Name: Caenorhabditis elegans의 수명 및 유전자 전사 분석을위한 지질 보충 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: 배우세요 Caenorhabditis elegans에서 액체 배양 및 배지 보충을 통한 지질 처리 방법으로, 소량의 웜이나 분리된 조직에서 RNA 추출 및 전사 분석을 수행하여 노화 및 영양 대사 연구에 활용할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

유지 보수 지원에 대해 P. Svay에게 감사드립니다. 이 작업은 NIH 보조금 R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), 마치 오브 다임스 재단 (MCW), 웰치 재단 (MCW), HHMI 조사관 (MCW) 및 NIH T32 ES027801 박사 전 학생 펠로우 (MS). 일부 균주는 NIH 연구 인프라 프로그램 사무소 (P40 OD010440)가 자금을 지원하는 CGC에서 제공했습니다.

<ol><li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li>
<li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+LIPID+MAPS+classification%2C+nomenclature%2C+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li>
<li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li>
<li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li>
<li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C. Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+J+%22Ageing%3A+Lessons+from+C.+elegans.+Healthy+Ageing+and+Longevity%22">Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity</a>. Olsen, A., Gill, M. , Springer. Cham. 307-329 (2017).</li>
<li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li>
<li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li>
<li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li>
<li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li>
<li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+window+into+biology%3A+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li>
<li>Nigon, V. M., Félix, M. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li>
<li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li>
<li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545(2009).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108(2006).</li>
<li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-CoA-specific+%CE%949+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-CoA-specific Δ9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li>
<li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li>
<li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+an+animal+%CE%9412+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of an animal Δ12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li>
<li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+animal+%CF%89-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Identification of an animal ω-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+%CE%945-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a Δ5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li>
<li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879(2013).</li>
<li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression%3A+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695(2021).</li>
<li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li>
<li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CF%89-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">ω-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes & Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1%2FNrf+in+response+to+germ+cell+absence%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836(2015).</li>
<li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1%2FNrf%2C+stress+responses%2C+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li>
<li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li>
<li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CF%89-3+fatty+acid+%CE%B1-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49%2FPPAR%CE%B1+and+oxidation+to+oxylipins%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The ω-3 fatty acid α-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPARα and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li>
<li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254(2017).</li>
<li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li>
<li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li>
<li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li>
<li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li>
<li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li>
<li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li>
</ol>

저자는 이해 상충이 없습니다.

지질 보충제는 건강한 노화에 대한 특정 지질 종의 직접적인 영향을 설명하기 위해 노화 연구에 사용되었습니다 6,7,23,26,27,31. 그러나 지질 보충 절차는 어려울 수 있으며 실험 간의 불일치로 인해 재현 불가능한 결과가 발생할 수 있습니다. 여기에서는 새로운 과학자들이 기술적 부정확성으로 인한 잠재적 인 함정을 피할 수 있도록 안내하기 위해 첫 번째 상세한 단계별 프로토콜이 문서화되어 있습니다. 이 프로토콜의 중요한 단계는 다음 단락에서 자세히 설명합니다. 지질 연구 도구 상자는 또한 지질 보충 후 소수의 벌레와 특정 벌레 조직에서만 RNA 분리를 도입하여 확장됩니다. 전...

