An Optimized Single-Molecule Pull-Down Assay for Quantification of Protein Phosphorylation

Elizabeth M. Bailey; Emanuel Salazar-Cavazos; Rachel M. Grattan; Michael J. Wester; David J. Schodt; Julian A. Rojo; Keith A. Lidke; Diane S. Lidke

doi:10.3791/63665

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

An Optimized Single-Molecule Pull-Down Assay for Quantification of Protein Phosphorylation

단백질 인산화의 정량화를 위한 최적화된 단일 분자 풀다운 분석

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07:45 min

June 6, 2022

DOI: 10.3791/63665-v

Elizabeth M. Bailey¹, Emanuel Salazar-Cavazos¹, Rachel M. Grattan¹, Michael J. Wester², David J. Schodt², Julian A. Rojo¹, Keith A. Lidke^2,3, Diane S. Lidke^1,3

¹Department of Pathology,University of New Mexico School of Medicine, ²Department of Physics and Astronomy,University of New Mexico, ³Comprehensive Cancer Center,University of New Mexico Health Sciences Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

본 프로토콜은 개선된 단일 분자 풀다운(SiMPull) 분석을 사용하여 단백질 인산화를 정량화하기 위한 샘플 준비 및 데이터 분석을 기술한다.

이 SiMPull 프로토콜은 항체 표지 및 고정 조건을 개선하고 녹색 채널에서 발견되는 자기 형광을 줄이며 강력한 단일 분자 분석 알고리즘을 제공함으로써 단백질 인산화의 정량화를 가능하게합니다. SiMPull의 주요 장점은 개별 손상되지 않은 단백질의 인산화 상태를 조사 할 수 있다는 것입니다. 이 방법을 사용하면 웨스턴 블롯팅 및 질량 사양 분석과 같은 전통적인 기술을 통해 액세스 할 수없는 새로운 정보를 얻을 수 있습니다.

우리는 프로토콜을 시연하는 데 도움이되는 연구원 팀을 보유하고 있습니다. 먼저, 줄리안 로조 (Julian Rojo)는 피라냐가 커버 글라스를 에칭하는 방법을 보여줄 것입니다. Rachel Grattan은 커버 글라스를 코팅하는 단계를 보여줍니다.

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