Name: 인간 박리 낙엽 치아에서 면역 표현형 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 분류 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 44 s
Description: 배우세요 인간 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 면역 표현형 분류 방법을 FACS를 사용하여 99% 순도로 정제하는 기술입니다. 이 방법은 줄기 세포 이식 및 분자 분석에 활용됩니다.

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인도 벵갈루루에 있는 Jawaharlal Nehru Centre for Advanced Scientific Research의 Flow Cell Facility에 유세포 분석 핵심 시설을 사용해 주신 것에 대해 감사드립니다. 분화된 세포의 펠릿 배양물의 동결 절편은 인도 벵갈루루에 있는 Neuberg Anand Reference Laboratory에서 수행되었습니다. 이 작업은 인도 MAHE(Manipal Academy of Higher Education)의 UC 교내 자금 지원을 받았습니다. AG는 MAHE의 Dr. T. M. A. Pai 장학금의 지원에 감사드립니다.

인간 중간엽 줄기 세포의 형광 활성화 단일 세포 분류

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<li>Fawzy El-Sayed, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+mesenchymal+stem+cells+explored+in+the+dental+field%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Biochemical+Engineering%2FBiotechnology%22%5BJournal%5D)">Adult mesenchymal stem cells explored in the dental field.</a> Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 130, 89-103 (2013).</li>
<li>Hardy, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+networks+in+single+perivascular+cells+sorted+from+human+adipose+tissue+reveal+a+hierarchy+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Transcriptional networks in single perivascular cells sorted from human adipose tissue reveal a hierarchy of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 35 (5), 1273-1289 (2017).</li>
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</ol>

저자는 이 논문의 출판과 관련하여 이해 상충이 없음을 선언합니다.

조직 공학 및 재생 의학 분야에서, 출생 후 소스 중 구강 조직 유래 MSC는 최소한의 윤리적 의무와 주목할 만한 다중 계통 분화 가능성으로 인해 깊은 관심을 끌었다21. 영향을 받은 제3대구치와 SHED의 치수 줄기세포(DPSC)는 신경퇴행성 및 외상성 질환에 대한 치료 잠재력으로 인해 치과 MSC들 사이에서 가장 주목을 받고 있다22. 이 원고에 설명된 프로토콜은 다중 모수 접근법을 사용하여 SHED를 특성화하고 단일 세포 정렬 접근법을 사용하여 관심 있는 모집단을 추가로 분류하는 데 도움이 됩니다. 그러나, 이 프로토콜의 응용은 경구 MSC에 한정될 뿐만 아니라, 인체 내의 다른 소스 조직으로부터 MSC의 면역표현형 분석 및 분류에 사용될 수 있다(23).
이 프로토콜의 몇 가지 중요한 단계는 다루어진 생물학적 문제에 대한 성공적인 구현을 위해 여...