지질 지질은 유기 용매에 용해되지만 물 1,2에는 녹지 않는 작은 소수성 또는 양친매성 분자입니다. 별개의 지질 분자는 사슬에 포함 된 탄소의 수, 위치, 이중 결합 수 및 글리세롤 또는 인산염을 포함한 결합 구조에 따라 서로 구별됩니다. 지질은 막 이중층을 구성하고, 에너지 저장을 제공하고, 신호 분자 3,4로 작용하는 것을 포함하여 유기체 기능을 조절하기 위해 별개의 세포 내에서 그리고 별개의 세포에 걸쳐 중요한 역할을 합니다.
첫째, 지질은 세포외 환경에서 내부 구획을 분할하는 원형질막과 세포내 세포하막을 포함하는 생물학적 막의 구조적 구성 요소입니다. 둘째, 지질은 척추 동물과 무척추 동물의 주요 에너지 저장 형태입니다. 트리 아실 글리세롤을 포함한 중성 지질은 지방 조직을 포함한 다양한 조직에 장기간 저장됩니다. 선충류에서 Caenorhabditis elegans, 장은 주요 대사성 지방 저장 기관입니다. 그 기능은 영양소의 소화 및 흡수뿐만 아니라 포유류 간세포의 활동과 유사한 해독 과정에도 관여합니다. 다른 지방 저장 조직으로는 지질이 난 모세포 발달에 필수적인 생식선과 피부와 같은 표피 세포 3,5로 구성된 피하가 있습니다. 셋째, 최근 몇 년 동안 지질은 G 단백질 결합 및 핵 수용체를 포함한 다양한 수용체에 직접 작용하거나 막 유동성 조절 또는 번역 후 변형을 통해 간접적으로 작용하여 세포 내 및 세포 외 신호 전달에 관여하는 강력한 신호 전달 분자라는 더 많은 증거가 있습니다 6,7,8,9 . 추가 연구는 장수와 건강 수명을 촉진하는 지질 신호 전달의 기본 분자 메커니즘을 계속 밝힐 것입니다.
모델 유기체는 인간에서 연구하기에는 너무 복잡한 특정 생물학적 질문을 해결하는 데 중요합니다. 예를 들어, 회충 C. elegans는 인간의 영양 및 질병10과 관련된 생물학적 과정을 해부하기 위해 유전자 분석을 수행하기위한 훌륭한 모델입니다. 인간 생리학, 복잡한 조직, 행동 패턴 및 풍부한 유전자 조작 도구와 관련된 고도로 보존 된 분자 경로는 C. elegans를 주목할만한 모델 유기체로 만듭니다11. 예를 들어, C. elegans는 표현형 특이적 유전자를 식별하기 위한 유전자 스크리닝뿐만 아니라 RNA 간섭12를 통한 게놈 전체의 역 유전자 스크리닝을 전달하는 데 탁월합니다.
실험실에서 선충류는 대장균 박테리아의 잔디밭이 뿌려진 한천 페트리 플레이트에서 재배되어 단백질, 탄수화물, 포화 및 불포화 지방산과 같은 다량 영양소를 에너지 및 빌딩 블록의 원천으로 제공하고 보조 인자 및 비타민13과 같은 미량 영양소를 제공합니다. 포유류와 유사하게 선충류는 팔 미트 산과 스테아르 산 (각각 포화 16- 탄소 및 18- 탄소 분자)에서 지방산 분자를 합성하여 순차적으로 불포화되고 다양한 단일 불포화 지방산 (MUFA) 및 폴리 불포화 지방산 (PUFA)14,15,16,17,18. 흥미롭게도 C. elegans는 지방산 생합성, 불포화 및 신장에 관여하는 모든 필수 지방산 및 핵심 효소의 de novo 합성이 가능하여 장쇄 PUFA의 합성을 촉진합니다19. 다른 동물 종과 달리 C. elegans는 자체 ω-3 불포화 효소를 사용하여 18- 탄소 및 20- 탄소 ω-6 지방산을 ω-3 지방산으로 전환 할 수 있습니다. 또한 웜은 올레산 (OA, 18 : 1)20,21에서 리놀레산 (LA)의 형성을 촉매하는 Δ12 불포화 효소를 가지고 있습니다. 대부분의 동물이나 식물은 Δ12 및 ω-3 불포화 효소가 모두 부족하므로 PUFA를 얻기 위해 ω-6 및 ω-3의식이 섭취에 의존하는 반면 C. elegans는식이 지방산을 필요로하지 않습니다22. 기능적 불포화효소 효소가 결여된 분리된 돌연변이체는 생식, 성장, 수명 및 신경전달을 포함한 별개의 생물학적 과정에서 특정 지방산의 기능을 연구하는 데 사용되었습니다. 특정 생물학적 경로에 대한 개별 지방산의 영향은 유전적 접근과 식이 보충제16,17,23을 모두 사용하여 해결할 수 있습니다. 현재까지 지질 연구는 신경 학적 및 발달 적 조건에서 지질 합성, 분해, 저장 및 분해에 관여하는 유전자를 특성화하는 데 중점을 두었습니다24. 그러나 장수 조절에서 지질의 역할은 이제 막 밝혀지기 시작했습니다.
수명 조절의 지질 신호 전달 지질은 별개의 조직과 세포 유형에서 세포 신호 전달 캐스케이드를 활성화하여 수명 조절에 중요한 역할을 합니다. 최근 연구는 지질 결합 단백질 또는 막 수용체25의 인식을 통한 전사 및 세포-세포 통신을 조절하는 지질의 적극적인 역할을 강조했습니다. 또한식이 지질 보충제는 지질 대사가 C. elegans의 수명에 어떻게 영향을 미치는지 해부하는 훌륭한 도구를 제공합니다. 뚜렷한 MUFA와 PUFA는 전사 인자26,27을 활성화하여 수명을 촉진하는 것으로 나타났습니다.
인슐린 / IGF-1 신호 전달 및 생식선 전구체 세포의 절제를 포함한 장수 모델은 MUFA 생합성 경로와 관련이 있으며 올레산, 팔미 톨레산 및 시스-백시닉을 포함한 MUFA 보충제는 C. elegans 수명을 연장하기에 충분합니다26. MUFA 행정부가 부여한 장수 효과는 추가 조사가 필요하지만 기본 메커니즘은 산화 스트레스 반응 및 수명 조절28,29의 핵심 활성화제인 SKN-1/Nrf2 전사 인자에 의해 매개될 가능성이 높습니다. MUFA 중에서 N- 아실 에탄올 아민 (NAEs)이라고하는 특정 종류의 지방 아실 에탄올 아미드는 염증, 알레르기, 학습, 기억 및 에너지 대사를 포함한 별개의 메커니즘에서 중요한 역할을합니다30. 특히, 올레 오일 에탄올 아미드 (OEA)로 알려진 지질 분자는 지질 결합 단백질 8 (LBP-8)의 핵으로의 전좌를 촉진하여 핵 호르몬 수용체 NHR-49 및 NHR-807. OEA 아날로그 KDS-5104의 보충은 수명을 연장하기에 충분하며 산화 스트레스 반응 및 미토콘드리아 β 산화 7,8에 관여하는 유전자의 발현을 유도합니다.
