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경내피 전기 저항 검출을 통한 bEnd.3 혈관 내피 세포의 장벽 기능 무결성 기록
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JoVE Journal Neuroscience
Barrier Functional Integrity Recording on bEnd.3 Vascular Endothelial Cells via Transendothelial Electrical Resistance Detection

경내피 전기 저항 검출을 통한 bEnd.3 혈관 내피 세포의 장벽 기능 무결성 기록

Full Text
4,765 Views
09:03 min
September 29, 2023

DOI: 10.3791/65938-v

Fuhan Fan1, Hong Jiang1, Ya Hou1, Yi Zhang1,2,3, Qipeng Zhao4, Yong Zeng1,2, Xianli Meng1,2,5, Xiaobo Wang2

1School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Ethnic Medicine,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4School of Pharmacy,Ningxia Medical University, 5Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a reliable in vitro model of the blood-brain barrier (BBB) using mouse cerebral vascular endothelial cells (bEnd.3). The model assesses transmembrane electrical resistance (TER) to evaluate the integrity of the BBB, facilitating drug screening for central nervous system treatments.

Key Study Components

Area of Science

  • Cell Biology
  • Neuroscience
  • Pharmacology

Background

  • The blood-brain barrier is crucial for maintaining homeostasis in the central nervous system.
  • Traditional in vitro models are less effective for drug testing due to limitations in cellular complexity.
  • This study addresses those limitations by presenting a simpler, non-invasive method.

Purpose of Study

  • To improve the assessment of BBB integrity through TER measurement.
  • To facilitate the screening of drugs targeting central nervous system disorders.
  • To verify the relationship between TER values and tight junction protein expression.

Methods Used

  • The study utilized bEnd.3 cell culture, which was seeded and cultured in a 96-well plate format.
  • Key interventions included the addition of cobalt chloride to assess cellular viability and barrier integrity.
  • TEER values were recorded over time to determine the formation and stability of the BBB model.
  • Statistical analysis was employed to compare control and treated groups.

Main Results

  • Results indicated a significant reduction in TEER values upon treatment with cobalt chloride, indicating compromised BBB integrity.
  • The study showed the potential of using TER as a reliable method for assessing drug effects on the BBB.
  • Stability of the cell barrier was reached by day five, underscoring the method's effectiveness.

Conclusions

  • This study demonstrates a simplified and effective approach to assess BBB integrity in drug development.
  • Results could enhance understanding of therapeutic interventions for central nervous system diseases.
  • The methods outlined may be adapted for broader applications in pharmacological research.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of using the bEnd.3 cell line?
The bEnd.3 cell line is an established model for studying the blood-brain barrier, providing relevant insights into endothelial function and drug permeability.
How is the cobalt chloride treatment implemented?
Cobalt chloride is added to the cell cultures to investigate its effects on cell viability and barrier function, specifically assessing changes in TER.
What measures are taken to ensure accurate TEER readings?
Calibration of the measurement instrument and proper handling of electrodes are critical for obtaining reliable TEER measurements before and during the experiments.
What types of data can be obtained from this method?
The method provides data on electrical resistance, supporting assessments of cell viability and barrier integrity essential for drug development.
How can this model be adapted for other studies?
This BBB model could be modified to test various compounds or treatments, enhancing its utility for pharmacological and toxicological research.
What are the limitations of this study?
While the model is reliable, it may not fully replicate in vivo conditions, signaling the need for complementary studies using more complex biological models.

이 프로토콜은 뇌 혈액 장벽의 신뢰할 수 있고 효율적인 시험관 내 모델을 설명합니다. 이 방법은 마우스 대뇌 혈관 내피 세포 bEnd.3를 사용하고 막관통 전기 저항을 측정합니다.

현재 연구에서는 일반적으로 투과성 테스트 및 관련 단백질 발현을 사용하여 TEER 검출의 정확도를 검증합니다. 미덕의 단층 세포의 BBB 모델은 약물 스크리닝에 덜 효과적이며 더 많은 세포를 사용하면 모델 구성이 더 어려워집니다. 이 연구의 프로토콜은 비침습적 절차를 통해 TEER 검출 후 세포 샘플을 다른 실험에 사용할 수 있기 때문에 비교적 간단합니다.

세포 모델의 투과성을 평가하기 위한 TEER의 검출은 중추신경계의 치료 및 예방을 위한 약물 스크리닝을 가속화하여 신약 개발의 성공률을 높일 수 있습니다. 앞으로 흉벽의 상부 구획 세포에서 밀착 접합 단백질의 발현을 감지하여 TEER 테스트 결과가 BBB 장벽 기능의 무결성을 효과적으로 나타낼 수 있는지 확인할 것입니다.

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장벽 기능 무결성 기록 BEnd.3 혈관 내피 세포 경내피 전기 저항 감지 혈액-뇌 장벽 미세혈관 내피 세포 성상교세포 주위세포 시험관 모델 신경 장애 약리학적 치료 단층 BBB 세포 모델 상부 챔버 24웰 플레이트 세포 장벽 기능 상피 세포 전압계 막관통 전기 저항 CoCl2 유도 저산소 세포 중추 신경계 질환

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