Name: Festuca rubra와 Zea mays의 뿌리에서 식민지화 패턴과 곰팡이 전략을 탐구하는 도구로서의 균근 지도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: 탐색하세요 MycoPatt 방법을 사용하여 Festuca rubra와 Zea mays 뿌리의 균근 식민지화 패턴을 정량적으로 분석하는 기술을. 이 프로토콜은 식물-진균 상호작용 메커니즘을 심층적으로 이해하는 데 활용됩니다.

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이 논문은 빅토리아 팝 몰도바 (Victoria Pop-Moldovan)가 수행 한 "농업 학적 투입물에 의해 구동되는 옥수수 균근 패턴"과 라리사 코르 코즈 (Larisa Corcoz)가 수행 한 "산 초원 우성 종의 균근 상태 및 식민지화 개발"이라는 주제 분야의 두 가지 박사 연구 결과를 얻은 데이터를 사용합니다.

1. 생물학적 물질 선택, 뿌리 샘플링 및 저장
<ol><li>각 변종에 대해 별도로 삽 (그림 1A)으로 식물의 전체 뿌리를 수집하고 복제하십시오. 뿌리에서 큰 토양 응집체를 손으로 부드럽게 제거하십시오. 전체 뿌리 시스템을 씻고 1cm x 1cm 셀로 눈금으로 측정하십시오 (그림 1B). 각 식물에 대해 뿌리를 따로 자르고 비닐 봉지에 넣으십시오.</li>
	<li>비닐 봉지에 각 식물의 깨끗한 뿌리를 모두 모으고 하나의 큰 봉지에 한 변종의 모든 샘플을 수집하십시오. 각 가방에 스테이지/변형 이름과 샘플링 날짜를 적습니다. 가공할 때까지 뿌리를 -4°C에서 -20°C 사이의 온도에서 냉장고 또는 냉동고에 보관하십시오.</li>
</ol>2. 현미경을 위한 뿌리 처리, 제거 및 염색
알림: 프로토콜의 이 단계에서는 장갑, 마스크 및 미생물학적/화학적 후드를 사용하십시오.
<ol><li>루트 해동 과정이 실온에서 천천히 수행되는지 확인하십시오. 모든 가공 단계에서 작은 항아리 (30-50 mL)를 사용하여 필요한 약제의 양을 줄이십시오.</li>
	<li>서른 클리어링 및 염색 절차15의 다음 4단계를 수행한다. 실온에서 모든 단계를 수행하십시오. 이 방법을 사용하면 끓기 위해 수조를 사용하지 않고도 동시에 많은 수의 샘플을 처리 할 수 있습니다.<ol><li>뿌리 정리 : 한 식물의 모든 뿌리를 항아리에 넣습니다. 수돗물로 10 % NaOH 용액을 준비하고 뿌리를 완전히 덮을 때까지 각 병에 부어 넣으십시오. 항아리를 1 분 또는 2 분 동안 격렬하게 흔들어 뿌리에 균일 한 맑은 용액이 분산되도록합니다. 24 시간 후에이 절차를 반복하고 적어도 48 시간 동안 클리어링 용액에 뿌리를 두십시오. 알림: 깨끗한 뿌리는 옅은 노란색 (흰색까지) 측면을 가지며 일관성이 부드럽습니다 (핀셋으로 눌러 쉽게 분쇄 할 수 있음).</li>
		<li>뿌리 헹굼 : 한 번에 한 병의 내용물을 체에 통과시킵니다. 클리어링 용액을 재활용하십시오. 클리어링 용액이 완전히 제거 될 때까지 수돗물로 뿌리를 여러 번 헹굽니다. 알림: 투명화 용액이 완전히 제거되지 않으면 염색 절차의 품질에 영향을 미칩니다.</li>
		<li>뿌리 염색 : 헹군 뿌리를 깨끗한 병에 넣으십시오. 수돗물(파란색 잉크 5mL + 9% 아세트산 5mL + 수돗물 90mL)로 5%:5% 잉크 식초 용액을 준비합니다. 뿌리를 완전히 덮을 때까지 각 병에 용액을 붓습니다. 항아리를 1 분 또는 2 분 동안 격렬하게 흔들어 뿌리에 균일 한 염색 용액 분산을 생성합니다. 24 시간 후에이 절차를 반복하고이 용액에 뿌리를 48 시간 동안 그대로 두십시오. 참고: 얼룩진 뿌리는 강렬한 파란색을 띠고 있습니다.</li>
		<li>뿌리 부분 얼룩 제거: 얼룩진 뿌리를 수돗물에 1-2분 동안 헹굽니다. 항아리를 세게 흔들어 여분의 얼룩 용액을 제거하십시오. 염색이 너무 강렬하고 명확한 현미경 평가를 허용하지 않는 경우 절차를 반복하십시오. 참고: 염색된 뿌리는 염색 품질을 변경하지 않고 실온에서 최대 1주일 동안 수돗물에 보관할 수 있습니다(그림 2). 더 오랜 기간 동안 뿌리는 5 % 상업용 사과 식초 용액 (5 % 아세트산)에서 최대 2-3 개월 동안 유지 될 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 현미경 검사를위한 루트 처리
<ol><li>뿌리 분할: 각 샘플의 염색된 뿌리를 스케일링된 도마에 놓습니다(그림 3A). 뿌리를 1cm 세그먼트로 자릅니다 (그림 3B). 각 변형에 대해 15개의 세그먼트를 선택합니다.</li>
	<li>세그먼트 준비를위한 부드러운 분쇄 방법 : 슬라이드에 뿌리를 펼칩니다. 라미네이팅 파우치를 사용하여 뿌리를 덮고 가장자리에서 시작하여 부드럽게 분쇄합니다(그림 3C, D). 핀셋, 메스 손잡이, 펜 또는 지우개가 달린 연필과 같은 부드러운 플라스틱 도구를 사용하여 슬라이드에 뿌리를 천천히 표시합니다. 라미네이팅 파우치를 조심스럽게 제거하고 커버슬립으로 샘플을 덮습니다(그림 3E). 참고 : 뿌리는 관형이므로 2 차원 평면에서 분리해야합니다. 이 동작은 중간 지점에서 뿌리가 분리되어 내경의 두 부분이 표시된다고 가정합니다. 부드러운 분쇄 절차에서 라미네이팅 파우치를 사용하면 실린더 형태의 뿌리를 왼쪽과 오른쪽에 하나씩 중간 지점을 향해 두 조각으로 표시 할 수 있습니다. 이러한 방식으로 전체 루트를 심층적으로 분석하고 집락 정도는 체적 식민지화를 보여주는 매개 변수입니다 (MycoPatt11의 원래 작업에 설명 됨). 기본적으로 실린더를 반으로 자른 후 수학적으로 다시 만듭니다.</li>