동시에 PUFA의 역할은 장수 규제와도 관련이 있습니다. PUFA ω-3 지방산 α- 리놀렌산 (ALA)의 투여는 NHR-49 / PPARα, SKN-1 / NRF 전사 인자를 활성화하고 미토콘드리아 β 산화31을 유도하여 장수를 촉진합니다. 흥미롭게도, 옥시리핀으로 지칭되는 ALA의 과산화 생성물은 SKN-1/NRF를 활성화시켜 PUFA와 그 산화 유도체 모두가 장수 이점을 부여할 수 있음을 시사한다23. ω-6 지방산 아라키돈산(AA)과 디호모-γ-리놀렌산(DGLA)의 보충은 자가포식 활성화를 통해 수명을 연장하고 단백질 품질 관리를 촉진하며 낭비되고 독성이 있는 단백질 응집체27,32의 분해를 초래합니다. 보다 최근에, 지질 결합 단백질 3 (LBP-3) 및 DGLA에 의해 매개되는 세포 - 비 자율 신호 조절은 말초 신호를 뉴런에 보내 수명을 촉진하는 데 중요한 것으로 나타 났으며, 이는 전신 수준에서 조직 간 통신에서 지질 분자의 장거리 역할을 시사한다33. 본 연구는 액체 배양에서 플레이트에 파종된 박테리아 또는 박테리아 현탁액으로 지질 보충을 수행하는 각 단계를 보고합니다. 이러한 방법론은 전신 내용 또는 몇 가지 벌레에서 파생된 해부 조직을 사용하여 수명 및 전사 분석을 평가하는 데 사용됩니다. 다음 기술은 다양한 영양 연구에 적용될 수 있으며 지질 대사가 수명과 건강한 노화에 어떻게 영향을 미치는지 해부하는 유효한 도구를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>1.5mL 유봉</td><td>Genesee Scientific</td><td>93-165P15</td><td>Trizol</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A9639-500G</td><td></td></tr><tr><td>AmfiRivert cDNA 합성 플래티넘 마스터 믹스</td><td>GenDEPOT</td><td>R5600</td><td></td></tr>을 사용한 웜 그라인딩용 <tr><td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td><td>ThermoFisher</td><td>A28567</td><td>qRT-PCR용</td></tr><tr><td>벤치마크 사이언티픽 StripSpin 12 마이크로 원심분리기</td><td>벤치마크 사이언티픽</td><td>C1248</td><td>스핀 다운 PCR 튜브용</td></tr><tr><td>Branson 450 디지털 소파니퍼, w/ 1/8" 팁</td><td>Branson Ultrasonic Corporation</td><td>100-132-888R</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤</td><td>시그마</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>디메틸설폭사이드(DMSO)</td><td>시그마</td><td>D8418-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424 R 원심분리기</td><td>Eppendorf</td><td>22620444R</td><td>RNA 추출용</td></tr><tr><td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td><td>Eppendorf</td><td>950030010</td><td>역전사용</td></tr><tr><td>Ethanol, Absolute(200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-500</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td><td>Neta Scientific</td><td>665180</td><td>12-well 라이쿠이드 공급용 플레이트</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>664161</td><td>박테리아 LB 플레이트 및 웜용 10cm NGM 플레이트</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>628161</td><td>웜용 6-cm NGM 플레이트용</td></tr><tr><td>Invitrogen nuclease-free water ThermoFisher</td><td></td><td>AM9937</td><td></td></tr><tr><td>이소프로아놀</td><td>시그마</td><td>PX1835-2</td><td></td></tr><tr><td>레바 미솔 하이드로 클로라이드</td><td>VWR</td><td>SPCML1054</td><td></td></tr><tr><td>lipl-4Tg</td><td>MCW Lab</td><td>N / A</td><td>형질 전환 C. elegans</td></tr><tr><td>lipl-4Tg; fat-3(wa22)</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>형질전환 