Name: 구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하기 위해 마우스 교근의 동결 손상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: 학습하세요 마우스 교근 동결 손상을 통한 구강 안면 근육 섬유증 모델 확립 방법을. 교근과 비복근의 재생 능력 차이를 비교하여 구강 안면 근육 재생 메커니즘을 연구하는 데 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 쓰촨성 건강 및 웰빙 위원회(Sichuan Provincial Health and Wellness Committee, 보조금 번호: 21PJ063)와 중국 국립 자연 과학 재단(National Natural Science Foundation of China, 보조금 번호: 82001031)의 보조금으로 지원되었습니다.

이 연구의 모든 동물 시술은 쓰촨대학교 중국서부구강학 학교 윤리위원회(WCHSIRB-D-2020-114)에서 검토하고 승인했습니다. 수컷 C57BL/6마리 마우스(5주령)는 습도 조절(53 ± 2%) 및 온도 조절(23 ± 2°C) 시설에서 사육되었으며 12시간 라이트/다크 사이클에 있었습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료, 시약 및 기기와 관련된 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 결빙 부상
<ol><li>마취: 이소플루란에 적신 면봉으로 생쥐를 진정시키고 50mg/kg의 용량으로 틸레타민-졸라제팜을 복강내로 주입합니다. 수술 전후 진통은 1mg/kg의 용량으로 meloxicam의 복강 내 주사로 제공되었습니다. 수의사 연고로 눈을 보호하십시오. 38°C로 유지되는 가열 패드를 전체 절차 동안 수술용 드레이프 아래에 놓아 동물에게 열 지원을 제공했습니다. 마우스를 수술 테이블에 옆으로 눕힌 후 접착 테이프로 고정합니다(그림 1). 눈꺼풀 반사, 바로잡기 반사 및 페달 철회 반사의 손실로 마취의 충분성을 평가합니다. 알림: 이소플루오란 마취를 할 때는 한 손에는 마우스를, 다른 한 손에는 이소플루오란에 적신 면봉을 잡으십시오. 불편함과 피부 자극을 피하기 위해 면봉을 동물과 멀리 두십시오.</li>
	<li>수술 전 제모: 전기 면도기를 사용하여 쥐의 종아리와 얼굴의 털을 면도하고 면봉으로 제모 페이스트를 피부에 바르고 교근과 경골 전방 근육을 덮습니다. 1-2분 후 에탄올 기반 수술용 물티슈로 페이스트를 씻어냅니다(그림 2A 및 그림 2G). 수술 부위는 요오드 기반 스크럽과 75% 에탄올로 3회 소독했습니다. 참고: 전기 면도기만으로는 특히 교근 부위의 제모에 충분하지 않았습니다. 제모 페이스트를 바를 때 과도한 페이스트를 사용하지 않는 것이 중요합니다. 피부 화상을 방지하기 위해 페이스트를 씻어낼 때 피부를 부드럽게 닦으십시오.</li>
	<li>수술 현장 노출: 수술 절차 전에 수술용 드레이프로 덮으십시오. MAS 근육의 경우 먼저 하악골의 아래쪽 가장자리를 따라 촉진합니다. 가장자리에서 5mm 떨어진 곳에서 구강 커미셔와 관마를 연결하는 선을 따라 7mm 절개를 합니다(점선은 그림 2B에서 절개 위치를 나타냄).</li>
