Name: 검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: 학습하세요 검은 후추 식물에 Phytophthora capsici를 효과적으로 접종하는 방법을. 기부 머리부분에 핀프릭 기법을 적용하여 전통적인 토양 침적법이나 뿌리 담금법보다 안정적인 결과를 얻습니다. 이 방법은 목본 덩굴 식물의 병원체 상호작용 연구에 활용됩니다.

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이 작업은 중국의 국가 핵심 R & D 프로그램 (2020YFD1001200), 중국 농업 연구 시스템 (CARS-11), 하이난 성 학자를위한 혁신 플랫폼 (YSPTZX202154), 중국 하이난 성 자연 과학 재단 (321RC652) 및 중국 자연 과학 재단 (제 31601626 호)의 재정 지원을 받았다.

1. 감염에 대한 후추 절단 식물의 준비
<ol><li>소독 된 가지치기 칼 또는 secateurs를 사용하여 건강하고 활발하게 자라는 검은 후추의 직교 성 가지에서 직경 0.5cm의 약 40cm 길이의 5 노드 절단을 가져 가십시오. 플라지오트로픽 브랜치의 아래쪽 세 노드를 자릅니다, 위쪽 두 노드는 약 10개의 잎을 그대로 남겨 둡니다.</li>
	<li>토양과 동물 분뇨 (소 배설물 또는 양 배설물)가 들어있는 뿌리 기질을 1:1의 비율로 준비하십시오. 응원 기판을 121°C에서 20분 동안 오토클레이브한다.</li>
	<li>절단을 약 50°의 각도로 응원 기판에 삽입하고, 세 번째 노드는 기판 표면과 기판 위의 이 노드의 겨드랑이 새싹을 터치합니다. 참고 : 여기에 사용 된 가방의 크기는 높이 40-60cm, 직경 25-30cm입니다.</li>
	<li>식물의 뿌리 위에 10-20 L의 물을 붓는다. 뿌리와 성장을 위해 25-30 ° C의 온도에서 90 % 그늘이있는 온실에 절단을 놓습니다.</li>
</ol>2. Phytophthora capsici (P. capsici)의 전파
참고 : Phytophthora capsici 문화의 재고는 향신료 및 음료 연구소, 중국 열대 농업 과학 아카데미7의 식물 보호 실험실에서 유지됩니다.
<ol><li>흐르는 수돗물로 감자 괴경을 닦고 닦은 다음 감자 200g을 1cm3의 큐브로 자릅니다. 큐브 중 일부를 이중 증류수 (ddH2O) 800 mL가 들어있는 비이커에 넣고20분 동안 끓입니다.</li>
	<li>중력 여과를 사용하여 이중 거즈를 통해 국물을 여과하십시오. 상기 여액에 덱스트로스 20 g 및 한천 15 g을 첨가하고, 혼합물을 ddH2O.로 부피 1 L까지 토핑하여 감자 덱스트로스 한천 (PDA)을 준비하고, 혼합물을 121°C에서 20분 동안 오토클레이브8.</li>
	<li>액체 형태의 멸균된 PDA 20 mL를 층상 공기 흐름 후드 내부의 직경 9 cm 둥근 페트리 접시에 붓는다. 결로를 방지하기 위한 수단으로 하룻밤 사이에 층류 후드 내부에 뚜껑이 열려 있는 PDA 플레이트를 그대로 두십시오.</li>
	<li>접종 루프를 사용하여 시험관 내부의 Phytophthora capsici 스톡에서 균사체를 채취하십시오. PDA와 접촉하는 균사체 측과 함께 접종물을 페트리 접시에 놓습니다.</li>
</ol>3. 후추의 감염
<ol><li>잠복<ol>
<li>접종을 위해 기질 표면에서 5cm 위, 줄기의 뿌리 근처에있는 영역을 확인하십시오.</li>
		<li>마개 보어를 사용하여 페트리 접시에서 PDA 상의 피토프토호라 캡시치 배양물의 성장 가장자리에서 직경 0.5 cm의 균사체의 디스크를 코어 아웃한다.</li>
		<li>주사기 바늘을 사용하여 줄기를 손상시키고 선택한 접종 영역에서 삼각형 패턴으로 세 개의 구멍을 만듭니다. 균사 디스크로 각 구멍을 덮으십시오. 상처 입은 부위가 균사 디스크로 완전히 덮여 있는지 확인하기 위해 구멍을 서로 가깝게 배치하십시오.</li>
		<li>균사 디스크를 건조를 방지하기위한 수단으로 멸균 된 축축한 면봉으로 덮으십시오. 패드를 폴리에틸렌 스트립으로 줄기에 묶어 접종 디스크의 위치를 유지하십시오. 참고 : 접종 후 8 시간에, 접종 된 구멍은 검은 색으로 변하고 시간이 지남에 따라 병변이 연장되었습니다. 잎은 노랗게 변하고 떨어졌으며 접종 된 식물은 접종 후 7-10 일 후에 사망했습니다. 대조 식물에서 병변이 발생하지 않았습니다. 대부분의 유전자는 대조군과 비교하여 Phytophthora capsici 로 접종 한 후 다르게 발현되었습니다. 감염된 조직의 조직병리학적 분석은 피토프토라 고추 시 치가 자일렘에서 콜로니화되었음을 입증하였다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>관심있는 식물 재료를 샘플링하고 후속 연구에 사용하기 위해 액체 질소 중 -80°C에서 보관하십시오. 참고: 액체 질소, 비닐 봉지, 마커 펜, 가지 가위 및 기타 재료는 실험 전에 준비되었습니다.</li>
	<li>특정 식물 재료가 사용을 위해 샘플링 된 후, 나머지 모든 식물 재료, 남은 Phytophthora capsici 배양 및 배양 배지 및이 접종 작업에 사용 된 모든 도구 및 실험실을 오토클레이브합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
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<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

