Name: 알려지지 않은 Fusarium oxysporum f.sp.의 인종을 결정하는 데 사용되는 세 가지 접종 기술의 대조. 니벳 격리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: 배우세요 Fusarium oxysporum f.sp. niveum의 인종 결정을 위한 세 가지 접종 기술을 수박 재배에서 활용하는 방법을. 이 방법은 병원체 식별과 효과적인 병해 관리에 필수적입니다.

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우리는 알리 박사와 식물 분자 진단 연구소뿐만 아니라 조지아 대학의 Pingsheng Ji 박사를 인정하고 싶습니다.이 박사의 리더십과 지원은 Fon 프로그램을 수립하는 데 도움이되었습니다.

저자들은 경쟁적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

레이스 타이핑의 세 가지 방법이 제시되었습니다. 이러한 각 방법은 특정 질문 및 실험 조건에 가장 적합합니다. 감염된 커널 접종 방법 (토양 침입)은 아마도 더 간단하고 간단하여 병원성30의 평가에 특히 유용합니다. 간단한 레이스 타이핑을 위해이 방법을 사용하는 것이 매우 효과적입니다. 그러나 특정 품종의 저항력을 결정하는 방법을 적용하는 것은 각 식물이 동일한 정도의 감염 또는 노출에 직면하지 않을 수 있으며 관심있는 품종의 저항력을 테스트하기 위해 똑같이 높은 수준의 질병이 필요할 수 있다는 점을 감안할 때 어려울 수 있습니다. 이는 이러한 방식으로 생산된 접종물이 잘 정량화되지 않기 때문에, 생존 가능한 프로파귤류의 비율, 또는 뿌리 영역에 도달하는 감염성 프로파귤류의 수가 잘 조절되지 않기 때문이다(31). 또한이 방법은 심은 커널과 루트 영역의 근접성의 불일치로 인해 제한됩니다. 너무 멀리 떨어져 있으면 포자가 발아하지 않거나 균사가 ...

