Name: 마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: 학습하세요 수동 유도 초음파를 이용한 마우스 자궁내막암 비침습적 모니터링 방법을. Arid1a 및 Pten 결실 모델에서 종양 진행을 추적하고 동물 실험 수를 줄이는 효율적인 기술입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NCI 난소암 포자 프로그램 P50CA228991, 박사후 과정 교육 프로그램 5T32OD011089 및 존스 홉킨스 대학의 Richard W. TeLinde Endowment의 자금 지원에 감사드립니다. 이 프로젝트는 또한 일본 사립 학교 진흥 및 상호 원조 공사 (Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan)의 사립 고등 교육 기관에 대한 경상 지출에 대한 보조금으로 부분적으로 자금을 조달 받았다.

마우스를 포함하는 모든 절차 및 실험은 존스 홉킨스 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행되었다. 모든 절차에 대해 장갑과 일회용 격리 가운을 포함하여 적절한 PPE를 착용했습니다. 날카로운 물건을 취급할 때 예방 조치를 취했으며, 사용 직후 빨간색 상자 날카로운 물건 용기에 적절하게 폐기했습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료 및 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 독시사이클린을 이용한 iPAD(inducible Pten, Arid1a double deletion) 마우스에서 자궁내막암 유도
<ol><li>앞서 설명한 대로 혼합 유전적 배경(129S, BALB/C, C57BL/6)에서 10마리의 Pax8-Cre-Arid1a-Pten 이중 결실(iPAD) 형질전환 마우스(그림 1)를 유지합니다14.</li>
	<li>독시사이클린 치료 전에 각 마우스의 난소, 난관 및 자궁의 기본 초음파(2D) 이미지를 수집합니다.</li>
	<li>유전자 결실을 유도하기 위해 7-8주령부터 최소 2주 동안 암컷 iPAD 마우스에 독점적으로 독점적으로 감소시킨 독시사이클린 하이클레이트 사료 7-8주령부터 시작하여 최소 2주 동안 암컷 iPAD 마우스에 제공합니다.</li>
</ol>2. 장비 설정
<ol><li>가열 패드를 켜고 깨끗한 흡수 패드로 덮습니다(목표 온도: 38°C).</li>
	<li>이소플루란 기화기와 O2 탱크가 적절하게 채워졌는지 확인하십시오. 내용물이 부족하면 다시 채우고 교체하십시오.</li>
	<li>유도 챔버, 노즈 콘 및 청소 시스템을 기화기에 연결합니다.</li>
	<li>초음파 기계를 설치합니다.<ol><li>자궁 또는 난소 이미징을 위해 각각 32-56MHz 또는 최대 70MHz 범위의 변환기(프로브)를 선택하십시오.</li>
		<li>프로브를 부착하고 기기의 전원을 켭니다.</li>
		<li>시스템 부팅 후 제어판을 사용하여 사용자 자격 증명으로 로그인하고 홈 화면에 액세스합니다.</li>
		<li>홈 화면에서 Applications(응용 프로그램 ) 탭으로 이동하여 Mouse (small) abdomen mode(마우스(작은) 복부 모드)를 선택합니다.</li>
		<li>스캔을 클릭하여 홈 화면으로 돌아가 라이브 이미지가 표시될 때까지 기다립니다.</li>
		<li>왼쪽 도구 모음의 옵션에서 B 모드를 선택합니다.</li>
		<li>추가 컨트롤을 클릭하여 이미지 게인 및 심도와 같은 이미지 미세 조정을 위한 추가 도구를 보거나 초당 프레임 수와 같은 클립 획득 설정을 조정합니다.</li>
		<li>이미지 설정이 선택되면 스캔을 클릭하여 홈 화면으로 돌아갑니다.</li>
	</ol></li>
	<li>O2 탱크를 켜고 유량을 유도실로 향하게 하고 유량을 1L/min으로 설정합니다.</li>
</ol>3. 제모를 포함한 초음파 스크리닝을 위한 마우스의 준비
<ol><li>유도 챔버에 마우스를 놓습니다. 마취 유도를 위해 이소플루란 기화기를 2%-3% vol/vol로 설정합니다.</li>
	<li>발가락 꼬집음에 대한 반응 부족과 약 1-2회 호흡/초의 호흡수로 적절한 마취 깊이를 결정합니다.</li>
	<li>멸균 안과 윤활제를 각 눈에 바릅니다. 적절한 크기의 가위로 마지막 갈비뼈와 골반 사이의 등쪽과 복부에서 털을 제거합니다.</li>
	<li>이미지를 촬영할 복부 및 등쪽 부위에 제모 크림을 얇게 바르십시오(필요한 경우).</li>
	<li>제모 크림이 모발을 제거하는 동안 적절한 마취 깊이를 유지하기 위해 마우스를 약 3-5분 동안 유도 챔버에 다시 넣습니다. ≤4분 후 깨끗하고 촉촉한 종이 타월로 크림을 부드럽게 닦아냅니다. 알림: 제모 크림에 장시간 노출되면 자극적이며 피부 병변을 유발할 수 있습니다.</li>
</ol>4. 장기 간의 대비를 높이기 위해 체액을 복강 주사합니다.
<ol><li>멸균 등장성 유체 용액(예: 멸균 0.9% NaCl 또는 젖산 링거 용액)으로 채워진 3-10mL 주사기를 가열 패드와 흡수 패드 사이에 몇 분 동안 배치하여 35-40°C로 따뜻하게 합니다. 기계에 워머가 없는 경우 가열 패드에 초음파 젤 한 병을 놓습니다.</li>
	<li>20-25g 마우스의 경우 1-2mL의 용액을 복강에 주입합니다.<ol><li>한 손으로 스크러프를 잡고 복부를 노출시킵니다.</li>
