Name: 마우스 사구체를 표지하고 분석하기 위한 효율적이고 빠른 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: 배우세요 마우스 신장 사구체를 FITC-Dextran으로 표지하고 광시트 및 공초점 현미경으로 분석하는 빠르고 정확한 방법입니다. 이 기술은 신장 질환 연구에 중요한 데이터를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 중국 국립자연과학재단(82204951)과 쓰촨성 과학기술프로그램(2020JDRC0102)의 보조금으로 지원되었습니다.

이 연구에서는 성체 C57BL/6마리 마우스(생후 6주, 25-30g)를 사용했습니다. 모든 절차는 동물 복지 및 실험 윤리에 대한 현지 규정을 준수하여 수행되었습니다. 이 연구는 쓰촨 대학 생물 의학 연구 윤리 위원회의 중국 서부 병원의 승인을 받았습니다.
1. 사구체 표지 및 조직 준비
<ol><li>사구체 라벨링<ol><li>FITC-덱스트란(10mg)을 1x 인산염 완충 식염수(PBS)에 1:1(1mg: 1mL)의 비율로 녹여 작업 프로브 용액을 준비합니다. 알림: 작업 용액은 4°C에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다.</li>
		<li>C57 마우스를 마우스 꼬리 정맥 고정 장치에 놓습니다. 거즈를 뜨거운 물로 적시고 거즈를 쥐꼬리 중간 부분에 감싼 후 꼬리를 1분 동안 따뜻하게 합니다.</li>
		<li>왼쪽 및 오른쪽 꼬리 정맥이 보일 때까지 75% 에탄올로 마우스 꼬리를 닦습니다.</li>
		<li>1mL 인슐린 주사기로 작업 프로브 용액 100μL를 뽑고 용액을 마우스 꼬리 정맥에 천천히 주입합니다.</li>
		<li>주입 후 프로브 용액을 30분 동안 순환시킵니다. 쥐가 새장에서 자유롭게 움직일 수 있도록 하십시오.</li>
		<li>충분한 순환이 이루어지면 펜토바르비탈나트륨(1%, 60-80μg/kg)의 복강내 주사로 마우스를 깊이 마취합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>신장 샘플링 및 고정<ol><li>마취된 쥐를 앙와위 자세의 해부판에 고정합니다. 의료용 테이프로 발을 고정하십시오.</li>
		<li>피부 준비 후 치사량의 펜토바르비탈 나트륨(1%, 10mg/kg)으로 쥐를 안락사시킵니다.</li>
		<li>복강을 노출시키기 위해 정중선 복부 절개를 합니다.</li>
		<li>신장을 드러내고 흄 후드에서 메스와 가위로 신장을 제거합니다. 신장 외피를 조심스럽게 제거합니다.</li>
		<li>신장을 채취하여 4°C에서 밤새 4% 파라포름알데히드(PFA)에 고정합니다.</li>
		<li>PBS로 샘플을 실온(RT)에서 각각 1시간 동안 세 번 세척합니다.</li>
		<li>현미경 검사를 위해 신장을 준비합니다.<ol><li>컨포칼 현미경 검사를 위해 신장 절단: 절편 두께를 표준화하기 위해 뇌 매트릭스(1mm 강철, 40-75g)를 사용하여 신장을 1mm 두께로 자릅니다. 슬라이스를 4% PFA로 옮기고 4°C에서 밤새 고정을 계속합니다.</li>
			<li>광시트 현미경 검사를 위한 전체 신장: 48시간 동안 4°C에서 4% PFA로 신장을 고정합니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. 청산
<ol><li>시약 준비<ol><li>10 % (wt / wt) N- 부틸 디에탄올 아민, 10 % (wt / wt) Triton X-100 및 80 % ddH2O를 혼합하여 CUBIC-L 시약을 준비합니다.</li>
		<li>45%(wt/wt)의 안티피린, 30%(wt/wt)의 니코틴아미드, 0.5%(vol/vol)의 N-부틸디에탄올아민 및 24.5%의ddH를혼합하여 CUBIC-R 시약을 제조합니다. 참고: CUBIC-L은 탈지질화에 사용되며 CUBIC-R은 굴절률 매칭에 사용됩니다.</li>
	</ol></li>
	<li>청산 절차<ol><li>50mL 원심분리 튜브에서 신장 샘플을 채취한 다음 37°C에서 60rpm으로 진탕하여 CUBIC-L에서 투명화합니다. 만족스러운 광학적 투명성을 얻을 때까지 4시간마다(신장 절편의 경우) 또는 24시간마다(신장 전체의 경우) CUBIC-L을 교체하십시오. 참고: 이 과정은 신장 절편의 경우 1일, 전체 신장의 경우 5일이 소요됩니다.</li>
		<li>샘플을 PBS에서 각각 1시간 동안 RT에서 부드럽게 흔들어 세 번 세척합니다.</li>
		<li>CUBIC-R을 샘플에 바르고 37°C, 60rpm에서 6시간 동안 샘플을 흔듭니다.</li>
		<li>투명화된 샘플을 직접 관찰하거나 CUBIC-R로 채워진 검은색 튜브에 1주일 동안 RT로 보관합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 이미지 취득
<ol><li>컨포칼 이미징 참고: 컨포칼 현미경(렌즈: Plan Apo λ 4×/0.2 N1 대물렌즈 또는 Plan Apo VC 10×/0.45 DIC N1 대물렌즈)으로 얇게 썬 신장 샘플을 이미지화합니다. z-stack을 사용하여 큰 이미지(예: 신장 절편의 경우 6052 μm x 6052 μm)를 캡처할 수 있습니다.<ol><li>컨포칼 현미경을 레이저 출력, 컨포칼 제어 스위치, 컴퓨터, 현미경 및 컨포칼 하드웨어의 순서로 켭니다. 자체 테스트를 실행한 후 공초점 소프트웨어를 켭니다.</li>
		<li>적절한 렌즈를 선택합니다. CUBIC-R 시약에서 샘플을 꺼내 컨포칼 접시에 넣고 뚜껑을 덮어 CUBIC-R 시약이 마르지 않도록 합니다.</li>
		<li>샘플을 시야 중앙으로 이동하고 초점이 맞춰질 때까지 초점면을 조정합니다.</li>
