Name: 인간 신생아 장 장내염과 디스바이오틱 마이크로바이옴을 통합한 괴사성 장염의 미세유체 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-28T12:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 배우세요 미세유체 칩을 활용한 괴사성 장염(NEC) 체외 모델링 방법을. 신생아 장기관류와 내피세포, 미생물군집을 결합하여 조산아 장 질환의 병태생리를 연구하고 새로운 치료 전략을 탐색합니다.

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이 원고는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 R01DK118568(MG), R01DK124614(MG) 및 R01HD105301(MG), Chan Zuckerberg Initiative Grant 2022-316749(MG), Thrasher Research Fund Early Career Award(LCF), UNC Children's Development Early Career Investigator Grant(LCF)의 지원을 받았습니다. 채플 힐에 있는 노스캐롤라이나 대학교의 소아과.

기계론적 연구 및 약물 발견을 위한 괴사성 장염 모델

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</ol>

저자는 이 원고와 관련된 이해 상충이 없음을 선언합니다.

이 NEC-on-a-chip 시스템은 NEC의 병태생리학을 모델링하는 데 사용할 수 있는 강력한 새 도구입니다. 이 플랫폼은 연속적인 발광 흐름 및 스트레치가 있는 공동 배양 시스템을 통합하여 이전 모델보다 생체 내 장 내 환경과 더 유사한 복잡한 미세환경을 제공합니다. 이러한 조건은 성숙한 상피 하위 유형과 단단한 접합부로 구성된 고도로 편광된 상피가 늘어선 3D 융모와 같은 구조의 발달을 촉진합니다(그림 2)36. 또한 정점 상피 표면은 환자 유래 미생물 또는 새로운 치료제와 같은 실험 자극에 노출되기 위해 쉽게 접근할 수 있습니다. 마지막으로, 이 모델은 관련 환자 집단에서 파생된 장내유세포를 활용하여 다양한 염증성 및 비염증성 장 질환과 정상적인 장 상피 발달 메커니즘을 연구하는 데에도 사용할 수 있습니다. 이 모델을 사용하면 단일 환자 샘플에서 데이터 수집을 극대화할 수 있으며, 이는 신생아 장 샘플의 제한된...