		<li>마우스를 ~20° 각도로 잡고 코가 바닥을 향하도록 하여 중력으로 인해 장기를 두개골로 향하게 합니다.</li>
		<li>작은 게이지 바늘 (25G, 길이 5/8, 투베르쿨린 주사기)을 사용하여 복부의 꼬리 오른쪽 사분면의 피부와 복벽을 뚫습니다.</li>
		<li>체액을 주입하기 전에 혈관 구조나 위장관에 주입되는 것을 방지하려면 최소한의 압력으로 뒤로 당깁니다. 혈액이나 다른 물질이 주사기에 들어가면 바늘을 제거하십시오. 새 바늘과 주사기를 사용하고 약간 다른 위치에서 다시 시도하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>주사 중에 마우스가 깨어나면 2%-3% vol/vol 이소플루란으로 마취를 위해 작은 유도 챔버에 다시 넣습니다.</li>
</ol>5. 등쪽 접근에서 초음파 영상
<ol><li>가열 패드 위의 흡수 패드에 복부 누운 상태로 마우스를 놓습니다(그림 2A-C).</li>
	<li>설치류 노즈 콘을 마우스의 코와 위에 단단히 놓습니다. 노즈 콘을 통해 전달되는 이소플루란으로 마취 깊이를 100% O 2에서 1%-2% vol/vol로 유지합니다. 필요에 따라 멸균 안과용 윤활제를 각 눈에 바릅니다.</li>
	<li>마우스에서 규칙적인 호흡수(1-2/s)와 발가락 꼬임 반응이 없는지 모니터링하여 마취를 조정해야 하는지 여부를 나타냅니다.</li>
	<li>소량(~0.5-1mL)의 예열 초음파 젤을 마지막 갈비뼈와 골반 사이의 마취된 마우스의 양쪽에 있는 척추에 축(측면)으로 놓습니다.</li>
	<li>초음파 프로브에 소량의 젤을 넣으십시오.</li>
	<li>프로브의 전면이 두개골 쪽에 오도록 프로브를 척추와 평행하게 놓습니다. 적절한 프로브 방향을 나타내기 위해 프로브 헤드에 표시기 표시가 있습니다. 수집되는 각각의 새로운 이미지 세트에 대해 날짜, 시간, 동물 ID, 프로브 방향 및 동물 측면(오른쪽, 왼쪽, 등쪽, 복부)을 기록합니다.</li>
	<li>복부 누운 상태(등쪽 피부가 프로브에 닿음)에 마우스를 놓고 신장 랜드마크가 있는지 해당 부위를 천천히 스캔합니다(그림 2B 및 그림 3). 신장을 바라보고 프로브 꼬리를 당겨 난소를 찾습니다.-약간 고에코 타원형에서 둥근 구조(그림 4A, B) 신장에 의해 두개골-복부와 등쪽 복벽에 의해 등쪽-외측으로 경계를 이루는 매우 고에코 난소 지방 패드 내에서. 참고: 꼬리와 난소의 측면 압력은 난소를 복벽에 더 가깝게 유도하고 장의 고리에서 멀어지게 할 수 있습니다. 난소는 해부학적으로 등쪽 복벽에 맞닿아 있으며, 복부와 외측은 축근, 꼬리는 신장에 위치합니다.</li>
	<li>컨트롤 화면 하단의 슬라이더를 사용하여 신호 게 인을 조정하여 이미지 대비를 개선합니다.</li>
	<li>신장의 영상을 개선하려면 반대쪽 복부에 손가락으로 압력을 가하십시오. 압력과 각도를 척추와 직접 평행한 것에서 복부 ~20°까지 변경합니다.</li>
	<li>관심 기관이 view, 클립 저장 또는 녹화 시작을 클릭한 다음 완료되면 녹화 중지 를 클릭하여 비디오를 수집하여 미리 설정된 프레임 수로 이미지를 유지합니다.</li>
	<li>라이브 이미지 또는 Save Frame 버튼을 사용하여 녹화에서 단일 프레임을 저장합니다.</li>
	<li>자궁을 이미지화하려면 난소가 시야의 가장 두개골 측면에 올 때까지 프로브를 꼬리쪽으로 당깁니다. 자궁이 보일 때까지 프로브 압력과 각도를 변경하십시오.</li>
	<li>관심 있는 각 기관에 대해 비디오 및 프레임 수집을 반복합니다.</li>
	<li>외측 다리 근육도 볼 수 있는 등쪽 복벽을 따라 세로로 달리는 자궁을 찾습니다(그림 4B). 참고: 자궁 크기와 내강 직경은 발정 단계와 질병 상태에 따라 달라질 수 있습니다.</li>
	<li>연동 운동에 대해 조직을 모니터링하여 장 루프와 자궁 고정 뿔을 구별합니다.</li>
</ol>6. 복부 접근에서 이미지 수집
<ol><li>마우스를 등쪽 누운 자세로 놓고 눈 윤활이 충분하고 주둥이가 코 콘에 단단히 고정되어 있는지 확인합니다(그림 2A).</li>
	<li>소량(~0.5-1mL)의 예열 초음파 젤을 복부 복부에 바르고 치골의 정중선 두개골에 프로브를 적용하여 방광을 저에코 랜드마크로 찾습니다(그림 5). 참고: 방광이 너무 커서 자궁 영상이 가려지면 하복부에 부드러운 압력을 가하여 소변을 표현할 수 있습니다.</li>
	<li>탐침을 방광 옆으로 당겨 자궁 뿔을 찾습니다. 마우스의 한쪽 또는 양쪽에서 가벼운 디지털 압력을 가하여 뿔을 시야로 가져옵니다. 프로브를 마우스에 수직으로 잡고 복부의 양쪽을 스캔하여 양쪽 뿔의 가로 모습(단면)을 캡처합니다. 프로브를 돌려 시상 뷰를 캡처합니다.</li>
	<li>초음파 검사 후 종이 타월로 마우스의 젤을 깨끗이 닦고 케이지로 돌려 보내 회복시킵니다. 마우스는 2-5 분 안에 완전히 깨어납니다. 완전히 깨어나고 보행이 가능하면 마우스를 동물 방으로 되돌립니다. 알림: 저온의 가열 패드를 케이지 아래에 놓아 회수를 위해 케이지를 따뜻하게 할 수 있습니다.</li>
	<li>실험적 또는 인도적 종점에서 마우스를 안락사시킵니다. 이상적으로는 스트레스를 줄이기 위해 홈 케이지에서 마우스를 안락사시키는 것이 좋습니다. 또는 마우스를 깨끗한 챔버에 넣습니다. 분당 챔버 부피의 10%-30%의 변위 속도로 가압된 CO2 를 전달합니다. 약 5분 동안 눈에 보이는 호흡이 없으면 경추 탈구로 인한 사망을 확인합니다. 종양 채취를 위해 복부 부검을 진행하십시오.</li>
</ol>