Fusarium oxysporum 종 복합체 (FOSC)를 구성하는 토양 매개 곰팡이는 다양한 범위의 작물에서 심각한 질병과 수확량 손실을 일으킬 수있는 영향력있는 반생물 영양 식물 병원균입니다1. F. oxysporum f. sp. niveum (Fon)에 의해 야기 된 수박의 Fusarium wilt는 지난 수십 년 동안 전 세계적으로 범위, 발생률 및 심각도가 증가하고 있습니다 2,3. 묘목에서 Fusarium wilt의 증상은 종종 댐핑 오프와 유사합니다. 오래된 식물에서는 단풍이 회색, 엽록색 및 괴사가됩니다. 결국, 식물의 시들음은 완전한 식물 붕괴와 죽음으로 진행된다4. 직접적인 수확량 손실은 증상 및 식물 사멸로 인해 발생하는 반면, 간접 수확량 손실은 엽면 캐노피의 제거로 인한 태양 손상으로 인해 발생할 수 있습니다5. 성적 재생산 및 관련 생식 구조는 F. oxysporum 에서 관찰 된 적이 없습니다. 그러나 병원균은 두 가지 유형의 무성 포자, 마이크로 및 마크로 코니디아뿐만 아니라 수년 동안 토양에서 생존 할 수있는 클라미도스 포자 (chlamydospores)라고 불리는 더 크고 장기적인 생존 구조를 생산합니다6.
FOSC는 관찰 된 숙주 범위에 따라 포르마 스페셜로 분류되며, 일반적으로 하나 또는 몇 개의 숙주 종1로 제한됩니다. 최근의 연구에 따르면이 종 복합체는 15 종의 복합체 일 수 있지만 수박을 감염시키는 특정 종은 현재 알려지지 않았습니다7. F. oxysporum f. sp. niveum (Fon)은 시트룰루스 라나투스 또는 길들여진 수박 8,9를 독점적으로 감염시키는 균주 그룹의 이름입니다. F. 대부분의 병원성 포르마 특산물 내의 옥시스포럼 균주는 그들의 유전 성분 및 숙주 종에 대한 독성과 관련하여 특정 수준의 다양성을 나타낸다. 예를 들어, 한 균주는 숙주의 모든 품종을 감염시킬 수 있지만 다른 균주는 더 취약한 품종 만 감염시킬 수 있습니다. 그러한 변이를 설명하기 위해, 이들 집단들은 진화적 관계들 또는 공통된 표현형 특성들에 기초하여 비공식적으로 종족들로 분류된다. 폰 내에서 네 종족 (0, 1, 2 및 3)은 선택된 수박 품종 세트에 대한 병원성을 기반으로 특성화되었으며, 최근10 번 종족 3이 발견되었습니다.
이러한 명백한 다양성에도 불구하고, 포자 또는 균사의 형태학은 폰 종족의 종족들 사이에서 구별될 수 없으며, 이는 분리물의 독특한 인종(11)을 확인하기 위해 분자 또는 표현형 분석이 필요하다는 것을 의미한다. 분자 연구는 몇 가지 유전 적 차이를 확인했습니다. 예를 들어, 자일렘에서 분비된 (SIX) 이펙터의 역할은 F. 옥시스포럼에서 수년간 연구되어 왔으며, 이들 이펙터 중 일부는 수평 유전자 전달12 동안 교환된 염색체 상에 위치되어 있다. 예를 들어, SIX6은 Fon 레이스 0과 1에서는 발견되지만 레이스 213에서는 발견되지 않습니다. SIX 이펙터는 F. oxysporum f. sp. lycopersici 및 F. oxysporum f. sp. cubense의 병원성에 연루되어 토마토와 바나나에 Fusarium wilt를 각각14,15,16,17로 일으킨다. 시금치의 Fusarium wilt 병원균 인 F. oxysporum f. sp. spiniciae의 균주 중 SIX 이펙터 프로파일을 분석함으로써 유전 적 및 표현형 다양성을 정확하게 반영하는 분류가 가능해졌습니다18. 그러나, 폰 종족의 독성 기작 사이의 차이는 현재 완전히 이해되지 않았으며, 그들의 사용에 따라 개발 된 분자 분석은 일관되지 않고 부정확 한 결과를 보여주었습니다19. 따라서, 감염 분석으로부터의 표현형 결과는 현재 단리물을 분류하는 가장 좋은 방법이다.
F. oxysporarum은 처음에는 자일렘20을 올라가기 전에 뿌리를 통해 숙주를 감염시킵니다. 이것은 주어진 숙주 재배자의 뿌리를 직접 접종하여 인종 타이핑을 수행하는 효과적인 방법이되며 뿌리 딥 및 트레이 딥 접종 방법(21)의 기초가됩니다. 숙주를 감염시키지 않을 때, F. oxysporum은 토양에 거주하며 수년간 휴면 상태를 유지할 수 있습니다. 관심있는 분야에서 토양에서 감수성이있는 수박 품종을 재배하는 것은 Fon의 존재를 테스트하는 한 가지 방법입니다. 이 방법을 의도적으로 Fon에 감염된 토양에 다른 알려진 수준의 내성을 가진 품종을 포함하도록 확장하는 것도 인종 타이핑을 수행하는 좋은 방법이며 (표 1) 감염된 커널 파종 방법의 기초입니다. 변형된 트레이-딥 방법은 원래의 트레이-딥 방법의 변형으로, 많은 식물 및 현장 분리물을 신속하게 조사할 수 있는 고처리량 레이스 타이핑을 허용한다(22). 신속하고 성공적인 인종 타이핑 생물 분석의 중요한 요인으로는 다양한 병원체 종족에 대한 내성의 차이를 문서화 한 품종 사용, 접종물이 감염 중에 생물학적으로 활성이고 풍부하다는 것을 보장, 병원체와 숙주에 도움이되는 환경 유지, 질병의 중증도 또는 발병률에 대한 일관된 평가 시스템 사용 등이 있습니다. 이 논문에서는 위에서 설명한 원칙에 따라 루트-딥 23,24, 감염된 커널 시드 25,26, 및 표현형 레이스 타이핑을 위한 트레이-딥(22) 방법을 수정한 것에 대해 설명한다.