	<li>피펫으로 슬라이드 모서리에 물을 넣고 물이 슬라이드에 천천히 퍼지도록 합니다(그림 3F). 종이 타월로 여분의 물을 제거하십시오.</li>
</ol>4. 뿌리 샘플의 현미경 분석
<ol><li>좋은 해상도의 카메라가 장착 된 현미경을 사용하십시오.</li>
	<li>말단에서 시작하여 슬라이드를 분석합니다. 각 미세한 필드를 캡처합니다. 캡처된 각 이미지의 이름을 루트 파트의 실제 사후 조립을 허용하는 코드로 바꿉니다. 두꺼운 뿌리의 경우 10x 또는 40x 배율을 사용하고 얇은 뿌리의 경우 40x 배율을 사용합니다. 종의 전체 뿌리 집합에 대해 동일한 대물렌즈와 배율을 사용합니다.</li>
</ol>5. 현미경 후 이미지 조립
<ol><li>프레젠테이션 소프트웨어를 사용하여 이미지 조립을 위한 드로잉 보드를 디자인합니다. 너비를 이미지 너비보다 2-3cm 넓게 설정하십시오. 캡처 순서대로 한 세그먼트에서 캡처된 모든 이미지를 추가하고 루트 세그먼트의 전체 길이를 재구성합니다(그림 4A).<ol><li>간단히 말해서, 각 1cm 세그먼트에 대해 총 15개의 사진을 수집하고 프레젠테이션 소프트웨어에서 1에서 15까지 수직으로 구성하여 세그먼트를 재구성합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>이미지를 가운데에 맞춥니다. 수직 정렬을 사용하여 각 이미지가 이전 이미지를 따르도록 합니다. 모든 그림에서 전체 루트 세그먼트를 덮도록 10 셀 x 150 셀의 격자를 배치하십시오.<ol><li>또한 각 개별 그림에 10 x 10 격자를 배치하고 이 격자의 모든 셀에 AM 구조가 표시되는 경우 1에서 6까지의 숫자를 삽입하고 AM 구조가 없는 경우 비워 둡니다. 이러한 방식으로 공정의 정확도는 관찰되는 AM 구조의 위치에 오류가 없이 최대입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>너비가 10셀이고 길이가 150셀인 그리드에 대한 표를 추가합니다(10셀로 구성된 15제곱 x 10셀). 테이블 너비 치수를 이미지 너비로 변경합니다. 모든 이미지를 포함하도록 테이블의 길이를 변경합니다(그림 4B).</li>
</ol>6. 균근 집락의 점수 매기기
<ol><li>균근 패턴 방법11에 설명 된대로 각 유형의 구조를 점수화하기 위해 고유 번호를 사용하십시오 : 균사에 대한 1; 2 arbuscules; 소포의 경우 3; 포자의 경우 4; 보조 셀의 경우 5; 진입점의 경우 6입니다(그림 4C). 이전에 적용된 그리드의 각 세포에서 관찰된 각 균근 구조에 점수를 매깁니다(그림 4D).</li>
</ol>7. 원시 데이터 분석 및 결과 추출
<ol><li>획득한 모든 점수를 MycoPatt 스프레드시트(11)에 삽입한다. 복사/붙여넣기 기능을 사용하여 프레젠테이션의 모든 점수를 rawdata 라는 첫 번째 시트로 전송합니다(그림 5).</li>
	<li>결과의 기본 분석: MycoPatt 스프레드시트 도구에서 매개 변수라는 세 번째 시트를 사용하여 결과를 세 가지 형식으로 개별적으로 백분율(%)로 시각화합니다(그림 6A-C). A에서 K 열을 사용하여 식민지화의 수평 이미지를 분석합니다. 컬럼 M 내지 W 를 이용하여 식민지화의 수직 이미지를 분석하는 단계; 그리고 열 Y에서 AI로 15 개의 10 x 10 사각형 (2-17 행) 각각에 대한 횡단 (평균) 식민지화와 최종 평균 식민지화 (19-20 행)를 분석합니다. 참고: 횡단 평균 식민지화는 수평 및 수직 분석과 관련된 실제 식민지화 매개변수의 계산에 사용됩니다. 이러한 방식으로, 수평 또는 수직 분석만이 사용되는 경우와 비교하여 오류가 발생할 수 없다(원본 작업(11)에서 상세히 설명됨). 또한이 매개 변수 세트는 현미경 필드의 전체 표면에 대해 계산됩니다.<ol><li>각 매개 변수에 특정한 정의와 공식을 사용하여 결과를 분석하십시오11. 식민지화 빈도 (%), 식민지화 강도 (%), arbuscules (%) 및 소포 (%), 포자 (%) 및 보조 세포 (%), 진입 점 (%), 비 균근 영역의 백분율 (%), 전체 식민지화 정도 (%) 및 균근 / 비 균근 영역의보고. 참고: 분석된 샘플에서 arbuscules, 소포, 포자, 보조 세포 및 진입점이 누락된 경우 MycoPatt 스프레드시트는 이를 영(0)으로 채점합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>균근 지도의 생성 및 추출: MycoPatt 명명된 그래프의 두 번째 시트에서 균근 구조 코드를 색상으로 변환하여 얻은 이미지를 시각화 합니다 (그림 7A). 그래프 시트의 결과 이미지를 이미지로 내보냅니다(그림 7B). 균근 패턴 분석을 위해 범례의 색상 코드를 사용하십시오.</li>
	<li>균근 지도 분석: 균근 지도에서 가장 중요한 구조와 그 집합을 식별합니다. 분석된 뿌리에서 관찰된 균근 집락화 패턴을 설명하십시오. 뿌리에서 관찰된 구조적 발달, 분기 패턴 및 수목/소포 발달을 기반으로 한 균근 집락화 전략을 설명합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

