Name: 자유롭게 움직이는 마우스에서 장 유래 미생물 대사 산물의 뇌실 내 전달 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: 배우세요 자유롭게 움직이는 마우스에서 뇌실 내 가이드 캐뉼라를 이용한 장 유래 미생물 대사 산물 전달 방법을. 이 기술은 장-뇌 축 연구와 신경 기능 메커니즘 탐구에 활용됩니다.

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우리는 동물을 돌보는 국립 쳉쿵 대학교 (NCKU)의 실험실 동물 센터 직원을 인정합니다. 이 작업은 CHENG-HSING 의료 재단의 Kun-Yen Huang 교수 교육 기금에서 C.-WL에 대한 장학금으로 지원되었습니다. 대만 과학 기술부 (MOST)의 기금 : (학부 연구 MOST 109-2813-C-006-095-B) TO T.-H.Y.; (대부분 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3)에서 W.-L.W.로; 그리고 고등 교육 새싹 프로젝트, 교육부에서 NCKU에서 W.-L.W까지의 대학 진흥 본부에

저자는이 작업과 관련하여 이해 상충이 없습니다.

장 유래 대사 산물은부분적으로 신체의 여러 결합 부위 6,12,24로 인해 많은 정확한 메커니즘없이 뇌 매개 질환과 관련이 있습니다. 이전 보고서에 따르면 SCFA는 G 단백질 결합 수용체, 후성 유전 조절자 및 신체의 여러 부위에서 에너지 생산 원을위한 리간드 역할을 할 수 있습니다 6,12. 말초에서 발생하는 교란 요인 (예 : 면역 세포, 호르몬 및 자율 신경계)을 우회하기 위해 자유롭게 움직이는 마우스에서 가이드 캐뉼러를 통해 뇌에 SCFA를 뇌실 내 주사하는 방법을 채택하여 개발되었습니다. 또한, 캐뉼러화 및 주입 부위는 SCFA의 영향을 받을 수 있는 뇌 영역을 탐색하기 위해 검증되었습니다. 전체적으로이 논문은 장 뇌 축 연구를 위해 장 유래 대사 ...

인간의 위장관에는 숙주 1,2,3에 영향을 미치는 다양한 미생물이 있습니다. 이 장내 박테리아는 숙주 4,5가 소비하는식이 성분을 활용하는 동안 장 유래 대사 산물을 분비 할 수 있습니다. 흥미롭게도, 말초에서 대사되지 않은 장 대사 산물은 순환을 통해 다른 기관으로 운반 될 수 있습니다6. 참고로, 이러한 분비 된 대사 산물은 중추 신경계와 장7 사이의 양방향 통신으로 정의되는 장-뇌 축의 매개체 역할을 할 수 있습니다. 이전 연구에 따르면 장 유래 대사 산물은 동물의 복잡한 행동과 감정을 조절할 수 있습니다 8,9,10,11.
단쇄 지방산 (SCFA)은식이 섬유와 소화되지 않는 탄수화물의 발효 과정에서 장내 미생물에 의해 생성되는 주요 대사 산물입니다6. 아세테이트, 프로피오네이트 및 부티레이트는 장12에서 가장 풍부한 SCFA입니다. SCFA는 위장관에서 세포의 에너지 원 역할을합니다. 장에서 대사되지 않은 SCFA는 문맥을 통해 뇌로 운반되어 뇌와 행동을 조절할 수 있습니다 6,12. 이전 연구에서는 SCFA가 신경 정신 장애에서 중요한 역할을 할 수 있다고 제안했습니다 6,12. 예를 들어, 자폐 스펙트럼 장애(ASD)의 동물 모델인 BTBR T+ Itpr3tf/J(BTBR) 마우스에서 부티레이트를 복강 내 주사하여 사회적 결핍을 구제했습니다13. 우울증 피험자로부터 미생물총을 투여받은 항생제 처리된 쥐는 불안과 유사한 행동과 대변 SCFA의 증가를 보였다14. 임상 적으로, 대변 SCFA 수준의 변화는 일반적으로 발달하는 대조군15,16과 비교하여 ASD 환자에서 관찰되었습니다. 우울증이 있는 사람들은 건강한 피험자보다 대변 SCFA 수치가 낮습니다17,18. 이 연구는 SCFA가 다양한 경로를 통해 동물과 인간의 행동을 바꿀 수 있음을 시사했습니다.
미생물 대사 산물은 신체의 여러 부위에 다양한 효과를 발휘하여 위장관, 미주 신경 및 교감 신경을 포함한 숙주 생리학및 행동 4,19에 영향을 미칩니다. 말초 경로를 통해 대사 산물을 투여 할 때 뇌에서 장 유래 대사 산물의 정확한 역할을 정확히 찾아내는 것은 어렵습니다. 이 논문은 자유롭게 움직이는 마우스의 뇌에서 장 유래 대사 산물의 영향을 조사하기위한 비디오 기반 프로토콜을 제시합니다 (그림 1). 우리는 SCFA가 행동 테스트 중에 가이드 캐뉼러를 통해 급격하게 주어질 수 있음을 보여주었습니다. 대사 산물의 유형, 부피 및 주입 속도는 목적에 따라 변형 될 수 있습니다. 캐뉼라이제이션 부위는 특정 뇌 영역에서 장 대사 산물의 영향을 탐색하도록 조정할 수 있습니다. 우리는 과학자들에게 장 유래 미생물 대사 산물이 뇌와 행동에 미치는 잠재적 영향을 탐구 할 수있는 방법을 제공하는 것을 목표로합니다.