		<li>3D 재구성(3.1.4.1단계) 및 큰 이미지 재구성(3.1.4.2-3.1.4.3단계)을 적용합니다.<ol><li>3D 재구성(공초점): 형광이 보이지 않을 때까지 확대/축소 평면을 한 방향으로 전환합니다. 이 위치는 맨 위로 정의됩니다. 그런 다음 형광이 보이지 않을 때까지 확대/축소 평면을 반대 방향으로 전환합니다. 이 위치는 맨 아래로 정의됩니다. 대화 상자의 오른쪽 하단 모서리에 있는 실행 버튼을 클릭하여 스캔을 시작합니다.</li>
			<li>큰 이미지 재구성(공초점): 시야를 샘플의 중앙으로 이동하고 현재 위치를 중심으로 설정합니다. 2 x 2 시야각을 선택합니다.</li>
			<li>ND 다기능 인터페이스에서 Z 스택 을 선택하여 큰 이미지를 재구성하고 패널에서 다양한 옵션을 설정합니다. 그런 다음 Run butto n을 눌러 스캔을 시작합니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>광시트 형광 현미경(LSFM) 이미징 참고: 광시트 형광 현미경(렌즈: EC Plan-Neofluar 5x/0.16(Medium n = 1.529) 대물렌즈)로 전체 신장을 이미지화합니다.<ol><li>샘플 부착(LSFM):<ol><li>투명한 신장을 검체 고정 어댑터에 붙이고 신장이 단단히 부착될 때까지 기다립니다.</li>
			<li>신장을 샘플 용기에 담그고 샘플 용기를 현미경 시스템에 밀어 넣습니다. 해치를 닫습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>관찰 및 스캔(LSFM):<ol><li>위치 찾기 인터페이스에서 샘플을 적절한 관찰 위치로 이동합니다. 획득 인터페이스로 전환하고, 광학 경로를 설정하고, 488nm 레이저, LBF 405/488/561/640, 광학 분할 필터 블록 SBS LP 490을 선택하고, 카메라 2를 선택하고, 의사 색상을 녹색으로 변경합니다.</li>
			<li>이전에 채널 하위 메뉴에서 기록한 왼쪽/오른쪽 Z 오프셋 값을 채웁니다. 가장 작은 확대/축소(0.36)를 선택하고 최대 선명도를 위해 미세 조정합니다.</li>
		</ol></li>
		<li>전체 오르간의 X\Y 경계와 Z 범위를 찾습니다. 레이저 강도와 노출 시간(10ms 미만 선호)을 조정하고 Run(실행 )을 클릭하여 시작합니다.</li>
		<li>조직이 너무 크면 이미지 스티칭을 사용하여 두 개 이상의 이미지를 병합합니다. 현미경 소프트웨어(여기서는 ZEISS ZEN 3.7)를 사용하여 캡처한 파일을 엽니다. Processing > Method > Stitching > Method Parameter > Apply 를 선택하여 이미지 스티칭을 완료합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 데이터 처리 및 정량화
알림: Imaris (이미지 분석) 소프트웨어로 이미지 스택을 처리하고 Surface 기능을 사용하여 사구체에 레이블을 지정하고 분석을 수행합니다.
<ol><li>사구체 수<ol><li>큰 이미지(컨포칼 현미경 검사) 또는 스티칭된 이미지(광시트 현미경 검사)를 이미지 분석 소프트웨어로 가져올 수 있습니다.</li>
		<li>이미지 분석 소프트웨어에서 파일을 엽니다. 서피스 버튼을 클릭하여 새 서피스를 생성합니다. 화면 왼쪽 하단의 안내를 따릅니다.<ol><li>아무 것도 선택하지 않고 다음 버튼(오른쪽 화살표 버튼)을 클릭합니다.</li>
			<li>스무딩(Smooth) 옵션 앞의 박스를 선택하고 적절한 숫자(예: 14.5)를 입력하여 표면의 디테일을 제어합니다. 임계값 설정(Thresholding)에서 배경 빼기(Background Subtraction)를 선택하고 사구체의 대략적인 평균 직경으로 상자를 채웁니다. 다음 버튼을 클릭합니다.</li>
			<li>필요한 경우 조정하고 다음 버튼을 클릭합니다. 적절한 범위를 선택하고 다음 버튼을 클릭하여 표면을 만듭니다.</li>
		</ol></li>
		<li>Filter(필터)를 클릭한 다음 Add(추가) 버튼을 클릭하여 Sphericity(구형)를 추가하여 구형이 아닌 개체를 필터링합니다. 복제(Duplicate) 버튼을 클릭하여 이 새 서피스를 복사합니다.</li>
		<li>Statistics 버튼을 클릭한 다음 Overall 버튼을 클릭합니다. 소프트웨어는 사구체의 수를 Total Number of Surface로 표시합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>사구체의 부피<ol><li>위와 같이 사구체의 표면을 만듭니다.</li>
		<li>표면이 완성되면 선택 버튼을 클릭하여 대상 객체를 선택하고 모든 객체의 체적을 표시합니다. 저장 버튼을 클릭하고 추가 분석을 위해 통계를 스프레드시트로 내보냅니다.</li>
	</ol></li>
	<li>신장 조각 또는 전체 콩팥의 부피<ol><li>큰 이미지(컨포칼 현미경 검사) 또는 스티칭된 이미지(광시트 현미경 검사)를 이미지 분석 소프트웨어로 가져올 수 있습니다.</li>
		<li>이미지 분석 소프트웨어에서 파일을 엽니다. 서피스 버튼을 클릭하여 새 서피스를 생성합니다. 화면 왼쪽 하단의 안내를 따릅니다.<ol><li>체크하지 않고 다음 버튼(오른쪽 화살표 버튼)을 클릭합니다.</li>
			<li>스무딩(Smooth) 옵션 앞의 박스를 선택하고 적절한 숫자(예: 50)를 입력하여 표면의 디테일을 제어합니다. 임계값 설정(Thresholding)에서 절대 강도(Absolute Intensity)를 선택합니다. 다음 버튼을 클릭합니다.</li>
			<li>전체 조직을 덮을 때까지 Surface를 조정하고 다음 버튼을 클릭합니다. 다음( Next ) 버튼을 클릭하여 서피스를 생성합니다.</li>
		</ol></li>
		<li>선택(Selection) 버튼을 클릭하여 전체 조직의 표면(Surface)을 선택하고 조직의 부피를 표시합니다. 저장 버튼을 클릭하여 통계를 스프레드시트로 내보냅니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