중간엽 줄기 세포(MSC)는 세포 기반 치료에 적합한 확장 가능한 세포 공급원으로 간주될 수 있으며 재생 의학의 황금 표준 시스템으로 간주될 수 있습니다. 이 세포는 조직 기원이 다른 신체의 다양한 공급원으로부터 분리될 수 있다1. 소스 조직에 따라 각 유형의 MSC는 모호한 in vitro 거동을 나타낸다 2. 이것은 형태학적, 기능적 특성에서 잘 관찰된다3. 여러 연구에서 MSC2,4의 성인 조직 분화, 게놈 상태, 대사 및 세포 구조를 포함한 차원의 클론 내 변이가 나타났습니다.
세포의 면역표현형은 줄기세포 식별을 위한 유세포 분석의 일반적인 응용 분야였으며 2006년 국제 세포 및 유전자 치료 학회(ISCT)에서 세포를 MSC로 식별하기 위한 최소 기준 목록을 처방하는 데 활용되었습니다. 이 연구는 체 외에서 플라스틱 부착 및 세 가지 계통(골형성, 연골형성, 지방형성)으로 분화할 수 있는 능력과 함께 세포 집단의 ≥95%가 CD105, CD73, CD90을 발현해야 하며, 이러한 세포는 유세포분석으로 측정한 CD34, CD45, CD11b, CD14 및 HLA-DR의 발현(≤2% 양성)이 부족해야 한다고 밝혔습니다 5. MSC는 ISCT의 최소 기준에 따라 일련의 바이오마커로 정의되었지만, 이러한 바이오마커로 면역 특성을 벤치마킹할 수 없었으며, 연구 간 비교 및 클론 변이를 더 쉽게 정량화하기 위해 이러한 기준을 넘어서는 것이 필요했습니다2.
ISCT가 정한 지침에도 불구하고, MSC에 대한 광범위한 연구는 이 집단에 이질성이 존재한다는 것을 보여주었으며, 이는 주로 MSC 공여체6, 조직 공급원7,클론 집단 내의 개별 세포8 및 배양 조건 2,9 사이에서 발생하는 이질성의 유비쿼터스 특성으로 인해 발생할 수 있는 다양한 요인으로 인해 발생할 수 있습니다. 10. 다양한 조직 공급원에서 이러한 일차 세포의 특성 분석 및 정제를 통해 품질과 세포 운명을 보장하는 것이 생산의 핵심 단계입니다. 모집단 간에 나타난 변이를 이해하기 위해서는 이를 별도로 나누고 수집할 수 있는 하위 모집단으로 해석하는 효율적인 방법이 필요하다11. 단일 세포 수준 분석은 세포 간 변이의 문제를 극복하고, 이질적인 집단에서 발생하는 생물학적 노이즈를 줄이며, 희귀 세포를 조사하고 특성화할 수 있는 기능을 제공합니다12.
목적과 선택한 매개변수에 따라 선택한 모집단을 정렬하고 보강하기 위해 여러 가지 방법을 사용할 수 있습니다. 세포 분류 기술은 벌크 분류 및 단일 세포 분류 방법 모두를 포함할 수 있습니다. 벌크 분류는 자기 활성화 세포 분류(MACS)13, 분획14 및 용출15을 통해 표적 집단을 농축할 수 있는 반면, 단일 세포 분류는 형광 활성화 세포 분류(FACS)11를 통해 보다 균질한 집단을 농축할 수 있습니다. 이러한 각 방법의 장점과 단점을 비교 분석한 것이 표 1에 강조 표시되어 있습니다.
표 1: 다양한 기법의 비교 분석: MACS, 분획, 용출 및 FACS는 원리의 차이점과 특정 기법을 다른 기법보다 선택할 때의 장단점을 강조합니다. 약어: MACS = 자기 활성화 세포 분류; FACS = 형광 활성화 세포 분류. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65723/65723_Table_1_.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
이 기법의 출현 이후로, 단세포 유세포분석법은 이종 샘플(17)에서 특정 세포 집단의 열거(enumeration)16, 검출 및 특성화(characterization)에 중요한 역할을 해왔다. 2006년 Hewitt et al.은 분화된 인간 배아 줄기 세포(hESC)의 균질한 풀의 분리를 강화하기 위해 자동화된 세포 분류 방법론의 토대를 마련했습니다18. 단일 세포 분류는 GFP 형질도입 hESC의 집단을 풍부하게 하여 유전자 변형 클론의 분리를 촉진하여 임상 연구의 새로운 차원을 열었습니다. 정렬 효율성을 개선하기 위해 일반적으로 두 가지 접근 방식이 취해졌습니다. 분류된 집단의 수집 배지가 후-분류된 세포(19 )의 생존 및 증식을 유지하기 위해 변형되거나, 세포-분류 알고리즘/소프트웨어가 적절하게 변형되거나(12).
기술의 발전으로 상용 유세포 분석기와 세포 분류기는 깨지기 쉬운 희귀 세포 집단, 특히 기원이 다른 줄기 세포를 무균 분류하는 동안 발생하는 문제를 해결하는 데 도움이 될 수 있었습니다. 줄기세포 생물학자들의 주요 과제 중 하나는 유전자 편집 연구에서 요구되는 형질주입 프로토콜에 따라 인간 만능 줄기세포의 클론 분리였다19. 이 문제는 단일 세포를 보충제 및 상업용 저분자 ROCK 억제제와 함께 마우스 배아 섬유아세포(MEF)로 코팅된 96웰 플레이트로 분류하여 해결되었습니다. 그러나, 세포 분리 전략은 분류된 개별 세포의 면역표현형을 식별하는 분류 알고리즘의 특징인 색인 분류(index sorting)의 사용으로 크게 개선될 수 있다12. 단세포 분류의 이러한 정교한 양식은 특히 희귀 조혈모세포 집단과 관련하여 줄기세포의 분류 효율을 향상시키는 데 도움이 되었을 뿐만 아니라 단세포 클론을 다운스트림 기능 분석에 효율적으로 연결하는 데 도움이 되었습니다20.
이 논문은 기능적 분화 능력을 연구하기 위해 하위 집단의 농축을 위해 인간 박리 낙엽 치아(SHED)에서 면역 표현형 줄기 세포의 단일 세포 분류에 중점을 둡니다. 두 개의 MSC 양성 마커인 CD90 및 CD73과 음성 조혈 마커인 CD45의 조합을 사용하여 MSC를 면역표현형으로 변환하고 dim 및 null 발현자를 식별했습니다. 면역 표현형에 따라 하위 집단은 순수 MSC, 단일 양성 및 이중 음성 집단으로 식별되었습니다. 이들은 마커의 차등 발현이 시험관 내 배양 조건의 인공물인지 또는 기능적 특성에도 영향을 미치는지 여부를 확인하기 위한 추가 기능 연구를 위해 순수하고 농축된 하위 집단을 얻기 위해 단일 세포 정렬 모드를 사용하여 분류되었습니다. "양성 MSC 마커"의 균질한 발현체가 아닌 세포를 분류하여 기능적 특성을 연구했습니다.

