2023년 12월 1일
성충 파리를 신선한 식품 바이알로 자주 옮기는 것에 대한 대안으로 초파리 균주에 대한 장기 보존 방법은 매우 바람직합니다. 이 프로토콜은 초파리 원시 생식 세포의 동결 보존과 무생식 숙주 배아로의 이식을 통한 균주 부활을 설명합니다.
초파리 균주는 성충 파리를 새 유리병으로 자주 옮겨 유지해야 합니다. 이것은 돌연변이 악화 및 유전적 변화의 위험을 초래합니다. 우리는 이러한 변화 없이 초파리 균주를 장기간 보존할 수 있는 대체 방법을 개발하는 것을 목표로 합니다.
생체 내 편집과 비교했을 때, 원시 생식세포(PGC)의 게놈 편집은 knock-in 비효율성을 증가시키고 더 복잡한 게놈 변화를 일으킬 수 있습니다. 따라서 PGC 조작의 광범위한 적용은 많은 분야에서 유전 공학을 촉진합니다. 우리는 이제 이종 이식에 초점을 맞춥니다.
Drosophila melanogaster를 대리 숙주로 사용함으로써, 우리는 melanogaster 종 하위 그룹에서 세포 종의 재고를 되살리는 데 성공했습니다. 이종 이식 장벽을 해결하고 가능한 해결책을 찾음으로써 PGC 이식 및 동결 보존의 잠재적 응용 분야를 탐구하고자 합니다.
본 프로토콜은 초파리 원시 생식 세포(PGCs)의 동결 보존 방법과 초파리 계통 복원을 위한 후속 이식 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 성체 초파리의 빈번한 전이와 관련된 위험을 완화하는 장기 보존 솔루션을 제공하는 것을 목표로 합니다.
Drosophila 계통의 장기 보존은 발굴 단계 연구의 유전적 충실도와 재현성을 위해 매우 중요합니다. 원시생식세포(PGCs)의 냉동 보존은 안전한 계통 아카이빙을 가능하게 하여, 실험의 연속성을 저해하는 돌연변이 표류와 표현형 변이를 줄여줍니다. 이러한 접근 방식은 기업 규모의 유전 자원 관리를 지원하며, 신뢰할 수 있는 전임상 모델 개발의 기반이 됩니다.
이 PGC 동결 보존 및 회복 프로토콜은 초기 발견과 전임상 모델 생성의 접점에 통합되어, 타겟 검증과 후속 중개 연구를 모두 지원합니다.