<table><tbody><tr><td>Material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Advil Liqui-Gels Solubilized Ibuprofen A2:D41</td><td>Pfizer</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 당나귀 안티-토끼</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fluorescent Gold (rabbit polyclonal)</td><td>Millipore</td><td>AB153-I</td><td></td></tr><tr><td>Bottle Top Vacuum Filter, 500 mL, 0.22 &mu; m, PES, 멸균</td><td>NEST</td><td>121921LA01</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>ACSF: 0.14g/L</td></tr><tr><td>클로르헥시딘 스크럽 2%</td> <td>Phoenix</td><td>NDC 57319-611-09</td><td></td></tr><tr><td>클로르헥시딘 용액</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-599-09</td><td></td></tr><tr><td>상업용 더미</td><td>RWD Life Science</td><td>62004</td><td>Single_OD 0.20mm/M3.5/G = 0.5mm</td></tr><tr><td>상업용 가이드 캐뉼Single_OD</td><td>RWD Life Science</td><td>62104</td><td>0.41mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>상업용 인젝터</td><td>RWD Life Science</td><td>62204</td><td>Single_OD 0.21 mm-33G/ M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td>ACSF: 0.61 g/L</td></tr><tr><td>치과용 아크릴</td><td>HYGENIC</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>고정 나사</td><td>RWD Life Science</td><td>62521</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td>가<td>있는 Fluoroshield 장착 매체</td></tr><tr><td>말 세럼</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>16050130</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기</td><td>BBraun</td><td>XG-LBB-9151133S-1BX</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Isoflurane&nbsp;</td><td>파니온 & BF 바이오테크</td><td>DG-4900-250D</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td>ACSF: 0.19 g/L</td></tr><tr><td>케토프로펜&nbsp;</td><td>스위스 제약</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>리도카인&nbsp;</td><td>AstraZeneca</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>저융점 아가로스</td><td>Invitrogen</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>ACSF: 0.19 g/L</td></tr><tr><td>현미경 커버 슬립</td><td>MARIENFELD</td><td>101242</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>4951PLUS-001E</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일 라이트, 화이트 NF</td><td>Macron Fine Chemicals</td><td>MA-6358-04</td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>S9888</td><td>ACSF: 7.46 g/L</td></tr><tr><td>NaH2PO4&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>S8282</td><td>ACSF: 0.18 g/L</td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>ACSF: 1.76 g/L</td></tr><tr><td>n-부틸 시아노아크릴레이트 접착제 (조직 접착제 접착제)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>3M Vetbond</td></tr><tr><td>신경 추적자&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-358883</td><td>FluoroGold</td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브</td><td>RWD Life Science</td><td>62329</td><td>OD 1.50, I.D 0.50 mm 및 OD 1.09, I.D 0.38 mm</td></tr><tr><td>Puralube Vet (eye) 연고</td><td>Dechra&nbsp;</td><td></td><td></td>12920060</tr><tr><td>아세트산 나트륨&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td>SCFAs: 13.5 mM</td></tr><tr><td>아지드화나트륨&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>부티르산나트륨&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td>SCFAs: 8 mM</td></tr><tr><td>프로피온산나트륨&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1880</td><td>SCFA: 5.18mM</td></tr><tr><td>스테인리스 가이드 캐뉼라</td><td>Chun Ta 스테인리스강 enterprise CO., LTD.</td><td>해당 없음</td><td>OD 0.63mm; 현지 공급 업체</td></tr><tr><td>스테인리스 인젝터</td><td>Chun Ta 스테인레스 스틸 기업 CO., LTD.</td><td>없음</td><td>OD 0.3mm; 더미는 인젝터로 만들어졌습니다. 현지 공급 업체</td></tr><tr><td>Superglue</td><td>Krazy Glue</td><td>KG94548R</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cannula holder</td><td>RWD Life Science</td><td>B485-68217</td><td></td></tr><tr><td>천장 카메라</td><td>FOSCAM</td><td>R2</td><td></td></tr><tr><td>디지털 스테레오택시 기기</td><td>스톨팅</td><td>51730D</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>INNOVIEW</td><td>SEM-HT/TW</td><td></td></tr><tr><td>유리 비드 살균기</td><td>RWD 생명 과학</td><td>RS1501</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>스톨팅</td><td>53800M</td><td></td></tr><tr><td>라이카 현미경&nbsp;</td><td>라이카</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 해부 집게</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5136</td><td>톱니, 약간의 곡선; 매우 섬세한; 0.5mm 팁 폭; 4" 길이&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5918</td><td>4.5" 각도 날카로운</td></tr><tr><td>마이크로 주입 컨트롤러</td><td>세계 정밀 기기 (WPI)</td><td>MICRO2T</td><td>SMARTouch 컨트롤러</td></tr><tr><td>미세 주입 주사기 펌프</td><td>세계 정밀 기기 (WPI)</td><td>UMP3T-1</td><td>UltraMicroPump3&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로리터 주사기</td><td>Hamilton</td><td>80014</td><td>10 &micro; </td></tr><tr><td>L 이중 섬유</td><td>스텝</td><td>LGY-150</td><td>현지 공급 업체</td></tr><tr><td>애완 동물 트리머</td><td>WAHL</td><td>09962-2018</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Step</td><td>AS-01</td> 용 기화기 현지 <td>공급 업체</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Animal behavior video 추적 소프트웨어</td><td>Noldus</td><td>EthoVision</td><td>버전 : 15.0.1416</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X 소프트웨어</td><td>Leica</td><td>LASX</td><td>버전 : 3.7.2.22383</td></tr></tbody></table>