C. elegans</td></tr><tr><td>Luria Broth Base</td><td>ThermoFisher</td><td>12795-084</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 설페이트(MgSO4)</td><td>Sigma</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td><td>ThermoFisher</td><td>4483354</td><td>96-well qPCR 플레이트</td></tr><tr><td>MicroAmp 광학 접착 필름</td><td>적용 BioSystem</td><td>4311971</td><td>96웰 qPCR 플레이트를 밀봉하기 위한</td></tr> Milli-Q Advantage A10 Water Purification System Sigma Z00Q0V0WW 프로토콜 <tr><td>N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>C. elegans wild isolate</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>에서 뉴클레아제가 없는 물로 지정되지 않는 한 완충액 및 배양 배지를 포함한 모든 시약을 만드는 데 사용되는 탈이온수</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 분광 광도계</td><td>ThermoFisher</td><td>N/A</td><td>RNA 농도 측정용</td></tr><tr><td>OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>C. elegans 식품</td></tr><tr><td>인산칼륨 이염기성 삼수화물(K2HPO4&middot; 3H2O)</td><td>Sigma</td><td>P5504-1KG</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 일염기성 (KH2PO4)</td><td>Sigma</td><td>P0662-2.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td><td>ThermoFisher</td><td>4402953</td><td>몇몇 벌레 또는 벌레 조직의 역전사 및 qPCR용</td></tr><tr><td>Power SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>4367659</td><td>용 벌크 웜 샘플의 qPCR</td></tr><tr><td>Pure Bright 살균 울트라 표백제&nbsp;</td><td>KIK 인터내셔널 LLC.</td><td>59647210143</td><td>6% 가정용 표백제</td></tr> 9개의 <tr><td>함몰부가 있는 벌레 알 준비용 파이렉스 스폿 플레이트</td><td>Sigma</td><td>CLS722085-18EA</td><td>벌레 해부용 시계 유리</td></tr><tr><td>RNaseZap RNase 오염 제거 용액</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>클로라이드 나트륨(NaCl)</td><td>Sigma</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨(NaOH)</td><td>Sigma</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>인산 나트륨 이염기성 헵타하이드레이트 (Na2HPO4&middot; 7H2O)</td><td>Sigma</td><td>S9390-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td><td>Thermo</td><td>7500-4337</td><td>박테리아 수집용</td></tr><tr><td>Thermo Sorvall ST 8 원심분리기</td><td>Thermo</td><td>7500-7200</td><td>벌레 알 준비용</td></tr><tr><td>TRIzol 시약</td><td>TheroFisher</td><td>15596018</td><td>RNA 추출 시약</td></tr><tr><td>Turbo DNA-free kit</td><td>ThermoFisher</td><td>AM1907</td><td>RNA 추출에서 DNA 오염 제거용</td></tr><tr><td>Vortexer 59</td><td>Denville Scientific INV</td><td>S7030</td><td></td></tr><tr><td>VWR 일회용 펠릿 믹서 및 무선 모터</td><td>VWR</td><td>47747-370</td> Trizol VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115 VWR N/A<td>를 사용한 웜 그라인딩용</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>웜 수집용. 단종된 모델, VWR에서 Cat# 76269-064</td></tr><tr><td>웜 피커</td><td>WormStuff</td><td>59-AWP</td><td></td></tr>와 함께 사용 가능한 유사한 모델</tbody></table>