Fluorescent Labeling of Glomeruli in Cleared Mouse Kidneys for Microscopy(현미경 검사를 위한 Cleared Mouse Kidneys의 사구체 형광 라벨링)

<ol><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number%2C+glomerular+volume%2C+renal+disease+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Bertram, J. F., Douglas-Denton, R. N., Diouf, B., Hughson, M. D., Hoy, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nephron+number%3A+implications+for+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Human nephron number: implications for health and disease.</a> Pediatric Nephrology. 26 (9), 1529-1533 (2011).</li>
<li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age%2C+kidney+weight%2C+and+body+surface+in+normal+man%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li>
<li>Rasch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+diabetic+glomerulopathy+in+streptozotocin+diabetic+rats+by+insulin+treatment.+Kidney+size+and+glomerular+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Prevention of diabetic glomerulopathy in streptozotocin diabetic rats by insulin treatment. Kidney size and glomerular volume.</a> Diabetologia. 16 (2), 125-128 (1979).</li>
<li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2011).</li>
<li>Bertram, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+and+how+we+determine+nephron+number%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29, 575-580 (2014).</li>
<li>Bertram, J. F., Soosaipillai, M. C., Ricardo, S. D., Ryan, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+numbers+of+glomeruli+and+individual+glomerular+cell+types+in+the+normal+rat+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Total numbers of glomeruli and individual glomerular cell types in the normal rat kidney.</a> Cell and Tissue Research. 270 (1), 37-45 (1992).</li>
<li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li>
<li>Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+renal+glomeruli+with+the+new+stereology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Cytology%22%5BJournal%5D)">Analyzing renal glomeruli with the new stereology.</a> International Review of Cytology. 161, 111-172 (1995).</li>
<li>Lødrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume%3A+a+pig+study%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li>
<li>Lane, P. H., Steffes, M. W., Mauer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+glomerular+volume%3A+a+comparison+of+four+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Estimation of glomerular volume: a comparison of four methods.</a> Kidney International. 41 (4), 1085-1089 (1992).</li>
<li>Baldelomar, E. J., Charlton, J. R., deRonde, K. A., Bennett, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurements+of+kidney+glomerular+number+and+size+in+healthy+and+Os%28%2F%2B%29+mice+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo measurements of kidney glomerular number and size in healthy and Os(/+) mice using MRI.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 317 (4), F865-F873 (2019).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cationic+near+infrared+fluorescent+agent+and+ethyl-cinnamate+tissue+clearing+protocol+for+vascular+staining+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A cationic near infrared fluorescent agent and ethyl-cinnamate tissue clearing protocol for vascular staining and imaging.</a> Scientific Reports. 9 (1), 521(2019).</li>
<li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li>
<li>Basgen, J. M., Steffes, M. W., Stillman, A. E., Mauer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+glomerular+number+in+situ+using+magnetic+resonance+imaging+and+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Estimating glomerular number in situ using magnetic resonance imaging and biopsy.</a> Kidney International. 45 (6), 1668-1672 (1994).</li>
<li>Prentice, B. M., Caprioli, R. M., Vuiblet, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+molecular+imaging+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Label-free molecular imaging of the kidney.</a> Kidney International. 92 (3), 580-598 (2017).</li>
<li>Sanden, S. K., Wiggins, J. E., Goyal, M., Riggs, L. K., Wiggins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+thick+and+thin+section+method+for+estimation+of+podocyte+number%2C+glomerular+volume%2C+and+glomerular+volume+per+podocyte+in+rat+kidney+with+Wilms%27+tumor-1+protein+used+as+a+podocyte+nuclear+marker%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a thick and thin section method for estimation of podocyte number, glomerular volume, and glomerular volume per podocyte in rat kidney with Wilms' tumor-1 protein used as a podocyte nuclear marker.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (10), 2484-2493 (2003).</li>
<li>Hama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scale%3A+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 14 (11), 1481-1488 (2011).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li>
<li>Lloyd-Lewis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+mammary+gland+and+mammary+tumours+in+3D%3A+optical+tissue+clearing+and+immunofluorescence+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging the mammary gland and mammary tumours in 3D: optical tissue clearing and immunofluorescence methods.</a> Breast Cancer Research. 18 (1), 127(2016).</li>
<li>Ren, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CUBIC-plus%3A+An+optimized+method+for+rapid+tissue+clearing+and+decolorization%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">CUBIC-plus: An optimized method for rapid tissue clearing and decolorization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 568, 116-123 (2021).</li>
<li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li>
<li>Matsumoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+CUBIC+tissue+clearing+for+whole-organ+cell+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Advanced CUBIC tissue clearing for whole-organ cell profiling.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3506-3537 (2019).</li>
<li>Puelles, V. G., Moeller, M. J., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((We+can+see+clearly+now%3A+optical+clearing+and+kidney+morphometrics%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">We can see clearly now: optical clearing and kidney morphometrics.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 26 (3), 179-186 (2017).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+combinations+of+fluorescent+vessel+labeling+and+tissue+clearing+methods+for+three-dimensional+visualization+of+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Optimal combinations of fluorescent vessel labeling and tissue clearing methods for three-dimensional visualization of vasculature.</a> Neurophotonics. 9 (4), 045008(2022).</li>
<li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452-459 (2017).</li>
<li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iDISCO%3A+A+simple%2C+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">iDISCO: A simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li>
<li>Bai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+effective+vascular+network+labeling+method+for+transparent+tissues+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">A simple and effective vascular network labeling method for transparent tissues of mice.</a> Journal of Biophotonics. 16 (7), e202300042(2023).</li>
<li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarifying+tissue+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Clarifying tissue clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li>
<li>Kolesová, H., Olejníčková, V., Kvasilová, A., Gregorovičová, M., Sedmera, D. J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+imaging+methods+for+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Iscience%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and imaging methods for cardiovascular development.</a> Iscience. 238 (2), 489-507 (2021).</li>
<li>Tian, T., Yang, Z., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+technique%3A+Recent+progress+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing technique: Recent progress and biomedical applications.</a> Journal of Anatomy. 238 (2), 489-507 (2021).</li>
<li>Du, H., Hou, P., Zhang, W., Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+CLARITY-based+tissue+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Advances in CLARITY-based tissue clearing and imaging.</a> Experimental and Therapeutic. 16 (3), 1567-1576 (2018).</li>
<li>Ertürk, A., Lafkas, D., Chalouni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cleared+intact+biological+systems+at+a+cellular+level+by+3DISCO%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Imaging cleared intact biological systems at a cellular level by 3DISCO.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. 89, e51382(2014).</li>
</ol>