<table><tbody><tr><td>100% 더 풀러' s Earth</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F200-5KG</td><td></td></tr><tr><td>1 L 유리 삼각 플라스크</td><td>PYREX</td><td>4980-1L</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 팔콘 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 눈금 실린더</td><td>실험실 안전 공급</td><td>41121805</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Eppendorf Conical Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-413-921</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일 랩</td><td>Reynolds Wrap</td><td>720</td><td></td></tr><tr><td>표백제</td><td>Walmart</td><td>587192290</td><td></td></tr><tr><td>Bunsen 버너</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-391-301</td><td></td></tr><tr><td>CaCO3</td><td>sigma-Aldrich</td><td>239216</td><td></td></tr><tr><td>세포 살포기</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-100-11</td><td></td></tr><tr><td>Cheesecloth</td><td>Lions Services, Inc</td><td>8305-01-125-0725</td><td></td></tr><tr><td>투명 플라스틱 접시</td><td>Visions Wave</td><td>999RP6CLSS</td><td>~15cm 지름</td></tr><tr><td>버섯 가방 클램프용 투명 비닐 튜브</td><td>버섯</td><td></td> 공급 작은 <td>가방용 6", 중간 가방용 8", 큰 가방용 10인치</td></tr><tr><td>솜뭉치</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-885</td><td>멸균</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Fisher Chemical</td><td>A4094</td><td>100%를 물과 결합하여 70%를 사용합니다.</td></tr><tr><td>형광 튜브 조명</td><td>MaxLume</td><td>모델 T5</td><td>2800 K 색온도, 24 ''또는 48 ''길이</td></tr><tr><td>과립 한천</td><td>VWR International</td><td>90000-786</td><td></td></tr><tr><td>휴대용 스프레이 병</td><td>능력 1</td><td>24122002</td> <td>~ 0.95 L</td></tr><tr><td>혈구계</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-671-55A</td><td>2 챔버 혈구계</td></tr><tr><td>실험실 트레이</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-236-2A</td><td></td></tr><tr><td>큰, 밀봉 가능한 비닐 봉투</td><td>Ziploc</td><td></td><td>430805 38 cm x 38 cm</td></tr><tr><td>미스터 / 물뿌리개</td><td>Bar5F</td><td>B10H22</td><td></td></tr><tr><td>버섯 가방 클램프</td><td>버섯 공급</td><td></td><td>6" 작은 가방, 8" 중간 가방, 10" 큰 가방</td></tr><tr><td>니트릴 장갑</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td></td></tr><tr><td>유기농 호밀 열매</td><td>버섯 공급</td><td></td><td>0.5 갤런 또는 25 파운드 백</td></tr><tr><td>P1000 피펫 및 팁</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Fisherbrand</td><td>FB0875713</td><td>원형, 직경 100mm, 높이 15mm</td></tr><tr><td>심기 매체</td><td>Jolly Gardener</td><td>Pro-Line C / B</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 투수</td><td>BrandTech</td><td>UX0600850</td><td>1L 이상</td></tr><tr><td>플라스틱 심기 화분</td><td>Neo/SCI</td><td>01-1177</td><td>~15cm 직경 및 ~10cm 높이</td></tr><tr><td>플라스틱, 오토클레이브 안전 빈</td><td>Thermo Scientific</td><td>UX0601022</td><td>3L</td></tr><tr><td>1/4 강도 감자 포도당 한천 매체</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX1420028</td> QPDA Scientific Balance Scale <td>레시피와 함께 분말을 사용하여</td></tr><tr><td>g Ohaus</td> 30208458 단위로<td>측정합니다</td><td>.</td><td>200g을 담을 수 있고 측정할 수 있는 어떤 정밀한 스케일도 작동합니다</td></tr>. <tr><td>사이즈 #4 코르크 보어</td><td>Cole-Parmer</td><td>NC9585352</td><td></td></tr><tr><td>작은 버섯 재배 가방</td><td>버섯 공급</td><td></td><td>0.5 마이크론 필터, 중형 및 대형 크기로도 제공</td></tr><tr><td>토양 흙손</td><td>월마트</td><td>563876946</td><td></td></tr><tr><td>스티로폼 플랫 (6 x 12 셀)</td><td>Speedling</td><td>모델 TR72A</td><td></td></tr><tr><td>스티로폼 플랫 (8 x 16 세포)</td><td>Speedling</td><td>모델 TR128A</td><td></td></tr><tr><td>주사기(5 또는 10mL)</td><td>fisher Scientific</td><td>14-829-19C</td><td></td></tr><tr><td>타이머</td><td>Walmart</td><td>TM-01</td><td></td></tr><tr><td>V8 Original 100% 야채 주스</td><td>Walmart</td><td>564638212</td><td></td></tr><tr><td>vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-418</td><td></td></tr><tr><td>수박 씨 - Black Diamond</td><td>Willhite Seed Inc</td><td>17</td><td></td></tr><tr><td>수박 씨앗 - Calhoun Gray</td><td>Holmes Seed Company</td><td>4440</td><td></td></tr><tr><td>수박 씨앗 - Charleston Gray</td><td>Bonnie Plants</td><td>7.15339E+11</td><td></td></tr><tr><td>수박 씨앗 - PI 296341-FR</td><td>저자 연락처</td><td>작성자</td><td></td>연락처</tr><tr><td>Wheat Kernels (Maxie var.) (선택 사항)</td><td>Alachua County Feed & 씨</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

