차 샘플에서 Pyrrolizidine 알칼로이드 오염의 출처 및 경로

잡초, 토양, 신선한 찻잎 및 건조 차 샘플에서 15가지 피롤리지딘 알칼로이드의 검출 방법 개발은 차에서 피롤리지딘 알칼로이드 오염원을 탐색하기 위한 기술 지원을 제공할 수 있습니다. 고체상 추출과 비교하여 토양 샘플에 대한 흡착제 방법은 피롤리지딘 알칼로이드 분석에서 시간을 절약하고 비용을 절감하며 회수율을 높일 수 있습니다. 예열 된 말린 차 제품, 신선한 찻잎 또는 잡초에서 추출을 시작하려면 50 밀리리터 원심 분리기 튜브에서 샘플 1 그램의 무게를 측정하고 리터당 0.1 몰의 황산 용액 10 밀리리터를 튜브에 첨가합니다.

다음으로, 고체상 추출을 사용하여 분석해야 하는 경우 시료를 2분 동안 와동시키고, 흡착제 클린업을 사용하여 분석해야 하는 경우 1분 동안 와류합니다. 그런 다음 샘플을 15 분 동안 초음파 추출한 다음 실온에서 10 분 동안 9, 390G에서 원심 분리합니다. 그런 다음 끝이 플라스틱인 스포이드를 사용하여 상청액 용액을 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

추출을 두 번 수행 한 후 상청액을 튜브에 결합시킵니다. 준비된 토양에서 추출을 시작하려면 50 밀리리터 원심 분리기 튜브에서 샘플 1g의 무게를 잰다. 리터당 0.1몰의 0.1밀리리터를 3구연산 삼나트륨 용액에 첨가하여 토양 pH를 6.0으로 조정하고 샘플을 2분 동안 방치합니다.

그런 다음 리터당 0.1몰의 황산 메탄올 용액 10밀리리터를 튜브에 넣고 샘플을 2분 동안 와동시킨 다음 30분 동안 진탕합니다. 다음으로, 앞에서 설명한 것처럼 30 분 동안 초음파 추출을 수행하십시오. 그런 다음 샘플을 9, 390G에서 10분 동안 원심분리합니다.

그리고 플라스틱 팁 스포이드를 사용하여 상층액을 50 밀리리터 원심 분리기 튜브로 옮깁니다. 추출을 2회 수행한 후, 상층액을 합친다. 5 밀리리터의 메탄올과 5 밀리리터의 탈 이온수로 고체상 추출 또는 SPE 카트리지를 활성화하십시오.

활성화 후, 샘플 추출에서 10 밀리리터의 상청액을 사전 활성화 된 카트리지에 첨가한다. 샘플 용액 레벨이 카트리지의 상부 층에 도달한 후, 5밀리리터의 1% 포름산 용액으로 샘플 매트릭스를 용리한 다음 5밀리리터의 메탄올로 용리하고 용리액을 버립니다. 다음으로, 0.5% 암모니아수를 함유하는 5밀리리터의 메탄올로 분석물을 용리합니다.

0.22미크론 멤브레인 필터를 통해 용리액을 여과하여 UPLC-MS/MS로 분석합니다. 흡착제를 사용하여 샘플 클린업을 수행하려면 GCB, PSA 및 C10을 손상시키는 흡착제가 10 밀리그램에서 20 밀리그램에서 15 밀리그램의 비율로 10 밀리리터 원심 분리기 튜브를 준비합니다. 그런 다음 샘플 처리 후 얻은 상청액 2 밀리리터를 첨가하십시오.

다음으로, 시료와 흡착제 혼합물을 상온에서 8분 동안 9, 390 G에서 1분 동안 원심분리한다. 생성된 상등액 1밀리리터를 0.22미크론 멤브레인 필터를 통해 샘플 바이알에 여과한 후 UPLC-MS/MS로 분석합니다. 이 연구에서는 SPE 카트리지 방법과 비교하여 흡착제 정제 기술을 사용하여 신선한 찻잎, 말린 차 샘플 및 잡초에서 15개의 피롤리지딘 알칼로이드를 더 높은 비율로 회수했습니다.

흡착제 정제를 사용한 토양 내 알칼로이드의 회수율은 79-111 %5 개의 샘플링 장소에서 수집 된 신선한 찻잎에서 세네 시오닌보다 더 높은 함량의 인터 메딘 N- 옥사이드가 검출되었다. 세네시오닌은 샘플링 사이트 1과 2의 성숙한 잎에서 검출되지 않았습니다. 11개의 피롤리지딘 알칼로이드 중 토양에서 인터메딘 N-옥사이드만 검출된 반면, 차나무의 다른 부분에서는 세네시오닌과 인터메딘 N-옥사이드가 검출되었습니다.

또한, 두 개의 잎을 가진 하나의 새싹에서 Intermedine N-oxide의 함량이 가장 높은 것으로 나타났습니다. 이것을 먼저 시도하는 동안 가장 중요한 것은 리터당 0.1몰의 0.1밀리리터를 더하여 토양 pH를 6.0으로 조정하는 것입니다. 이 방법은 다른 식용 식물의 알칼로이드 분석에 적용할 수 있으며 알칼로이드의 출처를 탐색하기 위한 자연 기술도 제공합니다.