균근 식민지화에 대한 연구는 농업 분야의 새로운 전략 개발에 필수적입니다. 여러 재배 식물이 arbuscular mycorrhizas와 공생 관계를 형성 할 수있는 잠재력은 농업 생태계의 지속 가능한 발전과 건강 유지의 중요한 구성 요소가되었습니다 16,17,18,19,20. 따라서 식물이 토양의 영양 네트워크, 수확량 및 생존 잠재력과 어떻게 연결될 수 있는지에 대한 필수 데이터를 제공하는 식민지화 메커니즘 및 곰팡이 전략에 대한 더 나은 이해가 필요합니다. 따라서 스마트 농업 맥락에서 이것은 금세기의 필수품이며 식민지화에 대한 심층적 인 평가를 수행하는 것이 중요하며 연구는 뿌리에서 곰팡이 위치에 대한 현실적인 이미지를 제공해야합니다.<...

Arbuscular mycorrhiza (AM) 곰팡이는 연구자들에게 지속적으로 관심있는 토양 매개 내생 식물의 범주입니다. 대부분의 식물의 뿌리에 존재하고 영양 순환에 관여하기 때문에 초본 식물이 존재하는 모든 생태계의 안정성에 중요한 구성 요소가 됩니다 1,2. 그들의 여분의 방사상 균사체를 통해 AM은 특히 도달하기 어려운 지역에서 식물 뿌리에 대한 곰팡이 확장 역할을합니다3. 주요 활동은 숙주 식물 뿌리에 있으며, AM은 큰 균사 네트워크와 arbuscules라고하는 특정 세포 내 구조를 개발합니다. 숙주 특이성이 없기 때문에 공생체가 동시에 여러 종을 식민지화 할 수 있습니다. 이 능력은 AM에게 생태계에서 자원 할당 및 영양 조절의 역할을 제공합니다. 곰팡이는 또한 식물 생존을 지원하고 식물 성능 4,5,6,7을 돕습니다. 숙주 뿌리에 대한 AM 종의 반응은 방사상 내 균사체의 확장 및 위치 및 세포 내에서 발달 된 arbuscules의 존재와 모양에서 볼 수 있습니다. 세포 내 arbuscules는 두 공생 사이의 교환 지점 역할을하며 빠른 전달 과정을 특징으로하는 영역을 나타냅니다. AM이 생산하는 구조는 종 의존적이며 뿌리에서 arbuscules 외에도 소포, 포자 및 보조 세포를 개발합니다.
식물 뿌리 8,9에서 AM 공생체를 평가하는 데는 많은 어려움이 있습니다. 첫 번째는 숙주의 전체 식생 기간 동안 지속적으로 발달하여 균사 arbuscular 구조에 여러 가지 변화를 가져옵니다. 붕괴까지의 arbuscular 성장의 여러 단계는 뿌리에 분명히 존재하지만, 노화 AM 구조는 때때로 소화되어 부분적으로 만 볼 수 있습니다10. 두 번째 과제는 염색 방법 및 프로토콜, 뿌리 시스템의 다양성, 세포의 크기 및 두께의 차이로 대표되며, 이로 인해 통일 된 방법을 제안하기가 어렵습니다. 마지막 도전은 AM 식민지화의 평가 및 점수로 표현됩니다. 다양한 객관성으로 AM에 점수를 매기는 방법은 여러 가지가 있으며 대부분은 여전히 현미경 기술로 제한됩니다. 단순한 것들은 뿌리 피질의 구조 유무를 기반으로하는 반면, 더 복잡한 것들은 식민지 현상의 빈도와 강도의 통합과 함께 시각적 점수 매기기와 식민지화 클래스의 사용을 기반으로합니다. 지난 수십 년 동안 여러 종의 균근 상태에 대한 많은 데이터가 생성되었지만 대부분의 방법은 뿌리 피질의 각 구조의 실제 위치를 가리 키지 않고 관찰 된 식민지화 값으로 제한됩니다. AM 집락화에 대한 보다 정확한 결과의 필요성에 대한 응답으로, 뿌리의 균근 패턴(MycoPatt)의 현미경 분석에 기초한 방법이 개발되어 상세한 균근 지도(11)를 디지털 형태로 조립했습니다. 또한이 방법을 사용하면 식민지화 매개 변수를 객관적으로 계산하고 루트에서 각 구조의 실제 위치를 결정할 수 있습니다.