알려지지 않은 fusarium oxysporum f.sp.의 인종을 결정하는 데 사용되는 세 가지 접종 기술의 대조. 니벳 격리

A Contrast of Three Inoculation Techniques used to Determine the Race of Unknown Fusarium oxysporum f.sp. niveum Isolates

Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon)에 의해 유발 된 수박의 Fusarium wilt (Citrullus lanatus)는 미국 남동부, 특히 플로리다에서 주요 생산 제약으로 다시 부상했습니다. 인종별 내성 품종과 같은 통합 해충 관리 전략을 수립하려면 재배자의 분야에서 병원균의 다양성과 인구 밀도에 대한 정보가 필요합니다. 병원체 분리물을 확인하기 위한 분자 진단 도구 개발의 일부 진전에도 불구하고, 인종 결정은 종종 생물분석 접근법을 필요로 한다.
레이스 타이핑은 뿌리딥 접종, 감염된 커널 시딩 방법, 및 네 개의 수박 차동 각각을 사용한 변형된 트레이-딥 방법(블랙 다이아몬드, 찰스턴 그레이, 칼훈 그레이, 식물 소개 296341-FR)에 의해 수행되었다. 격리는 접종 후 다섯 주 후에 질병 발생률의 계산에 의해 인종 지정을 할당됩니다. 특정 재배자에 대한 식물의 33 % 미만이 증상이 있으면 내성으로 분류되었습니다. 발병률이 33 % 이상인 품종은 감수성이있는 것으로 간주되었습니다. 이 논문은 인종, 뿌리 딥, 감염된 커널 및 변형 된 트레이 딥 접종을 확인하기위한 세 가지 접종 방법을 설명하며, 실험 설계에 따라 응용 프로그램이 다릅니다.

이러한 실험은 일반적으로 재배되는 품종의 상대적 저항을 정의하는 데 도움이됩니다 (표 1). 그런 다음 이 정보를 사용하여 지역 Fon 인구를 기반으로 관리 권장 사항을 안내할 수 있습니다. 즉, 인종 0 또는 1이 상업 분야에 존재하는 것으로 알려져 있다면, 농부는 칼훈 그레이, 선슈가 또는 이와 동등한 것과 같은 "내성적인"품종을 재배하는 경향이 있습니다. 모든 방법을 사용한 생물 분석의 결과는 묘목이 Race 1 분리 물에 감염되었을 때 Black Diamond와 Charleston Grey 품종이 사망하거나 심각한 증상을 보인 반면, Calhoun Grey 및 PI 품종은 내성을 보였다 (표 2 및 그림 8A).
모든 방법은 묘목이 Race 3 격리물에 감염되었을 때 모든 품종의 거의 모든 식물이 사망하거나 심각한 증상을 보였다는 것을 보여주었습니다 (<str...

