Name: S. cerevisiae의의 접착 및 아가르 침략을위한 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: 배우세요 S. cerevisiae의 접착 및 아가르 침략 분석법을 통해 효모의 침윤형과 가상균사형 분화를 평가하는 방법을 알아보세요. 이 정성적 분석법은 돌연변이체의 침윤 표현형과 환경 신호가 효모 분화에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

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우리는이 분석을 개발하고 그들의 통찰력에 대한 리사 Schneper와 카트린 Duevel 감사하고 싶습니다.

<ol><li> 문화의 밀도가 서로 너무 다른 경우에 필요한 기아 조건 (0.2 % 포도당과 SC 대비 2 % 포도당과 SC, 예를 들어)와 합성 미디어 접시에 관심을 성장 문화 200ul 넣고, 200ul 문화마다 셀 수를 조정 따라서 각각의 드롭은 대략 세포의 동일한 금액있다. </li><li> 문화는 접시에있는 드롭의 기록을 보관해야합니다. </li><li> 방울이 건조 때까지 판 덮개 열려 유지하고 실내 온도 또​​는 30 중 하나두고 ° C. </li><li> 시일 parafilm 및 플라스틱 포장 (선택 사항)와 함께 접시 및 3-7일 30 ° C에서 두십시오. </li><li> (디지털 사진 등 복용, 검색하여) 접시에 세포의 성장을 문서 </li><li> 방향을 리프트 및 변경하지 한천에 대한 간병에 대해 잠시 고압 물 (DI 선호 물)와 한천 표면의 세포를 씻으십시오. </li><li> 종이 타올에 번호판을 감청하고 건조에 열어두고으로 초과하는 물을 제거하십시오. </li><li> 일단 접시 각 접시에 건조 문서 접착 (디지털 사진을 스캔하거나 복용에 의해)입니다 </li><li> 장갑 낀 손가락으로 부드럽게 옮겨 세포에 대해 잠시 동안 실행 물 아래에있는 한천 표면을 형성합니다. </li><li> 이전처럼 번호판을 건조. </li><li> 해부 범위를 사용하는 경우, 현미경 플랫폼에 번호판을 배치하기 전에 바늘을 제거합니다. </li><li> 10X 또는 40x 배율로 문서 침공. 가장자리 너무 개별 셀 morphologies을 볼 붐비는 것입니다 각 써클의 중간 부분에 초점을 확인하십시오. 가장자리 filamentous 성장의 수준을 나타낼 수 있으며 나중에 참조할 수 있도록 문서화 수 있습니다. 스캔 또는 전체 접시의 디지털 사진을 찍을 때하면 도움이 될 수 있습니다. </li></ol>

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</ol>

효모 세포가 기아와 스트레스 상황, 각종 영양 스트레스하에 filamentation 및 응집에 따라 포자 형성을 포함하여 양분 가용성 및 환경 조건에 따라 다양한 차별 모드를 표시합니다. S. cerevisiae의 C. albicans와 등 다양한 효모는, 또한 미생물의 다양한 세트로 구성된 biofilms에서 찾을 수 있습니다. filamentation 및 침입 행동과 어떤 상관 관계가있다지만, 그것은 filamentation는 침략과 표면과 조직의 식민지가 발생할 수 있습니다 정확히 얼마나 명확하지 않습니다. 효모는 확실히 이러한 카테터 및 감염된 인간의 장기와 같은 식물과 filamentous 자연 biofilms의 양식뿐만 아니라 그들은 인간의 건강을 위협하는 장소 모두에서 찾을 수 있습니다. 10-13 동물을 감염과​​ 유해하고 유익한 biofilms에 참여하는 효모에 의해 이용 신호 경로를 이해하기 위해서는, 우리는 접근하고 안정적​​인 assays을 개발해야합니다. 여기 우리는 우리가 질적으로 다양한 조건에서 효모 종자 및 돌연변이의 접착제 및 침입 ...

<table><tbody><tr><td>Moticam 350</td><td>카메라</td><td>Motic</td><td>단종 (신모델: Moticam 352)</td><td>현미경 접안렌즈에 부착하여 PC 또는 Mac용 디지털 이미지를 캡처하는 비교적 저렴한 카메라입니다.</td></tr></tbody></table>