<ol><li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+Research+and+Practice%22%5BJournal%5D)">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5(2020).</li>
<li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125(2020).</li>
<li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome%3A+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li>
<li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research%3A+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238(2012).</li>
<li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li>
<li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research%3A+A+review+of+examples%2C+options%2C+and+resources%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li>
<li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuing+education+course+%231%3A+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li>
<li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+biomicroscopy%3A+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%2C+Fertility+and+Development%22%5BJournal%5D)">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li>
<li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li>
<li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106(2009).</li>
<li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Tohoku+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li>
<li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038(2017).</li>
<li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717(2020).</li>
<li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer%3A+Insights+from+a+new+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144(2021).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

이 프로토콜은 생쥐의 자궁 내 선암 진행에서 자궁 형태학적 변화를 평가하기 위한 초음파의 유용성을 조사합니다. 본 연구에서는 생쥐에서 자궁내막암의 유도를 종단으로 추적하여 초음파로 검출된 해부학적 세부 사항이 육안적 및 조직학적 병리의 지표임을 밝혀냈다. 이것은 생쥐에서 자궁암의 진행을 추적하기 위해 여러 시점에서 초음파로 모니터링되는 더 적은 수의 생쥐를 대상으로 종단 연구를 사용할 수 있는 문을 열어줍니다. 이 세로 검출은 레일 시스템 초음파 장비를 사용하지 않고 휴대용 프로브를 사용하여 수행되었습니다. 사용되는 고주파 프로브(변환기)는 널리 사용 가능하므로 전 세계 여러 기관에서 이 접근 방식을 재현할 수 있습니다. 프로토콜의 중요한 단계에는 실험에 필요한 분해능 수준에 맞는 올바른 프로브를 사용하고 초음파 전에 이미징을 위해 마우스를 준비하는 것이 포함됩니다. 
마우스를 준비하는 중요한 단계는 연구 영역에서 모든 모발을 제거하고 복강에 체액을 주입하는 것입니다. 피부에 남...

