Name: Brefeldin A Injection에 의한 신장에서 분비되는 단백질의 출처 확인 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 배우세요 Brefeldin A 주입을 이용한 손상된 신장에서 사이토카인을 생성하는 세포의 출처를 식별하는 방법을. 이 기술은 신장 질환 병태생물학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>GBD Chronic Kidney Disease Collaboration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+kidney+disease%2C+1990-2017%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2017%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of kidney disease, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017.</a> Lancet. 395 (10225), 709-733 (2020).</li>
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<li>Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+formalin-fixed%2C+paraffin+embedded+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks.</a> Methods in Molecular Biology. 1897, 253-268 (2019).</li>
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<li>Chung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+promotes+fibrosis+after+severe+acute+kidney+injury+by+enhancing+renal+macrophage+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">TGF-β promotes fibrosis after severe acute kidney injury by enhancing renal macrophage infiltration.</a> JCI Insight. 3 (21), 123563(2018).</li>
<li>Meng, X. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2%3A+the+master+regulator+of+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Nephrology%22%5BJournal%5D)">TGF-β: the master regulator of fibrosis.</a> Nature Reviews. Nephrology. 12 (6), 325-338 (2016).</li>
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<li>Engel, J. E., Williams, E., Williams, M. L., Bidwell, G. L., Chade, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+VEGF+%28vascular+endothelial+growth+factor%29+therapy+induces+long-term+renal+recovery+in+chronic+kidney+disease+via+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Targeted VEGF (vascular endothelial growth factor) therapy induces long-term renal recovery in chronic kidney disease via macrophage polarization.</a> Hypertension. 74 (5), 1113-1123 (2019).</li>
<li>Liu, B. C., Tang, T. T., Lv, L. L., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+tubule+injury%3A+a+driving+force+toward+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Renal tubule injury: a driving force toward chronic kidney disease.</a> Kidney International. 93 (3), 568-579 (2018).</li>
<li>de Haij, S., Woltman, A. M., Bakker, A. C., Daha, M. R., van Kooten, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+inflammatory+mediators+by+renal+epithelial+cells+is+insensitive+to+glucocorticoids%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Production of inflammatory mediators by renal epithelial cells is insensitive to glucocorticoids.</a> British Journal of Pharmacology. 137 (2), 197-204 (2002).</li>
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<li>Gewin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deleting+the+TGF-%CE%B2+receptor+attenuates+acute+proximal+tubule+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Deleting the TGF-β receptor attenuates acute proximal tubule injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 23 (12), 2001-2011 (2012).</li>
<li>Nlandu-Khodo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+TGF-%CE%B2+and+%CE%B2-catenin+epithelial+crosstalk+exacerbates+CKD%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Blocking TGF-β and β-catenin epithelial crosstalk exacerbates CKD.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (12), 3490-3503 (2017).</li>
<li>Brooks, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIM-1-%2FTIM-1-mediated+phagocytosis+links+ATG5-%2FULK1-dependent+clearance+of+apoptotic+cells+to+antigen+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">KIM-1-/TIM-1-mediated phagocytosis links ATG5-/ULK1-dependent clearance of apoptotic cells to antigen presentation.</a> EMBO Journal. 34 (19), 2441-2464 (2015).</li>
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<li>Yu, S. M., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+kidney+injury+and+maladaptive+tubular+repair+leading+to+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Acute kidney injury and maladaptive tubular repair leading to renal fibrosis.