의 탁월한 장기 치료법입니다. 전 세계적으로 매년 4,600건 이상의 폐 이식 수술이 시행되고있습니다 1. 그러나 현재 폐 이식은 상당한 한계가 있습니다. 우선, 장기의 필요성이 기증 가능한 사람을 계속 능가하고 있습니다. 2012년 이후 폐 이식 대상자 증가, 기증자 수 증가, 회수된 장기의 사용 개선 등의 복합적인 효과로 인해 폐 이식 비율이 매년 증가하고 있음에도 불구하고 이식 대기자 사망률은 크게 감소하지 않았다2. 장기 품질 문제는 또 다른 주요 한계로, 보고된 장기 이용률이 20%-30%에 불과합니다3,4,5. 마지막으로, 폐 이식의 수술 후 결과의 경향은 만족스럽지 못하며, 장기 이식 및 환자 결과는 여전히 다른 고형 장기 이식에 비해 뒤처져 있다2.
새로운 기술인 상피내 폐 관류(ESLP)는 이러한 한계를 완화할 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다. ESLP는 한계 기증자 폐를 평가하고 재조정하는 방법으로 점점 더 많이 적용되고 있으며, ECD(extended criteria donor) 폐 이식 후 수용 가능한 단기 및 장기 결과를 보여주었습니다 6,7,8,9,10. 결과적으로 ESLP는 일부 센터의 이용률을 15%-20%6,7,8,9,10,11 증가시켰습니다.
적절한 ESLP 연구는 in vitro 결과의 in vivo 검증을 필요로 합니다. 그러나 ESLP12,13,14,15에 대한 돼지 폐 이식 모델에 대한 문헌은 제한적이다. 또한, 이용 가능한 문헌은 혈류역학적으로 매우 불안정할 수 있는 폐 이식을 위한 요크셔 돼지의 마취 관리에 대한 세부 정보가 불충분하다12,13,14,15. 쉽게 재현 가능한 모델을 구축하면 현재 ESLP 전략의 생체 내 검증과 폐 허혈 재관류 손상을 줄이기 위한 다양한 중재의 전임상 평가가 가능합니다. 본 연구의 목적은 ESLP와 함께 사용하기 위한 기형외과 좌측 폐 동종 이식의 돼지 모델을 설명하는 것입니다. 프로토콜에는 마취 및 수술 기술에 대한 설명, 맞춤형 수술 체크리스트, 문제 해결 경험 및 프로토콜 수정에 대한 세부 정보가 포함됩니다. 좌측 폐 돼지 이식 모델의 한계와 이점도 이 연구에서 논의되었습니다. 이 원고는 35-50kg의 요크셔 돼지에서 돼지 폐를 채취하는 과정을 설명하지 않으며, ESLP의 설립과 종료에 대해서도 다루지 않습니다. 이 프로토콜은 수혜자 이식 수술만을 다룹니다.