마우스는 생식 장애에 대한 가장 중요한 동물 모델 중 하나이다 1,2,3. 난소암과 자궁암의 여러 유전자 변형 또는 유도 설치류 모델이 있습니다. 이러한 연구는 일반적으로 형태학적 및 병리학적 변화의 종단적 경향을 포착하기 위해 서로 다른 시점에서 안락사된 여러 코호트에 의존합니다. 이것은 개별 마우스에서 암 발병에 대한 지속적인 데이터를 획득하는 능력을 방지합니다. 추가적으로, 개별 마우스의 질병 진행 상태를 알지 못하면, 개입 연구는 특정 동물에서 진행을 검출하기 위한 개별 역치보다는 미리 결정된 시점과 이전 코호트의 평균 소견을 기반으로 한다 4,5. 따라서 신약 또는 화합물 테스트를 위한 전임상 모델을 용이하게 하고 병리학에 대한 이해를 가속화하는 동시에 엄격함과 재현성을 높이기 위해 살아있는 동물에서 종단적 평가를 허용하는 이미징 접근법이 필요합니다6.
초음파 영상(US)은 다른 영상 방법에 비해 상대적으로 쉽고 저렴하며 수행하기 쉽고 놀라운 해상도를 가질 수 있기 때문에 마우스 자궁암 진행의 종단 모니터링에 매력적인 방법입니다 6,7. 이 비침습적 방식은 깨어 있는 생쥐 또는 5-10분 검사를 사용하여 짧은 진정 상태에서 생쥐에서 미크론 규모의 특징을 포착할 수 있습니다. 초음파 현미경은 마우스 난포 발달 8 및 이식 또는 유도된 신생물의 성장을 측정하는 방법으로 검증되었다 9,10,11. 고주파 US는 또한 경피적 자궁내 주사12 및 발정 주기13 동안 쥐의 자궁 변화 관찰에 사용되었다. 고주파 US는 표준화된 위치와 압력으로 고해상도 이미지를 캡처하기 위해 변환기/프로브를 고정하는 레일 시스템을 사용하여 특수 고정 플랫폼에 고정된 마우스와 함께 사용할 수 있습니다. 그러나 이 장비는 모든 기관에서 사용할 수 있는 것은 아닙니다. 휴대용 변환기 스캐닝 방법은 덜 전용 장비로 채택할 수 있으며 마우스의 임상 진단 및 연구 응용 프로그램 모두에 사용할 수 있습니다.
휴대용 고주파 프로브를 사용한 미국 이미징을 사용하여 여러 주에 걸쳐 자궁암 발병을 모니터링할 수 있는지 여부에 대한 의문이 남아 있습니다. 내장과 유사하게 설치류 자궁은 복부 내에서 매우 움직이고 여러 조직 깊이를 통해 인접해 있는 얇고 가느다란 구조로 신장과 같이 상대적으로 움직이지 않는 기관보다 이미징이 더 어렵습니다. 이 연구는 초음파로 관찰된 조직과 조직병리학 사이의 상관관계를 확립하고, 마우스 자궁을 찾기 위한 랜드마크를 정의하고, 자궁내막암의 종단적 평가의 타당성을 결정하고자 했습니다. 이 연구는 미국에 의해 이미지화된 자궁의 모양과 조직 병리학 사이의 질적 일치를 보여주는 데이터와 몇 주에 걸친 마우스의 연속 이미징을 보여줍니다. 이러한 결과는 휴대용 US가 마우스의 자궁내막암 발병을 모니터링하는 데 사용될 수 있음을 나타내며, 따라서 전용 장비 없이 자궁암을 연구하기 위해 개별 마우스 종단 데이터를 수집할 수 있는 기회를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>Reagents and Equipment Used For Animal Care</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td><td>Envigio</td><td>TD.01306</td><td>Mouse Feed</td></tr><tr><td>Reagents and Equipment Used to Ultrasound Imaging</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL injectable 0.9% NaCl&nbsp;</td><td>Hospira, Inc</td><td>RL-7302</td> 플라스틱 지지대가 있는 <td>등장성 유체</td></tr><tr><td>흡수 패드</td><td>Daigger</td><td>EF8313</td><td>흡수 패드</td></tr><tr><td>마취 유도 챔버</td><td>Harvard Apparatus</td><td>75-2029</td><td>인덕션 챔버</td></tr><tr><td>마취 흡수 키트(흡수기 캐니스터, 홀더, 튜빙 및 어댑터 포함</td>) <td>CWE, Inc</td><td>13-20000</td><td>노즈 콘 및 튜빙</td></tr><tr><td>Aquasonic Clear 초음파 젤 (0.25 리터)</td> <td>Parker Laboratoies</td><td>08-03</td><td>초음파 젤</td></tr><tr><td>BD Plastipak 3 mL 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309657</td> 주<td>사기</td></tr><tr><td>F / 공기 청소부 숯 용기</td><td>OMNICON</td><td>80120</td><td>마취 용 청소 시스템</td></tr><tr><td>이소 플루란, USP</td><td>Vet One</td><td>502017</td><td>마취제</td></tr><tr><td>M1050 비 호흡 모바일 마취 기계</td><td>Scivena Scientific</td><td>M1050</td><td>마취 기화기</td></tr><tr><td>MX550S, 25-55MHz 변환기, 15mm, Linear</td><td>VisualSonics</td><td>MX550S</td><td>초음파 변환기(프로브)</td></tr><tr><td>Nair