Name: Murine 피부 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: 배우세요 BALB/c에서 C57BL/6으로의 피부 이식 기법을 통해 면역 거부 반응과 T세포 반응을 연구하는 방법을. 이 모델은 이식 생물학 및 면역학 연구에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

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NIH 면역학 교육 그랜트 T32 AI 60,573 (KRG)와 NIH 부여 GM 41,514 (MDC)

이전 실험 개시하기 : <ul><li> IACUC 승인을 받아야 </li><li> 수술기구 및 Q - 도움말을 소독 </li></ul> I. 하베스트 기증자 조직 <ol><li> (기관의 SOP에 따라) 기증자 마우스를 안락사 </li><li> 알코올 (内耳)의 기지에서 젖은 머리 뒤로 </li><li> 기지에서 귀를 잘라 수확하여 기증자 피부 </li><li> 얼음 접시에 넣어 조직 </li><li> 분할 이어 : 쥐 - 치아 포셉과 (内耳)의 기지로 조직 핀치 복부와 지느러미 양측, 부드럽게 조직을 분열 시키려고, 부동 등의 조직, 내부 표면 아래, PBS 얼음 속에서, collagenous 복부 플랩를 버리고 </li></ol> II. 이식받는 준비 <ol><li> 마취 마우스 승인 절차를 사용 </li><li> 수술 통증 (예 : 0.05-0.1 MG / G Bupernex의 IP)에 대한 진통제 투여 </li><li> 가로 위치에 플레이스 마우스 </li><li> 동물 충분히 진정되도록 발끝 핀치를 수행 </li><li> 젖은 알코올로 머리와 흉부를 면도 </li><li> 알코올 면봉과 함께 깨끗한 지역을 닦아 </li></ol> III. 피부 이식 <ol><li> 쥐 - 치아 포셉와 함께 텐트 피부 포셉 아래 ~ 0.25-0.5 cm 잘라 : ~ 1cm 절개를 확인 </li><li> PBS에서 기증자 피부 이식 침대 위에 자리 (그래프트 침대에 직면하고 귀 피부의 내부 표면)를 제거하고, 멸균 면봉을 넣었와 여분의 PBS를 제거 </li><li> 그 이식 (이식 가장자리가 아래에 모습을 드러냅니다하지 그 이식받는 사람의 트렁크 피부에 숙취가없는 것을 확인하고) 이식 침대 이내에 단호하게 자리잡고 있으므로 신중하게 거리를 초과 기증자의 피부를 트림 </li><li> 멸균 붕대로 감싸받는 사람 (피부 이식을 통해 위치가 아닌 접착 거즈 세그먼트 포함) </li><li> 그 붕대이 (동물의 호흡을 평가) 너무 꽉되지 않도록하고 팔을 자유롭게 이동 아르 </li><li> 단일 2-0 실크 봉합사와 보안 붕대 </li><li> 깨끗한 새장에 플레이스 동물 (동물까지 가열 램프에 따라 충분히 마취로부터 복구되었습니다) </li><li> 모니터받는 고통의 흔적을 1-2/day과 고통 구호를위한 필요에 따라 진통제 투여 </li></ol> IV. 붕대 제거 (6~7일 포스트 이식) <ol><li> 마취 마우스 승인 절차를 사용 </li><li> 실크 봉합사 컷 및 제거 </li><li> 신중하게 붕대 (그래프트를 방해하지 않도록 만들기)를 통해 컷 뭉툭한 끝 가위를 사용하여 부드럽게 제거 </li><li> 깨끗한 케이지 마우스로 돌아가기 </li><li> 폼 또는 수축의 흔적을 붕대 제거 후 이식 ~ 8 시간을 확인합니다. 있는 경우, 수술이 vascularize에 실패 할 수도 있습니다 및 기술 실패로 간주되어야합니다. </li><li> 거절의 흔적 (보통 기증자의 조직 ~ 80 %의 괴사로 정의)에 대한 일일 모니터 </li><li> Allogeneic 피부 이식은 보통 D8 - 12 수술 사이 거부합니다 </li></ol> V. 유용한 힌트 <ol><li> 가까이 귀에의 기본에 기증자의 조직을 것입니다 수확 : 1) 그래프트의 크기를 극대화하고, 2) 분할을 용이하게합니다 고르지 복부 오버행을 제공합니다 </li><li> 항상받는 조작에 대한 새 면도날을 사용하여 </li><li> 진통이 IP를 부여하는 경우 (그래프트을 방해의 가능성을 최소화) 수술 처리를 최소화하기 위해 절차를 이식하기 전에 관리 </li><li> 가능하다면, 붕대를 적용하기 전에 장갑을 제거합니다. 장갑은 붕대를 심어 응용 프로그램을 복잡하게하는 경향이 </li><li> 붕대 끝에 하나의 봉합사를 게재하면 조기 제거를 최소화합니다 </li><li> 꽉로 허용하고 봉합을 배치하기 전에 호흡을 평가로 바꿈 붕대. 붕대가 너무 꽉 경우, 동물은 호흡을 중지합니다. 붕대가 너무 느슨한 경우, 동물은 그것을 제거됩니다. </li></ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