이 연구에서, 기저 머리는 손상에 핀찔링하고 검은 후추 식물에 효과적인 접종 시스템을 제공했다. 균사 펠릿은 수분을 유지하고 병원균이 식물을 잘 감염시킬 수 있도록 세 개의 구멍을 덮었습니다. 접종 후, 잎은 노랗게 변하고 떨어졌고 접종 된 식물은 죽었습니다. 대조 식물에서 병변이 발생하지 않았습니다. 대부분의 유전자는 대조군과 비교하여 Phytophthora capsici 로 접종 한 후 다르게 발현되었습니다. 곰팡이 질병은 상당수의 작물에서 구조적 및 생리적 장애를 유발하여 생산자의 생산성 저하와 경제적 손실을 초래합니다. 곰팡이에 의한 식물 조직의 침투 및 식민지화 방식에 대한 조직학적 기술을 이용한 구조 연구는 병원균과 식물 조직 간의 상호작용에 대한 상세한 지표를 제공한다. 이 연구는 질병의 단주기를 이해하는 데 도움이되는 중요한 측면을 밝혀 냈습니다. 감염된 조직의 조직병리학적 분석은 자일렘에서 콜로니화된 피토프토호라 캡시치를 입증하였다. 이 방법은 토양 침지 또는 뿌리 침지를 포함한 ...