자유롭게 움직이는 마우스에서 장 유래 미생물 대사 산물의 뇌실 내 전달

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

장내 미생물총과 그 대사 산물이 숙주 생리학 및 행동에 미치는 영향은 지난 10년 동안 광범위하게 조사되었습니다. 수많은 연구에 따르면 장내 미생물총에서 파생된 대사 산물은 숙주의 복잡한 장-뇌 경로를 통해 뇌 매개 생리 기능을 조절합니다. 단쇄 지방산(SCFA)은 장내 마이크로바이옴에 의해 식이 섬유 발효 중에 생성되는 주요 박테리아 유래 대사 산물입니다. 장에서 분비된 SCFA는 말초의 여러 부위에서 작용하여 SCFA 수용체의 광대한 분포로 인해 면역, 내분비 및 신경 반응에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 SCFA의 경구 및 복강 내 투여를 통해 SCFA의 중추 및 말초 효과를 구별하는 것은 어렵습니다. 이 논문은 자유롭게 움직이는 마우스에서 가이드 캐뉼러를 통해 뇌에서 SCFA의 기능적 역할을 조사하는 비디오 기반 방법을 제시합니다. 뇌에서 SCFA의 양과 유형은 주입량과 속도를 조절하여 조정할 수 있습니다. 이 방법은 과학자들에게 뇌에서 장 유래 대사 산물의 역할을 이해하는 방법을 제공 할 수 있습니다.

마우스를 가이드 캐뉼라 이식으로부터 회복된 지 1주일 후에 SCFA를 주입하여 신규한 케이지에서 운동 활성을 평가하였다. 마우스를 새로운 케이지에 넣고 뇌의 측면 심실에 이식 된 상업용 가이드 캐뉼라를 통해 처음 5 분 동안 2,100nL의 SCFA 또는 ACSF (7nL / s의 전달 속도)를 뇌에 주입했습니다. 새로운 케이지에서의 운동 활동은 주입 후 추가로 30 분 동안 기록되었습니다. SCFAs와 ACSF의 주입 사이의 신규한 케이지에서 운동 활성에는 차이가 관찰되지 않았다 (그림 6) (n = 그룹당 2 마우스; 데이터는 평균 ± s.e.m.으로 표시되고 양방향 ANOVA로 분석됨).
뇌 영역에서 가이드 캐뉼라의 이식 정확도를 검증하기 위해 SCFA와 동일한 부피 및 전달 속도(5분에 2,100nL, 7nL/s)로 가이드 캐뉼라를 통해 마우스에 형광 신경 추적자를 주입했습니다. 뇌는 30 분 후에 조직...

장 유래 미생물 대사 산물은 동물에서 복잡한 행동으로 이어지는 다면적 효과가 있습니다. 우리는 가이드 캐뉼러를 통한 뇌실 내 전달을 통해 뇌에서 장 유래 미생물 대사 산물의 효과를 설명하는 단계별 방법을 제공하는 것을 목표로합니다.