<table><tbody><tr><td>ABL 800 플렉스 혈액 가스 분석기</td><td>복사계</td><td>989-963</td><td></td></tr><tr><td>성인-소아 정전기 필터 HME - 작은</td><td>Covidien</td><td>352/5877</td><td></td></tr><tr><td>앨리슨 폐 견인</td>기 <td>필링</td><td>341679</td><td></td></tr><tr><td>동맥 필터</td><td>SORIN GROUP</td><td>01706/03</td><td></td></tr><tr><td>백하우스 타월 클램프</td><td>필링</td><td>454300</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>MP 바이오메디컬</td><td>218057791</td><td></td></tr><tr><td>바이오메디쿠스 펌프</td><td>마케트</td><td>BPX-80</td><td></td></tr><tr><td>브론초스코프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>케이블 타이 &ndash; 화이트 12인치</td><td>HUASU International</td><td>HS4830001</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>C69-500G</td><td></td></tr><tr><td>쿨리 흉골 견인</td>기 <td>필링</td><td>341162</td><td></td></tr><tr><td>CUSHING Gutschdressing 집게 필</td><td>링</td><td>466200</td><td></td></tr><tr><td>Debakey-Metzenbaum 해부</td><td>필링</td><td>342202</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>필링</td><td>342202</td><td></td></tr><tr><td>DeBakey 말초 혈관 클램프</td><td>필링</td><td>353535</td><td></td></tr><tr><td>Debakey 직선 혈관 조직 집게</td><td>필링</td><td>351808</td><td></td></tr><tr><td>D-포도</td>당 <td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767-500G</td><td></td></tr><tr><td>드롭 빨판</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>기관내 튜브 9.0mm CUFD</td><td>Mallinckrodt</td><td>9590E</td><td></td></tr><tr><td>흐름 변환기</td><td>BIO-PROBE</td><td>TX 40</td><td></td></tr><tr><td>주입 펌프</td><td>Baxter</td><td>AS50</td><td></td></tr><tr><td>Inspire 7 M 중공사막 산소발생기</td><td>SORIN GROUP</td><td>K190690</td><td></td></tr><tr><td>인터셉트 튜빙 커넥터 3/8" x 1/2"</td><td>Medtronic</td><td>6013</td><td></td></tr><tr><td>인터셉트 튜빙 1/4" x 1/16" x 8'Medtronic</td><td></td> <td>3108</td><td></td></tr><tr><td>인터셉트 튜빙 3/8" x 3/32" x 6'Medtronic</td><td></td> <td>3506</td><td></td></tr><tr><td>후두경</td><td>N/A</td><td></td><td>10인치 블레이드가 있는 맞춤형</td></tr><tr><td>Metzenbaum 해부 가위</td><td>필링</td><td>460420</td><td></td></tr><tr><td>의료용 이산화탄소 탱크</td><td>Praxair</td><td>5823115</td><td></td></tr><tr><td>의료용 산소 탱크</td><td>Praxair</td><td>2014408</td><td></td></tr><tr><td>의료용 질소 탱크</td><td>Praxair</td><td>NI MK</td><td></td></tr><tr><td>모기 클램프</td><td>필링</td><td>181816</td><td></td></tr><tr><td>Harken Auricle 클램프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>장기 챔버</td><td>테보솔</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라즈마라이트 A</td><td>Baxter</td><td>TB2544</td><td></td></tr><tr><td>풀 흡입 튜브</td><td>필링</td><td>162212</td><td></td></tr><tr><td>인산 칼</td>륨 <td>Fischer Scientific</td><td>P285-500G</td><td></td></tr><tr><td>PERFADEX Plus</td><td>XVIVO</td><td>19811</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky 클램프</td><td>필링</td><td>354002</td><td></td></tr><tr><td>스케일</td><td>TANITA</td><td>KD4063611</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 지지 멤브레인</td><td>테보솔</td><td></td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>792519-1KG</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 0.9%</td><td>Baxter</td><td>JB1324</td><td></td></tr><tr><td>Sorin XTRA Cell Saver</td><td>SORIN GROUP</td><td>75221</td><td></td></tr><tr><td>흉골 톱</td><td>Stryker</td><td>6207</td><td></td></tr><tr><td>외과용 전기 소작 장치</td><td>Kls Martin</td><td>ME411</td><td></td></tr><tr><td>TruWave 압력 변환기</td><td>Edwards</td><td>VSYPX272</td><td></td></tr><tr><td>2루멘 중앙 정맥 카테터 7fr x2</td><td>Arrowg+ard</td><td>CS-12702-E</td><td></td></tr><tr><td>Vorse 튜빙 클램프</td><td>필링</td><td>351377</td><td></td></tr><tr><td>Willauer-Deaver 견인기</td><td>필링</td><td>341720</td><td></td></tr><tr><td>Yankauer 흡입 튜브</td><td>필링</td><td>162300</td><td></td></tr><tr><td>0 ETHIBOND 그린 1X36" 엔도 루프 0</td><td>ETHICON</td><td>D8573</td><td></td></tr><tr><td>0 PDS II CP-1 2x27"</td><td>에티콘</td><td>Z467H</td><td></td></tr><tr><td>1 VICRYL MO-4 1x18"</td><td>ETHICON</td><td>J702D</td><td></td></tr><tr><td>2-0 실크 블랙 12" x 18" 스트랜드</td><td>ETHICON</td><td>SA77G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 PROLENE 블루 TF 1x24"</td><td>ETHICON</td><td>8204H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 PROLENE 블루 BV 2x30"</td><td>ETHICON</td><td>M8776</td><td></td></tr><tr><td>21 게이지 바늘</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