모든 저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

조직 투명화 기술은 3개 또는 4개 그룹으로 분류할 수있다 29,30,31. 유기 용매 기반 조직 투명화(예: DISCO 및 PEGASOS), 수성 기반 조직 투명화(예: CUBIC) 및 하이드로겔 포매 조직 투명화(예: CLARITY)는 모두 신장 투명화에 적용되었습니다(25,26,28,32). CUBIC은 사구체(혈관)에 FITC-덱스트란이 부착되어 있을 때 가장 잘 작동합니다. 또한, CUBIC은 상대적으로 더 편리한 조작 공정을 가지며, 처리된 샘플이 유기 시약(33)에 담글 필요가 없기 때문에, 통상의 현미경 렌즈(27) 이상을 필요로 하지 않는다. 그러나 다른 청산 방법과 선박 라벨 방법에는 고유한 장점과 단점이 있습니다. 연구자는 특정 요구 사항을 충족하기 위해 다양한 접근 방식을 실험해야 할 수 있습니다.
이전 연구에서는 신장의 혈관이 13,25,26,28로 표지되었을 때 사구체가 투명한 신장에서 표지될 수 있음을 발견했습니다. 이 현상에 대한 철저한 설명은 여전히 추가 조사가 필요하지만, 혈관계에 대한 좋은 표지 방법이 사구체를 효과적으로 표지하는 것으로 추론할 수 있습니다. 실험 결과에 따라 중간 분자량(예: 150kDa)의 FITC-덱스트란의 혈관 내 주사를 권장합니다. 그러나 라벨링은 혈액 순환에 의존하기 때문에 이 방법은 혈액 순환이 부족할 때 사구체를 라벨링하지 못할 수 있습니다.
LSFM은 대규모 조직 관찰이 가능하므로 전체 신장 사구체 검출에 더 적합합니다. 그러나 광시트 현미경은 모든 실험실에서 사용할 수 있는 것은 아닙니다. 따라서 우리는 일반 컨포칼 현미경을 사용하는 대체 프로토콜 세트를 제공하고 있습니다. 신장은 여러 부분으로 나뉘어야 하지만, 전체 신장에서 사구체의 수와 부피와 같은 데이터를 얻는 것이 가능합니다. 게다가, 컨포칼 현미경은 더 적은 양의 데이터를 제공하므로 데이터 처리 친화적입니다.
Imaris는 직접 데이터 출력을 제공합니다. 그러나 아날로그 신호를 원본과 가깝게 일치시키도록 주의해야 합니다. 또한 소프트웨어가 대용량 파일을 처리하는 데 시간이 오래 걸릴 수 있으므로 답답할 수 있습니다. 사구체를 명확하게 라벨링하고 시각화할 수 있는 한, 데이터 분석을 위한 하나 이상의 고유한 솔루션이 있습니다. 서로 다른 실험실의 연구원들은 익숙한 소프트웨어 및 프로그래밍 언어로 작업할 수 있습니다.

사구체의 수와 양은 다양한 신장 질환의 진단과 치료에 매우 중요하다 1,2,3,4,5. 사구체 수 추정의 황금 표준은 물리적 해부기/분획기 조합입니다. 그러나 이 방법은 특수 시약과 장비가 필요하므로 느리고 비용이 많이 듭니다 6,7,8,9. 생검은 풍부한 정보를 제공하지만, 분명히, 이 방법은 대략적인 추정치에만 적합하다10,11. 자기공명영상(MRI), 컴퓨터단층촬영(CT) 및 X-ray를 포함한 의료 영상 기술도 사구체 검출에 널리 사용되지만(12,13,14,15) 이러한 기술에는 부피가 큰 기구가 필요하다. 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화(MALDI) 이미징 질량 분석기(16) 또는 두껍고 얇은 단면 방법(17)과 같은 새로운 방법도 사구체 검출에 사용되어 왔지만, 여전히 지루하고 힘들다.
투명성 기술의 도움으로 더 깊은 깊이를 관찰하고 두꺼운 조직 또는 전체 장기로부터 더 풍부하고 완전한 정보를 얻을 수 있습니다 18,19,20,21,22,23. 따라서 투명성 기술은 신장 연구에서 널리 사용되어 왔다24. 깨끗해진 신장에서 사구체를 관찰하고 검출하는 것도 포함됩니다. 그러나, 이들 발표된 논문들은 사구체 검출(glomerular detection)25을 간략하게만 언급했거나, 사구체를 표지하기 위해 형질전환 동물(transgenic animals)26, 자체 생산된 염료(self-produced dye)13 또는 고농도 항체 배양(high-concentration antibody incubation)27과 같은 달성하기 어려운 표지 방법을 사용하였다. 또한, 여러 연구에서 투명신장의 사구체를 분석했지만, 분석은 항상 제한적이거나13 저자가 직접 수립한 분석 알고리즘에 의존했다26.
우리는 이전에 생쥐 신장에서 사구체를 표지하는 보다 편리한 방법을 시연한 바 있다28. Imaris를 사용하여 사구체 수, 빈도 및 부피를 빠르게 얻을 수 있음을 발견했습니다. 따라서, 여기서는 생쥐 신장의 사구체를 표지하고 분석하기 위한 보다 접근하기 쉽고 포괄적이며 단순화된 일련의 방법을 제시합니다.

<table><tbody><tr><td>4% PFA</td><td>Biosharp</td><td>7007171800</td><td>고정 reaagen</td></tr><tr><td>502 접착제&nbsp;</td><td>Deli</td><td>7146</td><td>샘플 고정 어댑터에 신장을 고정하기 위해&nbsp;</td></tr><tr><td>안티피린</td><td>알라딘</td><td>A110660</td><td>클리어링 시약</td></tr><tr><td>뇌 매트릭스</td><td>RWD 생명 과학</td><td>1mm 40-75</td><td>조직 슬라이싱</td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td><td>Nikon</td><td>A1plus</td><td>이미지 획득</td></tr><tr><td>FITC-Dextran</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD150S</td><td>라벨링 시약</td></tr><tr><td>라이트 시트 형광 현미경&nbsp;</td><td>자이스</td><td>라이트 시트 7&nbsp;</td><td>이미지 획득</td></tr><tr><td>생쥐</td><td>Ensiweier</td><td></td><td>성체 C57BL/6 생쥐 (생후 6주, 25&ndash; 30g)&nbsp;</td></tr><tr><td>N-부틸디에탄올아민</td><td>알라딘</td><td>B299095</td><td>클리어링 시약</td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>알라딘</td><td>N105042</td><td>클리어링 시약</td></tr><tr><td>펜토바르비탈 나트리움잘츠</td><td>시그마-알드리치</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>꼬리 정맥 고정기</td><td>JINUOTAI</td><td>JNT-FS35</td><td>베일 주입을 위한 마우스 고정</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>클리어링 시약</td></tr></tbody></table>