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 29 (3), 310-318 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL 인슐린 주사기</td><td>BD</td><td>329654</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 주사기</td><td>BD 302995</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 mL 튜브</td><td>Fisher 브랜드</td><td>05-408-138</td><td></td></tr><tr><td>20 mL 주사기</td><td>BD</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>25 G 바늘</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>28 G 바늘</td><td>BD</td><td>329424</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>9017</td><td></td></tr><tr><td>아리스톨로치산-I</td><td>시그마-알드리치</td><td>A9461</td><td></td></tr><tr><td>&알파;-SMA 항체와 Cy3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6198</td><td>RRID:AB_476856</td></tr><tr><td>극저온 조절기용 블레이</td>드 CL <td>Sturkey. Inc</td><td>DT315R50</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)</td><td>&nbsp; 시그마-알드리치</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>브레펠딘 A</td><td>시그마-알드리치</td><td>B6542</td><td></td></tr><tr><td>시스플라틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4394</td><td></td></tr><tr><td>구연산</td><td>시그마-알드리치</td><td>791725</td><td></td></tr><tr><td>공초점 현미경</td><td>ZEISS</td><td>&nbsp; LSM710</td><td></td></tr><tr><td>공초점 현미경 대물렌즈</td><td>ZEISS</td><td>40x / 1.10 LD C-Apochromat WATER</td><td></td></tr><tr><td>공초점 소프트웨어</td><td>ZEISS</td><td>ZEN</td><td></td></tr><tr><td>Coplin 항아리</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>19-4</td><td></td></tr><tr><td>커버 글라스</td><td>피셔 브랜드</td><td>12545F</td><td></td></tr><tr><td>극저온 스타</td>트 <td>라이카</td><td>CM1850</td><td></td></tr><tr><td>CTGF 항체</td><td>Genetex</td><td>GTX124232</td><td>RRID:AB_11169640</td></tr><tr><td>Cy3-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG(H+L)</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>711-165-152</td><td>RRID: AB_2307443</td></tr><tr><td>Cy5-AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG(H+L)</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>705-175-147</td><td>RRID: AB_2340415</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide(DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>일회용 베이스 몰드</td> 피<td>셔 브랜드</td><td>22-363-553</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 혈청</td><td>잭슨 면역 리서치</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>데콘 랩스 주식회사</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>집게</td>, <td>VETUS</td><td>ESD-13</td><td></td></tr>, <tr><td>글리신</td><td>피셔 브랜드</td>, <td>12007-0050</td><td></td></tr>, <tr><td>가열 패드,</td><td>켄트 사이언티픽</td>, <td>DCT-20</td><td></td></tr>, <tr><td>헤파린, 나트륨염</td>, <td>ACROS 유기물</td>, <td>41121-0010</td>, <td>100mg/15ml의 dH2O</td></tr>, <tr>가<td>습실</td>, <td>Invitrogen</td><td>44040410</td> 호<td>일로 덮인 플라스틱 상자를 사용할 수 있습니다. 대체 가습실.</td></tr><tr><td>인슐린 주사기</td><td>BD 329461</td><td></td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>NIKON</td><td>Eclipse Ti-E2</td><td>면역형광</td></tr><tr><td>KIM-1 항체</td><td>R & D</td><td>AF1817</td><td>RRID: AB_2116446</td></tr><tr><td>레모졸(Histo-clear)</td><td>National diagnostics</td><td>HS-200</td><td></td></tr><tr><td>연꽃 tetragonolobus 렉틴</td><td>벡터</td><td>FL-13212</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Fisher scientific</td><td>12-550-343</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Reichert</td><td>Jung 820 II</td><td></td></tr><tr><td>흑백 CMOS 카메라</td><td>NIKON</td><td>&nbsp; DS-Qi-2</td><td></td></tr><tr><td>마우스 수술 키트</td><td>Kent scientific</td><td>INSMOUSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements</td><td>NIKON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>대물렌즈</td><td>NIKON</td><td>Plan Apo 20x/0.75</td><td>Eclipse Ti-E2(도립 현미경)에 연결된 이미지 획득 소프트웨어OCT</td></tr> <tr><td>컴파운드</td><td>Scigen</td><td>4586</td><td></td></tr><tr><td>Pap 펜</td><td>벡터</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>칼슘 및 마그네슘이 함유된 PBS</td> 칼슘 및 마그네슘이 없는 <td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>&nbsp; Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>PDGF-D 항체</td><td>Thermo-Fisher scientific</td><td>40-2100</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>전자 현미경 Science</td><td>15710</td><td>RRID: AB_2533455</td></tr><tr><td>플레이트 리더</td><td>Promega</td><td>GloMax&reg; Microplate Reader 4</td><td>% PFA를 PBS에서 16%로 희석하여</td> 살펴보십시오.</tr><tr><td>포비돈-요오드(베타딘)</td><td>Avrio Health L.P.</td><td>NDC 67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>압력솥</td><td>&nbsp; Tristar 8</td><td>Qt. 파워 쿠커 플러</td><td></td></tr>스 <tr><td>ProLong Gold 퇴색 방지 시약</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Urea (BUN) 분석 키트 II</td><td>BioAssay Systems</td><td>DUR2-100</td><td></td></tr><tr><td>신장 해부용 단일 날지 면도날(.009", 0.23mm)</td> <td>IDL 도구</td><td>521013</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 워머</td><td>Lab Scientific Inc.,</td><td>XH-2001</td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어</td><td>NIKON</td><td>NIS 요소</td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>RPI</td><td>S24060</td><td></td></tr><tr><td>TGF-b1 항규</td><td>시그마-알드리치</td><td>SAB4502954</td><td></td></tr><tr><td>트리스 EDTA 완충액</td><td>코닝</td><td>46-009-CM</td><td>RRID: AB_10747473</td></tr><tr><td>구연산 삼나트륨 이수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>SLBR6660V</td><td></td></tr> 구<tr><td>연산 삼나트륨 이수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>SLBR6660V</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>백색 유리 하전 현미경 슬라이드, 25 x 75 mm 크기, 접지 가장자리, 파란색 반투명</td><td>글로브 Scientific</td><td>1358D</td><td></td></tr></tbody></table>