caenorhabditis elegans의 수명 및 유전자 전사 분석을위한 지질 보충

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

노화는 환경 적 및 유전 적 기여로 인한 점진적인 생리적 변화를 특징으로하는 복잡한 과정입니다. 지질은 세포막의 구조적 구성 요소를 구성하고 에너지를 저장하며 신호 분자로 사용하는 데 중요합니다. 지질 대사 및 신호 전달의 조절은 뚜렷한 장수 경로를 활성화하는 데 필수적입니다. 회충 Caenorhabditis elegans 는 지질 대사의 기여와 장수 조절의 신호 전달을 해부하는 우수하고 강력한 유기체입니다. 여러 연구 연구에서 특정 지질 분자의 식단 보충제가 C. elegans 수명을 연장하는 방법을 설명했습니다. 그러나 보충 조건의 사소한 차이로 인해 다른 실험실의 과학자들 사이에서 재현성 문제가 발생할 수 있습니다. 여기에서 C. elegans 에 대한 두 가지 자세한 보충 방법은 접시에 파종 된 박테리아 또는 액체 배양에서 박테리아 현탁액으로 지질 보충을 사용하는 것으로보고되었습니다. 또한 본원에는 몇 가지 웜으로부터 유래된 전체 웜 용해물 또는 해부된 조직을 사용하여 평생 지질 보충 및 qRT-PCR 분석을 통한 수명 분석을 수행하기 위한 세부 정보가 제공된다. 지질 보충에 대한 종단 연구와 전사 조사의 조합을 사용하여 수유 분석은 지질이 수명과 건강한 노화에 어떻게 영향을 미치는지 해부하는 신뢰할 수 있는 접근 방식을 제공합니다. 이 방법론은 또한 소수의 해부 조직 또는 소수의 동물을 사용하여 전사체의 하위 집합의 변화를 평가하기 위해 다양한 영양 스크리닝 접근법에 적용될 수 있습니다.

지질 보충 시 몇 가지 전체 벌레를 사용한 전사 변화의 검증 몇몇 전체 웜에서 RNA를 추출하고 cDNA로 역전사하는 프로토콜이 재현 가능하고 벌크 웜의 데이터와 비교할 수 있는지 여부를 조사하기 위해 장에서 리소좀 산 리파아제 lipl-4를 과발현하는 수명이 긴 웜 균주를 사용했습니다 7,8,33,35. 이전 연구3에서 보고된 신경펩티드 처리 유전자 egl-21 및 egl-7,8,33의 전사 유도가 검증되었습니다(그림 2A...

본 프로토콜은 Caenorhabditis elegans에 대한 액체 및 온플레이트 배양에서 지질 보충 방법을 설명하고 벌크 또는 소수의 웜 및 웜 조직으로부터의 종단 연구 및 유전자 전사 분석과 결합합니다.