마우스 사구체를 표지하고 분석하기 위한 효율적이고 빠른 방법

An Efficient and Fast Method for Labeling and Analyzing Mouse Glomeruli

사구체는 신장의 기본 단위입니다. 따라서 사구체를 연구하는 것은 신장 기능과 병리를 이해하는 데 중추적인 역할을 합니다. 생물학적 이미징은 직관적인 정보를 제공합니다. 따라서 사구체에 라벨을 붙이고 관찰하는 것은 매우 중요합니다. 그러나 현재 사용되고 있는 사구체 관찰 방법은 복잡한 조작이 필요하며, 그 결과 라벨 디테일이나 3차원(3D) 정보가 손실될 수 있습니다. 명확하고 방해받지 않는 뇌 영상 칵테일 및 컴퓨터 분석(CUBIC) 조직 투명화 기술은 신장 연구에서 널리 사용되어 보다 정확한 검출과 더 깊은 검출 깊이를 제공합니다. 우리는 중분자량 FITC-Dextran의 꼬리 정맥 주입 후 CUBIC clearing 방법으로 마우스 사구체를 빠르고 효과적으로 표지할 수 있음을 발견했습니다. 제거된 쥐의 신장은 광시트 현미경(또는 얇게 썬 경우 컨포칼 현미경)으로 스캔하여 전체 신장에 있는 모든 사구체의 3차원 이미지 스택을 얻을 수 있습니다. 적절한 소프트웨어로 처리하면 사구체 신호를 쉽게 디지털화하고 추가로 분석하여 사구체의 수, 부피 및 주파수를 측정할 수 있습니다.