괴사성 장염(Necrotizing enterocolitis, NEC)은 조산아에게 영향을 미치며, 체중 1500g < 출생아의 경우 발병률이 최대 10%에 이른다1. NEC의 병태생리학은 복잡하며 장 상피의 손상, 장 밀착 접합부의 파괴, 장 장벽 투과성 증가, 면역 조절 장애 및 상피 세포 사멸을 포함합니다 2,3. NEC의 발병기전과 관련된 메커니즘에 대한 우리의 이해는 불완전하며, 수십 년간의 연구에도 불구하고 효과적인 표적 치료법은 아직 없습니다.
NEC 연구의 진전을 가로막는 중요한 장벽은 인간 유아로부터 분리한 1차 장 조직의 가용성이 제한적이고 크기가 작다는 것입니다. NEC를 앓고 있는 영아의 장 조직을 절제하면 괴사하고 심하게 손상되는 경우가 많아 질병 발병 전 메커니즘에 대한 연구가 복잡해집니다. 예를 들어, NEC를 앓고 있는 영아의 소장에는 면역 세포가 넘쳐나며, 장 줄기세포의 수가 감소하고, 상피 세포 증식이 감소하며, 상피 세포 사멸이 증가한다 4,5,6,7. 이로 인해 이러한 샘플에서 장 상피 세포를 배양하고 적대적인 염증 환경에서 분해될 수 있는 RNA와 단백질을 분리하는 데 어려움이 있습니다. 또한, 외과적 NEC를 앓고 있는 영아의 경우 질병 진행이 이미 진행되었기 때문에 질병을 유발하는 요인에 대한 기계론적 연구는 실현 불가능합니다. 이러한 한계로 인해 NEC의 기계론적 연구를 위해 동물 모델에 의존하게 되었습니다.
NEC의 동물 모델은 생쥐, 쥐, 새끼 돼지, 토끼 및 개코원숭이에 대해 확립되었다 5,8,9,11. 동물 모델의 강점은 NEC와 유사한 장 질환이 생물 불균형 마이크로바이옴, 저산소증의 반복적인 에피소드 및 모유 수유 부족을 포함하여 인간의 NEC 발병과 관련된 요인에 의해 유발된다는 것입니다 5,8,10,11. 또한, 실험 NEC 동안 관찰 된 염증 반응 및 병리학적 변화는 인간 질병과 유사합니다 5,9,12. 이러한 모델은 인간 NEC의 많은 특징을 모방하지만 동물과 인간에서 NEC의 병태생리학 사이에는 고유한 차이점이 있습니다. 예를 들어, NEC의 쥐 모델은 만삭으로 태어난 마우스에서 유도되며, 장 발달이 불완전하지만 NEC의 병태생리학은 이러한 임상적 맥락에서 본질적으로 다릅니다. 출생 시 쥐의 장 유전자 발현은 생존 가능한 인간 태아와 유사하며, 임신 22-24주의 조산아의 유전자 발현과 14일째까지 비슷하지 않다(P14)13. 이것은 P10 이후 마우스에서 장 손상이 일반적으로 유도될 수 없기 때문에 쥐 NEC 모델을 혼란스럽게 합니다. 또한, 생쥐의 근친교배 균주는 인간 신생아15의 면역학적 다양성14 및 미생물학적 다양성이 결여되어 있으며, 이는 또 다른 교란 요인으로 작용한다. 따라서 NEC 연구에 1차 인간 샘플의 통합이 증가하면 이 분야 연구의 임상적 관련성이 향상됩니다.
NEC의 체외 기전에 대한 연구는 전통적으로 대장 선암(Caco2) 및 인간 결장 선암(HT-29) 세포와 같은 성인 장암 세포에서 유래한 단일형 세포주를 활용해 왔다16. 이러한 모델은 편리하지만 성인 암 세포로부터의 성장, 분극되지 않은 구조 및 배양의 반복적인 통과와 관련된 표현형 변화로 인해 생리학적 관련성이 제한적입니다. 장 장내골은 장 조직의 소낭에서 성장할 수 있고, 모든 장 상피 아형으로 분화될 수 있으며, 3차원(3D) 융모와 같은 구조를 형성할 수 있기 때문에 이러한 모델보다 개선된다(17,18,19,20). 최근에, 장내 장내골은 미세유체 기술과 결합되어 소장-온-어-칩(small intestine-on-a-chip) 모델을 개발하고, 생리학적으로 더 관련성이 높은 시험관 내 모델 시스템(in vitro modelsystem)을 제공한다(21).
초기 장기 칩 미세 유체 장치는 2000 년대 초반에 도입되었습니다22,23,24. 최초의 장기 칩(organ-on-a-chip) 모델은 인간 호흡 폐 온 칩 25(Lung-on-a-chip25)였습니다. 그 뒤를 이어 장 21, 간26, 신장27, 골수 28, 혈액뇌장벽29, 심장30과 같은 수많은 단일 장기 모델이 나왔다. 이러한 장기 칩 모델은 급성 방사선 증후군,31 만성 폐쇄성 폐 질환,32 및 신경 퇴행성 질환33을 포함한 급성, 만성 및 희귀 질환을 연구하는 데 사용되었습니다. 이러한 칩에 있는 세포의 분극화된 특성과 다공성 막으로 분리된 두 개의 세포 구획의 존재는 관류, 화학 농도 구배 및 면역 세포 화학주성34,35와 같은 복잡한 생리학적 과정의 모델링을 가능하게 합니다. 따라서 이러한 미세유체 시스템은 인간 질병의 병태생리학 및 메커니즘을 연구하기 위한 새로운 도구를 제공합니다.
소장온어칩(small intestine-on-a-chip) 모델은 2018년 Kasendra et al.에 의해 기술되었으며, 그는 소아(10-14세) 소장 생검 표본을 장내형으로 분화하고 미세유체 장치(21)에서 배양했습니다. 혈관 내피 세포, 지속적인 배지 흐름 및 스트레칭/이완도 이 모델에 통합되었습니다. 그들은 장 상피 아형 분화, 3D 융모 유사 축의 형성, 점액 생성 및 소장 유전자 발현 패턴을 관찰했다21. 이 미세유체 모델은 NEC36을 가진 신생아 장 장내, 내피 세포 및 신생아의 마이크로바이옴을 통합하는 NEC-on-a-chip 시스템의 개발로 신생아 질환에 적용되었습니다. NEC-on-a-chip은 염증성 유전자 발현, 특수 상피 세포의 손실, 장 장벽 기능 감소 등 인간 NEC의 많은 중요한 특징을 요약합니다36. 따라서 이 모델은 기계론적 연구 및 약물 발견을 포함하여 NEC 연구에서 수많은 응용 분야를 가지고 있습니다. 이 원고에서는 NEC-on-a-chip 모델의 성능에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>[Leu15]-Gastrin I human</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9145</td><td></td></tr><tr><td>A 83-01</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Advanced Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham's F-12</td><td>Gibco 12634010</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement, serum free (50x)</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Basic Bio-kit</td><td>Emulate</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy 2 멀티모드 마이크로플레이트 리더</td><td>Agilent</td><td>&nbsp; 7131000</td><td></td></tr><tr><td>브랜드 메타크릴레이트(PMMA) 큐벳, 세미 마이크로</td><td>BrandTech</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>세포 회수 솔루션</td><td>Corning</td><td>354270</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Real-Time PCR 시스템</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>칩 크래들</td><td>에뮬레이트</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Chip-S1 Stretchable 칩</td><td>에뮬레이트</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML1046</td><td></td></tr><tr><td>Clear TC 처리된 다중 웰 플레이트,&nbsp; 48 웰&nbsp;</td>인간 태반에서 추출한 <td>Corning</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5533</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소, 타입 I, 분말</td><td>Gibco</td><td>17018029</td><td></td></tr><tr><td>완전한 인간 내피 세포 매체 키트&nbsp;</td><td>Cell Biologics</td><td>H-1168</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 폴리프로필렌 원심분리기 튜브, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-12</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 폴리프로필렌 원심분리기 튜브, 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-8</td><td></td></tr><tr><td>Countess 세포 계수 챔버 슬라이드</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Countess II 자동 세포 계수기</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td></td><td></td>AMQAX1000</tr><tr><td>DAPT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Cascade Blue, 3000 MW, 음이온성, 라이신 고정 가능한</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; D7132</td><td>투과성 염료&nbsp;</td></tr><tr><td>디메틸 설폭시드 (DMSO)</td> <td>시그마-알드리치</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>일회용 PES 필터 유닛, 0.2um aPES 멤브레인</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>FB12566504</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 혈청</td><td>시그마-알드리치</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>둘베코&프라임; s 수정된 독수리&프라임; s 매체 - 고포도당</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s 인산염 완충 식염수 (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, 0.5 M,&nbsp; pH 8.0</td><td>Corning</td><td>46-034-CI</td><td></td></tr><tr><td>ER-1 표면 활성화 시약</td><td>ER-1</td><td>Chip 활성화 시약 1</td><td></td></tr><tr><td>ER-2 표면 활성화 시약을</td> 에뮬레이트;<td>ER-2</td><td>칩 활성화 시약 2</td>피브로넥틴 인간 단백질, 플라즈마 Gibco <td>33016015</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> Fisherbrand를 에뮬레이트&<tr><td>nbsp; 투명 뚜껑이 있는 페트리 접시, 100mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>젤라틴 기반 코팅 솔루션&nbsp;</td><td>Cell Biologics</td><td>6950</td> Genie Temp-Shaker 300 Scientific Industries, Inc. (세포 생물학 제제 6950 <td></td></tr><tr><td>지니 템프 셰이커 300</td><td>Scientific Industries, Inc.)</td><td>SI-G300</td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15750060</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, 액체 1M 용액 (238.3 mg/ mL)</td><td>Corning</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342, Trihydrochloride, Trihydrate&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>인간 콜라겐 유형 I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CC050</td><td></td></tr><tr><td>인간 1차 소장 미세혈관 내피 세포</td><td>세포 생물학적 제제</td><td>H-6054</td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-000-013</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 범용 디럭스 수조</td><td>Fisher Scientific</td><td>FSGPD10</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth (LB) 한천, Miller</td><td>Supelco</td><td>L3027</td><td></td></tr><tr><td>L-WRN 셀&nbsp;</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CRL-3276</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel 성장 인자 감소 기저막 매트릭스, LDEV-free&nbsp;</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>세포 배양 매트릭스</td></tr><tr><td>N-2 보충제 (100x)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl-L-cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1009005</td><td></td></tr><tr><td>NAILSTAR UV LAMP</td><td>NailStar</td><td>NS-01-US</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop OneC&nbsp; 마이크로볼륨 UV-Vis 분광 광도계</td><td>Thermo Scientific</td><td>840-274200</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>시그마-알드리치</td><td>72340</td><td></td></tr><tr><td>Orb-HM1 허브 모듈</td><td>에뮬레이트</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>ThermoFisher</td><td>047392.9L</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite Multi Pipette L8-200XLS+</td><td>Rainin</td><td>17013805</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 TR LTS 1000&micro; L S 768A/8</td><td>Rainin</td><td>17014966</td><td></td></tr><tr><td>Pod 휴대용 모듈</td><td>에뮬레이트</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>프리미엄 등급 태아 소 세럼 (FBS)(열 비활성화)&nbsp;</td><td>Avantor Seradigm</td><td>1500-500</td><td></td></tr><tr><td>QuantiTect 역전사 키트&nbsp;</td><td>QIAGEN</td><td>205313</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 표피 성장 인자 (EGF)</td><td>PeproTech</td><td>315-09</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542</td><td>Tocris</td><td>1614</td><td></td></tr><tr><td>스퀘어 바이오 어세이 접시, 손잡이가 있음, TC 처리되지 않음&nbsp;</td><td>코닝</td><td>431111</td><td></td></tr><tr><td>SsoAdvanced Universal SYBR&nbsp; 그린 슈퍼믹스</td><td>Bio-Rad</td><td>1725271</td><td></td></tr><tr><td>Steriflip-GV 멸균 원심분리기 튜브 상단 필터 유닛</td><td>Millipore</td><td>SE1M179M6</td><td></td></tr><tr><td>멸균 세포 여과기, 70um</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기, 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-453</td><td></td></tr><tr><td>직선, 세밀, 날카로운 가위</td><td>Miltex&nbsp; Instruments</td><td>MH5-300</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Sorvall X4R Pro-MD 원심분리기</td><td>Thermo Scientific</td><td>75016052</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp; 엑스-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>세제</td></tr><tr><td>TRIzol 시약&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td>RNA 추출 시약</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, PBS에서 0.4% (w/v), pH 7.5 &plusmn; 0.5</td><td>Corning</td><td>25-900-CI</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1X), 페놀 레드 없음&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12604013</td><td>효소 해리 시약</td></tr><tr><td>트립신-EDTA 용액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4174</td><td></td></tr><tr><td>VIOS 160i CO2 인큐베이터, 165 L</td><td>Thermo Scientific</td><td>13-998-252</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td></td></tr><tr><td>Zo&euml;-CM1 배양 모듈</td><td>에뮬레이트</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 신생아 장 장내염과 디스바이오틱 마이크로바이옴을 통합한 괴사성 장염의 미세유체 모델