본 동영상 문서에 시연, 피부 이식 모델 allogeneic T 세포 응답을 모니터링을위한 빠르고 쉬운 방법입니다. Allogeneic 피부 이식은 어플 리케이션의 광범하고 분석하는 immunosuppressive 대리인 및 내성 유도 프로토콜뿐만 아니라 조사를 위해 다양한 차단 항체의 생물 학적 효과의 다양한의 효율성을 활용하고 있습니다.

<table><tbody><tr><td>미세해부 핀셋 (곡선형)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>쥐 치아 핀셋 (1x2 치아, 직선형)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>사시 가위 (둔단)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>아이리스 핀셋 (곡선형)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위 (각진 형태)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Halsey 미세 지침기</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 플레이트</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (Buprenorphine hydrochloride)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기 (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>외날 면도날 (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합사 (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

murine 피부 이식

Murine Skin Transplantation

가장 엄격한 최소 기술적으로 도전적인 모델 중 하나로서, 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 방법입니다. 이 비디오 문서의 목적은 마우스 모델을 사용 피부 이식의 단계별 영상 데모로 뷰어를 제공하는 것입니다. 2) 이식에 대한 수신자를 준비, 3) 피부 이식, 4) 붕대 제거 및 모니터링 이식 거부, 5) 유용한 힌트 1) 수확 기증자 피부 : 프로토콜은 5 주요 구성 요소로 나누어져 있습니다. 일단 실력, 절차 자체가 수행하는 &lt;10 분 정도 소요됩니다.

Allogeneic 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 모델입니다. 이 비디오 문서 BALB/c--&gt; C57BL / 6 피부 이식을 수행에 관련된 각 단계의 영상 자습서를 제공합니다.

Murine 피부 이식

가장 엄격하면서도 기술적 난이도가 낮은 모델 중 하나인 피부 이식은 ...에 대한 숙주 T 세포 반응을 분석하는 표준 방법입니다.

Michael Kalen 박사의 연구실에 오신 것을 환영합니다. 저는 Kim Gard입니다. 오늘은 조직 이식 거부 반응의 가장 엄격하면서도 기술적으로 가장 까다롭지 않은 모델 중 하나인 동종 BC에서 black six 계통 조합을 이용한 피부 이식 모델을 시연하겠습니다.피부 이식은 동종 반응을 분석하는 데 사용되는 표준 기술이며, 다양한 면역 관용 유도 전략의 효율성을 평가하는 데 흔히 사용됩니다. 이제 시작하겠습니다. 이 절차는 BAB 공여 마우스로부터 피부를 채취하는 것으로 시작합니다.먼저 IACUC 표준작업지침서(SOP)에 따라 공여 동물을 안락사시킵니다. 그런 다음 알코올로 기저부의 털을 적시고, 귀를 기저부에 최대한 가깝게 제거하여 피부를 채취한 후 얼음에 둡니다. 다음으로, 각 귀에서 콜라겐성 복측 플랩(ventral flap)을 제거하여 분리하고 조직을 얼음 위에 띄워 둡니다.이제 공여 피부가 이식 준비되었습니다. 이식 절차는 승인된 절차에 따라 수혜 동물을 마취하는 것으로 시작합니다. 수혜 동물이 충분히 마취되면 챔버에서 동물을 꺼내고 통증 완화를 위해 bup와 next를 IP로 투여합니다.수혜 동물을 측위로 배치하고, 발가락 꼬집기 반응(toe pinch)을 통해 동물이 완전히 진정되었는지 확인합니다. 알코올을 묻힌 털을 집어 깎아냅니다. 수혜 동물의 털이 깨끗하게 제모되면, 약 1~2 cm 크기로 절개합니다.공여부 스캔 부위 위에 절개창을 배치하고, 멸균 면봉으로 과잉 액체를 제거합니다. 이제 공여부 피부 랩, 동물 및 붕대의 불필요한 부분을 조심스럽게 잘라냅니다. 호흡 상태를 평가하여 붕대가 너무 조이지 않는지 확인한 후, 팔이 자유롭게 움직이는지 점검하십시오.이제 단일 봉합사로 붕대를 고정합니다. 동물이 회복될 때까지 처음 몇 일 동안은 가열 램프가 있는 깨끗한 케이지에 마우스를 둡니다. 수술 후에는 하루에 두 번 정도 동물의 고통 징후를 관찰하고, 통증 완화를 위해 필요에 따라 bupvec을 투여해야 합니다.수술 후 5~7일이 지나면 붕대를 제거합니다. 이식 후 6일째 되는 수신자의 붕대 제거 과정을 시연하겠습니다. 마우스가 완전히 마취되면, 봉합사를 제거하고 뭉툭한 가위(blunt nose scissors)를 사용하여 붕대를 잘라낸 뒤, 이식 부위가 손상되지 않도록 주의하며 조심스럽게 제거하십시오.동물을 깨끗한 케이지로 옮기고 거부 반응 징후가 있는지 매일 모니터링하십시오. 선택한 계