eslp를 위한 어린 돼지 모델에서의 좌측 폐 정형외과적 이식

Left Lung Orthotopic Transplantation in a Juvenile Porcine Model for ESLP

폐 이식은 말기 폐 질환의 황금 표준 치료법으로, 전 세계적으로 매년 4,600건 이상의 폐 이식이 시행되고 있습니다. 그러나 폐 이식은 기증 장기의 부족으로 인해 제한되어 있습니다. 따라서 대기자 명단 사망률이 높습니다. 상피내 폐 관류(ESLP)는 일부 센터에서 기증자의 폐 사용률을 15%-20% 증가시켰습니다. ESLP는 한계 기증자 폐를 평가하고 재조정하는 방법으로 적용되었으며 확장 기준 기증자(ECD) 폐 이식 후 수용 가능한 단기 및 장기 결과를 입증했습니다. 진행 중인 in vitro 연구 결과를 검증하기 위해 대동물( in vivo ) 이식 모델이 필요합니다. 인간과 돼지 사이의 해부학적 및 생리학적 차이는 상당한 기술적, 마취적 문제를 야기합니다. 쉽게 재현 가능한 이식 모델은 현재 ESLP 전략의 생체 내 검증과 기증자의 폐 기능을 개선하기 위해 고안된 다양한 중재의 전임상 평가를 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 orthotopic left lung allotransplantation의 돼지 모델을 설명합니다. 여기에는 마취 및 수술 기술, 맞춤형 수술 체크리스트, 문제 해결, 수정, 접근 방식의 이점과 한계가 포함됩니다.

모든 결과는NPV-ESLP 16의 12시간 이후 4시간의 재관류의 맥락에서 이루어집니다. 폐 이식 중에는 몇 가지 임상 결과를 예상할 수 있습니다(그림 3). 일반적으로 돼지는 성공적인 좌측 폐 이식 후 혈역학적으로 안정된 상태를 유지하지만 수술에 대한 혈관 확장 반응으로 인해 저용량 페닐에프린 주입(용량 범위: 2-10mg/h)이 필요할 수 있습니다. 심박수는 약 100-120bpm, SpO2 &gt; 90%의 경우 호흡수(RR) 8-30, 평균 동맥압(MAP) &gt; 60mmHg, 정상체온(38°C), 일회 호흡량(TV)은 최대 압력이 20-24cm H2O인 단일 폐 환기 시 5mL/kg을 목표로 합니다. 한쪽 폐 인공호흡 중에는 과도한 팽창으로부터 왼쪽 폐를 보호하기 위해 인공호흡량을 절반으로 줄였습니다. 생리학적 호기말 이산화탄소 수준을 목표로 호흡수를 증가시켰습니다(<strong cl...

이 프로토콜은 ESLP 연구와 함께 사용하도록 설계된 기형외과 좌측 폐 동종 이식의 어린 돼지 모델을 설명합니다. 마취 및 수술 기술뿐만 아니라 중요한 단계 및 문제 해결에 중점을 둡니다.

ESLP를 위한 어린 돼지 모델에서의 좌측 폐 정형외과적 이식

Lung transplantation is the gold-standard treatment for end-stage lung disease, with over 4,600 lung transplantations performed worldwide annually. ...