Microfluidic Model of Necrotizing Enterocolitis Incorporating Human Neonatal Intestinal Enteroids and a Dysbiotic Microbiome

괴사성 장염(Necrotizing enterocolitis, NEC)은 심각하고 치명적일 수 있는 장 질환으로, 복잡한 발병 기전으로 인해 연구가 어려웠으며, 아직 완전히 이해되지 않고 있습니다. NEC의 병태생리학에는 장 밀착 접합부의 파괴, 장 장벽 투과성 증가, 상피 세포 사멸, 미생물 미생물 미생물 불균형 및 조절 장애 염증이 포함됩니다. NEC를 연구하는 전통적인 도구에는 동물 모델, 세포주, 인간 또는 생쥐의 장 오가노이드가 포함됩니다. 이러한 모델 시스템을 사용한 연구는 질병 병태생리학에 대한 현장의 이해를 향상시켰지만, 인간 NEC의 복잡성을 요약하는 능력은 제한적입니다. NEC-on-a-chip이라고 하는 미세유체 기술을 사용하여 NEC의 개선된 시험관 모델이 현재 개발되었습니다. NEC-on-a-chip 모델은 인간 내피 세포 및 중증 NEC를 앓고 있는 유아의 마이크로바이옴과 함께 배양된 조산아에서 유래한 장내 장내형 장내형 물질로 파종된 미세유체 장치로 구성됩니다. 이 모델은 NEC의 병태생리학에 대한 기계론적 연구를 위한 귀중한 도구이자 신생아 장 질환에 대한 약물 발견 테스트를 위한 새로운 리소스입니다. 이 원고에서는 NEC-on-a-chip 모델에 대한 자세한 설명이 제공됩니다.

엔테로이드를 미세유체 장치(그림 1)에 파종하고 상술한 바와 같이 배양하였다. 파종 전 세포 배양 매트릭스 하이드로겔에서 엔테로이드의 성장과 파종 후 장 상피 세포 단층의 후속 확장은 명시야 현미경을 통해 모니터링되었습니다(그림 2). 합류하는 장 상피 세포 단층이 형성된 후 성숙한 3D 융모와 같은 구조로 발전했습니다(그림 2). 장내 유래 신생아 장 상피와 HIMECs가 파종된 이 미세유체 장치는 신생아 장-온-어-칩 모델(36)로 알려져 있습니다.
NEC-on-a-chip 모델은 신생아 NEC 중에 존재하는 미생물 미생물 불균형을 재현하기 위해 개발되었습니다. 이 모델에는 중증 NEC가 있는 신생아의 dysbiotic 마이크로바이옴을 신생아 intestine-on-a-chi...