Hair Aloe & 라놀린 제모 로션 - 9.0 oz</td><td>Nair</td><td></td><td>Depilliating Cream</td></tr><tr><td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td><td>Philips North America</td><td>MG7750</td><td>Clippers</td></tr><tr><td>PrecisionGlide 25 G 1" Needle</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>Needle Puralube 안과 연고</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>윤활 안약</td></tr><tr><td>Vevo 3100 이미징 시스템</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 3100</td><td>초음파 기계</td></tr><tr><td>Vevo LAB 5.6.1</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo LAB 5.6.1</td><td>초음파 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>비닐 가열 패드 커버 포함, 12 x 15"</td><td>Sunbeam</td><td>731-500-000R</td><td>가열 패드</td></tr><tr><td>Wd 요소 2TB 기본 스토리지</td><td>Western Digital Elements</td><td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td><td>데이터 스토리지</td></tr><tr><td>면역조직화학에 사용되는 Reagents and Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% w/v Formalin</td><td>Fischer Scientific</td><td>SF98-4</td><td>Tissue Fixation Buffer</td></tr><tr><td>Animal-Free Blocker and Dilutent, R.T.U.</td><td>벡터 연구소 Inc.</td><td>&nbsp; SP5035</td><td>항체 차단제</td></tr><tr><td>충전 슈퍼 프로스트 플러스 유리 슬라이드</td><td>VWR</td><td>4831-703</td><td>조직 장착 슬라이드</td></tr><tr><td>시트레이트 버퍼</td><td>밀리포어시그마</td><td>&nbsp; C9999-1000ML</td><td>에피토프 레트리벌 버퍼(pTEN)</td></tr><tr><td>Cytoseal &ndash; 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-4</td><td>Resin for Slide Sealing</td></tr><tr><td>Gold Seal Cover Glass</td><td>Thermo Scientific</td><td>3322</td><td>Coverslide</td></tr><tr><td>Harris Modified Hematoxylin</td><td>MilliporeSigma</td><td>HHS32-1L</td><td>카운터스테인 버퍼</td></tr><tr><td>하이브리드화 인큐베이터(이중 챔버)</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-247-30Q</td><td>파라핀</td></tr><tr><td>ImmPACT DAB 기판을 녹이기 위한 오븐, 과산화효소(HRP)</td><td>Vector Laboratories Inc.</td><td>SK-4105</td><td>신호 개발 기판</td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP 염소 안티 토끼 IgG 폴리머 검출 키트, Peroxidase</td><td>Vector Laboratories Inc.</td><td>MP-7451</td><td>2차 IHC 항체</td></tr><tr><td>Oster 5712 디지털 식품 기선</td><td>Oster</td><td>5712</td><td>항원결정기 레트라이벌</td></tr><tr><td>토끼 mAB anti-ARID1a</td><td>abcam</td><td>ab182560</td><td>1차 IHC 항체 (1:1,000)</td></tr><tr><td>rabbit mAB anti-PTEN</td><td>Cell Signaling</td><td>9559</td><td>1차 IHC 항체 (1:100)</td></tr><tr><td>Scotts 수돗물 대체품</td><td>MilliporeSigma</td><td>S5134-100ML</td><td>"Blueing" 버퍼</td></tr><tr><td>조직 경로 IV 카세트</td><td>Fischer Scientific</td><td>22272416</td><td>Tissue Fixation Cassette</td></tr><tr><td>Trilogy 버퍼</td><td>셀 Marque</td><td>&nbsp; 920P-10</td><td>에피토프 레트리벌 버퍼(ARID1a)</td></tr></tbody></table>