	<li>TA 근육의 경우 먼저 종아리를 따라 촉진하여 경골의 앞쪽 가장자리를 찾습니다. 무릎에서 시작하여 발목에서 끝나는 메스로 피부를 통해 가장자리에서 2mm 후방으로 자릅니다(점선은 그림 2H에서 절개 위치를 나타냄). 각 마우스에 대해 왼쪽의 MAS와 TA 근육이 부상을 입은 경우 반대쪽의 다른 근육을 대조군으로 사용합니다. 참고: 이 절개는 절개 시 근육이 다치지 않도록 하기 위해 매우 피상적입니다. 얼굴의 절개 부위는 진통에 너무 가깝지 않아야 합니다. 그렇지 않으면 이하선이 노출되어 다음 동결 과정에서 과도한 출혈이 발생합니다.</li>
	<li>드라이아이스 동결: MAS 및 TA 근육의 긴 축을 따라 예냉식 집게로 드라이아이스 한 조각을 잡습니다(각각 그림 2C 및 그림 2I). 드라이 아이스를 근육 표면에 직접 5 초 동안 올려 놓습니다. 드라이아이스를 제거한 직후 근육이 뻣뻣하고 창백한 흰색으로 보이지만(그림 2D 및 그림 2J) 22-25초 이내에 인접 근육(그림 2E 및 그림 2K)과 유사하게 정상적인 색상과 질감으로 돌아오는지 확인합니다. 알림: 드라이 아이스를 들고 있는 집게는 드라이 아이스의 빠른 승화를 방지하기 위해 예열해야 합니다. 타이머는 5 초 결빙 부상을 수행하고 근육의 22-25 초 회복 시간을 계산하는 데 필수입니다. 회복 시간이 22초 미만이거나 25초 이상인 근육은 포기해야 합니다. 이 단계는 연습이 필요합니다.</li>
	<li>상처 봉합: 근육이 완전히 회복된 후 최소 3개의 7-0 봉합사로 피부 상처를 봉합합니다(그림 2F 및 그림 2L).</li>
	<li>소생술: 봉합이 완료되면 열 지지대가 있는 케이지에 쥐를 넣고 모든 오른쪽 반사 신경이 회복될 때까지 지속적으로 모니터링합니다.</li>
</ol>2. 근육 수집
<ol><li>이소플루란을 과다 투여한 후 자궁경부 탈구를 하여 쥐를 안락사시킵니다. 조직학적 분석을 위해 양쪽의 MAS 및 TA 근육을 채취합니다.</li>
	<li>MAS 근육 절제술: 쥐 얼굴의 피부를 절개하고 귀밑샘을 제거하여 MAS 근육의 뒤쪽 부분을 노출시킵니다. MAS의 전방 부착부에서 하악골의 후방 부착부까지 모두 절개합니다. 흰색 점선 영역은 MAS의 노출된 부분을 나타냅니다(그림 3A). 참고: MAS 근육은 하악골 표면에 밀접하게 부착된 깊은 구획과 표재성 구획으로 구성되어 있습니다. MAS가 완전히 격리되도록 절개 중에는 가위를 하악골에 대고 눌러야 합니다. zygomatico-mandibularis와 MAS는 zygomatico와 mandible 사이의 경계로 구별할 수 있습니다.</li>
	<li>TA 근육 절개: 발목에서 무릎까지의 피부를 절개하고 근막을 제거하여 TA 근육을 노출시킵니다. 미세 절개 겸자의 끝을 사용하여 TA의 힘줄을 분리하고 무릎까지 밀어 경골에 부착된 섬유를 끊습니다. 그런 다음 발목의 힘줄을 자릅니다(그림 3B). 알림: TA 근육의 경우 마우스 발목 주위에 몇 개의 근육 힘줄이 있습니다. 경골에 가장 크고 가장 가까운 TA의 힘줄을 식별하려면 연습이 필요합니다.</li>
	<li>예냉용 이소펜탄: 두 개의 절연 배럴을 준비합니다. 작은 배럴에 이소펜탄을 채우고 큰 배럴에 액체 질소를 채웁니다. 근육 절개 10분 전에 작은 배럴을 큰 배럴 안에 넣습니다(그림 3D).</li>
