모기 및 초파리에 대한 살충제 독성을 정량화하기위한 국소 응용 생물 검정

표면 접촉보다는 곤충에 살충제를 직접 적용함으로써 살충제 노출의 변동을 최소화 할 수 있으며 이를 통해 모기 개체군의 감수성 프로파일을보다 정확하게 측정 할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 치명적인 농도보다는 살충제의 질량 상대화 된 치사 용량을 계산할 수있게하여 저항 비율 비교를 크게 향상시킬 수 있다는 것입니다. 살충제를 올바르게 보관하고, 도구를 오염시키지 않으며, 주사기 부품의 상태가 양호한지 확인하십시오.

이렇게하면 일관된 결과를 얻는 데 도움이됩니다. 시작하려면 냉동실에서 필요한 살충제 용액을 제거하십시오. 즉시 용액을 와류하거나 다섯 번 뒤집어 놓고 실온에서 내광성 용기에 넣어 살충제를 실온으로 따뜻하게하십시오.

각각 0.5 밀리리터의 아세톤을 가진 5개의 마이크로 원심분리 튜브를 세팅한다. 주사기 배럴을 첫 번째 튜브의 아세톤으로 완전히 채 웁니다. 그런 다음 플런저를 신속하게 밀어 아세톤을 폐기물 용기에 넣고 네 번 더 반복하여 동일한 아세톤 분취액에서 총 다섯 개의 아세톤 세척을 완료하십시오.

그런 다음 주사기 배럴을 공기로 완전히 채우고 공기 및 잠재적 인 아세톤 잔해를 폐기물 용기로 배출하십시오. 공기로 세 번 세척을 완료하려면 두 번 더 반복하십시오. 주사기 플런저와 바늘 상단 사이의 배럴 내에 플런저를 배럴 안으로 약 다섯 밀리미터 정도 당겨 공기 주머니를 만듭니다.

블라인드 사망률 평가를 위해 플라스틱 보관 컵에 임의의 ID로 라벨을 붙입니다. 흡입 흡입으로 구동되는 흡인기기를 사용하여 원하는 수의 삼 ~ 다섯 일 된 성인 모기를 흡인하십시오. 흡입기의 끝을 면으로 감싸 튜브에 넣으십시오.

부드럽게 내쉬고 흡인물을 두드려 모기를 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 흡입기 팁이 제거될 때 면을 사용하여 튜브를 꽂은 다음 뚜껑을 덮으십시오. 튜브에있는 모기를 섭씨 4도에서 최소 10 분 동안 두거나 얼음 쟁반의 얼음 아래에 묻어 간단히 쓰러 뜨립니다.

쓰러진 모기를 곤충 취급 텐트로 옮기십시오. 조심스럽게 모기를 얼음 위에 놓인 플라스틱 쟁반에 밀어 넣고 한 번에 약 50 마리의 모기를 부어 각 모기가 그 아래의 시원한 쟁반에 닿고 쓰러진 상태를 유지하도록하십시오. 모기를 포셉으로 다리 나 날개로 부드럽게 집어 들고 각 성별을 별도의 홀딩 컵에 넣고 원하는 수에 도달하면 멈추십시오.

분류하는 동안 부상을 입었거나 매우 크거나 작은 모기를 제거하십시오. 모기 컵의 무게를 기록하려면 페트리 접시가있는 빈 컵을 저울의 뚜껑으로 놓고 저울을 깎으십시오. 모기를 용기에 붓고 뚜껑을 위에 놓습니다.

컨테이너를 저울에 놓고 모기의 수와 함께 최종 무게를 기록하십시오. 즉시 표본 컵을 얼음 위에 다시 올려 놓고 표본의 모든 컵을 칭량할 때까지 고정시킵니다. 준비된 모기를 얼음 위에 놓인 다섯 개에서 10 개의 분리 된 컵으로 나누고 임의의 ID로 표시하십시오.

핀셋과 핸드 헬드 카운터를 사용하여 컵 당 20 ~ 25 마리의 모기를 얻으십시오. 초파리를 분류하려면 일곱 초 동안 이산화탄소를 사용하여 파리를 마취하십시오. 파리를 벤치 종이에 싸인 얼음 팩에 붓습니다.