이 연구는 생쥐 신장의 사구체를 표지하고 분석하기 위한 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다.
사구체(혈관)는 혈관 내 주입된 FITC-덱스트란에 의해 잘 표지될 수 있습니다. 투명화 과정 후 신장은 투명해졌고(그림 1A), 광시트 현미경(그림 1B) 또는 공초점 현미경(그림 1C)을 사용하여 사구체를 명확하게 관찰할 수 있었습니다. 컨포칼 현미경은 스캔 깊이가 제한되어 있으므로 신장은 약 1mm 두께의 조각으로 절단해야 합니다. 광시트 현미경을 사용하면 신장 전체를 직접 스캔할 수 있습니다.
명확한 신호로 사구체의 수를 쉽게 셀 수 있었습니다. 사실, 라벨링은 매우 효과적이어서 사구체를 육안으로 셀 수 있었습니다. 사구체의 부피도 직접 측정할 수 있습니다. 물론 Imaris와 같은 소프트웨어는 이 프로세스를 크게 가속화했습니다. 표면 기능을 사용하여 신장 절편(그림 2), 전체 신장(그림 3) 또는 스트립(그림 4)의 모든 사구체를 선택할 수 있으며 사구체의 수와 부피를 직접 얻을 수 있습니다(그림 2C, 그림 3C, 그림 4C). 선택된 영역의 부피도 측정할 수 있으므로(그림 2B, 그림 3B, 그림 4B), 특정 영역 또는 전체 신장에서 사구체 부피 비율 및 빈도를 계산할 수 있습니다(그림 2D, 그림 3D, 그림 4D). 특정 영역에서 계산을 수행하기 위해 신장의 영역을 선택할 수 있습니다. 우리는 생검과 유사한 스트립을 제시했습니다. 스트립에 있는 사구체의 수, 부피 및 빈도도 쉽게 얻을 수 있습니다(그림 4).
그림에서 볼 수 있듯이 본 연구에서 제시된 결과는 다음과 같습니다(N = 수, F = 주파수, V = 부피, V(a) = 평균 부피, V(t) = 총 부피).
절편 내 N 사구체 = 1128,전체 신장의 N 사구체 = 14006,절편 F 사구체 = 65 per mm3, F 절편 사구체 = 105 / mm3,V 총 사구체 절편 / V절편 = 2.24 %,전체 신장 / V 신장의 V 총 사구체 = 5.54 %, 절편 V (a) 사구체 = 373654 μm3, 전체 신장의 V (a) 사구체 = 521627 μm3, 절편의 V(t)사구체 = 421481724μm3, 전체 신장의 V(t)사구체 = 7305386256μm3 (그림 2D, 그림 3D).
스트립의 N 사구체 = 63,스트립의 F 사구체 = 72 / mm3,스트립의 V 총 사구체 / V스트립 = 2.23 %, 스트립의 V (a) 사구체 = 307698 μm3, 스트립의 V (t) 사구체 = 19384977 μm3 (그림 4D).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65973/65973fig01.jpg"> 그림 1: 신장 조직 투명도 및 FITC-덱스트란 표지 사구체. (A) 투명 치료 전후의 신장. (B) LSFM으로 스캔한 전체 신장의 이미지. (C) 컨포칼 현미경으로 스캔한 신장 조각의 이미지(왼쪽: 4x, 오른쪽: 10x). 눈금 막대 = 300μm(4x, 공초점); 스케일 바 = 100μm(10x, 공초점).; 스케일 바 = 700μm(5x, 확대/축소 0.36, LSFM). 사구체는 FITC-덱스트란으로 표지하였다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65973/65973fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65973/65973fig02.jpg"> 그림 2: 컨포칼 스캔 신장 절편에 적용된 기능 Surface. (A) 슬라이스의 표면과 모든 사구체가 생성됩니다. 분홍색 = 사구체, 파란색 = 밖으로 신장 절편의 표면, 녹색 = 혈관의 원래 라벨(사구체 및 일부 큰 혈관). 스케일 바 = 300 μm. (B) 슬라이스의 표면(왼쪽) 또는 사구체(오른쪽)를 선택하면(선택한 개체가 노란색으로 바뀜) 데이터를 직접 얻을 수 있습니다(점선 상자는 데이터를 표시하는 위치를 강조 표시함). (C) 모든 단일 사구체의 수, 부피 및 총 사구체의 부피는 절편의 부피뿐만 아니라 직접 얻을 수 있습니다. (D) 내보낸 데이터를 추가로 분석하여 사구체의 평균 부피 및 사구체 및 선택한 영역의 부피 비율과 같은 계산을 수행할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65973/65973fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65973/65973fig03.jpg"> 그림 3: LSFM에 적용된 기능 Surface가 전체 신장을 스캔했습니다. (A) 전체 신장의 표면과 모든 사구체가 생성됩니다. 