AM 곰팡이 구조의 위치는 다음 두 가지 질문에 답하는 데 중요 할 수 있습니다. 첫 번째는 식물의 식생주기에서 특정 순간의 식민지화 분석과 관련이 있습니다. 이러한 맥락에서 수목/소포 풍부도를 관찰하고, 뿌리에 어떻게 위치하는지 보고하고, 매우 명확한 식민지화 이미지와 매개변수를 제공하는 것이 매우 유용합니다. 두 번째는 곰팡이 전략의 탐지와 그 방향, 심지어 미래 발전의 예측과 관련이 있습니다. MycoPatt의 한 가지 응용 분야는 매일, 2-3일마다, 매주 또는 다양한 성장 단계에서 분석된 식물을 위한 것입니다. 이러한 맥락에서 소포 / arbuscules의 위치는 AM 식민지화의 생물학적 메커니즘을 더 잘 이해하는 데 중요합니다. 이러한 매개 변수와 관찰은 수학적 매개 변수를 보완하는 데 매우 유용합니다.
이 기사의 목적은 MycoPatt 시스템이 다양한 발달 단계에서 Zea mays (옥수수) 뿌리와 다양한 장기 수정 조건에서 Festuca rubra (붉은 페스 큐) 뿌리에서 토착 AM 곰팡이 식민지화 잠재력과 전략을 탐구 할 수있는 능력을 입증하는 것입니다. 목표를 달성하기 위해 두 번의 실험에서 두 개의 큰 데이터베이스를 분석했습니다. 옥수수 실험은 Cojocna (북위 46 ° 44′ 56 "및 길이 23 ° 50′0")에서 확립되었습니다. E), 농업 과학 및 수의학 대학의 실험 교훈 농장에서 Cluj는 양토 질감의 토양을 가진 phaeoziom에12. 적색 페스큐 실험은 2001년 아푸세니 산맥의 게샤리(북위 46°49'064" 및 길이 22°81'418'')에 설립된 더 큰 실험 사이트의 일부입니다. E), 프렐루보솔(테라로사) 토양 유형13,14. 옥수수는 5 개의 다른 성장 표현상12에서 수집되었다 : B1 = 2-4 잎 (균근 식민지화 시작을위한 조절점으로서); B2 = 6 잎; B3 = 8-10 잎; B4 = 개암 나무 열매 형성; B5 = 생리적 성숙도. 2-4 잎 단계 (A0)에서 시작하여 유기 처리가 적용되어 2 개의 눈금 계수 (A1 = 대조군 및 A2 = 처리)가 발생했습니다. 붉은 fescue의 뿌리는 5 개의 장기 수정13,14 실험에서 개화시 수집되었습니다 : V1 = 대조군, 비 수정; V2 = 10 t·ha-1 분뇨; V3 = 10 t·ha-1 분뇨 + N 50 kg·ha-1, P 2 O5 25kg·ha-1, K2O 25 kg·ha-1; V4 = N 100 kg·ha-1, P2O5 50 kg·ha-1,K2O50 kg·ha-1; V5 = 10 t·ha-1 분뇨 + N 100 kg·ha-1, P 2 O5 50kg·ha-1, K2O 50 kg·ha-1. 각 개발 단계에서 모든 수정 변종에서 5 개의 식물을 수집했습니다. 염색 프로토콜과 샘플 처리 시간 및 염색 품질 측면에서 그 성능을 분석했습니다. AM 균사 발달과 뿌리에서의 구조 존재 사이의 관계는 각 종에 대해 개별적으로 분석되었으며 식민지화에 가장 관대 한 뿌리를 식별하는 것으로 계속되었습니다. 각 루트 시스템의 특정 식민지화 패턴은 식민지화 맵과 AM 매개 변수의 값을 기반으로 분석되었습니다.
옥수수는 뿌리의 지속적인 성장을 의미하는 일년생 식물이며, 이것이 성장 단계에서 MycoPatt를 적용하는 주된 이유였습니다. Red fescue는 다른 비료로 오랫동안 처리 된 초원의 다년생 식물입니다. 그것의 뿌리는 1 년의 더 짧은 발달을 가지고 있고, anthesis는 식물이 신진 대사를 식물에서 생식으로 바꿀 때 식생 지점으로 간주됩니다. 이 강렬한 활동 기간 동안 이러한 식물을 잡기 위해 위에서 언급 한 시점이 선택되었습니다. 식생 기간 동안의 샘플링은 자연 초원에서 재배 될 때이 종에 대해 어렵습니다.