검은 후추 (Piper nigrum L.)는 우디 등반가이자 가장 중요한 향신료 작물 중 하나입니다. 그것은 "향신료의 왕"1으로 알려져 있으며 아시아, 아프리카 및 라틴 아메리카 전역의 40 개 이상의 국가와 지역에서 재배됩니다. Phytophthora 뿌리 썩음은 검은 후추의 가장 파괴적인 질병이며, oomycete Phytophthora capsici에 의해 발생합니다. 이 병원균은 또한 큐커빗, 가지, 칠리 고추 및 토마토 2,3을 감염시킵니다. 검은 후추를 사용하면 전체 작물이 때때로이 질병에 의해 파괴 될 수 있습니다. 후추 재배 지역의 확장은 내성 품종의 이용 불가능으로 인해 제한되며, 이는 중국 후추 산업의 발전을 크게 방해했습니다. 검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종과 정확한 샘플링 시스템은이 식물 - 병원균 상호 작용을 연구하는 데 필수적입니다.
생식 형질 자원에서 내성의 확인 및 스크리닝은 병원균의 병원성과 내성 품종의 번식 및 활용을 연구하기위한 기본 요구 사항입니다. 널리 사용되는 접근법은 식물 종 및 병원균 그룹에 기초한 다양한 식별 방법을 사용하는 것이다. 현재의 식별 방법에는 집단 식별, 개인 식별, 장기 식별, 조직 식별, 세포 식별, 생화학 적 식별 및 분자 식별이 포함되며 최근 몇 년 동안 개발 된 4,5. 이 분야에서 성공했지만 많은 문제가 있습니다. 어떤 방법을 선택하든 명확한 목표, 신뢰할 수있는 결과 및 간단하고 신속하며 표준화하기 쉬운 방법을 포함하여 식물 저항 식별의 기본 요구 사항은 일관됩니다. 이 원칙은 또한 후추 저항의 식별에 따라야합니다.
자연 현장 조건에서 질병 저항성의 확인은 많은 환경 요인에 의해 영향을받을 수 있습니다. 따라서 분리 된 잎과 관개 된 뿌리를 실험실에서 사용하여 질병 저항성을 확인하는 것이 제안되었습니다. 건강한 식물로부터의 어린 잎을 실험실 에서 시험관 내에서 접종하고, 병든 잎 면적을 식물6의 질병 저항성을 확인하기 위해 병원균을 접종하여 측정하였다. 그러나, 시험관내 잎 접종은 분자 상호작용 연구를 위한 것이 아니라 일반적인 내성 확인을 위해서만 사용될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 질병 내성 상태는 관개 된 뿌리 접종에 종종 나타나며, 질병 저항성에 대한 분자 육종에 대한 후속 연구에서 불확실성을 야기합니다. 따라서 빠르고 간단한 실내 감지 방법이 필수적입니다. 이 연구는 실험실에서 저항 식별 방법을 제공하는 것을 목표로합니다.

<table><tbody><tr><td>한천 가루</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>클린 벤치</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>Xilong Scientific</td><td>15700501</td><td></td></tr><tr><td>고온 살균 오븐</td><td>Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 접시</td><td>Biosharp</td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

검은 후추 식물에 대한 phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종 방법

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

파이퍼 니그럼 L. (후추)는 전 세계적으로 경제적으로 중요한 향신료 작물 인 전형적인 우디 포도 나무입니다. 검은 후추 생산은 Phytophthora capsici로 인한 뿌리 썩음병에 의해 크게 영향을받으며, 이는 "초크 포인트"문제로 산업 발전에 심각한 영향을 미쳤습니다. 그러나 검은 후추에 대한 내성의 분자 유전 적 메커니즘이 불분명하여 새로운 후추 품종의 개발이 느리게 진행됩니다. 검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici 에 대한 효과적인 접종 및 정확한 샘플링 시스템은이 식물 - 병원균 상호 작용을 연구하는 데 필수적입니다. 이 연구의 주요 목적은 검은 후추의 기저 머리에 Phytophthora capsici를 접종하는 상세한 방법론을 입증하는 동시에 우디 포도 나무 식물의 접종에 대한 참고 문헌을 제공하는 것입니다. 검은 후추 식물의 기저 머리는 그것을 손상시키기 위해 핀찔 렸고, 균사 알갱이는 병원균이 식물을 잘 감염시킬 수 있도록 수분을 유지하기 위해 세 개의 구멍을 덮었습니다. 이 방법은 토양 습류 또는 뿌리 침지를 포함한 전통적인 접종 방법으로 인한 불안정성을 해결하는 더 나은 방법을 제공합니다. 또한 농업 정밀 육종에서 식물과 다른 토양 매개 식물 병원균 사이의 작용 방식을 연구하기위한 유망한 수단을 제공합니다.

도 1은 P. capsici 접종 후 후추 잎의 증상을 나타낸다. 도 2는 P. capsici 접종 후 후추 줄기의 증상을 나타낸다. 병원체는 기저 줄기에서 검은 후추를 감염시켰다; 잎 황변, 시들음 나타남, 자일렘 갈변 및 혈관 흑색과 같은 증상이 점차 나타납니다. 도 3은 피토프토호라 캅시치를 대조군과 비교하여 접종한 후 다르게 발현되는 대부분의 유전자를 보여준다. 도 4 는 감염된 조직의 조직병리학적 분석에 의해 자일렘에서 콜로니화된 피토프토라 캡시치를 입증하였다.
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검은 후추 식물의 기저 머리를 핀찌르는 것은 그것을 손상시키는 간단하고 시간을 절약 할 수있는 방법입니다. 여기에서는 검은 후추 식물을 감염시키기위한 비디오와 함께 자세한 단계를 제공했습니다.