수박의 Fusarium wilt를 관리하려면 존재하는 병원균 종족에 대한 지식이 필요합니다. 여기에서, 우리는 병원성 균류 Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon)의 인종 타이핑에서 그들의 효능을 입증하기 위해 뿌리 딥, 감염된 커널 시딩, 및 변형된 트레이-딥 접종 방법을 설명한다.

알려지지 않은 Fusarium oxysporum f.sp.의 인종을 결정하는 데 사용되는 세 가지 접종 기술의 대조. 니벳 격리

Fusarium wilt of watermelon (Citrullus lanatus), caused by Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), has reemerged as a major production constraint in the ...

이 프로토콜은 수박 공동체에 관련된 사람들이 fusarium wilt 병원체를 평가하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 존재하는 병원균 집단을 결정하고 효과적으로 관리하는 데 도움이됩니다. 레이스 타이핑 fusarium wilt는 완료하는 데 복잡하고 시간이 많이 걸리며, 세 가지 실행 가능한 레이스 타이핑 생물 분석 옵션을 사용하면 사용자가 실험 조건에 가장 적합한 방법을 선택할 수 있습니다. 세 가지 방법 모두 식물 건강 종사자가 특정 분리 물과 관련된 fusarium wilt 감염의 잠재적 인 중증도를 진단하는 데 도움이됩니다.이 정보는 정보에 입각하고 효과적인 통합 질병 관리 결정을 가능하게 합니다. 심기 준비를 시작하려면 8x16 세포를 심기 배지로 채우고 토양을 압축하기 위해 아래로 두드리십시오. 그런 다음 정점이 길이와 동일한 깊이를 위쪽으로 향하게하는 씨앗을 뿌리십시오.씨앗이 뿌려진 후, 묻힌 씨앗이 들어있는 배지를 풀러의 흙으로 0.3175 ~ 0.635 센티미터의 깊이로 덮은 다음 평지를 안개로 만들어 서있는 물이나 풀링을 만들지 않고 배지를 감쇠시킵니다. 그 후, 종자가 발아할 때까지 오일일 동안 매 180분마다 20초씩 미스트하여 배지를 촉촉하게 유지한다. 발아 후, 하루에 한 번 아파트에 물을주십시오.5일 식재 후, 바람직한 푸사리움 옥시스포럼을 함유하는 직경 1 내지 1.25cm의 침윤된 종이 디스크를 1개의 명확히 된 V8 주스 배지 및 1/4 강도 감자 덱스트로스 한천 또는 QPDA 배지 플레이트 상에 놓고, 이들을 8일 동안 섭씨 28도의 인큐베이터에 저장한다. 여덟 번째 날에, V8 및 QPDA 플레이트를 생물 안전 캐비닛으로 옮기고 배지 표면을 가로 질러 멸균 세포 스프레더를 긁어 내고 액체 코니디아 현탁액을 멸균 50 밀리리터 배양 튜브에 풀링하여 코니디아를 분해하십시오. 다음으로, 포자 수를 정량화하고 약 1백만 포자의 계산된 부피를 신선한 멸균 배양 튜브로 옮기고 멸균 탈이온수로 총 부피를 30 밀리리터로 가져와 최종 접종액을 준비한다.