<table><tbody><tr><td>사과 식초 5%</td><td>FABRICA DE CONSERVE RAURENI S.R.L.</td><td>O?ET DE MERE</td><td></td></tr> https://www.raureni.ro/ro-ro/produs/otet-de-mere <tr><td>블루 잉크</td><td>Pelikan</td><td>4001</td><td>https://www.pelikan.com/pulse/Pulsar/ro_RO.Store.displayStore.224848./cerneal%C4%83-4001-de-la-pelikan</td></tr><tr><td>커버 슬립</td><td>Menzel-Glaser</td><td>D 263 M</td><td>https://si.vwr.com/store/product/20545757/cover-glasses-menzel-glaser</td></tr><tr><td>집게, PMP</td><td>Vitalab</td><td>9.171 411</td><td>http://shop.llg.de/info881_Forceps_PMP_lang_UK. htm? UID=55005bf838d80000000000000 & 앰프; OFS=33</td></tr><tr><td>유리병 47mL</td><td>인디고 카드</td><td>BORCAN 47ML 육각형</td><td>https://indigo.com.ro/borcan-47-ml-hexagonal</td></tr><tr><td>라미네이팅 파우치</td><td>복숭아</td><td>PP525-08</td><td>명함(60x90mm) / https://supremoffice.ro/folie-laminare-60x90mm-125mic-carte-vizita-100-top-peach-pp525-08-510328</td></tr><tr><td>마이크로플로우 클래스 II ABS 캐비닛</td><td>Bioquell UK Ltd</td><td>마이크로플로우 클래스 II ABS 캐비닛</td><td>http://www.laboratoryanalysis.co.uk/graphics/products/034_11%20CLASS%202BSC%20(STD).pdf</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Deltalab</td><td>D100001</td><td>https://distrimed.ro/lame-microscop-matuite-la-un-capat-26x76-mm-deltalab/?utm_source=Google%20Shopping&utm_campaign= google%20shopping%20distrimed& utm_medium=CPC& utm_term=1647& gclid=CjwKCAjwu YWSBhByEiwAKd_n_odzr8CaCXQ hl9VQkAB3p-ODo2Ssuou9cnoRtz1Gb xsjqPY7F05HmhoCj6oQAvD_BwE</td></tr><tr><td>Microsoft Office 365</td><td>Microsoft</td><td>Office 365</td><td>Excel 및 Powerpoint; 스프레드시트 및 프레젠테이션</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Oltchim</td><td>01-2119457892-27-0065</td><td></td></tr><tr><td>http://www.sodacaustica.com.ro/pdf/fisa-tehnica-soda-caustica.pdf 니트릴 장갑</td><td>SemperGuard</td><td>816780637</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/RO/en/product/aldrich/816780637?gclid=CjwKCAjwuYWSBhByEiwAKd _n_rmo4RRt8zBql7ul8ox AAYhwhxuXHWZcw4hlR x0Iro_4IyVt69aFHRoCmd wQAvD_BwE</td></tr><tr><td>Optika 사진기</td><td>OPTIKA</td><td>CP-8; P8 프로 카메라, 8.3 MP CMOS, USB 3.0</td><td>https://www.optikamicroscopes.com/optikamicroscopes/product/c-p-series/</td></tr> <tr><td>Optika 현미경</td><td>OPTIKA</td><td>B383pL</td><td>https://www.optikamicroscopes.com/optikamicroscopes/product/b-380-series/</td></tr> <tr><td>보호 마스크 FFP3</td><td>헤르메스 선물</td><td>HERMES000100</td><td>EN 149-2001 + A1 : 2009 / https://www.emag.ro/set-10-masti-de-protectie-respiratorie-hermes-gift-ffp3-5-straturi-albe-hermes000100/pd/DTZ8CXMBM/#specification-section</td></tr><tr><td>메스</td><td>컷픽</td>스 <td>9409814</td><td>https://shop.thgeyer-lab.com/erp/catalog/search/search.action;jsessionid=C258CA 663588CD1CBE65BF 100F85241B?model.query=9409809</td></tr><tr><td>화이트 와인 식초 9%</td><td>FABRICA DE CONSERVE RAURENI S.R.L.</td><td>O?ET DE VIN ALB</td><td></td></tr></tbody></table> https://www.raureni.ro/ro-ro/produs/otet-de-vin-alb

festuca rubra와 zea mays의 뿌리에서 식민지화 패턴과 곰팡이 전략을 탐구하는 도구로서의 균근 지도

Mycorrhizal Maps as a Tool to Explore Colonization Patterns and Fungal Strategies in the Roots of Festuca rubra and Zea mays