이 프로토콜은 대형 동물 모델을 위한 가장 간단한 폐 이식 프로토콜 중 하나이며 수술 관리 측면에서 가장 자세한 정보를 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 수술 설명, 이식 후 고립된 좌측 폐 기능 평가, 수술 중 돼지 안정화입니다. 이 방법은 in vivo 재관류 이식 모델로 ex-situ 결과를 검증하기 위한 ex-situ 폐 fusion 연구에 유용합니다.폐 이식의 생체 내 재관류 모델은 제자리 폐 증식 소견을 테스트하는 데 유용하며 생체 공학 또는 기계 폐와 같은 인공 장기 테스트에도 사용할 수 있습니다. 왼쪽 전방 외측 개흉술을 위해 돼지를 오른쪽 외측 욕창 위치에 배치하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 흉골보다 아래쪽에 있는 시푸이드 돌기에서 왼쪽 견갑골 끝을 촉진으로 확인하고 확인된 두 지점을 연결하여 20cm 길이의 개흉 절개 부위를 표시합니다.마취를 유도한 후 메스를 사용하여 피부를 절개한 후 전기 소작을 사용하여 동물의 피하층과 근육층을 절개합니다. latissimus dorsi는 나뉘어야합니다. 절개 부위 바로 아래의 갈비뼈를 확인한 후 갈비뼈 위에 소작하여 늑간 신경혈관 다발을 피하면서 늑간 근육을 노출시킵니다.모기 지혈제를 사용하여 갈비뼈 바로 위의 늑간 근육에 구멍을 뚫은 다음 손가락으로 가슴 안쪽을 만져보세요. 갈비뼈의 상단 가장자리를 소작하는 동안 Yankauer 흡입을 사용하여 흉곽 절개술을 흉골에서 1인치 떨어진 전방과 척추 주위 근육까지 후방으로 확장하기 위해 폐를 밀어냅니다. Cooley 흉골 견인기를 삽입하여 10cm 너비의 개흉술을 열어 폐를 수축시키고 왼쪽 반접합 정맥을 노출시킵니다.Metzenbaum 가위와 미세한 아래쪽을 사용하여 왼쪽 반접합 정맥을 원주방향으로 절개합니다. 실크 넥타이로 혈관을 둘러싸고 정맥을 합착하고 횡단합니다. 실크 타이의 정맥을 둘러싸기 전에 좌측 폐동맥(PA)과 좌측 폐정맥(PV)을 절개합니다.헤파린 투여 5분 후 PA를 DeBakey 크로스 클램프로, 왼쪽 전방 PV를 Satinsky 클램프로, 왼쪽 기관지를 Spoon Pots 클램프로 고정합니다. PA, 왼쪽 하부 PV 및 왼쪽 기관지를 통과시켜 최소 0.5cm의 조직 커프를 남깁니다. 좌측 하폐인대를 분할한 후 좌측 폐를 절제합니다.이식의 경우, 기증자의 폐를 수혜자의 흉부에 삽입하되, 폐를 제자리에 억지로 넣지 않고 하엽부터 삽입합니다. 그런 다음 TF 바늘에 4.0 Prolene 봉

left-lung-orthotopic-transplantation-juvenile-porcine-model-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Obliterative bronchiolitis는 폐 이식받는 사람의 장기 생존의 열쇠 장애와 강력한 잠복기 모델의 부족이다 obliterative bronchiolitis의 immunopathogenesis를 검토 걸로. 다른 고형 장기 이식과는 달리, vascularized 마우스 폐 이식이있다는 최근에 개발되었습니다. 여기 murine orthotopic 단일 폐 이식 후 당사 독자 개발한 obliterative bronchiolitis 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 폐 이식의 Murine 모델에 Obliterative Bronchiolitis의 개발

실험 동물 연구는 임상 이식 실습의 발전에 중추적인 역할을 합니다. 돼지 정소성 간 이식 모델(OLTx)은 인간의 상태와 매우 유사하며 임상 지향적인 연구에 자주 사용됩니다. 다음 프로토콜에는 활성 porto-caval-jugular 션트를 사용하는 신뢰할 수 있는 돼지 OLTx 모델에 대한 모든 정보가 포함되어 있습니다.