<table><tbody><tr><td>알시안 블루 스테인</td><td>HiMedia</td><td>CCK029-1KT</td><td></td></tr><tr><td>항생제-항진균제 (100x)&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>BD CompBead Plus 안티-마우스 Ig, &kappa;/negative control (BSA) Compensation Plus (7.5 &micro; m) BD</td><td>Biosciences</td><td>560497</td><td></td></tr><tr><td>BD FACS Accudrop Beads&nbsp를</td> 설정하는 입자;<td>BD Biosciences</td><td>345249</td><td>정렬 모듈이 열릴 때 레이저 지연을 설정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>BD FACS Aria Fusion 유세포 분석기</td><td>BD Biosciences</td><td>---</td><td></td></tr><tr><td>BD FACS Diva 9.4</td><td>BD Biosciences</td><td>---</td><td></td></tr><tr><td>BD FACS Sheath Fluid</td><td>BD Biosciences</td><td>342003</td><td>BD FACSAria Fusion</td></tr><tr><td>BD FACSDiva CS& T Research Beads</td><td>BD Biosciences</td><td>655050</td><td>노즐 크기에 따라 기기 구성에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>BD Horizon V450 마우스 Anti-Human CD44</td><td>BD Biosciences</td><td>561292</td><td></td></tr><tr><td>BD Horizon V450 마우스 IgG2b, &kappa; 동형 제어</td><td>BD Biosciences</td><td>560374</td><td>CD44-V450 동형</td></tr><tr><td>BD Pharmingen APC 마우스 Anti-Human CD105</td><td>BD Biosciences</td><td>562408</td><td></td></tr><tr><td>BD Pharmingen APC 마우스 IgG1, &kappa; 이소타입 제어</td><td>BD Biosciences</td><td>555751</td><td>CD105-APC 이소타입</td></tr><tr><td>BD Pharmingen DAPI 솔루션</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>DAPI 1 mg/mL</td></tr><tr><td>BD Pharmingen FITC Mouse Anti-Human CD90</td><td>BD Biosciences</td><td>555595</td><td></td></tr><tr><td>BD Pharmingen FITC Mouse IgG1, &kappa; 이소타입 제어</td><td>BD Biosciences</td><td>555748</td><td>CD90-FITC 이소타입</td></tr><tr><td>BD Pharmingen PE 마우스 Anti-Human CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>555483</td><td></td></tr><tr><td>BD Pharmingen PE 마우스 IgG1, &kappa; 동형 제어</td><td>BD Biosciences</td><td>555749</td><td>CD45-PE 동종</td></tr><tr><td>BD Pharmingen PerCP-Cy 5.5 마우스 Anti-Human CD73</td><td>BD Biosciences</td><td>561260</td><td></td></tr><tr><td>BD Pharmingen PerCP-Cy 5.5 마우스 IgG1, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>550795</td><td>CD73-PerCP-Cy 5.5 isotype</td></tr><tr><td>BD Pharmingen Purified Mouse Anti-Vimentin</td><td>BD Biosciences</td><td>550513</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Hi-Media&nbsp;</td><td>TC548-5G</td><td></td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛</td><td>니스 케미컬 pvt ltd&nbsp;</td><td>C33809</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-aldrich&nbsp; &nbsp;</td><td>D5652-50L</td><td>dPBS는 배양 작업 및 유지 보수에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>에탄올&nbsp;</td><td>---</td><td>---</td> <td>일반적인 sterlization를 위해 사용하는.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 Gibco&nbsp;</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>염소 항-마우스 IgG (H+L) 교차 흡착된 2차 항체, Alexa Fluor 555</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 A-21422</td><td></td></tr><tr><td>KO-DMEM</td><td>Gibco;</td><td>10829018</td> 배양 배지 L-Glutamine 200mM (100x) Gibco by ThermoFisher 25030-081 <td>Methanol의 준비에 사용되는 미분화 hESC용 기초 배지</td></tr> 분자 <tr><td></td><td></td><td></td> 생물학&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td><td>하이미디어&nbsp;</td><td>MB113</td><td></td></tr><tr><td>오일 레드 O</td><td>HiMedia&nbsp;</td><td>CCK013-1KT</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 로바 케미</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신 (100x)</td><td>Gibco;</td><td>15140- 122</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin (ActinGreen 488 ReadyProbes 시약)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>R37110</td><td></td></tr><tr><td>실버 질산염</td><td>HiMedia&nbsp;</td><td>MB156-25G</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 티오 황산염 펜타 하이드레이트</td><td>Chemport</td><td>10102-17-7</td><td></td></tr><tr><td>Sphero 무지개 형광 입자, 3.0 - 3.4 &micro; m</td><td>BD Biosciences</td><td>556291</td><td></td></tr><tr><td>염색 완충액&nbsp;</td><td>MIRM에서 준비됨&nbsp;</td><td>----</td><td>PBS에서 2% FBS를 사용하여 준비되었습니다&nbsp;</td></tr><tr><td>StemPro 지방형성 분화 기초 매체&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 Gibco&nbsp;</td><td>A10410-01 ThermoFisher에 의한 A10410-01</td><td>Adipogenic 매체</td></tr><tr><td>StemPro 지방형성 보충제</td><td>Gibco를</td> 위한 기초 매체;<td>A10065-01 ThermoFisher의 A10065-01</td><td>유도 매체</td></tr><tr><td>StemPro 연골형성 보충제</td><td>Gibco;</td><td>A10064-01</td><td>ThermoFisher의 연골</td></tr>형성 <tr><td>매체 StemPro Osteogenesis Supplement</td><td>Gibco용</td> 유도 매체;<td>A10066-01</td><td>골형성 배지용 유도 배지</td></tr><tr><td>StemPro Osteogenesis/Chondrogenesis Differentiation Basal Media&nbsp;</td><td>ThermoFisher의 Gibco&nbsp;</td><td>A10069-01</td><td>골형성 및 연골형성 매체 모두를 위한 기초 매체</td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Hi-Media&nbsp;</td><td>MB031</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루&nbsp;</td><td>생명 기술의 Gibco&nbsp;</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>트립신 - EDTA 용액 1x</td><td>Hi-media&nbsp;</td><td>TCL049</td><td></td></tr><tr><td>트윈-20&nbsp;</td><td>머크&nbsp;</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table> 년

