Name: Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-22T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 학습하세요 마우스 orthotopic 간 이식 수술 기법과 microCT 혈관 조영술을 활용한 이식편 개통성 평가 방법. 이 프로토콜은 이식 생물학 연구와 혈관 해부학 분석에 필수적인 고해상도 영상 기술을 제공합니다.

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SMB는 NIDDK(National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases) 보조금 R01DK1234750의 지원을 받습니다. BAW는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 국립 심장, 폐 및 혈액 연구소(National Heart Lung and Blood Institute) 보조금 R01HL143000 통해 지원됩니다.

마우스의 간 이식 및 동종이식 개통성 분석

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<li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ex+vivo+lung+perfusion+as+a+platform+for+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of ex vivo lung perfusion as a platform for transplantation research.</a> World Journal of Experimental Medicine. 4 (2), 7-15 (2014).</li>
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<li>Maehara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+microcomputed+tomography+study+of+the+3D+microangioarchitecture+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22European+Radiology%22%5BJournal%5D)">Experimental microcomputed tomography study of the 3D microangioarchitecture of tumors.</a> European Radiology. 13 (7), 1559-1565 (2003).</li>
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<li>Badea, C., Hedlund, L. W., Johnson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+with+respiratory+and+cardiac+gating%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Physics%22%5BJournal%5D)">Micro-CT with respiratory and cardiac gating.</a> Medical Physics. 31 (12), 3324-3329 (2004).</li>
<li>Ma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+hemodynamics+in+a+rat+model+of+liver+cirrhosis+with+precancerous+lesions+using+multislice+spiral+CT+perfusion+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of hemodynamics in a rat model of liver cirrhosis with precancerous lesions using multislice spiral CT perfusion imaging.</a> BioMed Research International. 2013, 813174(2013).</li>
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<li>Rothe, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+contrast+enhancement+by+micro-CT+with+dedicated+contrast+agents+in+normal+mice+and+mice+with+hepatocellular+carcinoma%3A+comparison+of+one+iodinated+and+two+nanoparticle-based+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+Radiology%22%5BJournal%5D)">Time course of contrast enhancement by micro-CT with dedicated contrast agents in normal mice and mice with hepatocellular carcinoma: comparison of one iodinated and two nanoparticle-based agents.</a> Academic Radiology. 22 (2), 169-178 (2015).</li>
</ol>