s. cerevisiae의의 접착 및 아가르 침략을위한 분석

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

효모는 많은 미생물이 표면을 식민지 자연 biofilms에서 찾을 수 있습니다. 같은 사람이 만든 개체의 표면과 같은 인공 환경에서는, biofilms는 산업 생산성을 줄이고 구조를 파괴하고, 인간의 생명을 위협하실 수 있습니다. 반면에 1-3, harnessing biofilms의 전원 환경을 청소하고 지속 가능한 에너지를 생성할 수 있습니다. 표면을 식민지 복잡한 biofilms에 참여 S. cerevisiae의 4-8의 능력은 주로이 생물의 다양한 신호 경로 및 환경 신호에 의해 트리거 차별화 프로그램의 재발견까지 무시되었습니다. 9, 10 빠르게 biofilm의 교차점에서 S.의 cerevisiae를 배치 등 라스 - PKA, Kss1 MAPK 및 Hog1 osmolarity 경로로 신호 통로,의 상호 작용과 융합을 이해하는 모델 생물로 S.의 cerevisiae를 사용하여 지속적인 관심을 생물학 및 신호 전달 연구. 이를 위해 11-20, 긴, 접착제, pseudohyphal 필라멘트로 효모 세포의 분화는 다양한 환​​경 변화에 따라 신호 전달 경로의 활성화를위한 편리한 판독되었다. 그러나, filamentation는 오해의 소지가있는 간단한 표현형 것처럼 그것을 시금하게 phenotypes의 복잡한 모음입니다. 지난 10 년간 여러 assays가 성공적으로 이러한 양적 세포 - 표면 부착을 측정하는 소프트 한천 및 크리스탈 바이올렛 얼룩에 콜로니 확산을 측정하는 매트 형성 assays 같은 효모 연구에 세균 biofilm 연구에서 채택되었다. 12 21 단, 질적 한천에서 효모의 접착제 및 침입 phenotypes을 평가하기 위해 개발 assays에 약간의 혼동이있었습니다. 여기, 우리는 침략 평가에서 접착 평가를 분리하는 단계를 이해하기 쉽게와 효모 종자의 접착제 및 침입 품질을 평가하기위한 단순하고 신뢰할 수있는 방법을 제시한다. 이전 연구, 10, 16에서 채택된 우리의 방법은 우리가 다음 접착력을 평가하기 위해 물로 씻고으로 침략을 평가하기 위해 한천 표면에서 완전히 세포를 문질러 큰 반점의 성장을위한 차동 영양 조건에 액체 미디어와 도금의 성장 세포를 포함 한천. 우리는 한천으로 세포의 침공에 영향을 한천에 세포를 줄이 필요를 제거합니다. 일반적으로, 우리는 한천를 침략 haploid 종자 항상 접착제 있으며, 아직 모든 접착제 종자는 한천 배지에 침입할 수 있다고 보여집니다. 우리의 접근 방식은 신중하게 효모 신호 전달, 차별화, 정족수 감지 및 biofilm 형성의 분화 단계와 요구 사항을 해부하다 다른 assays와 함께 사용할 수 있습니다.

우리는 침략과 pseudohyphal 차별화의 수단으로 효모 접착 및 한천 침공에 대한 질적 분석을 설명합니다. 이 간단한 분석은 다양한 돌연변이의 침략 표현형뿐만 아니라 효과 환경 단서를 평가하고 효모 차별에 대한 경로를 신호하는 데 사용할 수 있습니다.

S. cerevisiae의의 접착 및 아가르 침략을위한 분석

효모는 많은 미생물이 표면에 군집을 이루는 천연 생물막(biofilm)에서 발견됩니다. 인공물 표면과 같은 인공 환경에서는...

원하는 배양액 200 microliters를 취해 분주하십시오. 보통 원할 경우 한 플레이트에 최대 6개까지 배치할 수 있으며, 그 후 뚜껑을 열어 건조시킵니다. 여기 두 개의 플레이트가 있습니다.그중 하나에는 곰팡이가 생겼으나, 실험에 영향을 주지 않으므로 괜찮습니다. 그리고 그중 하나는 완전 배지에, 다른 하나는 저포도당 배지에 들어 있습니다. 따라서 우리는 부착과 침입을 살펴보고 차이가 있는지 확인하겠습니다.그렇게 플레이트를 꺼내십시오. 그러면 무언가가 자라나고 있는 것을 볼 수 있습니다. 이제 세척하겠습니다.오거(auger) 아래에 기포가 보이는데, 이는 오거 아래로 물이 들어갔기 때문입니다. 이는 괜찮은 현상이지만, 단지 오거가 플레이트에서 미끄러져 나오지 않도록 하기 위함입니다. 따라서 일부 세포가 떨어져 나왔음에도 불구하고, 두 균주 모두 접착성이 있다고 말할 수 있습니다. 세포들이 아마도 한천(agar)에 접착되어 있는 다른 세포들에 접착되고 있는 것입니다.그렇지 않으면 많은 세포가 떨어져 나갔겠지만, 실제로는 그렇지 않았습니다. 이제 부착을 확인했으므로 침습을 확인하겠습니다. 표면에서 세포가 떨어지는 만큼 부드럽게 문질러 제거하겠습니다.압력을 가하지 않고, 다른 표면에서 떨어져 나오는 모든 것을 제거하려고 노력하고 있습니다. 손가락으로 만져보면 캘링(calling)이 느껴지실 겁니다. 이제 말려보겠습니다. 여기서 차이점이 보이시나요?그렇게 할 수 없으며, 이는 이 플레이트가 완전 배지이므로 세포들이 어떤 영양소도 결핍된 상태가 아니기 때문에 바람직한 결과입니다. 반면 이것은 저농도 glucose 플레이트로, 세포들이 glucose 결핍 상태에 있습니다. 따라서 그 차이를 확인할 수 있습니다.따라서 이는 적절한 대조군이 됩니다.

assay-for-adhesion-and-agar-invasion-in-s-cerevisiae

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는, 우리는 효모와 효과기 유발 성장 저해 phenotypes의 식별에 세균성 유형 III의 effectors의 표현을위한 절차를 설명합니다. 이러한 phenotypes는 이후 이펙터 기능과 목표를 명료하게하다에 악용될 수 있습니다.