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

장내 미생물총에 의해 방출되는 대사 산물은 숙주에 복잡한 효과를 생성합니다. 이 프로토콜은 마우스의 뇌와 행동에서 장 대사 산물의 역할을 조사하는 방법을 제시합니다. 이 기술은 자유롭게 움직이는 마우스의 뇌에 장 대사 산물을 전달하는 정확하고 세심하며 검증 된 방법을 제공합니다.우리는 장 뇌 축 연구에 대한 통찰력을위한 포괄적이고 생리 학적 최상의 방법론을 제공합니다. 마우스를 정위 프레임에 놓고 입체 앞니 홀더의 앞니 막대에 마우스 앞니를 고정합니다. 코 콘 마스크로 코를 덮으십시오.그런 다음 상단 핀치 반사를 통해 마우스의 통각을 평가하고 수술 부위를 절개하기 전에 일정한 호흡 속도를 확인하십시오. 머리에 손질 된 모피가 접착 테이프로 제거되면 진통제 케토 프로 펜을 피하 주사하여 통증을 완화하고 눈 연고를 바르십시오. 그런 다음 외이도에 뾰족한 이어 바를 삽입하여 머리를 고정하십시오.앞니 홀더의 코 클램프를 조이고 머리를 부드럽게 눌러 머리가 고정되었는지 확인합니다. 클로르헥시딘 면봉을 3번 번갈아 가며 스크럽하여 두피를 소독합니다. 이제 해부 메스를 사용하여 두피를 앞쪽 뒤쪽으로 1cm 미만으로 절개하십시오.절개 부위를 연 후 미세 해부 집게로 잡은 면봉으로 두개골을 닦으십시오. 입체 좌표를 기반으로 원고에 설명 된대로 오른쪽 측면 심실의 위치를 식별하고 레이블을 지정합니다. 다음으로, 정위 드릴을 사용하여 라벨이 붙은 부위의 두개골을 통해 구멍을 뚫고 나중에 두개골에 2-4 개의 구멍을 더 뚫습니다.리도카인 면봉으로 두개골을 닦고 구멍에 2-4 개의 스테인리스 나사를 장착하십시오. 상업용 가이드 캐뉼러를 정위 캐뉼라 홀더에 놓고 섭씨 150도에서 유리 속도 살균기로 소독합니다. 그런 다음 정위 캐뉼라 홀더를 측심실용으로 뚫린 구멍으로 옮기고 원하는 깊이에 도달할 때까지 상업용 가이드 캐뉼라를 구멍에 천천히 삽입합니다.이제 10 마이크로 리터의 n- 부틸 시아 노 아크릴 레이트 접착제를 적용하여 드릴 구멍에 상업용 가이드 캐뉼러를 고정하고 3-4 분 동안 기다립니다. 정위 캐뉼라 홀더에서 상업용 가이드 캐뉼라를 부드럽게 풀고 절개된 두피에 치과용 아크릴을 바르고 상업용 가이드 캐뉼라를 고정하고 최소 5분 동안 기다립니다. 상업용 더미를 상업용 가이드 캐뉼러에 이식합니다.그런 다음 마취에서 회복하기 위해 아래에 가열 패드가 있는 새 케이지에 마우스를 넣고 마우스가 완전히 깨어날 때까지 계속 관찰합니다. 10 마이크로 리터의 증류수가 들어있는 마이크로 리터 주사기를 마이크로 주입 펌프에 장착하십시오. 인슐린 주사기를 사용하여 폴리에틸렌 튜브에 증류수를 채우고 마이크로 리터 주사기를 매달린 폴리에틸렌 튜브에 연결합니다.미세 주입 컨트롤러를 켜고 모든 채널 표시를 눌러 명령 화면에 액세스합니다. 그런 다음 구성을 누르고 초당 100 나노 리터의 전달 속도로 볼륨 목표를 9, 800 나노 리터로 설정하십시오. 