마우스에서 종양 억제인자 arid1a 및 pten 의 pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

자궁암은 이러한 모델에서 취급 및 유전자 조작의 용이성으로 인해 생쥐에서 연구될 수 있습니다. 그러나 이러한 연구는 종종 다른 코호트에서 여러 시점에서 안락사된 동물의 사후 병리를 평가하는 것으로 제한되며, 이는 연구에 필요한 마우스의 수를 증가시킵니다. 종단 연구에서 이미징 마우스는 개별 동물의 질병 진행을 추적하여 필요한 마우스의 수를 줄일 수 있습니다. 초음파 기술의 발전으로 조직의 마이크로미터 수준의 변화를 감지할 수 있게 되었습니다. 초음파는 난소의 난포 성숙과 이종 이식 성장을 연구하는 데 사용되었지만 마우스 자궁의 형태학적 변화에는 적용되지 않았습니다. 이 프로토콜은 유도된 자궁내막암 마우스 모델에서 병리학과 생체 내 이미징 비교의 병치를 조사합니다. 초음파로 관찰된 특징은 육안적 병리학 및 조직학에서 볼 수 있는 변화의 정도와 일치했습니다. 초음파는 관찰 된 병리를 매우 예측하는 것으로 밝혀졌으며, 생쥐의 암과 같은 자궁 질환의 종단 연구에 초음파 검사의 통합을 지원합니다.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten 이중 결실(iPAD) 형질전환 마우스는 이전에 기술된 바와 같이 혼합 유전적 배경(129S, BALB/C, C57BL/6)에서 유지되었다14. 마우스는 모두 Cre 재조합 효소를 유도하기 위해 2 주 동안 독시사이클린 사료를 공급 받았다. 우리 그룹의 이전 연구에서 독시사이클린은 위관 영양14에 의해 투여되었습니다. 그러나 이 현재 연구에서 독시사이클린 사료 유도 방법은 효율적으로 작동하여 마우스의 위관영양 스트레스를 감소시켰습니다. 독시사이클린 투여 방법이 자궁과 같은 Pax8 발현 세포에서 종양 억제 인자 (Arid1a 및 Pten)에 대한 DNA를 절제하는 데 필요한 Cre 재조합 효소 발현을 유도하는 데 적합한지 확인하는 것이 중요합니다. ARID1a 및 pTEN14에 대한 항체를 사용한 면역조...