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

설치류의 OLT는 문헌 2,8에 잘 설명되어 있습니다. 기술적으로 까다로운 이 시술을 수행하려면 해부학적 구조와 기술적 능력에 대한 확실한 이해가 필요하기 때문에 수년간의 미세 수술(또는 일반적인 수술)이 필요한 경우가 많습니다. 이 모델을 개발하는 과정에서 우리는 문합과 관련된 몇 가지 기술적 문제에 직면했습니다. 특히 PV 문합술의 경우 문합을 위해 정맥을 안정화하는 것이 어려운 경우가 많습니다. 우리는 하나 또는 두 개의 봉합사(외과 의사 선호)를 배치하는 것이 커프 배치를 용이하게 하는 데 도움이 된다는 것을 발견했습니다. 더 많은 스테이 봉합사를 배치하면 수술 시간이 늘어난다는 점에 유의해야 합니다.
또한 SHIVC는 복강 깊숙이 있어 적절한 노출을 제공하기 위해 클램프를 배치하기가 어렵습니다. 우리는 쥐가 구속 상태에서 가능한 한 이완되면 정맥의 유연성이 추가된다는 것을 발견했습니다. 궁극적으로, 연습을 통해 적절한 배치를 결정하는 것은 외과 의사의 몫입니다. 또한 CBD 문합으로 덕트는 다시 매우 섬세합니다. 덕트를 안정화하기 위해 스테이 봉합사를 배치하는 것은 어려울 수 있으며, 작은 거즈 조각에 놓으면 안정화에 도움이 될 수 있습니다. 마지막으로, 모든 작은 포유류는 마취 시간과 관련하여 독특하게 섬세하기 때문에 가능한 한 빨리 수술을 수행하는 것이 중요합니다. 이상적인 수술 시간은 다음과 같습니다: 1) 기증자 수술, 45-60분; 2) 백 테이블 준비, 15분; 3) 수신자 작업, 60-80분. 연습은 낭비되는 움직임을 줄이는 데 도움이 됩니다.
동물 모델이 발전함에 따라 연구 개입의 성공을 평가하는 능력도 발전했습니다. MicroCT는 1990년대 후반 쥐의 혈관 구조에 대한 연구를 수행하는 데 처음 사용되었습니다17. 설치류에서 정확하고 명확한 microCT 혈관 조영술 연구를 수행하는 데는 많은 어려움이 있습니다. 그러나 대부분의 문제는 이러한 포유류의 짧은 심장 및 호흡 주기에서 발생합니다. 이는 짧은 노출을 사용하여 모션 아티팩트를 제한하고 더 높은 광자 플루언스 비율(photon fluence rate)을 제한함으로써 극복된다 18. 일반적으로 심장 게이팅을 사용하고 호흡수를 줄이기 위해 이소플루란 농도를 조정하면 가장 선명한 이미지가 생성된다는 것을 발견했습니다. 또한 간동맥기(hepatic arterial phase), 문맥상(portal-venous phase) 및 지연기(delayed phase)와 같은 특정 단계에 설치류 특이적 대비 타이밍을 활용하면 시각화가 향상되는 것으로 나타났습니다19. ExiTron nano 12000 콘트라스트를 사용하면 몇 가지 장점이 있으며 전반적인 이미지 품질을 향상시킬 수 있습니다. 그것은 간20 및 혈액21에 있는 가장 강한 대조 증진을 제안한다. 또 다른 이점은 대조가 처음 주입 후 최대 120시간 동안 간에 존재한다는 것인데, 이는 반복 스캔이 필요한 경우 더 적은 대비가 필요하기 때문에 관련 간 독성을 줄일 수 있다는 것입니다20.
더욱이, 스캔은 이소플루란(isoflurane)으로 진정된 마우스로 수행되기 때문에, 생리학(physiology)20의 이러한 변화와 함께 대비 향상이 변경되지 않는다. 이러한 이미징 기술과 ExiTron 조영제를 사용하면 OLT에서 성공적인 문합을 명확하게 평가할 수 있습니다. MicroCT를 사용하면 장기간에 걸쳐 생체 내 동종이식편에 대한 비침습적 평가가 가능합니다. 이 프로토콜은 혈관 문합을 평가하기 위해 희생해야 하는 동물의 수를 줄이고 몇 주에 걸쳐 치료법과 혈관 구조에 미치는 영향을 연구할 수 있는 기회를 제공합니다.
제한 기술을 완성하기 위해 OLT 모델의 여러 수정이 이루어졌지만 microCT를 활용한 문합체의 시각화는 여전히 진행 중인 프로세스입니다. 또한 마우스 OLT는 이식 의학에 대한 독특한 통찰력을 제공합니다. 그러나 이 마우스를 1주일 이상 생존시키는 것이 어렵기 때문에 포괄적인 모델은 아닙니다. 전임상 실험을 더욱 구체화하기 위해 추가 이식 모델도 사용해야 합니다.
결론 microCT의 발전은 지난 10년 동안 빠르게 발전하여 연구자들에게 동물 모델 및 이식 분야에서 매우 귀중한 새로운 도구를 제공했습니다. 미래에는 더 상세한 3D 이미징을 통해 연구 및 발견에 대한 더 많은 통찰력을 얻을 수 있을 것입니다.