그런 다음 방향을 눌러 주입 모드로 전환하고 실행을 눌러 마이크로 리터 주사기에 연결된 폴리에틸렌 튜브에서 9, 800 나노 리터의 증류수를 주입합니다.이제 인젝터를 미네랄 오일이 들어있는 바이알에 넣고 구성을 누르고 볼륨 목표를 초당 100 나노 리터로 전달 속도로 3, 000 나노 리터로 설정하십시오. 3, 000 나노 리터의 미네랄 오일을 인출하려면 방향을 눌러 철수 모드로 전환 한 다음 실행을 누릅니다. 마이크로 리터 주사기 바늘에서 폴리에틸렌 튜브를 분해하십시오.마이크로 리터 주사기 바늘에서 3, 000 나노 리터의 증류수를 뱉어 내려면 방향을 눌러 주입 모드로 전환하고 실행을 누릅니다. 그런 다음 마이크로 리터 주사기를 폴리에틸렌 튜브에 다시 삽입하십시오. SCFA가 들어있는 바이알에 인젝터를 넣습니다.구성을 누르고 볼륨 목표를 9, 500 나노 리터로 설정하고 전달 속도를 초당 100 나노 리터로 설정합니다. 방향을 눌러 9, 500 나노 리터의 SCFA를 인출하여 인출 모드로 전환하고 실행을 누릅니다. 오일 SCFA 상에 라벨을 지정하여 SCFA가 성공적으로 주입되었는지 확인합니다.구성을 누르고 전달 속도로 원하는 볼륨 목표를 초당 7나노리터로 설정합니다. 방향을 눌러 주입 모드로 전환합니다. SCFA 주입을 위해 캐뉼라에 주입기를 삽입하기 전에 상업용 인젝터의 앞쪽 끝에서 액체가 나올 때까지 마이크로리터 주사기를 앞으로 주입하려면 실행을 누릅니다.마우스를 마취한 후 상업용 인젝터를 상업용 가이드 캐뉼라에 삽입합니다. 마우스가 마취에서 회복되면 새로운 케이지에 넣고 35 분 동안 자유롭게 탐색 할 수 있습니다. 처음 5 분 동안 2, 100 나노 리터의 목표 부피에 대해 초당 7 나노 리터의 전달 속도를 사용하여 SCFA를 주입하십시오.그런 다음 주입 모드로 방향을 누르고 실행을 누릅니다. 행동 테스트 후 상업용 가이드 캐뉼라에서 상업용 인젝터를 제거합니다. 주입 부위를 확인하기 위해 초당 7 나노 리터의 전달 속도로 2, 100 나노 리터의 중성 추적자를 주입하십시오.형광 현미경을 사용하여 주입 부위의 형광 신호를 이미지화합니다. ACSF와 SCFA가 주입 된 마우스는 총 35 분 동안 새로운 케이지에서 여행했습니다. SCFA와 ACSF의 주입 사이의 신규한 케이지에서의 운동 활성에는 차이가 관찰되지 않았다.형광 염료는 상업용 가이드 캐뉼라를 주입했을 때 마우스 뇌실과 마우스 뇌의 주변 영역에서 검출되었습니다. 유사하게, 스테인레스 스틸 가이드 캐뉼러를 통한 주입은 측면 심실과 마우스 뇌의 주변 영역에서 신호를 감지합니다. 이 절차를 회로 기반 신경 기술과 결합하면 과학자들은 장 대사 산물에 의해 기여하는 뇌 및 행동의 회로 기반 제어에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.이 기술은 연구자들이 복잡한 장내 뇌 축에서 미생물총과 대사 산물의 역할을 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다.