이 프로토콜은 전체 및 조직학적 변화와 상관관계가 있는 초음파 영상을 사용하여 자궁내막암의 유도성 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 형태학적 변화의 진행을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

이 연구는 수동 유도 초음파가 자궁내막암의 유도 마우스 모델에서 자궁 병리의 발달을 모니터링하는 데 매우 적합하다는 것을 보여줍니다. 초음파 영상은 비침습적이므로 며칠과 몇 주에 걸쳐 개별 마우스에 대한 종단 연구가 가능합니다. 이를 통해 개인차를 포착할 수 있고 궁극적으로 연구에 사용할 동물 수를 줄일 수 있습니다.이 방법은 병리학적 변화 및 비뇨기 및 소화관의 신생물 및 만성 질환에 대한 것을 포함한 기타 미러링 모델을 모니터링하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다. 32-56 메가 헤르츠 범위의 변환기 또는 프로브를 선택하여 자궁 또는 난소 이미징을위한 초음파 기계 설정을 시작하십시오. 홈 화면에서 Applications(응용 프로그램) 탭으로 이동하여 Mouse Small Abdomen Mode(마우스 작은 복부 모드)를 선택합니다.그런 다음 스캔을 클릭하여 홈 화면으로 돌아가 라이브 이미지가 표시될 때까지 기다립니다. 그런 다음 추가 컨트롤 옵션을 클릭하기 전에 왼쪽 도구 모음의 옵션에서 B 모드를 선택하여 이미지 게인 및 깊이와 같은 이미지 미세 조정을 위한 추가 도구를 보거나 초당 프레임 수와 같은 클립 획득 설정을 조정합니다. 이미지 설정이 선택되면 B 모드를 클릭하여 홈 화면으로 돌아갑니다.가열 패드와 흡수 패드 사이에 멸균 등장 유체 용액으로 채워진 3-10 밀리리터 주사기를 몇 분 동안 놓고 섭씨 35-40 도로 예열합니다. 기계에 워머가 없으면 가열 패드에 초음파 젤 한 병을 놓습니다. 마우스의 복강에 1-2 밀리리터의 용액을 주입하려면 한 손으로 스크러프를 잡고 복부를 노출시킵니다.그런 다음 코가 바닥을 향하도록 마우스를 약 20도 각도로 잡습니다. 복부의 꼬리 오른쪽 사분면의 피부와 복벽을 통해 25게이지 투베르쿨린 주사기 바늘을 삽입합니다. 맥관 구조나 위장관으로의 주입을 피하려면 혈액을 찾기 위해 최소한의 압력으로 주사기 플런저를 뒤로 당깁니다.마우스의 코와 위에 설치류 노즈 콘을 단단히 놓기 전에 가열 패드 위의 흡수 패드에 마우스를 복부 누운 상태로 놓습니다. 마지막 갈비뼈와 골반 사이에 마취된 마우스의 양쪽에 있는 척추에 소량의 예열 초음파 젤을 축으로 놓습니다. 초음파 프로브에 소량의 젤을 넣으십시오.다음으로, 프로브의 전면이 두개골 쪽에 오도록 프로브를 척추와 평행하게 놓습니다. 복부 누운 상태에서 마우스를 사용하여 신장 랜드마크를 찾기 위해 해당 부위를 천천히 스캔합니다. 신장

non-invasive-ultrasound-assessment-endometrial-cancer-progression

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 난소암의 성장과 재발을 감지, 정량화 및 모니터링할 수 있는 비침습적 동물 이미징 플랫폼을 설명합니다. 이 복막내 이종이식 모델은 난소암 환자의 임상 프로필을 모방합니다.

비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

난소암 전이는 수많은 미만성 복강 내 병변을 특징으로 하기 때문에 종양 부담을 시각적으로 정확하게 정량화하는 것이 어렵습니다.  여기에서는 적색 형광 단백질(RFP) 표지 종양 세포 및 광학 이미징을 사용하여 전이성 종양 부담의 현장 및 생체 외 정량화를 위한 방법을 설명합니다.