	<li>임베딩 금형 준비: 각 샘플에 대해 원통형 주석 호일 금형을 만들고 최적의 절단 온도(OCT) 화합물로 채웁니다.</li>
	<li>신선 냉동: 근육을 OCT에 담그고 OCT 화합물에 수직으로 유지합니다(그림 3C). 바늘 홀더를 사용하여 금형을 사전 냉각된 이소펜탄으로 옮깁니다. OCT가 하얗고 단색이 될 때까지 40초 동안 기다립니다(그림 3D). 알림: 금형의 위치가 너무 낮지 않은지 확인하십시오. 그렇지 않으면 이소펜탄이 OCT와 혼합되어 근육 동결 과정을 손상시킵니다. 금형의 OCT 수준은 근육 샘플의 높이와 비슷해야 합니다. 빠르고 효율적인 냉동을 위해 과도한 양의 OCT를 피하십시오.</li>
	<li>시료 보관: 신선하게 냉동된 근육 시료를 명확하게 라벨이 부착된 24웰 플레이트에 보관합니다. 샘플을 즉시 절단하거나 장기간 사용할 수 있도록 -80 °C에서 보관하십시오.</li>
</ol>3. 조직학적 분석
<ol><li>저온 유지 장치를 사용하여 근육 샘플에서 10μm 두께의 절편을 표면 처리된 슬라이드로 절단합니다.</li>
	<li>슬라이드를 얼음처럼 차가운 아세톤에 20분 동안 넣고 흄 후드에서 20분 동안 자연 건조합니다.</li>
	<li>인산염 완충 식염수(PBS)로 슬라이드를 3 x 5분 동안 세척합니다. 알림: 이 단계부터 슬라이드는 건조를 방지하기 위해 습도 챔버에 보관되었습니다.</li>
	<li>시리우스 레드 염색<ol><li>0.5g의 Sirius Red 분말을 포화 피크르산 500mL에 용해시켜 Sirius Red 작업 용액을 준비합니다.</li>
		<li>실온에서 1시간 동안 Sirius Red 작업 용액으로 슬라이드를 염색합니다.</li>
		<li>0.5% 아세트산으로 2 x 5분 동안 슬라이드를 세척합니다.</li>
		<li>염색 과정 후 샘플은 먼저 95% 에탄올에서 15초 동안 탈수한 다음 무수 에탄올에서 1분 동안 탈수해야 합니다. 마지막 단계는 중성 발삼으로 슬라이드를 장착하는 것입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>면역조직학적 염색<ol><li>실온에서 20분 동안 PBS에서 0.3% 트리톤으로 절편을 투과시킨 다음 PBS 세척합니다.</li>
		<li>Pax7 염색의 경우 참조된 키트와 함께 제공된 시약으로 섹션을 차단하십시오. 라미닌 및 Pdgfrα 염색의 경우 PBS의 5% 소 혈청 알부민(BSA) 및 5% 당나귀 혈청으로 실온에서 1시간 동안 차단합니다.</li>
		<li>Pax7, laminin 및 Pdgfrα에 대한 1차 항체가 있는 절편을 4°C에서 밤새 배양한 후 PBS로 3 x 5분 동안 세척합니다.</li>
		<li>형광 염료 접합 2차 항체로 절편을 실온에서 1시간 동안 배양한 후 PBS로 3 x 5분 동안 세척합니다.</li>
		<li>실온에서 4',6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)로 3분 동안 배양한 다음 PBS로 3 x 5분 동안 세척합니다.</li>
		<li>섹션에 장착 매체를 놓고 커버슬립을 그 위에 놓고 매니큐어를 사용하여 커버슬립을 밀봉합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