검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종 방법

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

다음 실험은 검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종과 정확한 샘플링 방법을 소개합니다. 전형적인 우디 포도 나무 인 검은 후추는 경제적으로 중요한 향신료 작물입니다. 검은 후추 생산은 주로 Phytophthora capsici에 의한 뿌리 썩음병의 영향을받으며 산업 발전에 심각한 영향을 미쳤습니다.검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종과 정확한 샘플링 시스템은 식물 - 병원균 상호 작용의 연구에 중요합니다. 이 연구의 주요 목표는 검은 후추의 기저 머리에 Phytophthora capsici를 접종하고 우디 포도 나무 식물의 접종에 대한 참조를 제공하는 상세한 방법론을 입증하는 것입니다. 이 방법은 토양 침지 또는 뿌리 침지와 같은 전통적인 접종 방법에 의해 야기되는 불안정성을 해결하는 더 나은 방법을 제공한다.실험 절차. 검은 후추의 절단은 두 달 동안 통제 된 환경에 심어집니다. 피토프토라 캡시치를 계대배양하고, 섭씨 25도 하에서 5일 동안 배양한다.감염 당일, 한천 블록은 바늘에 붙어있는 세 개의 구멍으로 덮여 있습니다. 그리고 마지막으로, 질병 증상을 특성화하십시오. 감염에 대한 검은 후추 절단 식물의 준비.직교 성 가지를 길이 40cm, 직경 0.5cm로 자르고 멸균 칼과 세카테로 아래쪽 마디의 표절 가지를 제거했습니다. 절단 브랜치에는 물 손실을 줄이기 위해 상단에 두 개의 노드와 다섯 개의 잎이 포함되어야합니다. 위쪽 부분을 평평한 컷으로 트리밍하고 아래쪽 부분을 비스듬한 컷으로 트림합니다.후추 절단의 뿌리 기질은 토양 및 동물 분뇨, 예를 들어 소 배설물, 양 배설물, et cetera를 일대일의 비율로 함유하는 혼합물로 제조되었다. 토양은 약 섭씨 121도에서 20분 동안 오토클레이브되었다. 직경 30cm, 높이 50cm의 번식 백을 사용하여 응원 받침대를 놓습니다.기판을 채우기 위해 50 도의 경사를 준비하십시오. 절단은 50도 각도로 배치되었으며 기판 아래에 세 개 이상의 노드가 있습니다. 그들은 응원 매체로 덮여 있었고 보조 부분은 매체에 달라 붙어야합니다.마지막으로, 절단은 완전히 침투되었습니다. 직선 절단은 절단을 삽입하기 위해 채택되었다. Phytophthora capsici 배양물의 준비.질병이없는 감자를 선택하십시오. 감자를 청소하고 작은 사각형으로 자릅니다. 감자 200 그램을 이중 증류수 800 밀리리터에 넣고 20 분 동안 끓입니다.그런 다음 혼합물을 여과하십시오. 20 그램의 덱스트로스를 넣으십시오. 혼합물을 이중 증류수로 한 리터에 채 웁니다.여과액에 한천 분말 15 그램을 넣으십시오. 배지를 플라스크에 분배하고 파라 필름을 사용하여 밀봉하십시오. 