이식은 말기 간 질환에 대한 유일하게 효과적인 치료법입니다. 간 이식의 이점은 부인할 수 없으며, 대기자 명단에 있는 3.1년에 비해 평균 생존 기간은 11.6년이다1. 그러나 간 이식의 광범위한 적용을 제한하는 상당한 제약이 있으며, 가장 중요한 것은 적합한 고품질 기증 장기의 부족을 포함합니다. 따라서 기증자 장기 풀을 확장하려면 현재 부적합하다고 간주되는 동종 이식편을 사용할 수 있는 혁신적인 전략이 필요하며, 이식에 대한 안전 마진을 높일 수 있습니다. 따라서 간 이식에 대한 접근성을 높이려면 소동물을 대상으로 전임상 연구를 수행하는 것이 필수적입니다.
이식 연구에서 특히 중요한 것은 이식의 생체 내 모델입니다. 생쥐 기형간 이식(OLT)은 거의 30년 동안 사용되어 왔으며 2 면역 반응의 특성화, 허혈 재관류 손상, 급성 거부 반응, 새로운 약제의 치료 효과 및 장기 생존을 포함하여 이식의 여러 측면을 연구하는 데 필수적입니다 3,4,5,6,7. 이식을 연구하기 위해 마우스를 사용하는 것은 이식 결과에 대한 특정 분자 경로의 영향을 연구하기 위해 형질전환 마우스 라인을 사용할 수 있기 때문에 매우 중요합니다. 마우스의 간 이식에 대한 확립된 프로토콜은 이전에 잘 기술되어 있다 8,9.
상부 및 하부 간 하대정맥(IVC), 문맥(PV) 및 총담관(CBD)에 대해 여러 가지 문합 방법이 있습니다. 그들은 전형적으로 손 문합술 또는 쥐 폐 이식과 유사한 수정된 혈관 커프 기술에 의존한다 10,11,12. 이식 마우스의 장기 연구 및 생존과 지속적인 마우스 간 이식 프로그램 개발의 중요한 단계는 이러한 중요한 문합을 평가할 수 있는 능력입니다. 간 동종이식 개통을 평가하기 위한 영상 양식은 임상 환경에서 초음파와 컴퓨터 단층 촬영(CT)에 의존하는 경우가 많다13,14. CT는 모든 문합을 포함하여 복부 전체를 볼 수 있기 때문에 초음파에 비해 뚜렷한 이점이 있지만 초음파로 이러한 시야를 얻는 것은 작은 동물의 경우 특히 어려울 수 있습니다. 동물 연구를 강화하고 이러한 부상 및 질병 모델에서 수집할 수 있는 정보를 향상시키기 위해 정확한 microCT를 개발하는 데 상당한 연구와 자원이 투입되었습니다15,16. 여기서는 orthotopic 마우스 간 이식을 위한 프로토콜(그림 1)을 설명하고, 동종이식 개통성 및 문합 내구성을 평가하기 위한 microCT용 프로토콜에 대해 간략하게 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>#11 블레이드</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>3120030</td><td></td></tr><tr><td>4-0 실크 봉합</td>사 <td>Surgical Specialties Corp.</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>6-0 나일론 봉합</td>사 <td>AD Surgical</td><td>S-N618R13</td><td></td></tr><tr><td>7-0 나일론 봉합</td>사 <td>AD Surgial</td><td>S-N718SP13</td><td></td></tr><tr><td>8-0 나일론 봉합</td>사 <td>AD Surgical</td><td>XXS-N807T6</td><td></td></tr><tr><td>10-0 나일론 봉합</td>사 <td>AD Surgical</td><td>M-N510R19-B</td><td></td></tr><tr><td>20 G Angiocath</td><td>Boundtree</td><td>602032D</td><td></td></tr><tr><td>30 G 니들</td><td>메드 바늘</td><td>BD-305106</td><td></td></tr><tr><td>Baytril (엔로플록사신) 항균 정제</td><td>Elanco</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Bovie Chang-A-Tip 고온 소작기</td><td>USA 의료 및 수술 용품</td><td>BM-DEL1</td><td></td></tr><tr><td>불독 정맥 클램프 1 1/8</td><td>Ambler Surgical USA</td><td>18-181</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스&nbsp;</td><td>Jackson Labs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Micro 해부 스프링 가위</td><td>Roboz 수술 상점</td><td>RS-5668</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - 세밀한 펜치</td><td>파인 사이</td>언스 도구 <td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 펜치</td><td>파인 사이</td>언스 도구 <td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Medical #5/45 펜치 - 각도 45도;</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>ExiTron nano 12000</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130&nbsp;-&nbsp; 095&nbsp;-&nbsp; 698</td><td>CT 조영제&nbsp;</td></tr><tr><td>펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-7112</td><td></td></tr><tr><td>heparin</td><td>Fresnius Lab, Lake Zurich, IL</td><td>C504701</td><td></td></tr><tr><td>histidine-trypotophan-ketoglutarate&nbsp;</td><td>University Pharmacy</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>절연 용기</td><td>YETI</td><td>ROADIE 24 HARD COOLER</td><td>https://www.yeti.com/coolers/hard-coolers/roadie/10022350000.html</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>Hikma Pharmaceuticals PLC</td><td>NDC 0413-9505-10</td><td></td></tr><tr><td>Mirco Serrefines</td><td>Fine Science tools</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>마우스 직장 온도 프로브</td><td>WPI Inc</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>NEEDLE HOLDER/FORCEPS 직선</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>PE10 튜빙&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD 427400</td><td></td></tr><tr><td>perfadex</td><td>XVIVO Perfusion AB</td><td>REF99450</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-MSTAT-RT</td><td></td></tr><tr><td>Puralube&nbsp; 안과 연고</td><td>Dechra</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>식염수</td><td>PP Pharmaceuticals LLC</td><td>NDC 63323-186-10</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>Fine Science 도구</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>소형 마우스 구속 &ndash; 1" 내경</td><td>Pro Lab Corp</td><td>MH-100</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite 소형 동물 마취 시스템</td><td>Kent scientific</td><td>SS-MVG-Module</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 현미경</td><td>Leica</td><td>M500-N w / OHS</td><td></td></tr><tr><td>U-CT HR</td><td>MI Labs</td><td>NA</td><td>CT 스캐너 소프트웨어</td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen 스프링 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>xylazine</td><td>Korn Pharmaceuticals Corp</td><td>NDC 59399-110-20</td><td></td></tr><tr><td>Yasagil 클램프</td><td>Aesculap</td><td>FT351T</td><td></td></tr><tr><td>야사길 클램프</td><td>Aesculap</td><td>FT261T</td><td></td></tr><tr><td>야사길 클램프 어플리케이터</td><td>Aesculap</td><td>FT484T</td><td></td></tr></tbody></table>