인간 박리 낙엽 치아에서 면역 표현형 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 분류

Single-Cell Sorting of Immunophenotyped Mesenchymal Stem Cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth

유기체의 중간엽 줄기세포(MSC)는 체내에서 여러 계통의 성체 세포로 분화할 수 있는 특별한 능력을 가지고 있으며 면역 조절 및 항염증 특성으로 알려져 있습니다. 이러한 줄기 세포의 사용은 재생 생물학 분야에 도움이 되지만 동시에 이와 관련된 여러 세포 모호성으로 인해 재생 의학 및 치료제에 골칫거리가 됩니다. 이러한 모호성은 줄기세포의 출처의 다양성과 체외 성장 조건에서 발생할 수 있으며, 둘 다 기능적 이질성을 반영합니다.
이는 치료 응용 분야를 위해 정제된 균질한 MSC 집단을 제공하는 방법론을 보증합니다. 유세포 분석 분야의 발전으로 다중 파라미터 접근법을 사용하여 단일 세포 집단을 검출할 수 있게 되었습니다. 이 프로토콜은 형광 보조 단일 세포 분류를 통해 인간 박리 낙엽 치아(SHED)에서 줄기 세포를 식별하고 정제하는 방법을 설명합니다. 표면 마커, 즉 CD90-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), CD73-페리디닌-엽록소-단백질(PerCP-Cy5.5), CD105-알로피코시아닌(APC) 및 CD44-V450의 동시 발현은 다중 파라미터 유세포 분석을 사용하여 MSC의 "밝은" 양성 발현체를 식별했습니다. 그러나 7번 구절부터 이후 구절까지 이러한 양성 마커의 4중 표현자의 비율이 크게 감소하는 것이 관찰되었습니다.
면역표현형 하위집단은 2개의 양성 마커와 1개의 음성 마커만 포함 기준을 구성하는 단일 세포 정렬 모드를 사용하여 분류되었습니다. 이 방법론은 분류된 집단의 세포 생존력을 보장하고 분류 후 세포 증식을 유지했습니다. 이러한 분류를 위한 다운스트림 응용 프로그램은 제어된 하위 모집단에 대한 계통별 분화를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 이 접근법은 분리 조건을 개선하고 다중 세포 표면 마커 정보를 획득하기 위해 다른 단일 세포 시스템에 적용될 수 있습니다.