예방 접종을 준비하려면 이전에 10 % 표백제로 소독 한 6x12 세포 스티로폼 플랫을 놓고 잘 헹구어 접종 된 식물을 섭취하십시오. 접종하기 몇 시간 전에 식물에 철저히 물을 공급하십시오. 물을 뿌린 후 두 시간 후에 8x16 세포 스티로폼 플랫에서 플랜틀릿을 제거하고 뿌리를 헹구십시오.그런 다음 헹군 식물을 사용할 때까지 수돗물로 깨끗한 용기에 임시로 보관하여 품종을 서로 분리하십시오. 나중에 재배지를 여섯 명으로 구성된 그룹으로 분리하고 묘목 그룹을 실험실 트레이에 젖은 종이 타월로 싸서 보관하십시오. 6x12 어레이 스티로폼 트레이의 각 셀 바닥에 25 ~ 30 입방 센티미터의 토양을 놓고 스쿼트 병을 사용하여 눈에 띄게 습기가 생길 때까지 토양을 적시십시오.건강한 방제부터 시작하여 동일한 재배자의 손상되지 않은 여섯 묘목 그룹을 접종물이 들어있는 50 밀리리터 튜브에 넣으십시오. 접종하기 위해, 뿌리가 30 초 동안 잠겨있는 식물의 튜브를 와류하십시오. 다음으로, 트레이의 한 열에 동일한 재배지의 식물이있는 6x12 스티로폼 플랫에 세포 당 하나의 플랜틀릿을 놓습니다.심는 매체로 플랜틀릿을 덮고 부드럽게 설정하십시오. 주사기를 사용하여 튀는 것을 피하면서 20 밀리리터의 물로 플랜틀릿을 적시십시오. 모든 플랜틀릿을 재식재했을 때, 평균 기온이 섭씨 27도인 밀폐된 어두운 환경에서 하룻밤 사이에 플랜틀릿을 놓으십시오.커널을 주입하기 위해, QPDA의 플레이트 상에 fusarium oxysporum niveum 균주를 단리하고 배양하여 그 성장이 플레이트의 절반을 덮을 때까지 접종물을 준비한다. 200 그램의 커널이 들어있는 한 리터 유리 삼각 플라스크에 멸균 수돗물을 첨가하여 커널을 준비하여 곡물을 적어도 다섯 센티미터까지 완전히 덮으십시오. 커널을 섭씨 24도에서 플라스크에 두 시간 동안 담근 후 플라스크에서 물을 배수하고 플라스크의 개구부를 치즈 천으로 싸서 개구부를 막은 다음 알루미늄 호일 랩으로 개구부를 덮습니다.중력주기로 오토클레이브의 플라스크를 다섯 분의 건조 시간으로 한 시간 동안 살균 한 다음 플라스크를 실온으로 식히십시오. 곡물을 필터가있는 버섯 재배 가방으로 옮기십시오. 가방에서 공기를 제거한 다음 여분의 플라스틱을 접으십시오.가방을 플라스틱 오토클레이브 안전 빈에 넣고 빈을 알루미늄 호일 랩으로 덮은 다음 이전과 동일한 설정을 사용하여 다시 오토클레이브하십시오. 오토클레이빙 후, 곰팡이가 가방의 커널에서 삼 주 동안 배양되도록하십시오. 네 번째 크기의 멸균 코르크 보어를 사용하여 배양 플레이트 상의 활성 성장 구역으로부터 직경 여섯 밀리미터의 한천 디스크를 절단한다.가방을 펼쳐 엄격한 멸균 기술로 다섯 개의 한천 디스크를 놓습니다. 멸균 된 50 밀리리터 눈금 실린더를 사용하여 35 밀리리터의 멸균 수돗물을 측정하고 가방에 첨가하십시오. 플라스틱 냄비에 포팅 믹스를 채우고 측정 된 양의 포팅 믹스를 감염된 커널 14 알갱이가 들어있는 대형 비닐 봉지에 넣으십시오.가방에 에어 쿠션을 만들고 가방을 여러 번 뒤집어 커널과 토양을 혼합하기 전에 닫은 밀봉하십시오. 완료되면 표면 살균 된 냄비에 감염된 토양 혼합물을 채 웁니다. 