Name: Mouse Fluorescent Angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: 학습하세요 마우스 형광 혈관조영술 이미지에서 망막 혈관 직경을 자동 측정하는 방법을. MATLAB 프로그램을 활용한 이 기술은 퇴행성 망막 질환 연구에 유용한 정량적 임상 지표를 제공합니다.

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이 연구는 아이슬란드 연구 기금 (217796-052) (A.G.L.)과 헬가 욘스도티르 (Helga Jónsdóttir)와 시굴리디 크리스티얀손 기념 기금 (Helga Jónsdóttir and Sigurlidi Kristjánsson Memorial Fund (A.G.L 및 T.E.)의 박사후 연구원 장학금으로 지원되었습니다. 저자들은 생쥐를 제공한 Eiríkur Steingrímsson 교수에게 감사를 표합니다.

모든 실험은 아이슬란드 식품 및 수의학 당국(MAST 라이선스 번호 2108002)의 승인을 받았습니다. 모든 동물 연구는 ARVO(Association for Research in Vision and Ophthalmology)의 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 성명서에 따라 수행되었습니다. 이 연구에서는 남성과 여성 C57BL/6J 및 Mitfmi-vga9/+ 마우스를 사용했습니다. C57BL/6J 마우스(n=7)를 대조군으로 사용하였다. 야생형은 상업적으로 얻어졌지만( 재료 표 참조), 모든 돌연변이 마우스(n = 7)는 아이슬란드 대학의 생물 의학 센터의 동물 시설에서 사육되고 사육되었습니다. 본 연구에서는 3개월 된 동물을 사용했습니다. 그러나 이 프로토콜은 1개월 이상의 동물에게도 적용됩니다.
1. 실험 준비
<ol><li>마취 혼합물을 준비합니다. 2mL 케타민 원액(25mg/mL) 및 250μL 자일라진 원액(2%) 앰플 1개를 사용하여 케타민/자일라진 혼합물(25mg/mL 케타민 및 20mg/mL 자일라진)의 작업 용액을 준비합니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>케타민/자일라진 혼합물의 복강 내 주사로 쥐를 마취하고 쥐 체중의 4배에 달하는 액체를 주입합니다. 예를 들어, 무게가 20g인 마우스는 자일라진(체중 4mg/kg) 및 케타민(체중 40mg/kg) 혼합물의 작업 용량을 얻기 위해 35μL의 자일라진/케타민 작업 용액이 필요합니다.</li>
	<li>마취 직후 10% 페닐에프린 염산염과 1% 트로피카마이드를 점안액으로 동공을 확장합니다.</li>
	<li>동물이 완전히 마취되고 동공이 넓게 확장될 때까지 기다리십시오.</li>
	<li>플루오레세인 염 용액을 준비합니다. 9mL의 인산염 완충 식염수(PBS, 1x)를 플루오레세인 용액 1mL(100mg/mL 원액 농도)에 추가합니다( 재료 표 참조). 최종 농도 작업 용액은 10mg/mL입니다.</li>
</ol>2. 설치류 망막 이미징 시스템을 사용한 망막 혈관의 In vivo 이미징
<ol><li>플루오레세인 작업 용액을 마취된 동물에게 복강내(체중 5μL/g)로 투여합니다.</li>
	<li>각막 표면에 2% 메틸셀룰로오스 겔 한 방울을 도포한 다음 동물을 이미징 시스템의 포지셔닝 단계에 놓습니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>망막 영상 안저 카메라 렌즈를 배치하여 쥐의 각막에 직접 부드럽게 닿도록 합니다. 시신경두를 시야 중앙에 배치하려면 정렬을 약간 조정합니다.</li>
	<li>안저 카메라의 녹색 형광 채널로 전환합니다.</li>
	<li>이미지를 촬영하기 위해 망막 혈관에 초점을 맞춥니다.</li>
	<li>이상적인 시점을 찾으려면 플루오레세인 주입 후 1, 3, 5, 10분(단, 10분 이하)에 여러 장의 사진을 찍습니다. 알림: FA 처리는 10분 이내에 완료해야 하며, 그 후에는 플루오레세인이 너무 확산되어 혈관이 감지되지 않을 수 있습니다.</li>
	<li>이미징이 완료되면 쥐가 아직 마취된 상태에서 자궁 경부 탈구로 안락사시킵니다.</li>
</ol>3. 망막혈관의 지름 분석
<ol><li>MATLAB 프로그램을 엽니다( Table of Materials 참조).</li>
	<li>"fundusDiameter.m" 코드를 다운로드하여 저장합니다( 보충 코딩 파일 1, 보충 코딩 파일 2 및 보충 코딩 파일 3 참조).</li>
	<li>코드가 저장된 폴더를 엽니다. 코드를 MATLAB의 현재 폴더 위로 끌어다 놓습니다.</li>
	<li>FFA 이미지(안저 형광 혈관 조영술 이미지) 또는 분석하려는 이미지를 MATLAB의 현재 폴더 위로 끌어다 놓습니다.</li>
	<li>MATLAB 도구 모음에서 실행 툴을 누릅니다.</li>
	<li>팝업 창이 나타납니다. 파일 이름 입력 상자에 관심 이미지의 파일 이름을 쓰고 OK를 누릅니다. 참고: 나머지 매개변수는 변경하거나 수정하지 마십시오.</li>
	<li>광학 디스크의 중심을 선택한 다음 광학 디스크의 가장자리를 선택합니다. 이제 소프트웨어는 광학 디스크의 중심에서 시계 방향으로 반경의 두 배인 원 안에서 마우스 안저 이미지의 픽셀 강도를 계산합니다(그림 1).</li>
	<li>다음으로, 소프트웨어가 안저에 있는 각 용기의 평균 용기 직경(픽셀 단위)을 혈관 수의 함수로 표시하는지 확인합니다(그림 2).</li>
	<li>그런 다음 소프트웨어가 각 선박에 대한 측정 데이터를 Excel 문서로 전송하여 이러한 값의 평균, 중앙값 및 표준 편차를 계산하는지 확인합니다(표 1 및 표 2).</li>
	<li>테이블의 모든 값을 선택하여 결과 테이블의 값을 스프레드시트 프로그램으로 이동합니다. 값을 스프레드시트에 붙여넣습니다.</li>
	<li>그래프를 플롯하고 선택한 스프레드시트 프로그램에 붙여넣은 데이터를 사용하여 통계 분석을 수행합니다( 재료 표 참조).</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