intracerebroventricular-delivery-gut-derived-microbial-metabolites

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

신생아 생쥐의 중추 신경계에 치료 요원들을 소개하는 뇌 (intracerebroventricular)와 (정맥 주사) 2) 체계로 : 1)이 문서 분사의 두 가지 방법을 보여줍니다.

마우스에 Intracerebroventricular을 통해 치료 대리점 납품 (ICV)과 정맥 (IV) 사출

이 비디오는 신생아 마우스 뇌에서 쥐 거대세포바이러스(MCMV) 분포를 연구하기 위한 뇌내폐 주사 과정을 보여줍니다. 가시성을 위해 강화된 녹색 형광 단백질(EGFP)을 발현하도록 설계된 MCMV는 새끼 쥐의 뇌 외측심실에 주입됩니다. 주입된 바이러스는 뇌척수액을 통해 순환하여 가장자리 영역, 맥락막 신경총 및 심실하 영역을 포함한 뇌실 주위 영역의 세포를 감염시킵니다.

신생아 마우스 뇌에서 쥐 사이토메갈로바이러스 분포를 분석하기 위한 뇌실 내 주사

출처: Liou, C. et al. 자유롭게 움직이는 마우스에서 장 유래 미생물 대사 산물의 뇌실내 전달. J. Vis. 경험. (2022).이 비디오는 뇌 매개 행동에 미치는 영향을 연구하기 위해 자유롭게 움직이는 마우스에 단쇄 지방산(SCFA)을 두개내 주사하는 방법을 보여줍니다. 인젝터 캐뉼라를 마우스 뇌에 이식된 가이드 캐뉼라에 삽입합니다. 회복 후 마우스는 새로운 새장에 적응합니다. 그런 다음 SCFA를 투여하고 운동 행동을 기록합니다.