매체를 섭씨 121도에서 20 분 동안 오토클레이브하십시오.계산된 감자 한천 배지를 페트리 접시 플레이트에 분주하고, 응고를 위해 멸균 벤치에서 냉각시켰다. 접종 바늘을 알콜 연소 램프를 사용하여 가열하고, 수초 동안 냉각시킴으로써 위생화시켰다. 멸균 접종을 사용하여 곰팡이 샘플의 작은 조각을 가져 와서 PDA에 놓습니다.균사체는 판의 약 세 분기를 덮는다. 문화는 추가 실험을 할 준비가 되어 있습니다. 검은 고추의 감염.기판의 표면으로부터 다섯 센티미터 떨어진 위치는 인큐베이팅 스폿으로서 고려되었다. 인큐베이팅 위치는 뿌리에서 멀리 떨어져 있어서는 안되며, 감염 시간을 연장하는 것을 피하기 위해 목표로합니다. 핀찌르기의 자세한 단계는 다음과 같습니다.Phytophthora capsici의 균사체 펠릿을 마개 보어를 사용하여 수집하였다. 특히, 플레이트의 가장자리에 새로 개발 된 균사체 펠릿은 더 높은 감염 활동 때문에 우선적으로 선택되었습니다. 75 % 에탄올을 사용하여 줄기를 멸균하고 접종 바늘을 사용하여 멸균 된 위치에서 세 개의 삼각형 기공을 취하십시오.접종 장소의 세 개의 삼각형 기공이 접종 바늘을 사용하여 붙어 있었고, 균사 펠릿이 세 개의 모공에 덮여있었습니다. 여덟 시간 후, 모공은 일반적으로 검은 색으로 변했습니다. 팽창은 인큐베이션의 연장과 함께 확대되었다.일곱에서 열흘 후, 잎은 노랗게 변하고 검은 후추가 죽을 때까지 떨어졌습니다. 발표 결과는 다음과 같다. 감염 후, 증상은 잎 황변 및 시들음, 자일렘 갈변 및 혈관 검게를 포함하여 검은 후추 식물에 나타납니다.대부분의 유전자는 Phytophthora capsici로 접종 한 후 대조군과 비교하여 다르게 발현되었습니다. 감염된 조직의 조직병리학적 분석은 자일렘에서 콜로니화된 피토프토호라 고추를 입증하였다. 결론. 이 연구에서, 기저 머리를 핀찌르는 것은 검은 후추에서 효과적인 예방 접종 및 배가계를 제공하기 위해 손상시키는 데 사용되었습니다.한편,이 프로토콜은 또한 인큐베이팅을위한 참조를 제공하는보다 효율적인 방법을 나타냅니다 - 우리의 방법은 더 많은 시간을 제공하고 더 간략하게 작동 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 더 나은 결과를 제공하여 한 식물과 토양 매개 병원균 간의 강력한 상호 작용을 가능하게합니다. 이는 가시적이며 식물과 병원균 사이의 역동적 인 과정을 감지하는 것이 편리합니다.우리의 방법에서 우리는 검은 후추 식물의 기저 머리를 찌르기 시작하여 손상시킵니다. 그런 다음 손상된 부위를 Phytophthora capsici로 직접 덮고 수분을 유지했습니다. 병원균이 식물을 감염시킬 수 있도록.우리는 또한 농업 정밀 육종에서 식물과 다른 토양 매개 식물 병원균 사이의 작용 방식을 연구하기위한 유망한 방법을 제공합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