성장 저해 Phenotypes의 확인은 효모에서 세균의 종류 III Effectors 표현에 의해 유도된

에 초점을 세균성 병원체에 의해 호스트 세포의 침략의 연구를위한 일반적인...

세균성 병원체에 의해 인간의 세포의 침략

이 프로토콜은 교양 세포에 준수 아르 단위를 형성하는 박테리아 식민지의 숫자를 계산에 구성된 간단한 세균 유착 분석이다. 분석은 강력한이며, adhesin 독립 공부하고, 다수의 유사 콘텐츠는 세균 pathogenesis 작업을 대부분의 실험실에 사용됩니다.

포유류의 상피 세포에 박테리아의 접착 시험 관내 분석

이 비디오는 박테리아와 곰팡이에 의해 바이러스에 감염된 세포에서 다미생물 생물막 형성이 시작되는 것을 보여줍니다. 단순 포진 바이러스 감염은 세포에 대한 박테리아 부착을 방해하여 박테리아-진균 공동 국소화를 방지합니다. 대조적으로, 감염되지 않은 세포는 박테리아-진균 공동 국소화 및 생물막 형성 시작을 나타냅니다.

바이러스에 감염된 세포에서 다미생물 생물막 개시를 결정하기 위한 분석

여기에서는 발아 효모에서 화학적-유전적 상호 작용을 정의하기 위한 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 이 접근 방식은 효모 분자 생물학의 기본 기술을 기반으로 하며 중소 규모의 화학 물질 및 기타 매체 환경에 대한 기계론적 조사에 매우 적합합니다.

화학 유전자 상호 작용의 신속한 식별<em&gt; 사카로 미세스 세 레비 시아</em

이 기사는 단백질 분해에 대한 유전적 요구 사항을 결정하기 위한 효모 성장 기반 분석에 대해 설명합니다. 또한 효모 단백질을 신속하게 추출하는 방법을 보여주며, 이는 분해 요구 사항을 생화학적으로 확인하기 위한 웨스턴 블로팅(western blotting)에 적합합니다. 이러한 기술은 다양한 단백질의 분해를 모니터링하도록 조정할 수 있습니다.

성장 기반의 결정 및 단백질 분해에 대한 유전 요구 사항의 생화학 적 확인에<em&gt; 사카로 미세스 세 레비 시아</em

이 프로토콜 기능 S. cerevisiae에 단백질 기반 상속에 대 한 화면을 높은 처리량 방법을 설명 합니다.

S. cerevisiae 에 단백질 기반 상속에 대 한 높은 처리량 검열

이 연구는 유틸리티 양적 세포 막 확장 측정 및 셀의 접착 능력의 상관 관계의 용이성을 보여 줍니다. 대표적인 예로 우리 보여 여기 그 Dickkopf 관련 단백질 3 (DKK3) 증가 lobopodia 형성을 촉진 하 고 adrenocortical 암 접착 력 셀 세포 생체 외에서.

세포 막 확장 하 고 공부 하는 암 세포 접착 역동성에 있는 그들의 역할의 특성

효모 성장 표현형은 마이크로콜로 성장하는 고정 된 세포의 매우 병렬 시간 경과 이미징을 통해 정확하게 측정됩니다. 동시에, 스트레스 내성, 단백질 발현 및 단백질 국소화를 모니터링할 수 있고, 통합된 데이터 세트를 생성하여 환경 및 유전적 차이뿐만 아니라 동종 세포 간의 유전자 발현 이질성, 변조 성장을 연구할 수 있습니다.

성장과 유전자 발현의 이질성을 측정하는 마이크로콜로니의 높은 처리량 라이브 이미징

여기에서는 원발성 쇼그렌 증후군 환자의 구강 칸디다 감염 검사를 위한 프로토콜을 제시하며, 이는 적시에 치료하고 이후 관련 합병증을 피하는 데 사용할 수 있습니다.

원발성 쇼그렌 증후군 환자의 구강 칸디다 감염 검사

배우세요 S. cerevisiae의 접착 및 아가르 침략 분석법을 통해 효모의 침윤형과 가상균사형 분화를 평가하는 방법을 알아보세요. 이 정성적 분석법은 돌연변이체의 침윤 표현형과 환경 신호가 효모 분화에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

S. cerevisiae의의 접착 및 아가르 침략을위한 분석

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