Arbuscular 균근 곰팡이는 식물의 뿌리에있는 공생체입니다. 그들의 역할은 숙주 발달을 유지하고 생태계의 영양 균형을 유지하는 것입니다. 식민지화 과정은 토양 생태학, 곰팡이와 숙주의 유전 적 다양성, 농업 관행과 같은 여러 요인에 따라 달라집니다. 그들의 동기화 된 작용은 복잡한 균사 네트워크의 발달로 이어지고 뿌리 세포에서 소포와 arbuscules의 2 차 발달로 이어진다. 이 연구의 목적은 Festuca rubra 및 Zea mays의 뿌리에서 곰팡이 구조의 위치를위한 균근 패턴 (MycoPatt) 방법의 효율성을 분석하는 것이 었습니다. 또 다른 목표는 각 종의 균근 지도에 의해 밝혀진 곰팡이 식민지화 전략을 탐구하는 것이었습니다. 여러 현미경 이미지의 획득 및 조립을 통해 옥수수 및 적색 페스 큐 식물 모두에서 균근 집락 평가를 통해 개발 된 구조의 실제 위치에 대한 정보를 제공 할 수 있습니다. 관찰 된 균근 패턴은 적용된 처리 및 성장 단계로 인한 토양 공생 균류와의 연결 개발 측면에서 각 식물의 다양한 효율성을 강조합니다. MycoPatt 방법을 통해 얻은 Mycorrhizal 상세지도는 토양에서 공생 획득에서 식물 효율성을 조기에 감지하는 데 유용합니다.

염색 절차 후 뿌리의 부드러운 분쇄 방법을 올바르게 사용하면 Zea mays (그림 8A-C)와 Festuca rubra (그림 9A-E) 모두에 대해 균근 구조에 대한 좋은 세부 사항, 균근 구조와 뿌리 세포 사이의 좋은 대비, 파란색으로 인한 비석 확인. 세척 및 염색 절차가 성공하지 못하면 뿌리 샘플을 분쇄하기 어렵고 균근 구조가 명확하게 표시되지 않습니다(그림 10A-E). 이 경우 전체 클리어링 염색 절차를 반복하십시오.
균근 패턴 방법과 MycoPatt 도구를 사용하여 식민지화 메커니즘을 완전히 탐구...

여기의 프로토콜은 Zea mays 와 Festuca rubra의 두 종에 대한 뿌리의 arbuscular mycorrhizal 식민지화 패턴과 전략을 평가하는 방법을 설명합니다. MycoPatt 방법을 사용하면 매개 변수 계산, 균근 구조를 디지털 데이터로 변환하고 뿌리에서 실제 위치를 매핑 할 수 있습니다.

Festuca rubra와 Zea mays의 뿌리에서 식민지화 패턴과 곰팡이 전략을 탐구하는 도구로서의 균근 지도

Arbuscular mycorrhizal fungi are symbionts in the roots of plants. Their role is to sustain host development and maintain the nutritional equilibrium in ...