Caenorhabditis elegans의 수명 및 유전자 전사 분석을위한 지질 보충

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

이 프로토콜은 모델 유기체 인 C.elegans에서 종단 및 전사 분석의 조합을 사용하여 두 가지 지질 보충 전략을 설명합니다. 이 기술은 소수의 벌레 또는 해부 된 벌레 조직을 사용하여 전사 변화를 검사하는 방법과 벌레 개체군에 대한 액체 공급이 수력 기술과 결합 될 수있는 방법을 설명합니다. 이 기술을 수행하는 개인은 적절한 전사 분석을 달성하기 위해 실험을 수행하는 짧은 시간 때문에 조직 해부를 연습해야 합니다.우선, 하룻밤 성장한 배양물을 실온에서 10분 동안 4, 000 G에서 원심분리하여 OP50 박테리아를 수집한다. 상청액을 폐기하십시오. 박테리아 펠렛을 20 밀리리터의 박테리아 희석, 식이 제한 또는 BDR 베이스에 와동에 의해 현탁시키고 다시 10분 동안 원심분리를 반복한다.상청액을 버린 후, 박테리아 펠렛을 BDR 배지에 재현탁시켜 20 X BDR 박테리아 스톡을 제조하였다. 사용하기 전에 BDR 배지를 사용하여 박테리아 스톡을 5X로 희석하십시오. 에탄올 또는 디메틸 황산 시드를 용매로 사용하여 새로운 오토 클레이브 유리 바이알에 지질 원액을 준비하고 유리 바이알에 아르곤 또는 질소를 채워 산화를 방지합니다.지질 스톡 용액을 BDR 박테리아 용액으로 옮겨 공급 조건에서 원하는 최종 농도를 달성합니다. 20 초 동안 소용돌이 치면서 철저히 혼합하십시오. 동일한 부피의 여과된 에탄올 또는 디메틸 설폭사이드를 BDR 박테리아와 혼합함으로써 대조군 비히클을 준비한다.원하는 양의 지질 또는 비히클 대조군을 각 공급 조건에 대해 3-4회 반복하여 12웰 플레이트의 각 웰로 옮겨 지질 보충 및 액체 배양을 수행합니다. 동기화 된 Caenorrhabditis elegans 웜 현탁액을 5X BDR 박테리아와 일대일 비율로 혼합하여 밀리리터 당 1, 500 웜 및 박테리아의 경우 2.5X의 최종 농도를 달성하십시오. 그런 다음 2 밀리리터의 웜 박테리아 혼합물을 12 웰 플레이트의 각 웰로 옮깁니다.완료되면 12웰 플레이트를 호일로 감싸고 원하는 배양 길이에 대해 섭씨 20도의 100RPMM에서 플레이트를 흔듭니다. 플레이트에 지질 보충을 위해 10cm 선충 성장 배지 또는 NGM 한천 플레이트의 중앙에 지질 조절 박테리아 1mg을 씨를 뿌립니다. 많은 수의 플레이트로 작업할 때 두 플레이트를 시드하는 사이에 최종 작업 솔루션이 여러 번 소용돌이되는지 확인합니다.생물 안전 후드 내부의 어두운 곳에서 플레이트를 건조시킵니다. 동기화 된 웜 배양에서 3000 개의 웜을 10cm 플레이트로 옮깁니다. 지질 보충 판에서 수영하고 있던 벌레가 크롤링을 시작할 때까지 생물 안전 후드에서 판을 건조시킵니다.