Theiler's 쥐 뇌척수염 바이러스를 이용한 감염성 병인의 간질 모델

TMEV 모델은 CNS 감염의 결과로 발작 발달 메커니즘을 조사할 수 있는 최초의 실험 플랫폼 중 하나입니다. 중추 신경계 감염은 간질의 위험을 크게 증가시킵니다. 이러한 모델은 위험에 처한 환자에 대한 잠재적인 치료 표적 및 화합물을 식별하는 데 도움이 됩니다.

실험자는 생쥐 작업에 대한 교육을 받아야합니다. 바이러스 주입은 충분한 정밀도와 루틴을 달성하기 위해 죽은 동물에 염료를 주입하여 매우 잘 연습할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 대학원생 인 Laura Bell이 될 것입니다.

시작하려면 인슐린 주사기의 캡을 제거하고 폴리에틸렌 튜브를 바늘 주위에 고리로 추가하여 2.5mm의 적절한 주입 깊이를 보장합니다. 그런 다음 주사기를 에탄올에 30분 동안 담그고 주사기를 UV 광선 아래에 30분 동안 두십시오. 그런 다음 캡을 바늘에 다시 끼우고 주사기를 멸균 파우치에 싸십시오.

파우치를 테이프로 감아 닫고 준비 날짜를 적습니다. 바이러스 주입을 수행하려면 섭씨 영하 80도 냉동고에서 TMEV의 Daniels 균주 분취량을 가져옵니다. 바이러스를 해동하고 얼음 위에 보관하십시오.

그런 다음 주사기에 바이러스 현탁액을 넣으십시오. 그런 다음 소독제로 벤치를 청소하고 흄 흡수기 아래에서 작업하십시오. 후드 아래의 마취 상자에서 마취 된 마우스를 옮기고 발가락 핀치를 수행하여 수술 내성을 확인합니다.

그런 다음 알코올 패드로 동물의 머리를 닦고 주사 부위가 위쪽을 향하도록 마우스의 머리를 약간 왼쪽으로 기울입니다. 피부를 약간 뒤로 당기고 바늘을 머리에 삽입하십시오. 다음으로, 우반구의 측두엽 영역에서 2.5 밀리미터의 깊이까지 20 마이크로 리터를 intracordically 주입한다.

주사기를 5-15초 동안 그대로 두고 주사로 인한 누출이 있는지 또는 기포가 보이면 새 주사기를 준비합니다. 주사기를 조심스럽게 빼낼 때 약간 돌립니다. 그런 다음 동물을 마취에서 회복하는 동안 가열 패드를 반쯤 떼어 놓은 새 케이지로 옮깁니다.

그리고 흉골 누운 자세를 유지하기에 충분한 의식을 회복 할 때까지 동물을 방치하지 마십시오. 먼저, 모든 케이지를 벤치로 가져 와서 가벼운 단계에서 하루에 두 번 발작을 관찰하십시오. 수정된 경주 척도로 발작 활동의 점수를 매기고 발작의 횟수와 강도를 보고합니다.

그런 다음 새장을 가로질러 펜을 밀어 약간의 소음을 내고 각 동물을 다른 상자로 옮겼다가 다시 옮깁니다. 자발적으로 또는 케이지를 부드럽게 흔든 후 포착되지 않은 동물의 경우 꼬리를 왼쪽에서 오른쪽으로 뒤집어 조심스럽게 뒤집으면서 더 강렬한 취급으로 발작을 유발합니다. 발작 행동에 대해 각 동물을 다시 관찰하고 후속 케이지에 대해 이 과정을 반복합니다.

약물 주사 중 또는 후속 발작 처리 모니터링 세션 중에 발생한 경우 행동 발작이 기록되었습니다. 관찰된 데이터는 발작 단계를 다양한 색상으로 묘사하여 생성된 히트 맵으로 제시되었습니다. EEG를 기록함으로써 TMEV 감염 후 몇 달 동안 만성 단계에서 다양한 간질 사건을 확인할 수 있습니다.

해마 변성 및 간질 TMEV 감염 마우스의 정량화는 대조군에 비해 TMEV 마우스의 해마 면적의 현저한 감소 및 그에 상응하는 심실 면적의 증가를 보여줍니다. 면역조직학적 분석은 염증 세포의 존재와 같은 다양한 매개변수에 대한 정보를 제공할 수 있습니다. 이 경우, 해마를 함유하는 절편을 T 림프구를 표지하는 항체로 염색하였다.

모의-감염된 동물은 T-세포 침윤을 나타내지 않는 반면, TMEV-감염된 마우스의 대다수에서 중간 정도의 침윤이 나타났다. 감염된 마우스의 일부는 T 림프구의 심각한 침윤을 나타낸다. 모든 동물이 각 관찰 기간 동안 발작을 일으키는 것은 아닙니다.

또한 발작 발생률이 가장 높은 것은 접종 후 5 일과 6 일에 발생합니다. 우리는 TMEV 모델을 사용하여 감염 유발 발작에 대한 새로운 항발작 약물의 효능을 테스트합니다. 동반이환 행동 변화 및 전기생리학적 변화를 조사하는 분석법도 평가할 수 있습니다.

TMEV 모델은 간질 연구 커뮤니티에 측두엽 간질의 첫 번째 CNS 감염 유발 모델을 제공하여 감염 후 간질 생성의 기본 메커니즘을 조사할 수 있도록 했습니다.