일본 뇌염 예방 접종 아동의 림프구 검출을 위한 유세포 분석기 간 실험실 간 이동 표준화

유세포 분석기의 표준화 방법은 실험실 결과의 상호 인증을 위한 실행 가능한 접근 방식을 제공하고 여러 센터의 연구 프로젝트와 결과의 일관성을 보장합니다. 시간 소비를 최소화하는 방법은 실행하기 쉽고, 자동화하고, 템플릿을 분석하고, 데이터 분석의 요구 사항을 획기적으로 줄일 수 있습니다. 이송 실험실에서 유세포분석기 버튼을 클릭하고 구성 보기를 선택하여 유세포분석기 A의 소프트웨어에서 새 구성을 생성하기 시작합니다.

구성 목록에서 기본 구성 폴더를 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 새 폴더를 선택한 다음 이름을 바꿉니다. 그런 다음 기본 구성을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 복사하여 새 구성을 만듭니다. 새 폴더를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 새 구성의 이름을 바꾸기 전에 기본 구성을 붙여넣고, 표준화된 방법 전송"매개변수 목록에서 FETC와 같은 매개변수 이름을 적절한 감지기 530/30으로 드래그하고 새 구성에 대한 추가 매개변수도 편집합니다.

이송 실험실에서 실험을 표준화하려면 이 유세포분석기 A 설정을 사용하여 성능 검사를 실행하고 비드를 추적하여 유세포분석기 A가 잘 작동하는지 확인합니다. 소프트웨어 브라우저 창에서 유세포분석기 A 설정을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 응용 프로그램 설정을 선택하여 워크시트를 만듭니다. 그런 다음 염색되지 않은 샘플을 사용하여 전방 산란 영역(FSC)과 측면 산란 영역(SSC)의 광증배관(PMT) 전압과 모든 형광 파라미터를 조정합니다.

실험 유세포분석기 설정을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 응용 프로그램 설정을 선택하여 응용 프로그램 설정을 저장합니다. 보정 컨트롤을 자동으로 추가하려면 실험 버튼을 클릭하고 보정 설정 메뉴를 선택한 후 보정 컨트롤 만들기를 선택합니다. 모든 보정 제어 비드에 대한 데이터를 기록합니다.

완료되면 실험을 클릭하고 보정 설정을 선택하고 보정을 자동으로 계산한 후 단일 세포 염색 대조군에 대한 데이터를 기록합니다. CD45 RAA APC를 사용하여 R7-18의 보상 값을 15% APC로 수정하고, CD19 BB700을 사용하여 APC H7의 보상 값을 14% BB700으로 수정하고, CD8 R7-18을 사용하여 APC H7의 보상 값을 60%R7-18로 수정합니다. CST 비드에 대한 데이터를 기록한 후 CST 브라이트 비드에 대한 목표 값 템플릿의 글로벌 워크 시트를 만들고 완료되면 유세포 분석기 어레이에서 샘플을 실행하고 25, 000 개의 림프구를 수집합니다.

샘플에 대한 분석 템플릿의 전역 워크시트를 만들고 실험 템플릿을 세포분석기 A.Export에 저장합니다. CD-ROM을 사용하여 실험 템플릿을 내보냅니다. 실험 템플릿을 테스트 랩의 유세포분석기 B로 옮기려면 CST 비드를 사용하여 성능 검사를 수행하여 유세포분석기 B가 잘 작동하는지 확인합니다. 세포분석기 A에서 실험 템플릿을 가져오고 템플릿을 사용하여 세포분석기 B에 대한 실험을 만듭니다.

동일한 로트의 CST 비드를 사용하여 이전 MFI 기기와 일치하도록 각 형광 채널의 형광 매개변수 전압을 조정합니다. 필요한 경우 염색되지 않은 샘플을 사용하여 FSC 전압을 조정합니다. 실험용 유세포분석기 설정을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 애플리케이션 설정을 선택하여 애플리케이션 설정을 저장합니다.

다음으로, CD45 RA APC를 사용하여 R7-18의 보상 값을 15%APC로 수정한다. CD19 BB700을 사용하여 APC H7의 보상 값을 24%BB700으로 수정합니다. 그리고 CD8 R7-18을 사용하여 APC H7의 보상 값을 60%R7-18로 수정합니다.

보상 값 수정 후 유세포 분석기 B에서 샘플을 실행하고 25, 000 개의 림프구를 수집하십시오. 세포계 설정 및 추적 또는 CST 브라이트 비드에 대한 목표값 템플릿의 글로벌 워크시트에서 10개의 형광 채널의 히스토그램 플롯을 얻었고, 각 매개변수에 대한 목표값은 히스토그램 게이트 내의 중앙값을 표시하여 표시했습니다. 기기 표준화 후 세포분석기 A와 B를 사용하여 얻은 샘플의 도트 플롯은 자동 분석 템플릿을 사용하여 서로 다른 기기 간의 데이터 일관성을 입증했습니다.

6개 샘플의 결과를 두 개의 서로 다른 기기 모델에서 비교했을 때 유의미한 차이가 관찰되지 않았습니다. 표준화된 방법을 사용하여 서로 다른 기구에서 얻은 15개의 림프 하위 집합의 결과는 매우 유사한 데이터를 얻었습니다. 동일한 구성 이름, 템플릿 생성 및 다른 기기에서 안전 비드의 에코테크 값을 만드는 것은 이 프로토콜의 중요한 단계입니다.