저자는 상충되는 이해관계가 존재하지 않는다고 선언한다.

본 논문은 마우스 FA 이미지에서 망막 혈관 직경과 망막 혈관 구조를 분석하는 방법을 최초로 제시한 것이다. 망막 혈관의 이미지를 캡처하기 위해 안저 이미징만 사용되었기 때문에 이 방법에는 몇 가지 단점이 있으며, 그 중 하나는 이 연구에서 조사한 마우스의 망막 혈관의 표층에서의 변화만 추론할 수 있다는 것입니다. 더 깊은 층에서의 차이점은 아직 알려져 있지 않다. 
자동 혈관 추적 및 혈관 직경을 이용한 독특한 광간섭 단층 촬영 혈관 조영술(OCTA) 영상 분석 방법이 제시되었습니다16. 그러나 이 방법에는 개별 모세혈관을 포함한 혈액 동맥 직경의 정량적 특성화를 위한 자동화된 프레임워크의 기초인 기울기 유도 최소 방사 거리(MRD) 측정이 필요합니다. 더욱이, 작은 모세혈관의 크기는 OCT 시스템이 측면 해상도16을 제한하기 때문에 어느 정도 과장되었을 수 있습니다. 이 방법은 망막 및 맥락...

아마도 신체에서 가장 많이 연구된 혈관층은 망막 혈관 구조일 것입니다. 끊임없이 발전하는 기술적 정교함으로 망막 혈관 구조는 살아있는 환자의 사진을 쉽게 촬영할 수 있으며 많은 연구 분야에서 사용됩니다1. 또한, 발달 중인 쥐의 망막 혈관 구조는 혈관 성장의 기본 생물학 연구에 매우 효과적인 모델 시스템임이 입증되었습니다. 망막 혈관 구조의 주요 목적은 신경 조직을 관통하는 층상 모세혈관 그물망을 통해 망막의 내부 부분에 대사 지원을 제공하는 것입니다2. 그럼에도 불구하고, 망막의 상태, 그리고 그에 따른 모든 기능 장애 또는 위축은 망막 혈관의 분기와 동맥의 지름 모두에 상당한 영향을 미칠 수 있으며, 이는 망막 세포와 혈관 구조 사이의 상호 작용을 보여줍니다 3,4. 미숙아 망막증(ROP), 당뇨병성 망막병증(DR), 연령 관련 황반 변성(AMD), 녹내장, 각막 신생혈관 형성 등 다양한 안과 질환이 비정상적인 안구 혈관 신생을 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다5. 망막 혈관 구조의 경우, 망막 변성의 마우스 모델은 종종 인간 혈관 질환에서 볼 수 있는 것과 유사한 변화를 보인다 6,7. 기본 나선-루프-나선-지퍼 전사 인자의 Myc 슈퍼유전자 계열에는 망막 색소 상피(RPE)에서 발현되는 미세안구증 관련 전사 인자(Mitf) 유전자가 포함됩니다8,9,10.
눈, 귀, 면역 체계, 중추 신경계, 신장, 뼈 및 피부를 포함한 수많은 기관이 Mitf 9,11,12,13에 의해 조절되는 것으로 입증되었습니다. 우리는 Mitf 유전자에 다양한 돌연변이를 가진 마우스에서 RPE의 구조와 기능이 영향을 받아 일부 망막 변성 사례가 발생하고 궁극적으로 시력 상실이 발생한다는 것을 발견했습니다10. 최근에는 Mitf 돌연변이 마우스와 야생형 마우스 간에 혈관의 수와 혈관 직경이 유의하게 다르다는 것이 밝혀졌다14. 연구자와 의사는 이제 망막 이미징 개발로 인해 생체 내에서 망막 혈관 구조를 정확하게 정량화할 수 있습니다. 1800년대 이래로 연구자들과 의사들은 망막 혈관 구조를 시각화하는 이점을 활용해 왔으며, 형광 혈관 조영술(FA)은 망막 혈류와 혈액-망막 장벽의 퇴화를 모두 보여주었다15.