SHED는 비멘틴(빨간색, 유형 III 중간 필라멘트), 액틴 필라멘트(Alexa fluor 488 Phalloidin Probes) 및 DAPI로 염색된 핵의 발현을 보여주는 표준 면역형광 분석으로 특성화되었습니다(그림 1A). 이들의 증식 및 콜로니 형성 능력을 추정하기 위해, 표준 단기 세포 성장 분석을 수행했습니다. 2일차에서 8일차까지 확산률이 14.3배 증가한 것이 그림 1B에 나와 있습니다. SHEDs의 clonogenic 재산은 숫자 1C-E에서 보인 CFU-F 분석실험에서 결정되었습니다. ISCT 기준에 따라, 다분화능 MSC는 3개의 중배엽 유래 계통으로 분화할 수 있었습니다. 분화된 지방 세포에서 오일 방울을 검출하기 위해 Oil Red O를 사용한 세포화학적 염색을 사용했습니다(<stron...

이 프로토콜은 단일 세포 분류 방법을 사용하여 인간 중간엽 줄기 세포의 형광 활성화 세포 분류를 사용하는 방법을 설명합니다. 특히, 단일 세포 분류를 사용하면 다중 파라미터 유세포 분석 기반 접근법과 결합할 때 이종 집단에서 면역표현형 세포의 99% 순도를 달성할 수 있습니다.

The mesenchymal stem cells (MSCs) of an organism possess an extraordinary capacity to differentiate into multiple lineages of adult cells in the body and ...

이 프로토콜은 단일 플랫폼에서 인간 중간엽 줄기 세포를 정확하게 특성화하고 정제하여 줄기 세포 이식과 같은 효율적인 다운스트림 애플리케이션을 가능하게 하는 중요한 방법을 자세히 설명합니다. 이는 조작된 줄기 세포 또는 자연 줄기 세포의 정밀한 단일 세포 분류를 통해 분자 및 세포유전학 분석을 강화하는 임상 실험실에 특히 중요합니다. 정제된 줄기 세포 집단의 분리에 일반적으로 사용되는 방법은 면역자기 분리, 밀도 구배 또는 미세유체 세포 분류와 같은 기술을 말합니다.인덱스 정렬과 같은 기술을 사용하면 정렬된 각 세포의 전사체 정보를 추출할 수 있는 단일 세포 RNA 프로파일링에 연결할 수 있습니다. 주요 과제는 시료 품질 유지, 세포 밀도 및 분류 중 및 분류 후의 생존력을 포함한 세포 배양 조건의 최적화입니다. 또한 기기에 적합한 노즐 크기를 선택하고 선별기에 적시에 접근할 수 있도록 하는 것도 고려해야 합니다.이 프로토콜은 면역표현형 분석 및 원하는 세포 집단 분류를 위한 정밀한 염색 패널을 보여줍니다. 표준화된 시료 품질, 최적의 세포 생존율, 세포 집단 분류를 위한 밀도를 보장하고 FACSDiva 소프트웨어에서 분류 실험 매개변수를 정의합니다. 이 방법을 사용하면 특정 바이오마커를 발현하는 줄기세포 집단을 간단하게 선택하고 면역표현형을 분석할 수 있습니다.이 간단한 플랫폼을 사용하면 대상 모집단을 기반으로 효율적으로 분류할 수 있으며, 후속 다운스트림 응용 분야를 위해 정제된 샘플을 얻고 얻을 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

쥐 MSCS는 대퇴골과 tibias으로부터 격리하고 자기 세포 분류에 의해 풍부하게되었다. 정렬 세포 유동세포계측법에 의해 표면 마커의 표현에 대해 확인했다. 이러한 세포는 하나의 식민지를 형성 clonal 밀도에 교양 있었다 그리고 이들 식민지는 복제 실린더로 구분했다.