분홍색 = 사구체, 파란색 = 밖으로 전체 신장의 표면, 녹색 = 혈관의 원래 라벨(사구체 및 일부 큰 혈관). 스케일 바 = 1000 μm. (B) 신장 표면(왼쪽) 또는 사구체(오른쪽)를 선택하면(선택한 물체가 노란색으로 변함) 데이터를 직접 얻을 수 있습니다(데이터를 표시하는 점선 상자가 강조 표시됨). (C) 신장의 부피뿐만 아니라 모든 단일 사구체의 수, 사구체의 수를 직접 얻을 수 있습니다. (D) 내보낸 데이터를 추가로 분석하여 사구체의 평균 부피 및 사구체 및 전체 신장의 부피 비율과 같은 계산을 수행할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65973/65973fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65973/65973fig04.jpg"> 그림 4: 선택한 신장 스트립에 적용된 기능 Surface. (A) 스트립의 표면과 모든 사구체가 생성됩니다. 분홍색 = 사구체, 파란색 = 밖으로 신장 스트립의 표면, 녹색 = 혈관의 원래 라벨(사구체 및 일부 큰 혈관). 스케일 바 = 150 μm. (B) 스트립의 표면(왼쪽) 또는 사구체(오른쪽)를 선택하면(선택한 물체가 노란색으로 바뀜) 데이터를 직접 얻을 수 있습니다(점선 상자는 데이터를 표시하는 위치를 강조 표시함). (C) 모든 단일 사구체의 수, 부피 및 총 사구체의 부피와 스트립의 부피를 직접 얻을 수 있습니다. (D) 내보낸 데이터를 추가로 분석하여 사구체의 평균 부피 및 사구체 및 선택한 영역의 부피 비율과 같은 계산을 수행할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65973/65973fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 연구는 CUBIC이 제거된 마우스 신장의 사구체를 표지하고 분석하기 위한 사용하기 쉽고 완전하며 간단한 방법 세트를 제시합니다. 사구체 수 및 부피와 같은 데이터는 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)-덱스트란, 광시트 형광 현미경(LSFM) 또는 일반적인 컨포칼 현미경 및 Imaris와 같은 소프트웨어를 사용하여 쉽고 안정적으로 얻을 수 있습니다.

The glomeruli are fundamental units in the kidney; hence, studying the glomeruli is pivotal for understanding renal function and pathology. Biological ...

기존 방법을 사용하여 사구체를 라벨링하고 계수하는 것은 복잡하고 지루하며 시간이 많이 걸리고 부피가 큰 기기가 필요할 수 있습니다. 당사의 분석법은 전체 신장 내의 사구체 분석을 위한 즉각적이고 직관적으로 정확한 표지 방법을 제공합니다. 우리의 기술은 신장 전체의 사구체를 분석하는 빠르고, 쉽고, 정확하고, 저렴한 방법입니다.특별한 장비가 필요하지 않으므로 모든 실험실에서 수행 할 수 있습니다. 이것은 사구체를 표지하는 획기적이고 신속하며 간단한 방법으로, 전체 신장 내의 모든 사구체를 직관적으로 관찰할 수 있습니다. 연구자들이 사구체의 양, 부피, 분포 등과 같은 정보를 제공함으로써 신장 연구에서 중요한 돌파구를 마련하는 데 도움이 될 수 있는 큰 잠재력을 가지고 있습니다.한편으로, 우리는 임상 신장 질환 연구에서 이 사구체 표지 방법의 적용을 모색하고 있습니다. 다른 한편으로는, 투명한 조직의 혈관 또는 특정 단백질과 같은 생체 표적을 라벨링하는 방법을 개선하여 연구 요구 사항에 맞게 조정하는 방법을 계속 연구할 것입니다.

an-efficient-fast-method-for-labeling-analyzing-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 이광자 매개 미세천자 기법을 사용하여 쥐 사구체의 유체 흡인을 보여줍니다. 이 기술은 살아있는 쥐의 사구체에 대한 접근을 제공하여 신장 생리학에 대한 통찰력을 얻는 데 도움이 됩니다.