Establishing an Orofacial Muscle Fibrosis model in mouse via a freezing injury (동결 부상을 통해 마우스에서 구강 안면 근육 섬유증 모델 확립)

<ol><li>Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+body+region+specificity+in+murine+models+of+muscle+regeneration+and+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy.</a> Acta Physiologica. 231 (1), e13553(2021).</li>
<li>Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Clinics in Perinatology. 45 (4), 661-678 (2018).</li>
<li>Pai, B. C. J., Hung, Y. -T., Wang, R. S. H., Lo, L. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+patients+with+complete+unilateral+cleft+lip+and+palate%3A+20-year+follow-up+of+a+treatment+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Outcome of patients with complete unilateral cleft lip and palate: 20-year follow-up of a treatment protocol.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 359e-367e (2019).</li>
<li>Parsaei, Y., Chandler, L., Smetona, J. T., Lopez, J., Steinbacher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aesthetic+repair+of+unilateral+cleft+lip+using+the+modified+inferior+triangle+and+adjunctive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Aesthetic repair of unilateral cleft lip using the modified inferior triangle and adjunctive techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 149 (1), 70e-73e (2022).</li>
<li>Schubert, F. R., Singh, A. J., Afoyalan, O., Kioussi, C., Dietrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+roll+the+eyes+and+snap+a+bite+-+function%2C+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+In+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">To roll the eyes and snap a bite - function, development and evolution of craniofacial muscles.</a> Seminars In Cell & Developmental Biology. 91, 31-44 (2019).</li>
<li>Vyas, B., Nandkishore, N., Sambasivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+cranial+mesoderm%3A+developmental+trajectory+and+evolutionary+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Vertebrate cranial mesoderm: developmental trajectory and evolutionary origin.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 77 (10), 1933-1945 (2020).</li>
<li>Sambasivan, R., Kuratani, S., Tajbakhsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+eye+on+the+head%3A+the+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An eye on the head: the development and evolution of craniofacial muscles.</a> Development. 138 (12), 2401-2415 (2011).</li>
<li>Cheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head+muscle+fibro-adipogenic+progenitors+account+for+the+tilted+regeneration+towards+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Head muscle fibro-adipogenic progenitors account for the tilted regeneration towards fibrosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 589, 131-138 (2022).</li>
<li>Pavlath, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+among+muscle+precursor+cells+in+adult+skeletal+muscles+with+differing+regenerative+capacities%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity among muscle precursor cells in adult skeletal muscles with differing regenerative capacities.</a> Developmental Dynamics. 212 (4), 495-508 (1998).</li>
<li>Camacho-Alonso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+lingual+musculature+in+rats+using+myoblasts+over+porcine+bladder+acellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Regeneration of lingual musculature in rats using myoblasts over porcine bladder acellular matrix.</a> Oral Diseases. 27 (6), 1580-1589 (2021).</li>
<li>LeBoff, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinician%27s+guide+to+prevention+and+treatment+of+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">The clinician's guide to prevention and treatment of osteoporosis.</a> Osteoporosis International. 33 (10), 2049-2102 (2022).</li>
<li>Julien, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+contribution+of+skeletal+muscle+mesenchymal+progenitors+to+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair.</a> Nature Communications. 12 (1), 2860(2021).</li>
<li>Mahdy, M. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol-induced+injury+as+a+new+model+of+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Glycerol-induced injury as a new model of muscle regeneration.</a> Cell and Tissue Research. 374 (2), 233-241 (2018).</li>
<li>Guardiola, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+acute+skeletal+muscle+regeneration+by+cardiotoxin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Induction of acute skeletal muscle regeneration by cardiotoxin injection.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (119), 54515(2017).</li>
<li>Larouche, J. A., Wallace, E. C., Spence, B. D., Buras, E., Aguilar, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+mapping+of+immune+and+stem+cell+dysregulation+after+volumetric+muscle+loss%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal mapping of immune and stem cell dysregulation after volumetric muscle loss.</a> JCI Insight. 8 (7), e162835(2023).</li>
<li>Anderson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+a+critical+size+threshold+for+volumetric+muscle+loss+in+the+mouse+quadriceps%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of a critical size threshold for volumetric muscle loss in the mouse quadriceps.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 25 (2), 59-70 (2019).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446.e7 (2019).</li>
<li>Dong, J., Dong, Y., Chen, Z., Mitch, W. E., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathway+to+muscle+fibrosis+depends+on+myostatin+stimulating+the+differentiation+of+fibro%2Fadipogenic+progenitor+cells+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The pathway to muscle fibrosis depends on myostatin stimulating the differentiation of fibro/adipogenic progenitor cells in chronic kidney disease.</a> Kidney International. 91 (1), 119-128 (2017).</li>
<li>Lemos, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nilotinib+reduces+muscle+fibrosis+in+chronic+muscle+injury+by+promoting+TNF-mediated+apoptosis+of+fibro%2Fadipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nilotinib reduces muscle fibrosis in chronic muscle injury by promoting TNF-mediated apoptosis of fibro/adipogenic progenitors.</a> Nature Medicine. 21 (7), 786-794 (2015).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Biferali, B., Proietti, D., Mozzetta, C., Madaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+cross-talk+in+skeletal+muscle%3A+the+social+network%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+In+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors cross-talk in skeletal muscle: the social network.</a> Frontiers In Physiology. 10, 1074(2019).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

골격근 재생을 연구하기 위한 다양한 부상 모델이 있으며, 여기에는 물리적, 화학적, 외과적 자극의 사용이 포함된다 10,11,12,13,14,15,16. 카디오톡신과 염화바륨은 근육 재생을 시작하는 데 가장 널리 사용되는 두 가지 화학 물질입니다10,11, 그러나 ~7dpi에서 일시적인 섬유증이 발생하고 3주 후에 완전한 재생이 발생합니다12,14<su...