MycoPatt 방법은 뿌리의 수목 균근 집락에 대한 심층적 인 탐구를 허용합니다. 균근 지도는 곰팡이 확장을 가리키며 각 구조의 실제 위치를 특정 패턴으로 제시합니다. 균근 집락화는 1% 분해능으로 객관적으로 분석됩니다.각 루트 세그먼트는 자동으로 디지털 매트릭스로 변환되고 식민지화 매개 변수의 광범위한 데이터베이스를 생성합니다. 시작하려면 냉장고에서 뿌리를 제거하고 실온에서 해동하기 위해 작업 플랫폼에 놓습니다. 뿌리 청소를 수행하려면 한 식물의 모든 뿌리를 30-50 밀리리터 병에 넣은 다음 수돗물로 10 % 수산화 나트륨 용액을 준비하고 뿌리를 완전히 덮을 때까지 항아리에 붓습니다.뿌리에 맑은 용액이 균질하게 분산되도록 항아리를 1-2 분 동안 격렬하게 흔 듭니다. 뿌리가 48 시간 동안 클리어링 용액에 남아 있도록하십시오. 뿌리 헹굼을 위해 항아리의 내용물을 체에 통과시킵니다.클리어링 용액이 완전히 제거 될 때까지 수돗물로 뿌리를 여러 번 헹굽니다. 다음으로 헹구어 진 뿌리를 깨끗한 병에 넣어 염색하십시오. 그런 다음 수돗물로 5-5 % 잉크 식초 용액을 준비하십시오.뿌리를 덮을 때까지 항아리에 붓고 1-2 분 동안 흔 듭니다. 부분 염색을 위해 48 시간 후, 얼룩진 뿌리를 수돗물로 1-2 분 동안 헹굽니다. 항아리를 세게 흔들어 여분의 얼룩 용액을 제거하십시오.현미경 평가를 위해 뿌리가 깨끗해질 때까지 절차를 반복하십시오. 뿌리 분할의 경우 얼룩진 뿌리를 스케일링 된 도마 위에 놓습니다. 뿌리를 1 센티미터 세그먼트로 자릅니다.각 변형에 대해 15개의 세그먼트를 선택합니다. 다음으로, 세그먼트 준비를 위해 슬라이드에 뿌리를 펼치고 라미네이팅 파우치를 사용하여 뿌리를 덮고 가장자리에서 시작하여 부드럽게 분쇄하십시오. 부드러운 플라스틱 도구를 사용하여 슬라이드에 뿌리를 표시합니다.라미네이팅 파우치를 조심스럽게 제거하고 커버 슬립으로 샘플을 덮습니다. 피펫으로 슬라이드 모서리에 물을 넣고 물이 슬라이드에 천천히 퍼지도록하십시오. 종이 타월로 여분의 물을 제거하십시오.현미경 분석을 위해서는 해상도가 좋은 카메라가 장착 된 현미경을 사용하십시오. 말단에서 시작하여 슬라이드를 분석합니다. 각 미세한 필드를 캡처합니다.두꺼운 뿌리에는 10 또는 40x 배율을 사용하고 얇은 뿌리에는 40x 배율을 사용합니다. 캡처 후 루트 파트의 실제 조립을 허용하는 코드로 각 이미지의 이름을 바꿉니다. 프리젠 테이션 소프트웨어를 사용하여 이미지 조립을위한 드로잉 보드를 디자인하고 너비를 이미지 너비보다 2-3 센티미터 넓게 설정하십시오.15장의 사진을 캡처한 후 한 세그먼트에서 캡처한 모든 이미지를 1부터 15까지 캡처 순서대로 추가하고 루트 세그먼트의 전체 길이를 재구성합니다. 그런 다음 수직 정렬을 사용하여 이미지를 중앙에 정렬하고 각 이미지가 이전 이미지를 따르는지 확인합니다. 전체 루트 세그먼트를 덮기 위해 모든 그림에 10 x 150 셀의 격자를 배치합니다.또한 각 그림과 이 격자의 모든 셀에 10 x 10 격자를 배치하고 수막 균근 또는 AM 구조가 보이는 경우 1에서 6까지의 숫자를 삽입하고 AM 구조가 없는 경우 비워 둡니다. 너비가 10셀이고 길이가 150셀인 그리드에 대한 표를 추가합니다. 치수가 있는 표를 이미지의 너비로 변경한 다음 모든 이미지를 포함하도록 표의 길이를 변경합니다.균근 집락화를 채점하려면 고유 번호를 사용하여 균근 패턴 방법에 설명된 대로 각 유형의 구조에 점수를 매깁니다. 균사에 1 개, arbuscules에 2 개, 소포에 3 개, 포자에 4 개, 보조 세포에 5 개, 진입 점에 6 개를 사용하십시오. 이전에 적용된 그리드의 각 세포에서 관찰된 각 균근 구조에 점수를 매깁니다.채점 후 얻은 모든 점수를 MycoPatt 스프레드시트에 삽입합니다. 복사 붙여넣기 기능을 사용하여 프레젠테이션의 모든 점수를 Raw Data라는 첫 번째 시트로 전송합니다. 기본 분석의 경우 매개 변수라는 세 번째 시트를 사용하여 결과를 세 가지 형식으로 개별적으로 백분율로 시각화합니다.A열부터 K열까지 사용하여 식민지화의 수평 이미지를 분석하고, M에서 W 열을 사용하여 식민지화의 수직 이미지를 분석하고, Y 열에서 AI를 사용하여 15 10 x 10 제곱 각각에 대한 횡단 식민지화와 최종 평균 식민지화를 분석합니다. 다음으로, 각 매개 변수와 관련된 정의와 수식을 적용합니다. 균근 지도의 생성 및 추출을 위해 균근 구조 코드를 Graphs라는 두 번째 시트의 색상으로 변환하여 얻은 이미지를 시각화합니다.그런 다음 그래프 시트의 결과 이미지를 이미지로 내보내고 범례의 색상 코드를 사용하여 균근 패턴을 분석합니다. 균근 지도 분석을 위해 가장 중요한 구조와 그 집합을 식별합니다. 그런 다음 분석된 뿌리에서 관찰된 균근 집락화 패턴을 설명한 다음 뿌리에서 관찰된 구조적 발달, 분기 패턴 및 수목 소포 발달을 기반으로 한 집락화 전략을 설명합니다.이 프로토콜은 균근 구조와 Zea mays 및 Festal rubra의 뿌리 세포 사이의 좋은 대비와 함께 균근 구조의 세부 사항을 제공합니다. 실패한 제거 및 염색 절차로 인해 Festal rubra 및 Zea mays에서 균근 구조의 불분명 한 현미경 이미지가 생성되었습니다. 균근 식민지화 패턴은 식민지화 메커니즘의 완전한 탐구를 허용했으며, 이 방법은 식민지화 매개변수의 추가 시각적 표현과 함께 Zea mays 및 Festuca rubra에 대한 식민지화 패턴 및 전략에 대한 심층적이고 작은 규모의 탐색을 제공합니다.Zea mays에서는 식물의 발달 단계에 따라 매우 변동하는 식민지화 잠재력이 관찰되었지만 Festuca rubra에서는 뿌리 내부에서 식민지화 과정이 일어나고 균사 네트워크의 발달은 뿌리의 낮은 발달 속도와 상관 관계가 있습니다. MycoPatt는 모든 식물에서 수목 균근 집락을 매핑하는 데 적합합니다. 식민지화 메커니즘을 완전히 탐구하고 뿌리를 따라 곰팡이 전략을 평가하는 것도 도움이됩니다.

mycorrhizal-maps-as-tool-to-explore-colonization-patterns-fungal

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

필드에서 식물 뿌리의 발굴 뿐만 아니라 endosphere, rhizosphere, 및 토양 샘플의 처리는 DNA 추출 및 데이터 분석 방법 등 자세하게에서 설명 되어 있습니다. 이 문서는 토양, endosphere, rhizosphere microbiomes의 연구에 대 한 이러한 기법을 사용 하 여 다른 실험실을 사용 하도록 설계 되었습니다.