출처: 루피안, J. S., et.al. 식물 조직 내 슈도모나스 시링기 유전자 발현의 단세포 분석. J. Vis. 경험 (2022)이 영상은 아라비도시스 식물 잎에 박테리아 병원체를 주입하는 진공 침투 방법을 시연합니다. 이 방법은 준비된 박테리아 현탁액과 진공 펄스를 사용하여 기공을 균일하게 통과시켜 잎 감염을 통제합니다.

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Endophytes로 곰팡이 Entomopathogens 구축 : Endophytic 생물학적 방제 향해

생체영양 병원체 우스틸라고 수교를 이용한 옥수수 및 테오신테 식물을 접종하는 바늘 주입 방법의 사용이 설명된다.  상기 바늘 주입 접종 방법은 병원체가 아프레소리아 형성을 통해 식물에 유입되는 식물 잎 사이에 곰팡이 병원균의 통제된 전달을 용이하게 한다. 이 방법은 매우 효율적이며, 미국 maydis와재현 가능한 접종을 가능하게 합니다.

옥수수와 테오신테 라인에 우스틸라고 성 실증의 병원성을 평가하기위한 신속하고 효율적인 방법

농약침과 PVX 농병은 식물에 있는 유전자의 일시적인 자궁 발현을 위한 일상적인 기능적인 분석입니다. 이 방법은 효과적인 전략 (급속한 저항 및 비열유전자 발견)에 있는 능률적인 연구및 분자 식물 병리학에 있는 현대 연구에 결정적입니다. 그들은 공장에서 강력한 고처리량 기능 분석에 대한 수요를 충족합니다.

감자와 니코티아나 벤타미안의 농아침투 및 PVX 농병감염

병원체 성장의 정량화는 다양한 애기장대(Arabidopsis) 탈리아나(Arabidopsis) 면역 반응을 특성화하는 강력한 도구입니다. 여기에 설명된 방법은 Pseudomonas syringae pv를 정량화하기 위해 최적화된 주사기 침투 분석을 제공합니다. 마쿨리콜라 성체 애기장대에서 ES4326 성장.

을 사용해서 식물 방어 응답의 미세 특성에 대한 세균성 잎 침투 분석<em&gt; 애기 장대-슈도모나스 시린 개 (Pseudomonas syringae)</em&gt; Pathosystem

여기, 우리 식물 병원 체와 식물 독성 테스트 프로토콜을 제시 Magnaporthe grisea. 이 보고서 균 분리의 pathotypes의 대규모 검열을 하 고 분자 번 식 하는 동안 식물의 저항 메커니즘을 이해 하기 위한 훌륭한 시작 지점으로 제공.

식물 감염 테스트: 스프레이 식물 병원 체 Magnaporthe Grisea 와 상처-중재 접종

우리는 ~ 50 μm 메쉬가있는 접종 상자와 투명한 플라스틱 챔버로 구성된 간단한 포자 분배 시스템을 구성하기위한 프로토콜을 제시합니다. 이것은 식물에 흰가루병 포자를 고르게 접종하는 데 사용할 수 있으므로 연구 중인 식물의 질병 표현형을 정확하고 재현 가능하게 평가할 수 있습니다.

애기장대 및 기타 식물의 흰가루병 감염 표현형을 정확하게 평가하기 위한 쉽고 유연한 접종 방법

이 프로토콜은 식물 뿌리에 토양 매개 미생물을 접종하는 전략에 대한 자세한 요약을 제공합니다. 진균 Verticillium longisporum 및 Verticillium dahliae에 대해 예시된 세 가지 상이한 뿌리 감염 시스템이 기술된다. 잠재적 응용 분야와 가능한 다운스트림 분석이 강조되고 각 시스템에 대한 장단점이 논의됩니다.

식물 뿌리를 토양 매개 미생물로 감염시키는 접종 전략

이 프로토콜은 단일유전학적 곤충인 겨자 진딧물(Lipaphis erysimi (Kalt .))에 대한 곤충병원성 곰팡이(EPF)의 효과를 평가하기 위해 최적화된 분리형 잎 생물검정 시스템을 제공합니다. 이 방법은 페트리 접시 실험 중 데이터 수집 프로세스를 간략하게 설명하여 연구원이 겨자 진딧물 및 기타 단일유전 곤충에 대한 EPF의 독성을 일관되게 측정할 수 있도록 합니다.

Parthenogenetic 곤충, 겨자 진딧물, Lipaphis erysimi (Kalt.)에 대한 곤충 병원성 곰팡이의 무균 효과 평가

한천이 함유된 유리 용기에서 변형된 분리엽 방법을 사용하여 고추 총채벌레를 대량 사육하기 위한 분리잎 생물학적 분석 프로토콜이 확립되어 높은 생존율과 동기화된 발달을 보장했습니다. 이 시스템은2nd instar 유충에 대한 곤충병원성 곰팡이 독성을 효율적으로 스크리닝할 수 있으며 실험실, 온실 및 현장 평가를 위한 신뢰할 수 있는 총채벌레 공급을 제공합니다.

곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis Hood) 사육 시스템 구축

학습하세요 검은 후추 식물에 Phytophthora capsici를 효과적으로 접종하는 방법을. 기부 머리부분에 핀프릭 기법을 적용하여 전통적인 토양 침적법이나 뿌리 담금법보다 안정적인 결과를 얻습니다. 이 방법은 목본 덩굴 식물의 병원체 상호작용 연구에 활용됩니다.

검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종 방법

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