마우스 모델에서 장 유래 미생물 대사산물의 두개내 주사

인간의 내시경 두개골 바닥 재건의 마우스 모델은 코 점막 이식을 사용하여 뇌와 코 사이의 반투과성 인터페이스를 만듭니다 개발되었다. 이 방법은 연구자가 체계적으로 관리, 그렇지 않으면 혈액 - 뇌 장벽에 의해 제외되는 고 분자량 치료제의 중추 신경계에 전달을 연구 할 수 있습니다.

쥐의 뇌에 직접 약물 전달 이소성 점막 Engrafting 절차

여기에서는 바이러스 입자 또는 형광 마이크로비즈를 신생아 쥐의 뇌에 뇌내실 및 혈관 내 주입하는 간단한 방법을 설명합니다. 바이러스와 나노 입자의 국소화 패턴은 현미경 평가 또는 현장 혼성화에 의해 검출될 수 있습니다.

신생아 뇌에 바이러스 성 입자와 형광 마이크로 비즈의 뇌실과 혈관 내 주입

이 연구는 gavaging 정확한 양의 신생아 쥐에 probiotics의 과정을 자세히 설명합니다. 실험 설정 포함 하도록 최적화 되었다 하지만 probiotic 주입, 관리의 방법 및 내장에 있는 박테리아의 정량화에 국한 되지 않습니다.

Gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에 있는 Probiotic 연구

여기서 목표는 심혈관 질환에서 dysbiosis의 메커니즘을 조사하기 위한 프로토콜을 설명하는 것입니다. 이 논문은 쥐 분변 샘플을 무균적으로 수집 및 이식하고, 장을 분리하고, "Swiss-roll" 방법을 사용한 다음 면역염색 기술을 사용하여 위장관의 변화를 조사하는 방법에 대해 설명합니다.

쥐 분변 분리 및 미생물군 이식

미주 신경에 의해 촉진되는 장과 뇌의 소통은 위장 내분비계와 뇌 사이의 소통에 매우 중요합니다. 그러나 위내 포도당 주입이 대뇌 피질 활동을 변화시킬 수 있는지는 아직 이해되지 않았습니다. 여기에서는 십이지장에 포도당을 주입한 후 대뇌 피질 활동의 변화를 관찰하기 위한 포괄적인 프로토콜을 제공합니다.

장-뇌 신경 통신의 실시간 분석: 장 포도당 자극에 대한 반응의 피질 전체 칼슘 역학

이 프로토콜은 장내 미생물 대사 산물의 생산 및 흡수를 평가하기 위해 마우스의 문맥 및 하대정맥에서 혈액을 순차적으로 수집하는 방법을 보여줍니다.

하대정맥(Inferior Vena Cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다.

조산(37주 분만)은 최적이 아닌 예방 및 치료 옵션이 있는 긴급한 글로벌 건강 문제&lt; 있습니다. 우리는 상행 질 세균 감염으로 인한 조산의 마우스 모델을 제시하고 그 결과 신생아 이환율과 사망률을 분석하는 방법을 간략하게 설명합니다.

마우스의 상승하는 질 감염, 조산 및 신생아 이환율 모델링

이 논문은 다음을 설명합니다: (1) 신생아 마우스에게 DOL 6 초기부터 경구 개베지 분자를 전달하는 것; 그리고 (2) DOL 10부터 이유기(DOL 20) 새끼 생검에서 Ussing 챔버를 이용한 세포 간 및 세포 간 투과성을 평가하여 대장실 상피 장벽 기능을 체 외 평가.

신생아 마우스 새끼의 구강 개비지와 사용 챔버를 이용한 장 장벽 무결성 기능 평가

배우세요 자유롭게 움직이는 마우스에서 뇌실 내 가이드 캐뉼라를 이용한 장 유래 미생물 대사 산물 전달 방법을. 이 기술은 장-뇌 축 연구와 신경 기능 메커니즘 탐구에 활용됩니다.

자유롭게 움직이는 마우스에서 장 유래 미생물 대사 산물의 뇌실 내 전달

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