brefeldin a injection에 의한 신장에서 분비되는 단백질의 출처 확인

Identification of the Source of Secreted Proteins in the Kidney by Brefeldin A Injection

시스플라틴 유도 AKI에 따른 사이토카인 생산에서 세뇨관 상피 세포의 역할을 조사하기 위해 시스플라틴 농도 20mg/kg으로 시스플라틴을 주입한 후 시스플라틴 주입 후 3일째에 BFA 0.25mg을 정맥 주사했습니다. 신장은 6시간 후에 적출하였다. 파라핀이 삽입된 신장을 절편하여 AKI의 조직 복구를 담당하는 대표적인 사이토카인인 TGF-β, PDGF-D 및 CTGF로 염색했습니다. 그림 2A에서 볼 수 있듯이, TGF-β+ 소포는 BFA가 있는 시스플라틴 처리된 신장에서 LTL로 표지된 PTC에서 관찰됩니다. 한편, TGF-β+ 소포는 손상되지 않았거나 BFA가 치료되지 않은 신장에서 관찰되지 않았습니다.
정량화는 시스플라틴 유도 AKI에서 BFA 처리로 TGF-β1+ 면적의 증가를 보여주었습니다(그림 2B). ...

Brefeldin A Injection에 의한 신장에서 분비되는 단백질의 출처 확인

Chronic kidney disease (CKD) is one of the top ten leading causes of death in the USA. Acute kidney injury (AKI), while often recoverable, predisposes ...

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

2 광자 현미경 높은 해상도 intavital을 활용하는 기술을 직접 시각화 및 표면 사구체에서 gloemrular 여과를 정량화한다. 이 방법은 정상과 질병 상태 모두에서 거대 분자의 투과 특성을 직접 측정 할 수 있습니다.

뮌헨의 Wistar 쥐에서 2 광자 현미경을 사용하여 형광 고분자의 사구체 투과율을 정량화

제브라 피쉬의 성인 신장은 신장 재생과 질병 연구를위한 훌륭한 시스템입니다. 이러한 연구의 중요한 양태는 네프론의 구조와 기능의 평가이다. 이 프로토콜은 네프론의 세뇨관 조성물을 평가하기 위해 신장 재 흡수를 평가하도록 구현 될 수있는 몇 가지 방법론을 설명한다.