절연 및 토양, Rhizosphere, 및 다년생 잔디 실험에 뿌리에서 미생물 커뮤니티의 분석

가능성이 커뮤니티 내에서 대부분의 식물은 arbuscular 균 류 (오전) mycorrhizal, 연결 되어 있지만 식물 상호 작용 그들에 의해의 중재 없이 mycorrhizas 대와 식물 성장에 의해 주로 조사 되었습니다. 우리는 공장 상호 작용에 대 한 그들의 결과 조사 하는 mycorrhizal 식물 중 일반적인 mycorrhizal 네트워크를 조작 하는 방법을 제시.

회전 된 코어를 사용 하 여 일반적인 Mycorrhizal 네트워크를 통해 상호 작용 식물의 조사

이 프로토콜은 균근 진균으로 발아된 식물 조직 및 종자에서 진균 집락을 연구하기 위해 주사 및 투과 전자 현미경, 빛, 공초점 및 형광 현미경과 같은 다양한 현미경 기술을 적용하여 진균종속영양 식물 샘플을 수집, 고정 및 유지하기 위한 자세한 절차를 제공하는 것을 목표로 합니다.

균종속영양 식물 조직의 곰팡이 집락화 및 종자의 공생 발아를 해석하기 위한 현미경 기술

토양의 불투명도로 인해 구성 미생물 간의 상호 작용은 세포 분해능으로 쉽게 시각화 될 수 없습니다. 여기에서는 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 새로운 기회를 제공하는 두 가지 미세 유체 도구가 제시됩니다. 이 장치는 다재다능하고 사용하기 쉬우므로 세포 수준에서 높은 시공간 제어 및 고해상도 이미징이 가능합니다.

세포 수준에서 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 미세 유체 도구

현재 논문은 식물 관련 내생균의 분리, 분리물의 장기 보존, 형태학적 특성 분석 및 후속 분자 식별 및 균유전체 분석을 위한 전체 DNA 추출을 위한 상세하고 적절한 프로토콜을 제공하는 것을 목표로 합니다.

Mycoheterotrophic 식물에서 내생균 균류를 식별하기 위한 분리, 특성화 및 전체 DNA 추출

이 원고는 곰팡이 식물 병원체와의 옥수수 상호 작용에 대한 재현 가능한 세포학적, 생리학적, 분자적 연구를 위해 분리된 옥수수 잎 덮개를 사용하는 최적화된 접종 프로토콜을 자세히 설명합니다. 잎 덮개는 고정되지 않은 조직에서 살아있는 식물과 곰팡이 사이의 세포 상호 작용을 실시간으로 관찰할 수 있도록 합니다.

곰팡이 잎 옥수수 병원체에 의한 감염의 살아있는 세포 이미징을 위한 분리된 옥수수 덮개

여기에서는 초흡수성 고분자 기반 독립 영양 시스템에서 arbuscular mycorrhizal fungi를 접종하고 관찰하기 위한 간단하고 저렴한 기술에 대해 설명합니다.

Superabsorbent Polymer-based Autotrophic Systems에서 Arbuscular Mycorrhizal Cultures 접종 및 관찰

이 문서에서는 벼의 AM 강화 염분 스트레스 내성을 조사하기 위해 수목 균근(AM) 곰팡이 접종물을 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

수목 균근(AM) 곰팡이 접종물 생산 및 식염수 조건에서 쌀과 AM 공생의 표현형 평가

여기에서 우리는 P. blakesleeanus 짝짓기의 유도를 위한 기본 프로토콜을 제시합니다.

Mucoromycete Phycomyces blakesleeanus를 가진 성적 십자가

클레멘 타인 기술은 microinjected 분자에 의해 영향을 멤브레인, 세포 소기관, 그리고 subcellular 구조 ultrastructural 형태를 분석하도록 구성되었습니다. 이 방법은 다중 나노 미터 해상도 밀리미터 수 있도록 미세 조작 / microinjection의 강력한 기술, 공 촛점 형광 현미경 및 전자 현미경을 자랑합니다. 이 기술은 응용 프로그램의 다양한 의무가 있습니다.

도구로 상호 빛과 전자 현미경 (클레멘 타인)는 Microinjected 분자와 진핵 세포 하위 세포 목표를 시각화하는 방법

탐색하세요 MycoPatt 방법을 사용하여 Festuca rubra와 Zea mays 뿌리의 균근 식민지화 패턴을 정량적으로 분석하는 기술을. 이 프로토콜은 식물-진균 상호작용 메커니즘을 심층적으로 이해하는 데 활용됩니다.

Festuca rubra와 Zea mays의 뿌리에서 식민지화 패턴과 곰팡이 전략을 탐구하는 도구로서의 균근 지도

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