일단 건조되면, 지질 컨디셔닝 플레이트를 섭씨 20도 인큐베이터에서 원하는 시간 동안 배양하고, 고도불포화 지질을 사용하는 경우 플레이트를 빛으로부터 보호한다. PCR 튜브에서 0.2마이크로리터의 DNase I과 19.8마이크로리터의 용해 용액을 혼합하여 각 샘플에 대해 20마이크로리터의 최종 용해 용액을 준비하고 5회 위아래로 피펫팅하여 잘 혼합합니다. 소수의 전체 벌레에서 RNA를 추출하려면 박테리아 잔디에서 15-20 개의 벌레를 새로 파종되지 않은 NGM 플레이트로 옮겨 박테리아를 제거하십시오.파종되지 않은 NGM 플레이트에서 15 내지 20 웜을 최소 수의 박테리아로 새로 준비된 최종 용해 용액 20 마이크로리터가 들어 있는 PCR 튜브로 옮기고 용해 반응을 실온에서 5분 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 샘플을 멋진 냉수 욕조에 보관하고 프로브가 웜을 4 번, 5 초 동안 30 % 진폭으로 매번 초음파 처리하고 초음파 처리 시간 사이에 15 초 동안 펄스합니다. 용해 반응에 2 마이크로 리터의 정지 용액을 추가하기 전에 튜브를 실온에서 5 분 동안 배양하고 부드럽게 두드려 혼합합니다.반응물을 실온에서 2분 동안 배양한 다음 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 벌레 조직에서 RNA를 추출하려면 박테리아 잔디에서 약 20 개의 벌레를 골라 씨를 뿌리지 않은 신선한 NGM 플레이트에 넣어 벌레에서 박테리아를 제거합니다. 가능한 한 적은 박테리아로 20 개의 벌레를 4 개의 마이크로 몰 levamisole을 함유 한 500 마이크로 리터의 M9 용액이 들어있는 시계 유리에 옮깁니다.벌레가 고정되면 1 밀리리터 주사기에 부착 할 수있는 25 게이지 바늘을 사용하여 생식선 또는 장을 해부합니다. 오토클레이브 유리 피펫을 사용하여 해부된 조직을 PCR 튜브로 옮기고 튜브를 2분 동안 얼음에 침전시켜 바닥에 물질이 증착되도록 합니다. 20 마이크로 리터의 최종 용해 용액을 추가하기 전에 PCR 튜브에서 상청액을 제거하고 두드려 잘 혼합하십시오.용해 반응을 5분 동안 배양한 후 2마이크로리터의 정지 용액을 추가하고 튜브를 여러 번 두드립니다. 역전사를 진행하기 전에 튜브를 2분 동안 배양합니다. 검증 연구에서 많은 집단과 소수의 벌레에서 추출한 RNA는 신경 펩티드 처리 유전자 인 egl-3 및 egl-21의 유사한 유도를 보여주었습니다.이는 소수의 웜에서 추출한 RNA가 대규모 개체군의 표준 CDNA 합성 기술에 대한 유효한 대안이 될 수 있음을 시사합니다. 디호모-감마-리놀렌산 또는 DGLA가 보충된 lipl-4 전이유전자 웜의 해부된 장에서 뉴런 뉴로펩타이드 처리 유전자는 유도되지 않았습니다. 다양한 농도의 DGLA 보충제는 fat-3 녹다운 시 웜의 수명 연장을 구했습니다.지질 보충제가 있는 웜은 RNA 시퀀싱, 단백질체학, 대사체학 및 행동 연구를 위해 처리되어 이러한 특정 조건에서 추가 표현형을 식별할 수도 있습니다. 이 방법론은 노화 연구, 지질 생물학 및 특정 표현형과 영양 인자 또는 대사 산물 간의 관계를 확립하는 것을 목표로하는 기타 연구 분야에 적용될 수 있습니다.