구강 안면 근육은 저작, 언어, 호흡 및 얼굴 표정과 같은 일상적인 생리 활동에 중요합니다1. 그러나 선천성 구강안면 기형의 경우 이러한 근육이 위축성 및 섬유화 변화를 일으켜 신체 건강과 사회적 인지를 손상시킨다2. 안면 재건 수술이 여전히 1차 치료법이지만, 수술 후 환자의 최대 30-70%가 여전히 근육 손실과 근육 기능 장애를 겪고 있습니다 3,4 구강 안면 근육 재생의 실패는 수술만으로는 해결할 수 없는 내인적 요인에 기인합니다.
구강 안면 근육의 출현은 복잡한 척추 동물의 머리와 방이있는 심장 5,6을 동반하는 진화 적 참신함입니다. 좀마이트(somite)에서 유래한 사지(limb)와는 달리, 구강안면근(orofacial muscle)은 분지아치(branchial arch)7에서 유래한다. 이러한 계통발생학적 및 존재론적 특성은 그들에게 뚜렷한 재생행동을 유발할 수 있다8. 교근(MAS) 근육은 경골 전방(TA) 근육이 동일한 정도의 부상에 노출된 후 완전히 재생되는 시점에 심각한 섬유증이 발생한 것으로 보고되었습니다 1,9. 그러나 재생의 근본적인 메커니즘은 잘 이해되지 않고 있습니다.
이 연구에서는 구강 안면 근육 재생에 대한 연구를 용이하게 하기 위해 마우스 교근의 동결 손상 모델을 설정했습니다. 우리는 두 근육 사이에서 식별 가능한 발산이 감지될 수 있는 가장 빠른 시점이었기 때문에 섬유증 표현형을 평가하기 위한 시점으로 부상 후 14일을 선택했습니다. 부상 후 MAS가 완전히 재생되려면 최소 40주가 필요합니다1. 일관되게, 이 연구는 MAS의 동결 손상 후 콜라겐의 현저한 침착을 손상 후 TA의 규칙적인 재생과 비교하여 밝혔습니다. 이 모델의 도움으로 근육 위축 및 섬유증에 대한 추가 기계론적 연구를 수행할 수 있으며, 이는 수술 후 구강 안면 근육 재생을 촉진하기 위한 잠재적인 치료 방법을 개발하는 데 도움이 될 것입니다.

<table><tbody><tr><td>1mL 주사기</td><td>Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)</td><td>1-ml 주사기</td><td>/</td></tr><tr><td>아세톤</td><td>크론 화학 물질</td><td>아세톤</td><td>/</td></tr><tr><td>접착 현미경 슬라이드</td><td>Citotest Scientific</td><td>188105</td><td>/</td></tr><tr><td>동물 제모</td><td>Phygene Scientific</td><td>PH1877</td><td>/</td></tr><tr><td>BSA(소 혈청 알부민)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>A8010</td><td>/</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>C0065</td><td>/</td></tr><tr><td>당나귀 안티 염소 Alexa Fluor 488</td><td>Abcam</td><td>ab150129</td><td>1:200</td></tr><tr><td>당나귀 혈청</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>SL050</td><td>/</td></tr><tr><td>드라이 아이스</td><td>Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)</td><td>쌀 모양의 드라이 아이스</td><td>/</td></tr><tr><td>IFKine 레드 당나귀 안티 토끼</td><td>Abbkine Scientific Company</td><td>A24421</td><td>1:200</td></tr><tr><td>절연 배럴(대)</td><td>Thermos</td><td>D600</td><td>/</td></tr><tr><td>절연 배럴(소)</td><td>Polar Ware</td><td>250B</td><td>/</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Technology Company(중국 광둥성 심천)</td><td>R510-22</td><td>/</td></tr><tr><td>Isopentane</td><td>MACKLIN</td><td>M813375</td><td>/</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9393</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>액체 질소</td><td>Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>M.O.M kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>Mice&nbsp;</td><td>&nbsp; Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)</td> <td>5주 된</td> <td>매체</td></tr> <tr><td></td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>S2100</td><td>/</td></tr><tr><td>Nertral balsam</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>G8590</td><td>/</td></tr><tr><td>PAX7</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank&nbsp;</td><td>팍스7</td><td>1:5</td></tr><tr><td>Pdgfra</td><td>R& D systems</td><td>AF1062</td><td>1:40</td></tr><tr><td>Sirus Red Staining Kit</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>G1472</td><td>/</td></tr><tr><td>수술 기구(집게, 가위, 바늘 홀더, 메스 및 봉합사)</td><td>Zhuoyue 의료 기기(Suqian, Jiangsu, China)</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>Tissue-tek OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>/</td></tr><tr><td>Triton</td><td>Shanghai Scigrace Biotech</td><td>ABIO-Biofroxx-0006A</td><td>/ </td></tr><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac</td><td>Zoletil 50</td><td>/</td></tr></tbody></table>