microcomputed tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 orthotopic 간 이식

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

마이크로 컴퓨터 단층 촬영(microCT) 혈관 조영술은 연구자에게 매우 귀중한 리소스입니다. 이 기술의 새로운 발전으로 미세 혈관 구조의 고품질 이미지를 얻을 수 있게 되었으며 장기 이식 분야에서 충실도가 높은 도구입니다. 생쥐의 기립성 간 이식(OLT) 모델에서 microCT는 동종이식 문합을 실시간으로 평가할 수 있는 기회를 제공하며 연구 동물을 희생할 필요가 없다는 추가 이점이 있습니다. 콘트라스트의 선택과 이미지 획득 설정을 통해 고화질 이미지를 생성할 수 있으며, 이는 연구자들에게 매우 귀중한 정보를 제공합니다. 이를 통해 절차의 기술적 측면을 평가할 수 있을 뿐만 아니라 장기간에 걸쳐 다양한 치료법을 잠재적으로 평가할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는 마우스의 OLT 모델을 단계적으로 자세히 설명하고 마지막으로 고품질 이미지를 제공할 수 있는 microCT 프로토콜을 설명하여 연구자들이 고형 장기 이식에 대한 심층 분석을 수행하는 데 도움이 됩니다. 생쥐의 간 이식에 대한 단계별 가이드를 제공하고 microCT 혈관 조영술을 통해 이식편의 개통을 평가하기 위한 프로토콜에 대해 간략하게 논의합니다.