Fluid Aspiration from Mouse Glomeruli: A Method to Aspirate from Mouse Glomerular Fluid Using Two-Photon Mediated Micropuncture(생쥐 사구체의 유체 흡인: 이광자 매개 미세천자를 사용하여 마우스의 사구체 유체를 흡인하는 방법)

2 광자 현미경 높은 해상도 intavital을 활용하는 기술을 직접 시각화 및 표면 사구체에서 gloemrular 여과를 정량화한다. 이 방법은 정상과 질병 상태 모두에서 거대 분자의 투과 특성을 직접 측정 할 수 있습니다.

뮌헨의 Wistar 쥐에서 2 광자 현미경을 사용하여 형광 고분자의 사구체 투과율을 정량화

사구체 여과율 (GFR)의 측정은 신장 기능 평가를위한 황금 표준입니다. 여기서 우리는 두 단계 지수 붕괴 모델 플라즈마 GFR의 계산에 하나의 알약 주입, 형광 이소 티오 시아 네이트의 결정 (FITC) 이눌린을 사용하여 의식 쥐 GFR의 결정을 허용하는 높은 처리량 방법을 설명합니다.

의식 쥐의 사구체 여과율의 측정을위한 높은 처리량 방법

이 프로토콜에는 전체 신장 작업 업 사 질병 마우스 모델에서을 수행 하는 설명 합니다. 사 병의 모든 마우스 모델에 적용할 수 있는 사 기능의 자세한 기능, 구조, 및 기계적 분석 방법 허용.

신장 기능 사 질병 마우스 모델에서의 평가

이 프로토콜의 주요 초점은 가능한 기본 glomeruli 문화 다양 한 다운스트림 응용 프로그램에에서 사용 하기 위해 최소한의 오염 물질을 효율적으로 분리 하는 것입니다. 격리 된 glomeruli 구성 요소 셀 형식 간의 구조적 관계를 유지 하 고 교양 비보 전 짧은 시간 동안 수 있습니다.

그대로 Glomeruli 성인 쥐 신장에서 분리 하는 효율적인 체질 하 방법

선물이 2 광자 현미경은 micropipette 쥐, 보 먼의 요도 공간 배치의 사용의 신장 생리학의 2 기초 기술을 결합. 2 광자 현미경의 사용 micropuncture 신장 생리학 연구에 대 한 기존의 현미경의 중요 한 한계를 극복 한다.

보 먼의 공간 2 광자 현미경에 의해 촉진 생쥐에서의 Micropuncture

여기 선물이 murine 비보에 biotin과 사 세포 표면 단백질의 라벨에 대 한 프로토콜. 이 프로토콜은 마우스 신장 perfuse glomeruli, 격리 하 고, 관심사의 단백질의 생 immunoprecipitation를 수행 하는 방법에 대 한 정보를 포함 합니다.

절연 Glomeruli와 비보에 사 세포 표면 단백질의 라벨

여기에서, 우리는 고과민성, 비방사성 추적자를 사용하여 마우스에 있는 사구체 투과성을 시험하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 작은 소변 볼륨을 가진 반복적인 소변 분석을 허용합니다.

플루오레세인 이소티오차네이트-폴리수크로오스 70을 가진 마우스에서 사구체 투과성의 고감도 측정

이 문서는 마우스 신장에서 분리된 캡슐화된 사구체 사구류의 구체 정수리 세포 성장을 배양하고 분석하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 정수리 상피 세포 증식 및 마이그레이션에 관여하는 경로를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 통로를 분석하는 전 비보 분석으로 구체 아웃스승

세포 사멸 중에 방출되는 세포외 DNA(ecDNA)는 염증성 염증에 기여합니다. 상해 부위에서 ecDNA의 측정은 표적 기관에서 치료 치료의 효능을 결정할 수 있다. 이 프로토콜은 신장 조직에서 ecDNA의 측정을 자동화하기 위해 기계 학습 도구의 사용을 설명합니다.

글로메룰로네프염의 세포외 DNA의 반정화를 위한 감독된 기계 학습

여기에서는 표면 사구체가있는 뮌헨 Wistar Fromter 쥐에서 2 광자 현미경을 사용하여 사구체 역학 및 기능에 대한 장기간의 요관 폐쇄의 영향을 정량화하는 프로토콜을 제시합니다.

2광자 현미경을 사용하여 만성 일방적 요관 폐쇄가 사구체 과정에 미치는 영향을 정량화

배우세요 마우스 신장 사구체를 FITC-Dextran으로 표지하고 광시트 및 공초점 현미경으로 분석하는 빠르고 정확한 방법입니다. 이 기술은 신장 질환 연구에 중요한 데이터를 제공합니다.

마우스 사구체를 표지하고 분석하기 위한 효율적이고 빠른 방법

더 많은 동영상 탐색