구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하기 위해 마우스 교근의 동결 손상

Freezing Injury in Mouse Masseter Muscle to Establish an Orofacial Muscle Fibrosis Model

구강 안면 근육은 골격근 조직의 하위 집합을 구성하며, 뚜렷한 진화 궤적과 발달 기원을 가지고 있습니다. somite에서 파생 된 사지 근육과 달리, 구강 안면 근육은 분지 아치에서 유래하며 두개 신경 능선에서 독점적으로 기여합니다. 최근 연구에 따르면 구강 안면 근육 그룹에서도 재생이 다르다는 사실이 밝혀졌습니다. 그러나 근본적인 규제 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았습니다. 현재의 골격근 재생 모델은 주로 사지와 몸통 근육에 초점을 맞추고 있습니다. 이 프로토콜에서는 드라이아이스를 사용하여 마우스 교근과 경골 전방근의 동결 손상을 유도하여 구강 안면 근육 섬유증 모델을 만들었습니다. 근육 위성 세포와 섬유-지방 생성 전구 세포의 시간적 역학은 두 근육 간에 달랐고, 이로 인해 근섬유 재생이 손상되고 과도한 세포외 기질 침착이 발생했습니다. 이 모델의 도움으로 구강 안면 부위의 근육 재생에 대한 심층적인 연구를 수행하여 구강 안면 질환 환자를 위한 치료 접근법을 개발할 수 있습니다.

HE와 Sirius Red 염색(그림 4 및 추가 그림 S1)은 이 동결 부상 모델에서 TA의 완전한 근육 재생을 보여주었습니다. 대조적으로, MAS는 손상된 근섬유 재생과 과도한 세포외 기질 침착을 나타냈습니다. 온전한 MAS 및 TA 근육의 조직학은 그림 4A, B에 나타나 있으며, 여기서 근섬유는 정렬되어 있고 섬유화 영역은 간질 공간과 다른 다발 사이에서만 나타납니다. TA 근육은 부상 후 14일 동안 손상되지 않은 대조군과 거의 동일한 근육 구조를 유지했지만(그림 4G-J), MAS 근육의 구조는 심각하게 교란되었습니다(그림 4C-F</stron...

이 프로토콜의 목표는 구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하는 것입니다. 생쥐 교근과 경골 전방 근육 간의 조직학을 비교한 결과, 동결 손상 후 교근 섬유화가 확인되었습니다. 이 모델은 구강 안면 근육 섬유증의 기저에 있는 메커니즘에 대한 추가 연구를 용이하게 할 것입니다.

Orofacial muscle constitutes a subset of skeletal muscle tissue, with a distinct evolutionary trajectory and development origin. Unlike the somite-derived ...