이 기사에서는 MATLAB 소프트웨어에서 사용자 지정 작성한 코드를 사용하여 마우스 FA 이미지의 망막 혈관 직경을 분석하는 방법을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>1% 트로피카미드(Mydriacyl)</td><td>Alcon Inc Laboratories</td><td></td><td>Mydriatic agent</td></tr><tr><td>2% Methocel</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>하이드록시프로필릴 메틸셀룰로오스 젤</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Microsoft 365용</td> Excel 야생형 마우스 <td>Microsoft Inc</td><td></td><td>소프트웨어 패키지</td></tr><tr><td>Fluorescein sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>28803-100G</td><td>형광 혈관 조영</td></tr>술 <tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>소프트웨어 패키지</td></tr><tr><td>미크론 IV 설치류 안저 카메라</td><td>피닉스 - 마이크론</td><td>40-2200</td><td>안저 사진</td></tr><tr><td>페닐 에프린 10 % w / v</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>Mydriatic agent</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline - 100 tablets</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Dilution</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel Scientific Software</td><td></td><td>Software Package</td></tr><tr><td>S-Ketamine, 25 mg/mL</td><td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>마취 IP</td></tr></tbody></table>

mouse fluorescent angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

비정상적인 혈관 성장이 궁극적으로 시력 상실로 이어질 수 있는 망막병증에서 망막 혈관 구조의 발달을 연구하는 것이 중요합니다. 미세안구증 관련 전사 인자(Mitf) 유전자의 돌연변이는 저색소침착, 미안구증, 망막 변성, 경우에 따라 실명을 보여줍니다. 비침습적 수단을 통한 쥐 망막의 생체 내 이미징은 눈 연구에 매우 중요합니다. 그러나 크기가 작기 때문에 쥐 안저 이미징이 어렵고 특수 도구, 유지 관리 및 교육이 필요할 수 있습니다. 이 연구에서는 MATLAB으로 작성된 자동화 프로그램을 사용하여 생쥐의 망막 혈관 직경을 분석할 수 있는 고유한 소프트웨어를 개발했습니다. 안저 사진은 플루오레세인 염 용액의 복강 내 주입 후 상업용 안저 카메라 시스템으로 획득했습니다. 콘트라스트를 향상시키기 위해 이미지를 변경했으며, MATLAB 프로그램은 광학 디스크에서 사전 정의된 거리에서 평균 혈관 직경을 자동으로 추출할 수 있도록 허용했습니다. 야생형 마우스와 Mitf 유전자에 다양한 돌연변이가 있는 마우스에서 망막 혈관 직경을 분석하여 혈관 변화를 조사하였다. 여기에서 개발된 맞춤형 MATLAB 프로그램은 실용적이고 사용하기 쉬우며, 연구자들이 쥐 망막 혈관 구조의 혈관 수뿐만 아니라 평균 직경과 평균 총 직경을 편리하고 안정적으로 분석할 수 있도록 합니다.