lipid-supplementation-for-longevity-gene-transcriptional-analysis

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기에 단단한 판 기반식이 제한을 수행하는 프로토콜을...

솔리드 플레이트 기반식이 제한에 Caenorhabditis 엘레간스</em

&lt;em&gt; 사용 Caenorhabditis의의 우 •은 &lt;/ EM은&gt; 개발 및 생리학에 고도 불포화 지방산의 기능을 탐구 할 수있는 유용한 모델입니다. 이 프로토콜의 &lt;em&gt; C.의 보충의 효율적인 방법을 개시 엘레 &lt;/ EM&gt; 고도 불포화 지방산 다이어트.

에있는 고도 불포화 지방산의식이 보충제<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

갤럭시 다윗은 생물 정보학 교육을받지 않은 상태에서 연구자들은 분석하고 RNA-SEQ 데이터를 해석 할 수 있도록 인기있는 도구로 등장했다. C. elegans의 연구원들은 RNA-SEQ 실험, 액세스를 수행 갤럭시를 사용하여 데이터 집합을 처리하고 DAVID를 사용하여 유전자 목록에서 의미있는 생물학적 정보를 얻을 수 있도록 우리는 프로토콜을 설명합니다.

의 Transcriptomic 분석<em&gt; C</em&gt;.<em&gt; 간스</em갤럭시 프로젝트에 턱시도 제품군을 통해&gt; RNA 시퀀싱 데이터

여기, 우리는 넓은-범위 식이 제한 유전자 발현 및 수명에 관련 된 프레임 워크 제시. 우리는 넓은-범위 식이 제한 및 유전자 발현이이 패러다임에서의 양적 이미징에 대 한 프로토콜 설명합니다. 우리는 더 이상 음식 감지에 관여 유전자 회로의 정보 처리 기능 기본 공개 전산 분석 개요.

C. 선 충 에서 광범위 한 범위 식이 제한 유전자 식 수준 동안 수명 변조에서 인코딩된 정보의 정량화

여기 우리는 빠르게 잘 당 Caenorhhabditis 선 충 의 일관 된 번호 96 잘 문화 접시 선 충 성장 미디어 agar의 수백을 생산에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이러한 문화는 전체 생물의 phenotypic 심사에 대 한 유용 합니다. 우리는 여기 화면 화학 물질에 이러한 culture를 사용 하 여 프로 장 수 효과 초점.

꼬마 선 충 에서 높은 처리량 화학 심사 하는 간단한 방법

여기 우리가 설명 복제 설정 방법, 양적 측정 C. 선 충 수명/생존 하 접근법 및 healthspan 높은 처리량 및 강력한 방법으로 데이터 품질을 희생 하지 않고도 많은 조건의 심사 되므로. 이 프로토콜은 전략 하 고 데이터 복제 집합의 분석을 위한 소프트웨어 도구를 제공 합니다.

복제 설정된 방법: 양적 측정 꼬마 선 충 수명에 접근 높은 처리량

여기, 선물이 편차를 줄이기 위해, 재현성, 개선 및 해석을 용이 하 게 하기 위해에서 RNA, DNA, 그리고 동일한 샘플에서 단백질의 격리에 대 한 프로토콜.

결합 된 뉴클레오티드와 꼬마 선 충 의 단백질 추출

전립선성 감소는 노화의 특징입니다, 신경 퇴행성 질환의 발병을 촉진. 우리는 형광 기자에게 융합 된 폴리 글루타민 반복의 이종 발현을 통해 두 가지 다른 Caenorhabditis elegans 조직에서 프로테오스타시스를 정량적으로 측정하는 프로토콜을 설명합니다. 이 모델은 프로테오스타증의 생체 내 유전 적 분석을 빠르게 허용합니다.

Caenorhabditis 예인단에서 조직 특정 전립선 성 감소를 정량화

자극라만 산란 (SRS) 현미경 검사법은 특정 화학 적 moieties의 선택적, 라벨없는 이미징을 허용하고 효과적으로 생체 내에서 지질 분자를 이미지하기 위해 사용되었습니다. 여기에서, 우리는 SRS 현미경 검사법의 원리에 대한 간략한 소개를 제공하고 Caenorhabditis elegans에있는 지질 저장에 그것의 사용을 위한 방법을 기술합니다.

자극라만 산란 현미경 검사를 사용하여 Caenorhabditis elegans의 지질 저장 역학의 라벨 프리 이미징

Caenorhabditis elegans는 건강, 수명 및 스트레스에 대한 탄력성을 조사하기위한 강력하고 저렴한 방법을 갖춘 우수한 모델 시스템 역할을합니다.

Caenorhabditis elegans의 수명과 건강 상태를 측정하기위한 저비용 방법 조사

실험실에서 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans )의 먹이 공급원은 살아있는 대장균입니다. 박테리아는 대사적으로 활동적이기 때문에 예쁜꼬마선충(C. elegans )의 대사 및 약물 연구에서 혼란스러운 변수를 제시합니다.파라포름알데히드를 사용하여 박테리아를 대사적으로 비활성화하는 자세한 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다.

예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans) 연구를 위한 대사 불활성화 박테리아 방법론

배우세요 Caenorhabditis elegans에서 액체 배양 및 배지 보충을 통한 지질 처리 방법으로, 소량의 웜이나 분리된 조직에서 RNA 추출 및 전사 분석을 수행하여 노화 및 영양 대사 연구에 활용할 수 있습니다.

Caenorhabditis elegans의 수명 및 유전자 전사 분석을위한 지질 보충

더 많은 동영상 탐색