현재의 골격근 재생 연구는 사지와 몸통 근육에만 초점을 맞추고 있으며, 구강 안면 근육 재생의 특성과 메커니즘은 대부분 탐구되지 않고 있습니다. 이 연구의 범위는 구강 안면 영역의 근육 재생에 대한 추가 연구를 용이하게 하기 위해 더 쉽고 신뢰할 수 있는 마우스 모델을 만드는 것입니다. 최근의 연구는 구강 안면 근육이 뚜렷한 진화 궤적과 발달 기원을 가진 골격근의 독특한 부분 집합을 구성한다는 것을 검토합니다.그들은 또한 사지 상대와 비교하여 다른 재생 성능을 나타냅니다. 구강 안면 근육 재생에 대한 더 깊은 연구는 이러한 현저한 차이의 기저를 파악하기 위해 필요합니다. 이 연구는 구강 안면 근육 재생을 연구하기 위한 빠르고 재현 가능한 방법을 제시합니다.반쯤 얼어붙은 부상 과정은 20분이 걸렸고, 수확 과정은 각 쥐에 대해 10분밖에 걸리지 않았으며, 쥐는 운동의 손상 없이 부상을 잘 견딜 수 있습니다. 우리의 모델은 형태학, 조직학 및 분자 조절의 측면에서 섬유화 교근과 완전히 재생된 경골 전방근 간의 후속 비교를 허용하기 때문에 기본 메커니즘에 대해 더 깊이 탐구할 수 있는 두 가지 힘을 제공합니다. 우리의 향후 연구는 상주 근육 줄기 세포와 여러 틈새 세포의 변화 사이의 인과 효과에 초점을 맞출 것이며, 이에 따라 구강 안면 근육 섬유증 과정에 대한 중재를 개발할 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

마우스의 안면 신경을 절개하거나 으깬 축삭 절개술을 수행하는 방법을 자세히 설명하는 수술 프로토콜을 제시합니다. 안면 신경 축삭 절개술은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 연구하고 치료 기술을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

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여기에서는 쥐 교근에서 체적 근육 손실(VML) 손상을 외과적으로 생성하기 위한 프로토콜을 설명하며, 새로운 하이드로겔과 같은 생체 재료를 사용하여 두개안면 근육 손상 및 그 치료 연구를 위한 재현 가능하고 접근 가능한 모델을 제공합니다.

생명 공학 재료 연구를 위한 Masseter 체적 근육 손실의 설치류 모델

여기에서는 두개골 거근 장뇨근(LAL)의 생체 내 전기천공법(in vivo electroporation)과 탈질법(denervation)을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차를 통해 신경근 시냅스의 재생에서 근육 유래 단백질의 잠재적 역할을 연구할 수 있습니다.

In Vivo Electroporation과 Cranial Levator Auris Longus Skeletal Muscle의 단기 신경 재생이 결합되었습니다.

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Less-Invasive Technique for Non-stabilized Mandibular Fracture in Mouse Models

체적 근육 손실(VML) 손상은 내인성 재생 능력을 초과하여 영구적인 기능 결손을 초래합니다. 현재 VML 연구는 주로 사지 및 몸통 근육에 초점을 맞추고 있습니다. VML에 대한 기계론적 연구를 두개안면 근육으로 확장하기 위해 이 기사에서는 VML 손상 전후 교근 기능의 종단 평가를 위한 생체 내 방법을 설명합니다.

체적 근육 손실(VML) 손상의 외과적 생성 후 쥐 마세터 근육의 생체 내 기능 평가

난소암의 Orthotopic 동물 모델은 더 나은 인간의 질병을 복제하기 때문에 암 진행 및 치료 종양 반응의 우리의 이해를 향상시킬 수 있습니다. 마우스 모델 루시페라제 - 표현 난소 종양 세포의 intrabursal 주사를 받게됩니다. 치료는 경구 gavage를 통해 관리합니다. 종양 성장에 의해...

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

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우리는 직접의 근육 힘, 근육 힘, 수축성 속도론 및 절연 골격 근육의 fatigability를 측정하는 방법을...

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

학습하세요 마우스 교근 동결 손상을 통한 구강 안면 근육 섬유증 모델 확립 방법을. 교근과 비복근의 재생 능력 차이를 비교하여 구강 안면 근육 재생 메커니즘을 연구하는 데 활용할 수 있습니다.

구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하기 위해 마우스 교근의 동결 손상

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