그림 1은 테스트된 모든 마우스의 마우스 FFA 이미지에 적용된 망막 혈관을 분석하는 데 사용되는 프로세스를 보여줍니다. 광학 디스크의 두 배 큰 반경은 광학 디스크의 중심에서 시계 방향으로 원형 방향으로 픽셀의 강도를 측정하는 데 사용됩니다. 사용자가 지정한 임계값 위와 아래의 지점을 각각 발견할 때 픽셀을 시작 또는 끝 지점으로 표시합니다. 이것은 30번 반복되며, 매번 광학 디스크의 중심에서 약간 더 멀리 이동합니다. FFA 이미지는 플루오레세인 주입 후 5분 후에 촬영됩니다(그림 1A 및 그림 1B). 그런 다음 분석 소프트웨어는 30개의 관련 끝점과 각 시작점 사이의 최단 경로를 계산합니다. 이 처리의 결과는 점과 측정값이 그 사이에 흰색 선으로 표시되는 그림입니다. 대조군 및 Mitf 돌연변이 마우스로부터의 이러한 이미지의 예는 <strong ...

생쥐의 망막 혈관 구조는 혈관 패턴 형성의 메커니즘을 이해하는 데 특히 흥미롭습니다. 이 프로토콜은 광학 디스크에서 고정된 거리에서 형광 혈관 조영술 안저 영상에서 마우스 망막 혈관의 직경을 자동으로 측정합니다.

Mouse Fluorescent Angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

이 프로토콜은 유전자 돌연변이 또는 망막 질환으로 인해 마취된 마우스에서 망막 혈관의 직경을 자동으로 측정하는 쉽고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 여기에서 사용자 정의 작성된 MATLAB 프로그램이 실용적이고 사용하기 쉽고 편리하고 신뢰할 수 있다는 것입니다. 망막 혈관 직경 변화는 일반적으로 RP 및 기타 망막 혈관 질환과 같은 퇴행성 질환에서 발생합니다.마우스 모델은 치료 효능과 망막 혈관에 미치는 영향에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 방법은 눈의 혈관 질환 진행을 따른 정량화 가능한 임상 마커로 그리고 잠재적인 치료법을 모니터링하는 데 잠재적으로 유용할 수 있습니다. 먼저 플루오레세인 작동 용액이 든 주사기를 준비하여 마취된 동물에게 복강내 투여하고 각막 표면에 2% 메틸 셀룰로오스 겔 한 방울을 바릅니다.그런 다음 동물을 이미징 시스템의 포지셔닝 단계에 놓습니다. 망막 영상 안저 카메라 렌즈를 배치하여 쥐의 각막에 직접 부드럽게 닿게 하고 정렬을 약간 조정하여 시신경 머리가 시야 중앙에 위치하도록 합니다. 그런 다음 안저 카메라의 녹색 형광 채널로 전환하고 망막 혈관에 초점을 맞춰 이미지를 촬영합니다.플루오레세인 주입 후 원하는 시점에서 이미지를 캡처하여 이상적인 시점을 결정하고 플루오레세인 안저 이미지를 시각화합니다. 먼저 MATLAB 프로그램을 엽니다. 그런 다음 안저 직경을 다운로드하여 저장하십시오.M 코드. 그런 다음 안저 이미지 분석 폴더를 열고 안저 직경을 끌어다 놓습니다. m 코드를 분석 폴더에 넣습니다.FFA 이미지를 이미지 분석 폴더로 끌어다 놓습니다. MATLAB 프로그램에서 코드 파일을 두 번 클릭하여 활성화합니다. 실행 옵션을 선택합니다.이미지를 선택할 수 있는 팝업 메뉴가 나타납니다. 이미지를 선택하면 분석 매개변수에 대한 팝업 메뉴가 화면에 나타납니다. 팝업 메뉴에서 분석 파라미터를 설정하고 OK를 누릅니다. 광학 디스크의 중심을 선택한 다음 광학 디스크의 가장자리를 선택합니다.분석은 백그라운드에서 수행되고 분석 결과가 화면에 나타납니다. 테이블에는 각 용기에 대한 평균, 표준 편차 및 표준 오차 값이 포함되어 있습니다. 테이블을 저장합니다.그런 다음 평균 두께 세트로 그림을 저장하십시오. 저장된 파일이 있는 해석 폴더를 연 다음 저장된 그림을 엽니다. 저장된 테이블을 열고 값을 복사한 다음 Excel 파일에 붙여넣습니다.플루오레세인 주입 후, 대조군 마우스와 MITFMI-VGA9/돌연변이 마우스의 이미지를 획득했으며, 이를 위해 광학 디스크 중심에서 혈관의 종점까지 시계 방향으로 최단 거리를 측정했습니다. 평균 용기 직경은 야생형 및 돌연변이 마우스에 대한 용기 수의 함수로 구했습니다. 기억해야 할 가장 중요한 사항은 안저 카메라의 위치와 안저 이미지에서 광학 디스크의 중앙입니다.이 기술 외에도 신약을 탐색하고, 눈의 다양한 혈관 상태를 진단하고, 망막 혈관의 기능을 더 잘 이해하기 위해 분자 기술을 수행할 수 있습니다.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Intravital 현미경 검사는 동물에서 망막 혈관 직경, 혈류 속도 및 총 망막 혈류를 시각화하고 측정하는 데 사용할 수 있습니다.

