구강 안면 조작 통증 분석을 사용한 쥐의 신경 손상 유발 기계적 과민증 평가

구강 안면 통증 평가 장치 (OPAD)는 조작 적 보상 충돌 패러다임을 사용하기 때문에 전임상 통증 연구에 유용한 도구입니다. 여기에는 통각, 학습 및 동기 부여가 포함되며, 이는 인간의 통증 경험과 번역 타당성 향상에 중요합니다. 전통적인 반사 기반 분석에 비해 OPAD의 중요한 장점은 완전 자동화되어 관련 스트레스 효과를 방지하는 동물을 제지할 필요가 없으며 실험자 편향도 줄인다는 것입니다.

안와 신경의 CCI 수술을 시연하는 것은 내 실험실의 실험실 기술자 인 Darrice Montgomery가 될 것입니다. 우유 드립 트레이, 플렉시 유리 케이지 및 금속 바닥 격자를 배치하여 구강 안면 통증 평가 장치 (OPAD) 설정부터 시작하십시오. 케이지에 배선을 연결하고 병 홀더를 장치 뒷면의 금속 기둥에 밀어 넣습니다.

그런 다음 동물이 주둥이에 닿을 수 있도록 보상 우유 병을 병 홀더에 놓습니다. 홀더의 왼쪽 손잡이를 조여 병을 제자리에 고정합니다. 그런 다음 전면 패널을 켜고 케이지를 켭니다.

프로토콜을 설정하려면 소프트웨어를 열고 암호를 입력한 다음 로그온을 클릭하거나 Enter 키를 누릅니다. 비어 있는 새 실험과 프로토콜 메뉴를 클릭합니다. 장치에서 이름 없는 프로토콜을 클릭하고 이 프로토콜이 사용할 모드를 선택합니다.

장비별 모드에서 OPAD 기계식 케이지 모드를 선택하고 프로토콜 이름을 지정합니다. 모든 케이지가 켜져 있는지 확인한 후 프로토콜 창 맨 위에 있는 장치 및 항목 추가를 클릭한 다음 새 OPAD 케이지 및 연결된 모든 OPAD 케이지 추가를 선택하여 OPAD 케이지를 추가합니다. 실험 테스트 단계를 추가하려면 테스트 탭으로 이동하여 단계를 선택하고 첫 번째 단계 탭으로 이동한 다음 단계 이름을 지정합니다.

테스트 기간으로 10분을 추가합니다. 항목 탭 추가를 클릭한 다음 새 스테이지를 클릭하여 단계를 더 추가합니다. 그런 다음 추가 정보 및 치료 그룹을 클릭하여 그룹을 할당합니다.

사용 된 치료 그룹을 확인한 다음 옵션을 선택합니다. 사용자는 동물을 그룹에 수동으로 할당합니다. 프로토콜 메뉴를 클릭하여 동물 ID를 할당합니다. 추가 정보에서 동물 ID를 클릭하고 내 ID를 사용하여 동물 참조 옵션을 선택합니다.

실험 제목을 입력하고 치료 보기를 클릭하고 처리 이름을 입력하여 실험을 설정합니다. 동물을 추가하고 동물 보기 및 동물 추가를 클릭하여 처리 및 동물 ID를 할당합니다. 테스트할 동물의 수를 입력한 다음 확인을 입력합니다.

동물 목록이 나타나면 각 쥐에 대한 동물 ID와 치료법을 추가하십시오. 프로토콜 메뉴를 클릭한 다음 프로토콜 저장을 클릭하여 프로토콜을 저장합니다. 파일 이름과 소프트웨어 암호를 입력하고 저장을 클릭합니다.

그런 다음 파일을 클릭한 다음 저장을 클릭하고 소프트웨어 암호를 입력한 다음 저장 탭을 클릭하여 실험 파일을 저장합니다. 케이지를 켠 후 케이지를 테스트할 준비가 되었음을 나타내는 케이지의 녹색 표시등을 찾으십시오. 저장된 실험 파일을 더블 클릭으로 엽니다.

암호를 입력하고 로그온을 클릭하거나 Enter 키를 누릅니다. 화면 왼쪽에서 동물의 수와 해당 케이지, 해당 날짜에 실행 된 스테이지 및 테스트 상태를 확인하십시오. 케이지 화면에서 실험동물의 ID를 관찰합니다.

쥐를 새장에 넣고 해당 새장의 버튼을 누릅니다. 녹색 표시등은 테스트가 시작되면 주황색 표시등으로 바뀝니다. 동물이 기계적 스파이크와 충분히 접촉하면서 보상 병에 접근할 수 있는지 확인하십시오.

화면 오른쪽에서 핥기와 접촉 횟수를 보여주는 각 동물의 차트를 관찰하십시오. 테스트 세션이 끝나면 경고음이 들립니다. 마취 된 쥐를 수술대에 놓고 제지하십시오.

가열 패드를 사용하여 체온을 섭씨 37도로 유지하십시오. 눈이 마르지 않도록 안과 용 연고를 눈에 바르십시오. 메스 블레이드 15를 사용하여 등 잇몸과 입술 사이에 작은 절개를하십시오.

메스 블레이드를 사용하여 연조직을 제거하고 안와 신경 또는 ION의 가지를 드러냅니다. 무딘 구부러진 주사기 바늘을 사용하여 ION 주위에 두 개의 5-O 크롬 내장 합자를 놓은 다음 조직 접착제를 사용하여 상처를 닫습니다. 기준선에서 표준 10분 테스트 세션 동안, 및 수술 후 2주, 4주, 및 6주 동안 단일 CCI 이온 및 Sham 조작 래트의 접촉 시도 및 핥기 데이터가 여기에 제시된다.

이 모델은 유해하지 않은 기간 동안 쥐가 긴 음주 세션을 가지고 있음을 보여주었습니다. 부상 후 동물은 스파이크 막대와 오랫동안 얼굴 접촉을 유지할 수 없어 핥기 횟수가 감소합니다. Sham 그룹에서는 음주 기간 동안 유의 한 변화가 관찰되지 않았습니다.

기준선에서 CCI ION과 Sham 조작 쥐 사이의 평균 핥기 수는 유의한 차이를 나타내지 않았다. 그러나 CCI ION은 수술 후 4주까지 핥는 횟수를 유의하게 감소시켰고 기계적 통각 과민을 나타내는 신경 손상 후 1주일 동안 수술 후 1주일 동안 첫 번째 핥기에 대한 대기 시간을 늘렸습니다. Sham 운영 쥐에는 큰 변화가 없었습니다.

OPAD를 사용하는 동안 우유병의 거리와 스파이크의 너비를 최적화하십시오. 데이터 수집 중 오류를 줄이려면 일관성을 유지하는 것이 중요합니다.