외과 의사가 아니거나, 해부학에 익숙하지 않거나, 방사선학적 결과를 해석하는 데 불편한 연구자의 경우 적절한 교육을 받은 직원이 적절한 이미지 분석을 수행해야 합니다. 마우스에서 OLT의 성공은 위의 프로토콜에서 입증됩니다. 또한 연구 지표를 개선하고 이식 성공에 대한 실시간 피드백을 제공하고 괴사의 필요성을 없애기 위해 microCT 혈관 조영 스캔을 사용하여 정확하고 선명한 이미지를 제공할 수 있습니다. 이 원고에는 대표적인 이미지가 포함되어 있습니다(그림 11). in vivo 실패한 문합술의 대표적인 이미지는 그림 12에서 볼 수 있습니다.
간 해부학과 혈관 구조에 익숙한 사람들은 IVC의 특허 정맥 문합을 볼 수 있습니다. 어떤 상황에서는 문맥도 시각화할 수 있는데, 이는 문맥 커프로 인해 이 모델에서 쉽게 만들 수 있습니다. 개방 문합을 보는 것은 수술의 기술적 성공을 나타냅니다. 또한 이러한 이미지의 3D 재구성은 연구자에게 추가 정보와 혈관 해부학에 대한 보다 자세한 이미지를 제공할 수 있습니다. 위의 모델을 활용하면 OLT 마우스 코호트의 사망률은 ~40-45%입니다.
<img alt="간 이식 해부학도 및 수술 절차; 문맥, 담관 스텐트, IVC 문합." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: orthotopic 간 이식의 개요. (A) 4개의 다른 문합을 묘사한 그래픽 그림: i) suprahepatic IVC 문합, ii) infrahepatic IVC 문합, iii) 문맥 문합, iv) 총담관 문합. 각 화살표는 혈관 또는 덕트가 절단-간상-IVC(프로토콜 단계 2.13), 간하 IVC(프로토콜 단계 2.11), 문맥(프로토콜 단계 2.10) 및 총담관(프로토콜 단계 2.7)이어야 하는 상대적 위치를 나타냅니다. (B) 문합체의 생체 내 다이어그램. 축척 막대 = 2mm. 약어: IVC = 하대정맥. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="수술 기구 다이어그램; 메스, 겸자, 가위를 포함합니다. 의료 장비 개요." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2: 수술에 사용되는 수술 도구. (A) 45° 미세 겸자, (B-E) 미세 겸자, (F) 곡선형 바늘 홀더/겸자, (G) 직선 겸자, (H) 혈관 클램프 도포자, (I) 지혈기, (J) 바늘 홀더, (K) 전기 소작 장치, (L) #11 블레이드, (M) 복부 견인기, (N,O) 마이크로 가위, (P) 미세 가위, (Q) 수술용 가위, (R,S) Yasargil 클램프, (T) 불독 정맥 클램프, (U) 미세 혈관 클램프. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="문맥 커프 및 담관 스텐트 비교; 어두운 배경에 3.5mm 스케일." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3: 문맥 커프 및 담관 스텐트. 사용 전 스텐트 및 커프의 생체 외 이미지. 축척 막대 = 3.5mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="설치류 모델의 담관 스텐트 배치, 주석이 달린 수술 절차, 생물 의학 연구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 그림 4: 기증자 수술 중 총담관 스텐트 삽입. (A) 담관 스텐트가 총담관에 삽입되는 경우. (B) 담관 내에 고정된 담관 스텐트. 축척 막대 = 2mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="간하 및 간상 IVC, 문맥 절단, 2mm 척도로 표시된 간 해부학 다이어그램." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 그림 5: 간 동종 이식편을 백테이블 준비 중 문맥 커프 배치. (A) 정맥 커프를 통해 문맥을 실을 꿰는 것. (B) 커프 위의 정맥. 축척 막대 = 2mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="문맥 커프 배치 실험; 수술 설정; 혈관 수술 기술." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 그림 6: 이식자 수술 중 문맥 문합. (A) 정맥 커프를 수취인 문맥에 삽입. (B) 봉합사로 고정된 문맥 문합. 축척 막대 = 2mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="수술 기법 다이어그램; 횡격막에 SHIVC 문합; 전벽/후벽이 확인되었습니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 그림 7: 수혜자 수술 중 Suprahepatic IVC 문합 . (A) 문합술의 후방벽이 완전합니다. (B) SHIVC 문합을 완료했습니다. 축척 막대 = 2mm. 약어: IVC = 하대정맥; SHIVC = suprahepatic IVC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="외과적 문합 방법, HVVC 조직, 전벽 및 후벽 봉합사를 보여주는 다이어그램." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig08.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> 그림 8: 수혜자 수술 중 Infrahepatic IVC 문합 . (A) 문합체의 후방벽이 완전합니다. (B) IHIVC 문합을 완료했습니다. 축척 막대 = 2mm. 약어: IVC = 하대정맥; IHIVC = infrahepatic IVC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig08large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="간 이식에서 스텐트를 이용한 담관 문합; 수술 절차, 매크로 이미지, 세부 설정." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig09.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> 그림 9: 수용자 수술 중 총담관 문합 . (A) 수용자 총담관 내에 담관 스텐트를 삽입합니다. (B) 담관 문합 확보. 축척 막대 = 1mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig09large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="뇌 영상 실험을 위한 마우스 MRI 스캔 준비 및 진입 튜브 설정." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig10.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 10"> 그림 10: 마우스 microCT 혈관 조영술 동물 준비. (A) 조영제를 투여하기 위한 쥐 꼬리 정맥 주사. (B) 마우스가 microCT 기계를 통과하고 있습니다. 약어: microCT = microcomputed tomography. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig10large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="문맥(PV) 및 하대정맥(IVC) 단면을 보여주는 CT 스캔 이미지." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig11.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 11"> 그림 11: 동종이식 개통의 microCT 혈관 조영술을 보여주는 대표 이미지. (A,B) IVC 전체에서 대비를 볼 수 있으며, 이는 상부 및 하부 문합체의 개통성을 보여줍니다. (C) 문맥의 대비, 다시 개통을 보여줍니다. (D) 혈관 구조의 3D 재구성. 약어: microCT = microcomputed tomography; IVC = 하대정맥; PV = 포털 정맥. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig11large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="수술용 현미경 이미지에서 문맥 문합 왜곡 및 SHVC 문합 출혈." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65537/65537fig12.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 12"> 그림 12: 실패한 생체 내 문합을 보여주는 대표적인 이미지. (A) 정맥의 왜곡으로 인해 혈류가 부족하여 문맥 문합이 실패한 경우. (B) 과다 출혈로 인한 상부 IVC 문합 실패. 축척 막대 = 2mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65537/65537fig12large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...