분리 및 랫 Mesenchymal 줄기 세포의 농축 (MSCS)와 MSCS를 유래 단일 식민지의 분리

방법 중 하나를 사용하여 인간의 치과 펄프의 줄기 세포 (hDPSCs)의 분리 및 특성...

인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

여기서는 하류 어플리케이션 및 상기 분화의 개선을위한 결정적인 내배엽으로 분화 노력하고 인간 배아 줄기 세포의 정제를위한 방법을 설명한다.

인간 배아 줄기 세포로부터 생성 된 내배엽 세포의 정제를위한 신속하고 효율적인 방법

이 프로토콜 인간의 치과 여 포에서 추출한 치아 줄기 세포의 변이 유전 공학에 설명 합니다. 적용된 비 바이러스 성 수정 전략 치료 줄기 세포 제품의 개선 위한 기초 될 수 있습니다.

절연, 특성화 및 예측에 관한 기반 유전자 조작 인간 치과 여 포 줄기 세포의

여기서는 메가카요세포 분화의 특성화를 위한 면역페노티핑 전략을 제시하고, 이 전략이 형광 활성화 세포 선별기로 다른 단계에서 메가카요사이클을 분류하는 방법을 보여준다. 방법론은 인체 에 있는 문화에서 생성된 거대 karyocytes뿐만 아니라 인간 1차 조직에적용될 수 있다.

인간 1차 출처에서 인간 MK의 면역페노티핑 및 세포 분류 또는 헤마토포이틱 전조자로부터 시험관내 분화

현재 프로토콜은 지속적으로 성장하는 마우스 절개, 마우스 어금니 및 인간 치아로부터 단세포 RNA-seq 분석에 적합한 단일 세포를 격리하는 빠르고 효율적이며 부드러운 방법을 제시합니다.

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

이 프로토콜은 효소 소화를 통해 치수에서 다분화능 줄기 세포의 추출, 배양 및 보존을 강조합니다. 또한 조골세포, 지방세포 및 연골세포로 분화할 수 있는 잠재력을 보여주며 공정에서 정밀도와 일관성의 중요성을 강조합니다.

Isolation, Culture, and Characterization of Dental Pulp Stem Cells from Human Deciduous and Permanent Teeth(인간 낙엽 및 영구치에서 치과용 치수 줄기 세포의 분리, 배양 및 특성화)

턱뼈 골수에서 채취한 중간엽 줄기세포는 다양한 분화, 자가 재생, 면역 조절에 중요한 기능을 합니다. 그들은 유전자 치료, 조직 공학 및 재생 의학에서 전구 세포의 중요한 저장소로 부상했습니다. 여기에서는 쥐에서 턱뼈 골수 중간엽 줄기세포를 분리하는 독특한 방법을 제시합니다.

Technique for Isolation and Culture of Rat Jaw Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells(쥐 턱뼈 골수 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 기법)

본 프로토콜은 마우스에서 매우 균일한 골수 중간엽 줄기세포(BMSC)를 정제, 확장 및 특성화하는 비용 효율적인 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 증식 및 분화 가능성이 높은 BMSC를 대량으로 획득할 수 있도록 하여 마우스 모델을 지원하고 전임상 연구를 발전시킵니다.

Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

이 프로토콜은 피코에리트린(PE) 표지된 유세포검사 항체와 항PE 미생물구슬을 이용한 자기 구슬 기반 분류 방법을 설명하며, 고가의 세포 분류기나 표적 특이적 맞춤 구슬 없이 고가의 세포 분류기나 표적 맞춤형 비드 없이 고가의 세포 분류기나 표적 특이적 비드 없이 높은 사후 표적 표적 양성률을 가진 특정 중간엽 줄기세포 아군을 분리합니다.

간접 자기 구슬 전략을 이용한 포도플라닌 양성 중간엽 줄기세포 아군의 분리 및 검증

배우세요 인간 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 면역 표현형 분류 방법을 FACS를 사용하여 99% 순도로 정제하는 기술입니다. 이 방법은 줄기 세포 이식 및 분자 분석에 활용됩니다.

인간 박리 낙엽 치아에서 면역 표현형 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 분류

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