복강 내 난소 암 전이의 정량

마이크로 컴퓨터 단층촬영을 사용하여 선암종 마우스 모델의 폐에서 종양 결절 발달을 감지하는 방법과 시간 경과에 따른 결절 크기 및 치료에 대한 반응 변화를 모니터링하는 데 사용하는 방법을 설명합니다. 평가의 정확성은 종말점 조직학적 정량화로 확인되었습니다.

종양 개발의 평가를 위해 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 사용하고 후속 치료에 대한 반응의를 폐암의 마우스 모델에서

마우스 널리 임신 생물학을 공부 하는 데 사용 됩니다. 그러나, 임신 종료는 이러한 연구는 경도 조사 하는 걸로 하 고 동물의 큰 숫자의 사용을 필요로 필요 합니다. 따라서 조기 발견에 대 한 높은 주파수 초음파의 비-침략 적 기법 및 임신 마우스에서 후 이식 이벤트 모니터링 설명 합니다.

마우스에서 초기 임신 특성에 대 한 3 차원 높은-주파수 초음파의 새로운 사용

이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

여기, 선물이 붙일 레이블된 인간의 자궁내 막 조각 쥐에 투입의 라이브 이미징에 대 한 프로토콜. 메서드를 모니터링을 통해 endometriotic 병 변 크기에 선택의 약의 효과 실시간으로 형광 기자에 의해 방출 되는 형광의 정량화를 공부 하 고 수 있습니다.

궁의 분리 마우스 모델에서 병 변 크기의 비 침 투 적인 모니터링

이 프로토콜은 초음파 화상 진찰에 의하여 형성된 종양의 정량화뿐만 아니라 마우스에 있는 KRAS 폐 종양을 유도하기 위하여 취한 단계를 기술합니다. 작은 종양은 B 선으로 초기 시간대에 시각화됩니다. 이후 시점에서 상대 종양 부피 측정은 초음파 소프트웨어의 측정 도구에 의해 달성됩니다.

초음파 화상 진찰에 의하여 마우스에 있는 폐 종양 진행의 탐지

흑색 종은 다른 장기로 빠르게 퍼지는 매우 공격적인 질병입니다. 이 프로토콜은 전이성 흑색종의 Braf/Pten 마우스 모델에서 사타구니 림프절의 부피를 모니터링하기 위해 3D 렌더링과 결합된 초고주파 초음파 이미징의 적용을 설명합니다.

흑색종의 Braf/Pten 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 이미징에 의한 림프절 부피 분석

현재 프로토콜은 전체 마우스 갑상선을 시각화하고 역형성 갑상선 암종의 성장을 모니터링하기 위한 고주파 초음파를 설명합니다.

유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양 분석을 위한 고해상도 초음파 검사

이 프로토콜은 마우스에서 유방암 환자 유래 이종이식편의 정소성 이식을 위한 효율적인 비수술적 방법을 설명합니다. 이 기술은 효소 종양 해리 후 유방 지방 패드에 직접 주입하여 고처리량 이식을 가능하게 합니다. 포괄적인 검증은 모델 충실도를 보장하여 다양한 유방암 하위 유형에 대한 엄격한 연구를 촉진합니다.

High-Throughput Dissociation and orthotopic Implantation of Breast Cancer Patient-derived Xenografts(유방암 환자 유래 이종이식편의 High-Throughput Dissociation and orthotopic Implantation of breast Cancer Patient-derived Xenografts)

이 프로토콜은 최대 4마리의 동물에 대해 다중 챔버 침대를 사용하여 유전자 조작 마우스 모델에서 췌장 선암종 종양을 검출하기 위해 최대 4대의 동물에 대해 병렬 자기공명영상(MRI)을 촬영합니다. 이 다동물 MRI 프로토콜은 종양을 빠르고 비용 효율적으로 탐지하고 측정하여 전임상 연구를 위한 동물 선발과 종양 성장의 종단 모니터링을 용이하게 합니다.

췌장암 마우스 모델에서 종양 측정을 위한 다동물 자기공명영상

학습하세요 수동 유도 초음파를 이용한 마우스 자궁내막암 비침습적 모니터링 방법을. Arid1a 및 Pten 결실 모델에서 종양 진행을 추적하고 동물 실험 수를 줄이는 효율적인 기술입니다.

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

더 많은 동영상 탐색