2024년 1월 26일
이 프로토콜은 단일 대물렌즈 광시트 형광 현미경을 구축하는 방법과 세포골격 네트워크 시각화를 위한 사용법에 대해 자세히 설명합니다.
우리의 연구는 트랜스 작업 역학, 국소 구조 및 평형에서 멀리 떨어진 재료의 기계적 특성 간의 관계에 대한 지식을 발전시키는 것을 목표로 합니다. 세포골격 네트워크와 같이 평형에서 멀리 떨어진 물질을 시각화하려면 형광 광시트 현미경이 가장 적합한 기술적으로 어려운 작업인 광표백을 통해 손상을 최소화하면서 시료 부피 전체에 걸쳐 유사한 이미지 품질로 조밀한 3차원 시료를 이미지화할 수 있는 기능이 필요합니다. 형광 광시트 현미경 시스템은 뛰어난 광학 절편 기능을 제공하여 광표백을 최소화하면서 장시간 동안 이러한 두꺼운 3차원 샘플을 이미징할 수 있습니다.
특히, 우리가 소개할 단일 대물렌즈 광시트 시스템은 기존의 슬라이드 장착 샘플과 호환되므로 매우 다재다능한 도구입니다. 대다수의 단일 대물렌즈 광시트 가이드는 광범위한 광학 경험을 가진 사용자를 위해 작성되었습니다. 복잡한 단일 대물렌즈 라이트 시트 스타일 설정에 더 쉽게 접근할 수 있도록 이 상세 가이드는 초급 수준의 광학 교육 과정을 갖춘 사용자가 따라할 수 있는 단계를 제공합니다.
본 연구는 비평형 상태의 재료, 특히 세포골격 네트워크 내에서의 트랜스 작업 역학(trans work dynamics)에 대한 이해를 높이는 것을 목표로 합니다. 본 연구에서는 이러한 조밀한 3차원 시료를 최적으로 시각화하기 위한 단일 목적 라이트시트 형광 현미경의 제작 및 적용 방법을 상세히 설명합니다.
밀집된 3차원 세포골격 네트워크의 고해상도 시각화는 세포 생물학 기반 신약 개발의 초기 발견 및 기전적 리스크 제거에 매우 중요합니다. 사용자 맞춤 설정이 가능한 단일 렌즈 광시트 형광 현미경(SOLS)은 복잡한 생물학적 어셈블리의 재현 가능하고 광퇴색이 적은 이미징을 가능하게 하여, 타겟 검증 및 표현형 스크리닝의 예측 신뢰도를 높여줍니다. 이러한 접근성 높은 기기 구성은 고급 광학 단층 촬영과 실제 R&D 워크플로우 사이의 간극을 메워, 발견 단계의 변곡점에서 포트폴리오 의사 결정을 강화합니다.
SOLS 현미경은 3D 세포골격 모델의 정량적 이미징을 가능하게 함으로써 발견부터 전임상 단계까지의 연속 체계에 통합되며, 가설 기반 연구와 확장 가능한 분석법 개발을 모두 지원합니다.