활성 포르토 대정맥 션트를 사용하여 돼지 간 조달 및 동소 이식 이식의 기술

생체 외 관류 폐 (EVLP)은 인간의 폐 이식 더욱 쉽게 이용할 공여체 풀 장기를 평가하고 확장 할 수 있도록함으로써 될 수있다. 여기서는 쥐 EVLP 프로그램 및 미래의 확장을위한 재현성있는 모델을 허용 세목의 개발을 기술한다.

고립의 방법<em&gt; 전의 VIVO</em쥐 모델에서&gt; 폐 관류 : 쥐 EVLP 프로그램 개발에서 교훈을

여기에서, 우리는 새로운 심장 보호 전략을 조사하기 위하여 확고하게 확립되고 이용된 정형포피성 심혼 이식의 전임상 대형 동물 (돼지) 모형을 기술합니다.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

이 논문은 맞춤형 플랫폼에서 조달, 부착 및 관리를 포함하여 음압 환기 현장 폐 관류의 돼지 모델을 설명합니다. 마취 및 수술 기술과 문제 해결에 중점을 둡니다.

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: 폐 기능 및 대사 평가

이 프로토콜에서는 생착 중 정맥 - 정맥 바이 패스를 사용하지 않고 20 시간 동안 기증자 장기를 정적 냉장 보관 한 후 돼지 동종 간 이식 모델을 설명합니다. 이 접근법은 무간기를 최소화하고 정교한 부피 및 혈압 강하제 관리와 함께 단순화 된 수술 기술을 사용합니다.

확장 기준 기증자 모델로서의 정맥 우회술이 없는 돼지 간 이식

여기에서는 쥐 EVLP 모델을 확립하는 데 필요한 단계를 설명하고 관류된 폐와 관련된 염증 프로파일을 보여줍니다. 목표는 쥐 EVLP 모델에 대한 지식과 경험을 전파하여 이 혁신적인 기술과 관련된 생물학적 반응을 통합적으로 이해할 수 있도록 하는 것입니다.

폐 이식의 중개 통찰력을 위한 Ex vivo Lung Perfusion Rat Model 구축

이 프로토콜은 쥐의 정소성 좌측 폐 이식을 위한 개선된 기술을 설명하며, 수술의 어려움을 줄이고 생존율을 개선하는 데 중점을 둡니다.

쥐의 정소성 좌측 폐 이식

이 연구는 바이아트리방 기술을 활용하여 Bama 미니어처 돼지에서 전임상 정소성 심장 이식 모델을 제안합니다. 이 모델은 이식 면역학, 약물 평가 및 수술 기술 최적화에 적용할 수 있으며 임상 심장 이식 응용 분야를 지원합니다.

Biatrial 기술을 사용한 Bama 미니어처 돼지의 정형외과성 심장 이식의 전임상 모델

이 글에서는 새끼 돼지에게 좌심실 보조장치(LVAD)를 이식하는 프로토콜을 제시합니다. 이 모델은 어린이의 LVAD 이식을 연구하고 LVAD 치료에서 심실 역방향 재형성의 기전을 밝히는 강력한 방법을 제시합니다.

어린 랜드레이스 돼지에 좌심실 보조 장치(LVAD) 이식: 소아 심부전의 LVAD 이식 모델

학습하세요 어린 돼지 모델에서 좌측 폐 정형외과적 이식 기법을 통해 폐 기능 평가 및 수술 관리 방법을. 이 프로토콜은 ESLP 연구 및 인공 장기 테스트에 활용됩니다.

ESLP를 위한 어린 돼지 모델에서의 좌측 폐 정형외과적 이식

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