시험중인 격리 된 토양 당 감염된 토양의 총 네 개의 전체 냄비에 대해 남아있는 각 수박 품종에 대해 과정을 반복하십시오.다음으로, 씨앗의 정점 끝이 위로 향하게하여 냄비에 여섯 개의 수박 씨앗을 뿌립니다. 스프레이 병을 사용하여 0.3 ~ 0.6 센티미터의 토양 상부를 물로 적신 다음 각 냄비 아래 및 위에 투명한 플라스틱 접시를 놓습니다. 48 셀 인서트를 증기 저온 살균 모래, 이탄, 질석을 4 : 1 : 1의 비율로 채우고 인서트를 탭하여 토양을 압축하십시오.그런 다음 플라스틱 트레이에 삽입물을 놓고 앞에서 설명한대로 씨앗을 뿌리십시오. 심기 7일 전에, 다섯 개의 QPDA 플레이트에 침윤된 종이를 접종하여 14시간/10시간 암주기로 8일 동안 배양된 지역에 보관한다. 일곱째 날에는 100 밀리리터의 감자 덱스트로스가 들어있는 각 250 밀리리터 삼각 플라스크에 1 평방 센티미터의 한천 플러그를 옮기고 삼각 플라스크를 벤치 탑 쉐이커에 놓습니다.접종 당일에, 접종물을 네 층의 멸균 치즈 천을 통해 여과하여 포자를 수확하여 플라스크의 미세침엽수 농도를 결정한다. 파종 후 14 일 후, 묘목이있는 세포 삽입물을 웹베드 트레이로 옮긴 다음 묘목이있는 웨브 베드 트레이를 일곱 리터의 접종 현탁액이 들어있는 플라스틱 욕조에 넣으십시오. 접종물을 방해받지 않고 15 분 동안 유지 한 후, 접종 된 묘목이 들어있는 세포 삽입물을 구멍이없는 트레이로 옮기고 구멍이없는 트레이를 온실 벤치에 놓은 다음 필요에 따라 물을 뿌립니다.뿌리딥 생물검정을 위해 앞서 설명한 바와 같이 조명 및 환경 조건을 유지한다. 사용 된 방법에 따라 시들음과 식물 사망의 발생률을 관찰 및 계산하여 등급을 시작하고 디지털 이미지를 촬영하여 질병 진행을 문서화하십시오. 변형된 트레이 딥 방법에서, 레이스-2 분리물에 감염된 블랙 다이아몬드 및 찰스턴 그레이 품종은 심각한 증상을 보였고 사망했다.대조적으로, 시트룰루스 아마루스 PI 재배자는 저항을 보였다. 뿌리 딥 방법에서, 인종 -0 격리에 감염된 묘목은 대부분 생존했으며, 인종 -3 격리물에 감염된 거의 모든 묘목은 사망했습니다. 감염된 커널 방법에서, 인종 -2에 감염된 토양에서 자란 슈가 베이비 (Sugar Baby)와 찰스턴 그레이 (Charleston Gray) 품종은 시들고 죽기 시작했으며, 시트룰루스 아마루스 PI 식물은 여전히 건강하게 보입니다.식물을 적절하게 파종하고 유지하고, 병원균이 생존력을 확인하고, 각 접종 방법의 고유 한 기술을 이해하고, 질병 증상을 평가할 때 일관성을 유지하는 것을 잊지 마십시오. 이러한 방법의 결과를 통해 연구자들은 시퀀싱 및 비교 유전체학 분석을 통해 분리 물 간의 차등 분산 발현을 관리하는 근본적인 유전 결정 인자를 조사 할 수 있습니다. 이러한 방법을 사용하여 연구자들은 서로 다른 위치에 걸쳐 다양한 독성 표현형의 유병률을 평가하고 이러한 표현형을 관찰 가능한 유전 요소와 비교할 수있었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