미세한 페인트 브러시를 사용하여 남성과 여성을 분리하고 계산하십시오. 페인트 브러시를 사용하여 선택한 파리를 부드럽게 집어 들고 깨끗하고 빈 재고 병에 넣으십시오. 동일한 수의 수컷 및 여성 초파리를 선택한 후 스톡 병에 스트레인 이름과 과일 파리 합계로 라벨을 붙입니다.

일곱 초 동안 이산화탄소를 사용하여 초파리의 병을 마취하십시오. 초파리를 계량 용지에 붓고 종이를 깔때기로 사용하여 파리를 임의의 ID로 표시된 타르 드 바이알에 넣습니다.초파리의 바이알 위에 페트리 접시 뚜껑을 놓은 후 저울에 놓습니다. 점수 시트에 표본의 결합 된 무게와 수를 기록하십시오.

파리가 탈출하는 것을 막기 위해 뚜껑을 여전히 위에 올려 놓은 얼음 쟁반에 초파리의 약병을 즉시 두십시오. 주사기에 적절한 살충제 농도를로드하고, 최소 농축 용량으로 시작하여 각 유기체 그룹과 함께 가장 집중된 용량으로 작업하십시오. 시편을 얼음 위의 트레이 위에 놓인 계량 용지에 팁으로 씌우십시오.

깨끗한 살충제가없는 페인트 브러시 또는 면봉을 사용하여 서로 가까운 표본을 분리하여 투약을 위해 각 표본에 쉽게 접근 할 수 있도록하십시오. 주사기를 사용하여 모기의 경우 복부 흉부 및 복부 부위에 살충제 용액 한 방울을 바르고 초파리의 경우 도섬을 바르십시오. 즉시 시편을 라벨이 붙은 플라스틱 컵에 다시 붓습니다.

컵을 그물망과 고무 밴드로 덮으십시오. 이 과정에서 어떤 표본이 죽거나 손상되거나 탈출 된 경우 컵에 업데이트 된 표본 수를 기록하십시오. 완성 된 컵을 홀딩 트레이에 넣으십시오.

첫 번째 컵의 경우, 투약이 완료된 시간을 기록하십시오. 모든 표본이 적절한 살충제 농도로 투여 될 때까지 각 컵에 대해 투약을 반복하고 모든 표본이 투여 된 종료 시간을 기록하십시오. 젖은 면봉을 통해 각 컵에 10 % 자당 용액을 제공하고 모기와 초파리를 원하는 온도와 습도로 보관하십시오.

살충제 노출 시작 후 24 시간에 표본 사망률을 기록하십시오. WHO가 묘사 한 바와 같이 모기가 움직이지 않거나 운동 실조적 인 경우 모기가 날아 다니고 똑바로 서서 죽을 수 있다면 살아있는 것으로 분류하십시오. 초파리에 대해 동일한 사망률 평가를 따르십시오.

생물검정을 수행한 후, 용량 반응 데이터는 남성 및 여성 Aedes aegypti에 대한 록펠러 및 IICC 유전자형인 두 균주를 특징으로 하는 수득되었다. 록펠러 및 IICC에 대한 질량 상대화된 중앙값 치사량은 밀리그램 당 각각 0.008 및 0.336 나노그램이었다. 결과는 각 균주 내에서 암컷과 수컷 모기의 용량 반응 곡선 사이에 차이가 없음을 밝혀 냈습니다.

따라서 남녀 모두로부터의 데이터를 결합하여 중앙값 치사량 값을 계산하였다. 이 두 균주의 중간 치사량에 대한 95%신뢰구간이 겹치지 않았기 때문에, 이들 값은 유의하게 상이한 것으로 간주되었다. 추가적으로, 내성 비율을 계산할 때, IICC 균주는 감수성 록펠러 균주보다 40배 이상 내성이 더 높았다.

초파리, 초파리 멜라노가스터, 광저우-S 균주에 대한 용량 반응 데이터도 얻어졌으며, 질량 상대화된 중앙값 치사량은 밀리그램 당 0.213 나노그램인 것으로 밝혀졌다. 일관성은 특히 살충제를 저장 및 적용하고 사망률을 평가할 때 중요합니다. 또한 살충제에 의해 유발되지 않은 해로움이나 사망을 피하기 위해 표본을 취급 할 때주의하십시오.

이 방법을 통해 우리는 이제 모기 개체군의 기술적 저항과 환경 조건이 저항에 미치는 영향 또는 기술적 저항이 실제 저항을 예측하는 방법을 정확하게 결정할 수 있습니다.