성인 Zebrafish의 신장에서 네프론의 구성 및 기능 분석

신장 구조 조직 설계 기관 부족 및 투 석의 해로운 효과 위한 솔루션을 제공합니다. 여기, 우리는 마이크로 프로토콜 설명 cortico 골 수 세그먼트의 격리 murine 신장 해 부. 이 세그먼트는 신장 organoids를 형성 세포 비 계 없는 구문으로 이식.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

이 프로토콜에는 전체 신장 작업 업 사 질병 마우스 모델에서을 수행 하는 설명 합니다. 사 병의 모든 마우스 모델에 적용할 수 있는 사 기능의 자세한 기능, 구조, 및 기계적 분석 방법 허용.

신장 기능 사 질병 마우스 모델에서의 평가

여기 선물이 murine 비보에 biotin과 사 세포 표면 단백질의 라벨에 대 한 프로토콜. 이 프로토콜은 마우스 신장 perfuse glomeruli, 격리 하 고, 관심사의 단백질의 생 immunoprecipitation를 수행 하는 방법에 대 한 정보를 포함 합니다.

절연 Glomeruli와 비보에 사 세포 표면 단백질의 라벨

여기에서, 우리는 고과민성, 비방사성 추적자를 사용하여 마우스에 있는 사구체 투과성을 시험하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 작은 소변 볼륨을 가진 반복적인 소변 분석을 허용합니다.

플루오레세인 이소티오차네이트-폴리수크로오스 70을 가진 마우스에서 사구체 투과성의 고감도 측정

항체 라벨링, 광학 클리어링 및 고급 광 현미경의 조합은 완전한 구조 또는 장기의 3차원 분석을 가능하게 합니다. 여기에 설명된 간단한 방법은 두꺼운 신장 슬라이스의 면역 라벨링, 에틸 시나메이트와 광학 클리어링, 3차원 신장 구조의 시각화 및 정량화를 가능하게 하는 공초점 이미징을 결합하는 간단한 방법입니다.

면역 표지된 신장 조직의 광학 클리어링 및 화상 진찰

본 프로토콜은 마우스에서 루푸스 진행을 추적하는 방법을 기술한다. 세포 침윤과 신장에서의 단백질 침착을 기반으로 루푸스 신염을 특성화하기위한 두 가지 추가 절차가 제시됩니다.

단백뇨, 백혈구의 신장 침윤 및 루푸스가 발생하기 쉬운 MRL / lpr 마우스에서 단백질의 신장 침착 분석

본 프로토콜은 막성 신병증(MN) 동물 모델의 확립과 Kemeng Fang의 억제가 PI3K/AKT 신호 경로를 활성화하여 MN 쥐 포도세포 자멸사를 감소시키는 방법을 설명합니다.

PI3K/AKT 신호전달 경로를 통한 멤브라누스 신병증이 있는 쥐에서 Kemeng Fang의 Podocyte Apoptosis 억제 메커니즘

이 프로토콜은 폐쇄성 신병증에서 조직 섬유증의 진행을 연구하기 위해 마우스에서 편측 요관 폐쇄(UUO)를 유도하는 방법을 설명합니다. 여기에는 수술 절차, 수술 후 관리 및 섬유증 평가 방법이 포함됩니다.

신장 간질성 섬유증(Kidney Interstitial Fibrosis) 조사를 위한 일측성 요관 폐쇄 모델(Unilateral Ureteral Obstruction Model for Investigating Kidney Interstitial Fibrosis)

배우세요 Brefeldin A 주입을 이용한 손상된 신장에서 사이토카인을 생성하는 세포의 출처를 식별하는 방법을. 이 기술은 신장 질환 병태생물학 연구에 활용됩니다.

Brefeldin A Injection에 의한 신장에서 분비되는 단백질의 출처 확인

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