성 십자가와 재조합 자손의 고립은 사상균에 대한 중요한 연구...

의 성적 개발 및 Ascospore 방전 Fusarium graminearum</em

생체영양 병원체 우스틸라고 수교를 이용한 옥수수 및 테오신테 식물을 접종하는 바늘 주입 방법의 사용이 설명된다.  상기 바늘 주입 접종 방법은 병원체가 아프레소리아 형성을 통해 식물에 유입되는 식물 잎 사이에 곰팡이 병원균의 통제된 전달을 용이하게 한다. 이 방법은 매우 효율적이며, 미국 maydis와재현 가능한 접종을 가능하게 합니다.

옥수수와 테오신테 라인에 우스틸라고 성 실증의 병원성을 평가하기위한 신속하고 효율적인 방법

우리는 ~ 50 μm 메쉬가있는 접종 상자와 투명한 플라스틱 챔버로 구성된 간단한 포자 분배 시스템을 구성하기위한 프로토콜을 제시합니다. 이것은 식물에 흰가루병 포자를 고르게 접종하는 데 사용할 수 있으므로 연구 중인 식물의 질병 표현형을 정확하고 재현 가능하게 평가할 수 있습니다.

애기장대 및 기타 식물의 흰가루병 감염 표현형을 정확하게 평가하기 위한 쉽고 유연한 접종 방법

여기서 우리는 토양 샘플에서 entomopathogenic 균류 (EPF)를 분리하고 선택하는 데 사용 된 식사 벌레 (Tenebrio molitor)-미끼 시스템을 기반으로 프로토콜을 제시합니다. 효과적인 코니디아 번호(ECN) 포뮬러는 현장에서 해충 미생물 조절을 위한 생리적 특성에 기초하여 높은 스트레스 내성 EPF를 선택하는 데 사용된다.

토양 샘플에서 내토모 병원성 곰팡이의 격리 및 선택 및 곤충 해충에 대한 곰팡이 독성의 평가

엔토모병원성 진균 콜로니는 테네브리오 미끼, 갤러리아 미끼 및 선택적 인공 배지, 즉 클로람페니콜, 티아벤다졸 및 시클로헥시미드(CTC 배지)로 보충된 효모 추출물이 풍부한 감자 덱스트로스 한천을 사용하여 열대 토양 샘플로부터 분리된다.

토양 샘플에서 엔토모병원성 곰팡이를 분리하는 방법의 비교

이 프로토콜은 7 일 이내에 대규모 토양 샘플 세트에서 효모와 곰팡이 Aspergillus fumigatus를 배양하는 효과적이고 신속한 방법입니다. 이 방법은 실험에 필요한 다양한 인큐베이션 배지 및 온도를 수용하도록 쉽게 변형 될 수 있습니다.

곰팡이 개체군 구조를 조사하기 위해 토양에서 배양 가능한 효모와 곰팡이를 분리합니다.

이 프로토콜은 식물 뿌리에 토양 매개 미생물을 접종하는 전략에 대한 자세한 요약을 제공합니다. 진균 Verticillium longisporum 및 Verticillium dahliae에 대해 예시된 세 가지 상이한 뿌리 감염 시스템이 기술된다. 잠재적 응용 분야와 가능한 다운스트림 분석이 강조되고 각 시스템에 대한 장단점이 논의됩니다.

식물 뿌리를 토양 매개 미생물로 감염시키는 접종 전략

이 프로토콜은 균근 진균으로 발아된 식물 조직 및 종자에서 진균 집락을 연구하기 위해 주사 및 투과 전자 현미경, 빛, 공초점 및 형광 현미경과 같은 다양한 현미경 기술을 적용하여 진균종속영양 식물 샘플을 수집, 고정 및 유지하기 위한 자세한 절차를 제공하는 것을 목표로 합니다.

균종속영양 식물 조직의 곰팡이 집락화 및 종자의 공생 발아를 해석하기 위한 현미경 기술

현재 논문은 식물 관련 내생균의 분리, 분리물의 장기 보존, 형태학적 특성 분석 및 후속 분자 식별 및 균유전체 분석을 위한 전체 DNA 추출을 위한 상세하고 적절한 프로토콜을 제공하는 것을 목표로 합니다.

Mycoheterotrophic 식물에서 내생균 균류를 식별하기 위한 분리, 특성화 및 전체 DNA 추출

이 프로토콜에서, 결합된 재조합효소 중합효소 증폭 CRISPR/Cas12a 분석은 침입성 식물 병원체인 Fusarium oxysporum f. sp. cubense 열대 인종 4의 검출을 위해 설명된다.

Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4를 검출하기 위한 복합 재조합효소 중합효소 증폭 CRISPR/Cas12a 분석

배우세요 Fusarium oxysporum f.sp. niveum의 인종 결정을 위한 세 가지 접종 기술을 수박 재배에서 활용하는 방법을. 이 방법은 병원체 식별과 효과적인 병해 관리에 필수적입니다.

알려지지 않은 Fusarium oxysporum f.sp.의 인종을 결정하는 데 사용되는 세 가지 접종 기술의 대조. 니벳 격리

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