생쥐의 망막 혈류에 대한 Intravital Video Microscopy 측정

이 프로토콜은 생쥐에서 개발로 각막 micropocket 분석에 대해 설명합니다.

각막 Micropocket 분석 : 마우스 눈에있는 혈관의 모델

망막 질환의 동물 모델에서 혈액-망막 장벽 투과성과 내부 제한 막 무결성을 조사하기 위해 여러 아데노 관련 바이러스(AAV) 변종을 망막 뉴런과 신경교세포를 라벨링하는 도구로 사용했습니다. 그런 다음 바이러스 매개 리포터 유전자 발현을 망막 장벽 투과성의 지표로 사용합니다.

도구로 아데노 관련 바이러스를 사용하여 질병 망막 장벽을 연구하는

망막 뇌와 눈에 띄는 유사성을 공유 하 고 따라서 비 접촉 맥 관 구조와 뇌의 신경 구조를 공부 하는 독특한 창을 나타냅니다. 이 프로토콜에는 망막 이미징 기술을 사용 하 여 치 매를 공부 하는 방법을 설명 합니다. 이 방법은 잠재적으로 치 매 진단 및 위험 평가에 도움이 됩니다.

망막 화상 진 찰을 사용 하 여 치 매 공부 하기

많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 망막 Arterioles Ex Vivo 에서 반응의 측정을 위한 준비 단계

여기, 우리는 방법 프로토콜 neoangiogenesis 및 구조적인 변화에 연결 된 장기 혈관 병 리의 설정에서 빠른 읽기로 쉽게 성인 tg(fli:EGFP) zebrafish 망막 맥 관 구조 분석 수 있는 논의.

물고기는 눈을 통해 당뇨병을 공부: 기정, 시각화, 및 성인 tg(fli:EGFP) Zebrafish 망막 맥 관 구조 분석

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

이 프로토콜은 망막 플랫 마운트 마우스의 제조 및 면역형광 염색 및 분석을 위한 상세한 방법을 기술한다. 마우스 새끼를위한 fluorescein 안저 혈관 조영술 (FFA)의 사용 및 이미지 처리도 자세히 설명되어 있습니다.

산소 유발 망막병증 마우스 모델에서 망막 혈관의 동적 성장 모니터링

이 문서에서는 전체 마운트 망막 제제및 증식 및 비증식 망막병에서 자주 변경되는 혈관 매개 변수의 정량적 측정에 필요한 프로토콜에 대해 잘 확립되고 재현 가능한 렉틴 얼룩 분석법에 대해 설명합니다.

비증식 및 증식 망막증을 가진 마우스의 전체 산 망막에 있는 혈관 매개변수의 정량화

여기에서는 망막 정맥 폐색(RVO) 연구에서 형광 혈관 조영술(FA) 및 광학 간섭 단층 촬영(OCT) 이미지에 대한 세 가지 데이터 분석 프로토콜을 제시합니다.

생체 내 재현성 촉진을 위한 마우스 망막의 혈관 손상 판독

망막 혈관 구조의 주위 세포는 형광 토마토 렉틴의 역궤도 주사 후 혈소판 유래 성장 인자 수용체 β로 면역 형광 염색으로 검사했습니다. 표지된 망막은 조직 제거 방법으로 추가로 처리되었으며 컨포칼 현미경으로 망막 혈관 구조를 둘러싼 주위 세포의 3차원 보기를 시각화하기 위해 전체적으로 장착되었습니다.

Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화 

학습하세요 마우스 형광 혈관조영술 이미지에서 망막 혈관 직경을 자동 측정하는 방법을. MATLAB 프로그램을 활용한 이 기술은 퇴행성 망막 질환 연구에 유용한 정량적 임상 지표를 제공합니다.

Mouse Fluorescent Angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정

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