이식은 말기 장기 질환에 대한 유일하게 효과적인 치료법인 경우가 많습니다. 간 이식의 손상에 내재된 복잡한 메커니즘을 이해하기 위해 동종 이식 손상의 생리학 및 병태생리학을 요약하기 위해 강력한 소동물 이식 모델이 개발되었습니다. 이식 시 관찰되는 조직 손상과 관련된 기계론적 경로를 심층적으로 조사하고 기증자 풀을 확장하기 위한 혁신적인 전략이 개발되어야 합니다.이식을 연구하기 위해 마우스를 사용하는 것은 동종 이식편 손상의 병태생리학에 대한 특정 분자 경로의 역할을 연구하기 위해 유전자 편집 및 형질전환 마우스 계통을 사용할 수 있기 때문에 매우 중요합니다. 생쥐 간 이식에는 혈관 문합체의 직경이 작다는 점과 그에 따른 혈전증이 동종이식 실패로 이어질 수 있는 위험 등 여러 가지 기술적 문제가 있습니다. 초음파 혈관 조영술과 같은 많은 기술이 사용되어 왔지만 마이크로 컴퓨터 단층 촬영은 전체 복부의 혈관 문합에 대한 고해상도 이미지를 얻을 수 있는 등의 장점이 있습니다.이러한 연구는 시간 경과에 따른 간의 혈관 개통성과 풍부함을 평가하기 위해 종단적으로 수행할 수 있습니다. 설치류에서 정확하고 명확한 마이크로 CT 혈관 조영술 연구를 수행하는 데는 많은 어려움이 있습니다. 심장 게이팅을 사용하고 호흡수를 줄이기 위해 이소플루란 농도를 조정하면 가장 선명한 이미지가 생성된다는 것을 발견했습니다.또한 특정 단계에 설치류별 대비 타이밍을 활용하면 시각화도 향상된다는 사실도 발견했습니다.

successful-orthotopic-liver-transplantation-mice-utilizing

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 시궁창에서 orthotopic 간 이식을위한 클래식 두 커프스 기술의 쉬운 설정 개정을 제시.

쥐에게 Orthotopic 간 이식

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

Suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 재건 쥐 orthotopic 간 이식에 어려운 단계에 남아 있다. 이 문서에서 우리는 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

정형외과 성 인간 간 전이성 포도막 흑색종 이종이식 마우스 모델은 배양된 인간 포도정 흑색종 세포주를 가진 환자 유래 종양 덩어리 및 바늘 주입 기술을 이용한 외과 정형외과 이식 기술을 사용하여 만들어졌습니다.

면역결핍 마우스에서 간 직교 인간 편도 흑색종 Xenograft 플랫폼의 생성

여기에서 우리는 간동맥 결찰을 포함하거나 포함하지 않는 동소 간세포 암종 이종이식편을 만들고 [18 F]플루오로미소니다졸([18 F]FMISO) 및 [18F]플루오로데옥시글루코스([18F]FDG).

간세포 암종의 동소 마우스 모델에서 비침습적 PET/MR 이미징

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스 orthotopic 간 이식에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건을 위한 기술 정보를 제공합니다.

Mouse Orthotopic Liver Transplantation에서 Cuff Technique을 사용한 혈관 재건

작은 창자 이식은 되돌릴 장 실패 환자에 대한 인정 치료 옵션이되었습니다. 쥐의 orthotopic 작은 창자 이식 우리의 실험 모델은 장 이식을 복잡하게 기본 immunologic과 염증 프로세스를 처리 할 수​​있는 신뢰할 수있는 도구로 제공하고 있습니다.

쥐 Orthotopic 작은 창자 이식

학습하세요 마우스 orthotopic 간 이식 수술 기법과 microCT 혈관 조영술을 활용한 이식편 개통성 평가 방법. 이 프로토콜은 이식 생물학 연구와 혈관 해부학 분석에 필수적인 고해상도 영상 기술을 제공합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

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