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 보고서에서는, 우리는 3 차원의 피부 구조와 구성에 인간의 피부를 모방 모델을 재구성 설명합니다. Melanocyte 생리, 흑색증의 진행 및 피부 줄기 세포의 운명은 피부 모델을 재구성 사용하여 조사되었습니다. 모델은 또한 약물 평가를위한 잠복기 도구로 유용합니다.

3 차원의 인간 피부 모델을 재구성 : 도구는 일반 피부와 흑색증의 진행을 공부하기

이득 또는 손실 기능을 중재 할 lentivirus를 사용하여 머리 소낭 재생 모델의 조직 별 분석.

헤어 재생시 상피 - 중간 엽 시그널링의 빠른 유전 분석

이 비디오는 호중구 반응이 억제된 면역 결핍 마우스에 인간 피부를 이식하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 인간의 분할 두께 피부를 마우스의 이식 침대에 적용하고 밀봉한 다음 복구를 위해 덮는 것입니다. 결국 인간의 피부가 쥐의 피부에 달라붙어 혈관 형성과 순환을 확립하여 성공적인 피부 이종 이식을 가능하게 합니다.

마우스 모델에서 인간 피부 이식을 위한 기술

나이 세리아 수막염은 혈관을 감염시키는 인간의 특정 병원체이다. 이 프로토콜에서 인간의 미세 혈관은 면역 억제 쥐에 인간의 피부를 이식하여 마우스에 도입된다. 박테리아는 일반적으로 인간의 경우에 관찰 부르르 발진, 혈관 손상과 발전에 선도적 인, 인간의 혈관에 광범위하게 준수합니다.

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

꼬리 피부 이식은 생쥐의 동종 면역 반응 중 T 세포 의존적 거부 및 내성 유도를 연구하기 위한 강력한 모델입니다. 이 프로토콜의 장점은 경미한 침습적 수술과 수용 마우스를 희생할 필요 없이 모니터링이 용이하다는 것입니다.

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 설정에 거부 반응을 연구하는 잘 확립 된 모델이다. &gt; C57BL / 6 전층 피부 이식 - 여기, 우리는 BALB / C를 수행에 관련된 각 단계의 튜토리얼을 제공합니다.

쥐의 전체 두께 피부 이식

우리는 이러한 keratinocytes 및 섬유 아 세포를 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포 유래 keratinocytes 및 섬유 아 세포 분화 및 3D 피부 organoid, 생성 하는 방법을 보여 주는 프로토콜을 제안 합니다. 이 프로토콜 humanized 마우스 모델을 생성 하는 추가 단계를 포함 합니다. 여기에 제시 된 기술 피부과 연구를 향상 됩니다.

코드 혈액 파생에서 3D 피부 Organoid의 생성 유도 만능 줄기 세포

이 연구의 목적은 화상 상처 치유의 뮤린 모델을 개발하는 것이었습니다. 예열된 황동 템플릿을 사용하여 마우스의 등불 피부에 열 화상이 유도되었다. 연소된 조직은 유전적으로 유사한 기증자 마우스의 꼬리에서 수확한 피부 이식으로 파괴되고 겹쳐졌습니다.

동종 유전자 이식편으로 재구성된 화상 상처의 뮤린 모델

본 프로토콜은 비비만 당뇨병(NOD)-scid 인터루킨-2 감마사슬 수용체(NSG) 마우스에 인간 피부를 이식하는 방법을 설명합니다. 이식을 위한 인간 피부의 준비, 이식을 위한 마우스의 준비, 분할 두께의 인간 피부의 이식 및 이식 후 회복 절차에 대한 자세한 설명이 보고서에 포함되어 있습니다.

생체 내에서 인간 면역 반응을 조작하기 위한 이종이식 피부 모델

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

배우세요 BALB/c에서 C57BL/6으로의 피부 이식 기법을 통해 면역 거부 반응과 T세포 반응을 연구하는 방법을. 이 모델은 이식 생물학 및 면역학 연구에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

Murine 피부 이식

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