이 프로토콜은 질병 발병에 대한 기계론적 연구에 사용할 수 있는 괴사성 장염(NEC)의 시험관 내 모델을 설명합니다. 인간 신생아 장, 내피 세포 및 중증 NEC가 있는 신생아의 장내 마이크로바이옴에서 추출한 장내 장내형 칩을 파종한 것이 특징입니다.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe and potentially fatal intestinal disease that has been difficult to study due to its complex pathogenesis, ...

괴사성 장염의 병태생리학이 복잡하고 이러한 복잡성이 일반적으로 사용되는 많은 체외 모델에 반영되지 않기 때문에 이 분야의 연구는 어렵습니다. 인간 검체를 사용한 연구는 소량의 검체량과 장 수술 시 채취한 검체의 희소성으로 인해 제한되는 경우가 많습니다. 우리의 목표는 조산아에서 NEC의 발달을 유도하는 메커니즘을 결정하고 새로운 치료 전략을 식별하는 것입니다.NEC-on-a-Chip 시스템은 신생아 장의 생리학을 보다 밀접하게 반영하여 이전 모델을 개선합니다. 이 모델에서는 환자 유래 장 오가노이드, 내피 세포 및 중증 NEC를 가진 신생아의 마이크로바이옴을 미세유체 칩에 결합합니다.

microfluidic-model-necrotizing-enterocolitis-incorporating-human

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 지질다당류 치료에 의해 유도된 인간 유래 신생아 장 모델에서 괴사성 장염 질환의 발달을 보여줍니다. 이 모델은 장 병태생리학을 연구하는 데 도움이 됩니다.

인간 상피 장 모델에서 괴사성 장염의 유도

Enteroids 인간 질병의 연구에 새로운 모델로 떠오르고 있다. 프로토콜 신생아 조직에서 생성 된 enteroids의 lipopolysaccharide (LPS) 치료를 사용 하 여 인간의 necrotizing enterocolitis에의 enteroid 모델을 시뮬레이션 하는 방법을 설명 합니다. 수집 된 enteroids 그 인간의 necrotizing enterocolitis에 본 유사 염증 성 변화를 보여 줍니다.

Necrotizing Enterocolitis의 소설 인간 상피 Enteroid 모델

이 프로토콜은 극성이 역인 작은 장 장내염을 활용하여 정점 표면에 접근 할 수있는 apical-out 괴사 장염 (NEC) 인 - 접시 모델을 설명합니다. 우리는 NEC 관련 상피 파괴를 검출하기위한 면역 형광 염색 프로토콜 및 NEC-in-a-dish 프로토콜을 실시한 apical-out enteroids의 생존력을 결정하는 방법을 제공합니다.

체외 괴사성 장염의 Apical-Out Enteroid 모델

대장균은 출생 무렵에 박테리아를 섭취하는 신생아에게 패혈증을 일으킵니다. 대장균이 장내에서 혈류로 이동하는 능력과 관련된 과정은 잘 이해되지 않았습니다. 이 시험관 내 모델은 대장균 균주가 장 상피 세포를 통해 이동하는 능력을 평가합니다.

신생아 대장균 균 혈증 분리물의 장 트랜스사이토시스 평가

이 프로토콜은 괴사성 소장결장염(NEC)의 신생아 마우스 모델 및 신생아 쥐 소장에서 고유판 면역 세포의 후속 분리를 설명합니다.

면역 세포 프로파일링을 위한 괴사성 소장결장염 및 Lamina Propria 분리의 신생아 마우스 모델

대형 동물 모델은 신생아 질식의 생리학과 약리학의 시험에서 좋은 병진 값을 가진다. 신생아 piglets를 사용하여, 우리는 조직과 지역 혈류 역학, 생화학 및 pathologic 경로와 상관 관계가있는 산소 수송을 공부의 장점을 가지고 신생아 질식을 시뮬레이션 할 수있는 실험 프로토콜을 개발합니다.

신생아 질식의 돼지 모델

주산기 질식에 따른 저산소성 허혈성 뇌병증은 동물 모델을 사용하여 연구할 수 있습니다. 우리는 신생아 저산소성-허혈성 뇌병증의 새끼 돼지 모델을 확립하는 데 필요한 절차를 보여줍니다.

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우리는 수술 조직과 생검에서 수집한 결장 소굴에서 인간 장류를 확립하고 결장 소굴에서 콜로노이드를 확립하는 방법을 설명합니다. 이 방법론적 기사에서는 인간 장 및 콜로노이드의 성공적인 성장과 유지에 필수적인 배양 방식을 제시합니다.

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